vi sinh vật họcvi sinh vật có lợivi sinh vật đại cươngvi sinh vật trong đấtvi sinh vật hiếu khívi sinh vật gây bệnhvi sinh vật trong nướcvi sinh vật có hạivi sinh vật trong không khívi sinh vật ưa lạnhvi sinh vật là gìvi sinh vật lacticvi sinh vật lactobacillusvi sinh vật azotobactervi sinh vật ăn dầuvi sinh vật và môi trườngvi sinh vật và ứng dụngvi sinh vật ưa axitvi sinh vật trong tiếng anh là gìvi sinh vật trong bể aerotankvi sinh vật ăn mòn kim loạivi sinh vật ăn gìvi sinh vật trong thức ăn chăn nuôivi sinh vật làm hỏng thức ănthức ăn của vi sinh vậtthức ăn nhiễm vi sinh vật1 số vi sinh vậtvi sinh vật gram âmvi sinh vật biến đổi genvi sinh vật bao gồm các dạng nàovi sinh vật bacillus subtilisvi sinh vật bảo vệ môi trườngvi sinh vật biểnvi sinh vật bacillusvi sinh vật biến đổi gen là gìvi sinh vật bản địavi sinh vật bánh mìvi sinh vật bể cávi sinh vật cố định đạmvi sinh vật có lợi hay có hạivi sinh vật chỉ thịvi sinh vật công nghiệpvi sinh vật có trong nước mắmvi sinh vật có trong sữa chuavi sinh vật có đặc điểm gìvi sinh vật có những đặc điểm chung nàocó mấy nhóm vi sinh vậtvi sinh vật dị dưỡngvi sinh vật dạ cỏvi sinh vật dính bámvi sinh vật dị dưỡng aminvi sinh vật dinh dưỡng mêtanvi sinh vật dùng trong sản xuất protein đơn bàovi sinh vật dị dưỡng là gìvi sinh vật dầu mỏvi sinh vật khuyết dưỡngvi sinh vật nguyên dưỡngvi sinh vật đấtvi sinh vật được chia thành những nhóm nàovi sinh vật đối khángvi sinh vật đơn bàovi sinh vật đa bàovi sinh vật đầu tiên trên trái đấtvi sinh vật đường ruộtvi sinh vật đất là gìvi sinh vật đầu tiênvi sinh vật e.colivi sinh vật emvi sinh vật hữu hiệu emvi sinh vật y học ebookchế phẩm vi sinh vật emunivchế phẩm vi sinh vật emenzyme vi sinh vậtebooks vi sinh vật đại cươngvi sinh vật trong sản xuất enzymetại sao vi sinh vật tiết enzim vào môi trườngvi sinh vật e colivi sinh vật gây ô nhiễm môi trườngvi sinh vật gồm những nhóm nàovi sinh vật gây hạivi sinh vật gây bệnh trong thực phẩmvi sinh vật gây ngộ độc thực phẩmvi sinh vật gồm những loại nàovi sinh vật gây bệnh cơ hộivi sinh vật gây bệnh trong thủy sảnvi sinh vật gây bệnh môi trườngvi sinh vật hô hấp hiếu khívi sinh vật học nguyễn lân dũngvi sinh vật hóa dị dưỡngvi sinh vật hô hấp kị khívi sinh vật hoại sinhvi sinh vật học nguyễn lân dũng pdfvi sinh vật học đại cươngvi sinh vật hiếu khí trong xử lý nước thảivi sinh vật xử lý nước thảivi sinh vật xử lý môi trườngvi sinh vật xử lý kim loại nặngdi truyền vi sinh vậtvi sinh vật kỵ khívi sinh vật khuyết dưỡng và nguyên dưỡngvi sinh vật kị khí bắt buộcvi sinh vật kỵ khí trong xử lý nước thảivi sinh vật ký sinh trùngvi sinh vật kỹ thuật môi trườngvi sinh vật không khívi sinh vật khoang miệngvi sinh vật khử mùivi sinh vật lớp 10vi sinh vật làm sạch nướcvi sinh vật làm nước mắmvi sinh vật là gì nêu đặc điểm chung của vi sinh vậtvi sinh vật làm sữa chuavi sinh vật là jsinh lý vi sinh vậtvi sinh vật môi trườngvi sinh vật môi trường nướcvi sinh vật môi trường đỗ hồng lan chivi sinh vật môi trường lâm minh triếtvi sinh vật màng nhầyvi sinh vật học môi trườngvi sinh vật trong môi trường nướcvi sinh vật trong môi trường đấtvi sinh vật học môi trường lê xuân phươngvi sinh vật nhân thựcvi sinh vật nguyên dưỡng là gìvi sinh vật nấmvi sinh vật nhân sơvi sinh vật nguyên dưỡng và khuyết dưỡngvi sinh vật nhân nguyênvi sinh vật nông nghiệpvi sinh vật nguyễn lân dũngvi sinh vật nhân thậtvi sinh vật ở việt namvi sinh vật ở rừng ngập mặnvi sinh vật có lợi trong thực phẩmvi sinh vật có lợi trong đấtvi sinh vật có lợi cho cây trồngvi sinh vật có lợi cho con ngườivi sinh vật có íchô nhiễm vi sinh vậtô nhiễm vi sinh vật trong thực phẩmô nhiễm vi sinh vật là gìô nhiễm vi sinh vật trong không khísinh sản ở vi sinh vậtsinh trưởng ở vi sinh vậthô hấp ở vi sinh vậtđột biến ở vi sinh vậtdinh dưỡng ở vi sinh vậtvi sinh vật xử lý ô nhiễm môi trườngvi sinh vật chỉ thị ô nhiễmvi sinh vật chỉ thị ô nhiễm môi trường đấtvi sinh vật trong xử lý ô nhiễm môi trườngvi sinh vật trong xử lý ô nhiễmôn tập vi sinh vậtgiới hạn ô nhiễm vi sinh vật trong thực phẩmnước bị ô nhiễm vi sinh vậtnước bị ô nhiễm vi sinh vật như thế nàonguyên nhân gây ô nhiễm vi sinh vậtvi sinh vật sống ở suối nước nóngvi sinh vật sống ở đâuhệ vi sinh vật ở cásinh trưởng ở vi sinh vật là gìbiến dưỡng ở vi sinh vậtsinh sản ở vi sinh vật nhân sơ và nhân thựcbiến dị ở vi sinh vậtquang hợp ở vi sinh vậtvi sinh vật phát sángvi sinh vật probioticvi sinh vật quang tự dưỡngvi sinh vật quang tự dưỡng khác với vi sinh vật hóa dị dưỡngvi sinh vật quang tự dưỡng khác vi sinh vật hóa dị dưỡng ở chỗ nàovi sinh vật quang hợpvi sinh vật trong quá trình xử lý nước thảivi sinh vật rau quảvi sinh vật trong quá trình kỵ khívi sinh vật tự dưỡng quang năngvi sinh vật trong rau quảvi sinh vật trong bảo quản thực phẩmvi sinh vật rhizobiumvi sinh vật rừngvi sinh vật ruột giàvi sinh vật vùng rễvi sinh vật trong rượu vangvi sinh vật trong rừng ngập mặnvi sinh vật trên rau quảvi sinh vật sản xuất vitamin b12vi sinh vật sống trong đấtvi sinh vật sản xuất kháng sinhvi sinh vật sống trong nướcvi sinh vật sinh kháng sinhvi sinh vật sau thu hoạch là gìvi sinh vật streptococcus thermophilusvi sinh vật sống trong những môi trường nàovi sinh vật sống hoại sinhvi sinh vật thú yvi sinh vật trong sữa chuavi sinh vật tự dưỡngvi sinh vật trong nước mắmvi sinh vật thuộc giới nàovi sinh vật trong khoang miệngvi sinh vật trong y họctừ điển vi sinh vậtenzyme từ vi sinh vậttủ cấy vi sinh vậtđộc tố từ vi sinh vậtsản phẩm từ vi sinh vậtcác enzyme từ vi sinh vậtnguồn enzyme từ vi sinh vậtvi sinh vật ưa nhiệtvi sinh vật ưa siêu nhiệtvi sinh vật ưa mặnvi sinh vật ưa kiềmvi sinh vật ưa trung tínhvi sinh vật trong bể uasbvi sinh vật trong nước uốngcác vi sinh vật ưa lạnhbào tử vi sinh vậtbào tử vi sinh vật là gìnhóm vi sinh vật ưa ấmví dụ vi sinh vật ưa lạnhvi sinh vật và bệnh truyền nhiễmvi sinh vật và sự chuyển hóa các chất trong tự nhiênvi sinh vật vi hiếu khí là gìsinh trưởng của vi sinh vật violetsinh sản của vi sinh vật violetviện vi sinh vật đại học quốc gia hà nộivi sinh vật xử lý dầu trànvi sinh vật xử lý rác thảivi sinh vật xử lý đấtvi sinh vật xử lý chất thảivi sinh vật xử lý nướcvi sinh vật trong xử lý nước thảivi sinh vật y họcvi sinh vật yếm khívi sinh vật y học lê huy chínhvi sinh vật y học pdfvi sinh vật y học là gìsách vi sinh vật y họcvi sinh vật trong yaourtý nghĩa của vi sinh vậtý nghĩa của vi sinh vật trong nướcvi sinh vật 10vi sinh vật thú y 1bài tập vi sinh vật 10vi sinh vật sinh học 10khái niệm vi sinh vật lớp 10bài tập vi sinh vật lớp 1010 loại vi sinh vậtôn tập phần sinh học vi sinh vật 10một số vi sinh vậtmột số vi sinh vật gây bệnhmột số vi sinh vật hiếu khímột số vi sinh vật có lợivi sinh vật thú y 2công nghệ vi sinh vật tập 3sinh trưởng của vi sinh vật bài 38giáo trình vi sinh vật học (phần 3) ebook4 tác hại của vi sinh vật4 kiểu dinh dưỡng ở vi sinh vật4 pha sinh trưởng của vi sinh vật4 quá trình phát triển của vi sinh vật4 giai đoạn phát triển của vi sinh vật5 ví dụ về quần thể sinh vậtsinh sản của vi sinh vật lớp 10sinh trưởng của vi sinh vật sinh 10sinh sản của vi sinh vật sinh 10sinh học 10 vi sinh vậttrắc nghiệm sinh học 10 vi sinh vật
Bài 1: NUÔI CẤY, PHÂN LẬP VI KHUẨN ĐƯỜNG RUỘT (E coli Salmonella) Ngày 22 tháng 02 năm 2016 1.1 Mục đích: Trang bị cho học viên kỹ xét nghiệm vi khuẩn đường ruột phục vụ cho công tác chẩn đoán bệnh, xét nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm 1.2 Dụng cụ nguyên liệu 1.2.1 Dụng cụ thiết bị - Đĩa petri,ống nghiệm chứa môi trường vận que cấy (tròn, thẳng, gạt), lame kính.microwave, micropipet - Tăm vô trùng Hình 1: Tăm vô trùng Hình 2: Que cấy vòng que cấy thẳng 1.2.2 Nguyên vật liệu - Đèn cồn - Môi trường vận chuyển: NA ¼ - Môi trường tiền tăng sinh cho Salmonella: pepton đệm - Môi trường chuyên biệt cho E coli: môi trường EMB (Eosin Methylene Blue), MC (MacConkey) - Môi trường chuyên biệt cho Salmonella: môi trường BGA (Brilliant Green Agar); XLD Agar (Xylose lysine deoxycholate agar) Hình 3: Môi trường EMB Hình 4: Môi trường MC Hình 5: Môi trường BGA Hình 6: Môi trường XLD 1.3 Phương pháp tiến hành 1.3.1 Chuẩn bị môi trường vận chuyển - Môi trường cần chuẩn bị để mẫu mội trường NA ¼ - Môi trường cho vào microwave cho tan, sau chia vào ống nghiệm có nắp đậy - Đem ống nghiệm chứa môi trường trùng 1210c - Sau trùng cần phải bảo quản lạnh liên tục để tránh nấm mốc phát triển làm hỏng môi trường 1.3.2 Phương pháp lấy mẫu - Mẫu phân: lấy trực tiếp từ hậu môn Dùng tẩm cồn sát trùng xung quanh hậu môn, đưa tăm vô trùng vào trực tràng, ngoáy nhẹ lấy tăm cho vào ống nghiệm có chứa môi trường vận chuyển - Bảo quản vận chuyển mẫu + Mẫu sau lấy cần tiến hành xét nghiệm sớm tốt Nếu phải vận chuyển xa cần lưu ý bảo quản + Mẫu phân: bảo quản ống nghiệm có chứa môi trường vận chuyển NA 1/4, giữ thùng đá ướp lạnh vận chuyển phòng thí nghiệm 1.3.3 Kiểm tra định tính E coli Mẫu MC/ EMB (Trên MC: khuẩn lạc màu hồng, lồi, trơn bóng 37oC/2 Làm MC/ 37oC/2 NA Nhuộm Gram KIA/TSI (vàng/ vàng, sinh hơi) Xét nghiệm IMVC Huyết học : phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính Khẳng định E coli Giữ giống Hình 5: Quy trình nuôi cấy, phân lập, định danh vi khuẩn E coli 1.4 Tiến hành thí nghiệm 1.4.1 Nuôi cấy phân lập vi khuẩn E coli 1.4.1.1 Cấy từ mẫu có sẵn Môi trường nuôi cấy chuẩn bị: + đĩa chứa môi trường MC + đĩa chứa môi trường EMB Hình 6: Môi trường EMB ( trái) môi trường MC ( phải) - Đĩa MC EMB chia làm phần nhau, bên cấy code mẫu, code mẫu cấy MC cấy EMB - Mỗi code mẫu cấy đường cấy, đường cấy thứ thứ dày, đường cấy thứ thứ thưa dần - Dùng que cấy vòng, hơ que cấy đèn cồn cho cháy đỏ, để nguội, chấm nhẹ vào vi khuẩn mẫu có sẵn - Dùng que cấy có vi khuẩn dàn góc phía để đường cấy thứ - Từ đường thứ dùng que cấy vòng kéo sang đường thứ hai, đường chan dày sát với thành đĩa -Đường thứ 3, ta kéo từ đường thứ theo đường zigzag -Đường thứ 4, ta kéo theo đường thứ theo đường zigzag thưa dần Nếu sợ E.coli nhiều quá, nhấc que cấy lên tiếp để lấy lạc khuẩn đơn lẻ 1.4.1.2 Cấy từ mẫu phân gà gà Tương tự cấy từ mẫu có sẵn, cấy từ mẫu phân gà, cấy phần lại đĩa MC EMB, lấy từ ống nghiệm chứa mẫu phân , hơ ống nghiệm, dùng kẹp hơ qua đèn cồn gấp tăm phần rút tăm chấm đĩa petri Sau để tăm trở lài ống nghiệm, hơ phần đầu tăm lửa đèn cồn trước đẩy vào ống nghiệm ( tránh tạp mẫu), hơ miệng ống nghiệm qua lửa đèn cồn - Dùng que cấy vòng,hơ que cấy đèn cồn cho cháy đỏ, để nguội, chấm nhẹ vào vi khuẩn chấm từ tăm - Mỗi code mẩu cấy đường cấy, đường cấy thứ thứ dày, đường cấy thứ thứ thưa dần để lấy vi khuẩn đơn lẻ - Dùng que cấy vòng, chấm nhẹ vào vi khuẩn mẫu phân gà gà - Dùng que cấy có vi khuẩn dàn góc phía để đường cấy thứ - Từ đường thứ dùng que cấy vòng kéo sang đường thứ hai, đường chan dày sát với thành đĩa -Đường thứ 4, ta kéo theo đường thứ theo đường zigzag thưa dần Nếu sợ Salmonella nhiều quá, nhấc que cấy lên tiếp -Đem mẫu cấy vào tủ ủ vòng 24h 37 độ C Hình 7: Đường cấy vi khuẩn 1.4.2Nuôi cấy phân lập vi khuẩn Salmonella 1.4.2.1 Kiểm tra định tính Salmonella Mẫu phân Tiền tăng sinh: Peptone đệm (37oC/ 24 – 48 giờ) Tăng sinh Rappaport (37oC/ 24 – 48 giờ) BGA, XLD, (37oC/ 24 – 48 giờ) Cấy BGA, XLD, (37oC/ 24 – 48 giờ) NA KIA IMVC (-+-+) (37oC/ 24 – 48 giờ) Urease (-) Giữ giống Hình 8: Quy trình nuôi cấy, phân lập, định danh vi khuẩn 1.4.2.2Cấy từ mẫu có sẵn Tương tự, cấy vi khuẩn E.coli, vi khuẩn Salmonella mẫu có sẵn dùng que cấy hơ lửa đèn cồn cho cháy đỏ, để nguội - Đĩa XLD BGA chia làm phần nhau, bên cấy code mẫu, code mẫu cấy XLD cấy BGA - Mỗi code mẩu cấy đường cấy, đường cấy thứ thứ dày, đường cấy thứ thứ thưa dần - Dùng que cấy vòng, chấm nhẹ vào vi khuẩn Salmonella mẫu có sẵn - Dùng que cấy có vi khuẩn dàn góc phía để đường cấy thứ - Từ đường thứ dùng que cấy vòng kéo sang đường thứ hai, đường chan dày sát với thành đĩa -Từ đường thứ hai kéo đường zígzác, ta đường thứ -Đường thứ 3, ta kéo từ đường thứ theo đường zigzag -Đường thứ 4, ta kéo theo đường thứ theo đường zigzag thưa dần Nếu sợ Salmonella nhiều quá, nhấc que cấy lên tiếp Hình 9: Đường cấy vi khuẩn 1.4.2.3 Từ mẫu phân gà gà Tương tự E.coli, ta cấy đĩa môi trường XLD BGA - Lấy từ ống nghiệm chứa mẫu phân , hơ miệng ống nghiệm, dùng kẹp hơ qua đèn cồn gấp tăm phần rút tăm chấm đĩa petri Sau để tăm trở lài ống nghiệm, hơ phần đầu tăm lửa đèn cồn trước đẩy vào ống nghiệm ( tránh tạp mẫu), hơ miệng ống nghiệm qua lửa đèn cồn - Mỗi code mẩu cấy đường cấy, đường cấy thứ thứ dày, đường cấy thứ thứ thưa dần để lấy vi khuẩn đơn lẻ - Dùng que cấy vòng, chấm nhẹ vào vi khuẩn mẫu phân gà gà - Dùng que cấy có vi khuẩn dàn góc phía để đường cấy thứ - Từ đường thứ dùng que cấy vòng kéo sang đường thứ hai, đường chan dày sát với thành đĩa -Đường thứ 4, ta kéo theo đường thứ theo đường zigzag thưa dần Nếu sợ Salmonella nhiều quá, nhấc que cấy lên tiếp -Đem mẫu cấy vào tủ ủ vòng 24h 37 độ C 1.5.1.3 Tiền tăng sinh Salmonella từ mẫu phân gà gà - Cho ml môi trường BPW trùng vào bọc vô trùng, lấy tăm chứa mẫu cho vào môi trường, cột bọc lại đem ủ tủ ấm 37oC/ 24 Ngày 23 tháng 02 năm 2016 Kết nuôi cấy với mẫu Salmonella E coli: 2.1 Kết nuôi cấy với mẫu E.coli Đĩa môi trường MC: Khuẩn lạc có màu hồng, mọc đều, xung quanh có mây Hình10: Khuẩn lạc E coli môi trưởng MC - Đĩa môi trường EMB: Khuẩn lạc có màu tím ánh kim, mọc đều, xung quanh môi trường có màu tím đen Hình 11: Khuẩn lạc E coli môi trường EMB 2.2 Kết nuôi cấy với mẫu Salmonella - Đĩa môi trường BGA: Môi trường chuyển từ màu vàng xanh sang màu đỏ, khuẩn lạc có màu đỏ, mọc Hình 12: Khuẩn lạc Salmonella môi trường BGA - Đĩa môi trường XLD: Khuẩn lạc có tâm màu đen, rìa trắng, mọc đều, môi trường chuyển từ màu cam sang màu đỏ Hình 13: Khuẩn lạc Salmonella môi trường XLD => Chọn số khuẩn lạc đạc trưng để kiểm tra độ vi khuẩn E.coli Salmonella 2.3 Môi trường tăng sinh Ta nuôi cấy vi khuẩn Salmonella cách lấy 1ml nước gà (trong môi trường tiền tăng sinh nuôi cấy) cho vào 9ml môi trường tăng sinh (Rappaport) trộn cho vào túi đựng khử trùng, sau ta buộc túi đem ủ 24h nhiệt độ 370C (khi thao tác nhớ không để tay tiếp xúc với bề mặt bên túi phải để gần lửa đèn cồn để tránh vi khuẩn lạ xâm nhập) Hình 14: thao tác thực nuôi cấy phân môi trường tăng sinh Ngày 24 tháng năm 2016 3.1 Cấy vi khuẩn E coli Salmanella 3.2 Cấy vi khuẩn E coli 10 - Dùng tăm vô trùng ( để gần đèn cồn) lượng nhỏ lạc khuẩn môi trường tăng sinh cho vào đĩa môi trường XLD BGA Dùng que cấy vòng cấy môi trường với đường cấy - Que cấy thứ cấy đường cấy thứ đường cấy thứ Dùng vi khuẩn lấy dàn góc phía để đường cấy thứ - Từ đường thứ dùng que cấy vòng kéo sang đường thứ hai, đường chan dày sát với thành đĩa - Que cấy thứ cấy đường thứ đường cấy thứ 4, ta kéo từ đường thứ theo đường zigzag -Đường thứ 4, ta kéo theo đường thứ theo đường zigzag thưa dần 3.7 Nuôi cấy E coli gà môi trường NA Hơ que cấy que cấy cháy đỏ Dùng que cấy vô trùng lấy lạc khuẩn từ đĩa môi trường chứa khuẩn lạc E coli gà chọn ( để gần đèn cồn), cho vào đĩa môi trường NA ( môi trường NA chia làm phần) cấy theo đường zigzag từ vào Làm tương tự với phần lại Ngày 25 tháng 02 năm 2016 4.1 Tiến hành kiểm tra tiêu chí hóa sinh Hình 33: Kết cấy khuẩn lạc môi trường kiểm tra hóa sinh 18 Ống thí nghiệm 1: Đọc kết môi trường KIA Ống thí nghiệm 2: Trên môi trường Indole dùng ống nhỏ giọt lấy giọt thuốc thử Kovac’s cho từ từ vào ống nhiệm (thuốc thử chạy dọc thành ống nghiệm) Ống thí nghiệm 3: Trên môi trường MR_VP (MR) dùng ống nhỏ lấy giọt thuốc Methyl Red cho vào ống nghiệm Ống thí nghiệm : Trên môi trường MR_VP (VP) cho giọt thuốc thử α napthol vào ống nghiệm lắc cho tiếp giọt KOH 40% vào ống nghiệm 19 Ống thí nghiệm 5: Đọc kết môi trường Ci E coli KIA Glucose Lactose H2S Hơi Indole MR Ure VP Ci E.I.g1a + + - E.I.g4a + + - + + + + + + Không có - - Salmonella Sal 148d Sal.139b + + + + + - + - + + Bảng 1: Kết kiểm tra hóa sinh khuẩn lạc E Coli Salmonella Hình 34: Kết kiểm tra sinh Sau 24h ủ, đọc kết đĩa chứa môi trường MC đĩa môi trường EMB, khuẩn lạc đĩa thuần, chọn khuẩn lác có code mẫu( với code mẫu môi trường trước) môi trường NA để làm thí nghiệm sinh hóa E.coli => chọn khuẩn lạc môi trường NA để kiểm tra sinh hóa 20 Hình 35: Chọn khuẩn lạc môi trường NA - Quan sát vi khuẩn E.coli Sal qua kính hiển vi phương pháp nhuộm đơn ( xác định vi khuẩn thuộc Gram âm từ thí nghiệm trước đó) 4.2 Nhuộm đơn 4.2.1 Mục đích Phương pháp giúp sinh viên nhận biết hình dạng, kích thước phân biệt vi khuẩn Gram dương (G+) Gram âm (G-) 4.2.2 Dụng cụ nguyên liệu 4.2.2.1 Dụng cụ - Kính hiển vi Hình 36: Kính hiển vi - Mâm dụng cụ 21 - Cốc thuỷ tinh 100ml - Cốc thuỷ tinh 1000ml - Que cấy - Đèn cồn - Bình tia chứa cồn, nước cất - Lame kính 4.2.2.2 Nguyên liệu Thuốc nhuộm (dung dịch Lugol, Crystal violet, Safranin/ Fuchsin) Hình 37: Thuốc nhuộm 4.2.3 Phương pháp Bước 1: Làm vết bôi (trải trùng) - Nhỏ giọt nước vô trùng lên phiến kính, dùng que cấy khử trùng để nguội, lấy khuẩn lạc riêng lẻ hoà vào giọt nước phiến kính hòa vào giọt nước trải mỏng mặt kính, để khô 22 Hình 38: Dùng que cấy lấy khuẩn lạc Hình 39: Lấy khuẩn lạc nhỏ nước cất Bước 2: Cố định mẫu - Hơ nhẹ phiến kính lửa đèn cồn 3-4 lần, nhỏ cồn vết trải đốt Hình 49: Trải làm khô lam kính Bước 3: Nhuộm màu - Nhỏ vài giọt thuốc nhuộm đơn (Blue methylen 0,1%) lên vết trải – 5” Hình 50: Nhỏ thuốc nhuộm Blue methylen 0,1% - Rửa nước 23 - Rửa cồn Hình 51: Rửa cồn - Rửa nước Hình 52: Rửa nước - Làm khô - Quan sát vật kính dầu 4.2.4 Kết Hình 53: Lạc khuẩn nhìn kính hiển vi 24 Vi khuẩn hình que ngắn, màu xanh vi khuẩn G (-), 4.3 Xác định tên khuẩn lạc môi trường XLD BGA - Trên môi trường XLD BGA vi khuẩn vi khuẩn E.coli vi khuẩn có màu dỏ môi trường XLD có màu vàng chanh môi trường BGA có mùi Bài 4: Kháng sinh đồ 4.4 Mục đích Tìm loại kháng sinh mẫn cảm với dòng vi khuẩn gây bệnh 4.5 Dụng cụ nguyên liệu 4.5.1 Dụng cụ Bình tam giác chứa môi trường Đĩa Petri Que cấy gạt Đèn cồn Bình tia chứa cồn Nguyên liệu Vi khuẩn gây bệnh Mội trường Muller Hinton Agar Đĩa giấy tẩm kháng sinh (Tetracycline, Neomycin, Gentamycin, Colistin, Trimethoprim Sufamethoxazoic, Doxycycline, Ofloxacin, Amoxicillin) + Nước muối sinh lý 9‰ + Ống so độ đục Mc Farland 0,5 + + + + + 4.5.2 + + + Hình 54: Ống đo độ đục Mc Farland 0,5 + Que tăm vô trùng + Thước đo mm 4.6 Phương pháp 25 • Nuôi cấy vi khuẩn gây bệnh : Bằng cách lấy mẫu vi khuẩn từ quan, mô, máu bệnh súc cho phát triển trân đĩa thạch có chứa môi trường dinh dưỡng đặc biệt • Sau định danh qua phản ứng sinh hóa, vi khuẩn ria cấy môi trường TSA để tăng sinh, ủ 37oC/24h • Lấy khuẩn lạc hòa vào 1,5 ml nước sinh lý để đạt độ đục tương đương với ống so độ đục Mc Farland 0,5 Hình 55: Làm đục ống nước sinh lý chứa khuẩn lạc • Mở nắp ống nghiệm sau hơ đầu ống nghiệm lửa đèn cồn lấy tăm khử trùng khuấy vào ống nghiệm lấy tăm ->hơ thành ống nghiệm xong đậy nắp lại • Lấy lượng thích hợp vi khuẩn trải đĩa thạch Muller Hinton (từ xuống dưới, từ trái sang phải vòng quanh bên ngoài) chờ thạch khô • Sau gắn đĩa kháng sinh vào đĩa thạch (đĩa kháng sinh mảnh giấy tròn có tẩm kháng sinh) Phải đảm bảo đĩa kháng sinh phải tiếp xúc mặt phẳng với mặt thạch • Lật ngược đĩa cho vào tủ ấm nhiệt độ 37oC/24h Chú ý: Thạch đĩa có độ dày – 4mm 26 27 Hình 56: Các loại thuốc kháng sinh 4.7 Kết Hình 56: Đường kính vòng vô khuẩn 28 Kháng sinh Ac Ne Ge Ng Nr Pb Nhạy trung bình 14 – 17 16 – 19 13 – 14 14 – 18 13 – 16 13 – 19 Co 12 – 16 Te 12 – 14 Bt Dx 11 - 15 11 – 13 Of 13 – 15 Đường kính vòng vô khuẩn E.I.g1a E.I.g4a Kết Kết Kết Kết luận luận Không có 20 Nhạy 14 Kháng 15 Kháng Không có Không có 28 Nhạy 20 Nhạy Không có Không có 14 Nhạy Không có tb 14 Nhạy 14 Nhạy tb tb 14 Nhạy 15 Nhạy tb 20 Nhạy 22 Nhạy 11 Nhạy Không có tb Không có Không có Sal.148d Kết Kết luận 20 Nhạy 14 Kháng 18 Nhạy 28 Nhạy Không có Không có 14 Nhạy tb 14 Nhạy tb Nhạy tb Nhạy tb 28 Nhạy Bảng 2: Các chuẩn đường kính vòng vô khuẩn vi khuẩn đường ruột (CLSI2012) Sau có kết so sánh, người ta chọn loại kháng sinh có độ nhạy cao dùng để điều trị bệnh cho bệnh súc Nên sử dụng kháng sinh Amoxicillin, Trimethoprim Sufamethoxazoic, Ofloxacin thú y có độ nhạy cao Ngày 26 tháng 03 năm 2016 Bài 5: NUÔI CẤY VIRUS TRÊN PHÔI TRỨNG 5.1 Mục đích Có thể lúc cấy lên hàng loạt phôi gà thu lượng lớn virus 5.2 Dụng cụ nguyên liệu 29 5.2.1 Dụng cụ - Máy soi trứng - Tủ cấy vô trùng - Ống chích nhựa - Đèn cồn - Bình tia chứa cồn - Găng tay - Khẩu trang 5.2.2 Nguyên liệu - Phôi trứng vịt - 14 ngày tuổi - Giấy parafin hay sáp 5.3 Phương pháp - Chuẩn bị giống virus - Tiêm vào xoang niệu mô hay màng đệm niệu 5.3.1 Kỹ thuật tiêm: - Soi trứng đèn soi trứng 30 Hình 54: Đánh dấu Hình 56: Máy soi trứng 31 - Vô trùng - Tiêm truyền - Bịt kín lỗ tiêm 5.3.2 Thu hoạch nước trứng 5.4 Kết Trứng tiêm xong đưa vào tủ ấp tiếp 32 [...]... quả luận Không có 20 Nh y 14 Kháng 15 Kháng Không có Không có 28 Nh y 20 Nh y Không có Không có 14 Nh y Không có tb 14 Nh y 14 Nh y tb tb 14 Nh y 15 Nh y tb 20 Nh y 22 Nh y 11 Nh y Không có tb Không có Không có Sal.148d Kết Kết quả luận 20 Nh y 14 Kháng 18 Nh y 28 Nh y Không có Không có 14 Nh y tb 14 Nh y tb Nh y tb Nh y tb 28 Nh y Bảng 2: Các chuẩn đường kính vòng vô khuẩn của vi khuẩn đường ruột (CLSI2012)... sinh mẫn cảm với một dòng vi khuẩn g y bệnh nào đó 4.5 Dụng cụ và nguyên liệu 4.5.1 Dụng cụ Bình tam giác chứa môi trường Đĩa Petri Que c y gạt Đèn cồn Bình tia chứa cồn Nguyên liệu Vi khuẩn g y bệnh Mội trường Muller Hinton Agar Đĩa gi y tẩm kháng sinh (Tetracycline, Neomycin, Gentamycin, Colistin, Trimethoprim Sufamethoxazoic, Doxycycline, Ofloxacin, Amoxicillin) + Nước muối sinh lý 9‰ + Ống so độ đục... loại kháng sinh có độ nh y cao dùng để điều trị bệnh cho bệnh súc Nên sử dụng kháng sinh Amoxicillin, Trimethoprim Sufamethoxazoic, Ofloxacin trong thú y vì có độ nh y cao Ng y 26 tháng 03 năm 2016 Bài 5: NUÔI C Y VIRUS TRÊN PHÔI TRỨNG 5.1 Mục đích Có thể cùng lúc c y lên hàng loạt phôi gà và thu được một lượng lớn virus 5.2 Dụng cụ và nguyên liệu 29 5.2.1 Dụng cụ - M y soi trứng - Tủ c y vô trùng... trường tăng sinh ra đĩa để xác định tên khuẩn lạc 17 - Dùng tăm bông vô trùng ( để gần đèn cồn) một lượng nhỏ lạc khuẩn trong môi trường tăng sinh cho vào 2 đĩa môi trường XLD và BGA Dùng que c y vòng c y trên môi trường với 4 đường c y - Que c y thứ 1 c y đường c y thứ 1 và đường c y thứ 2 Dùng vi khuẩn đã l y dàn đều 1 góc phía trên để được đường c y thứ nhất - Từ đường thứ nhất dùng que c y vòng kéo... một đường duy nhất • Khi c y chú ý không được c y gần vách chia phần, không chạm vào tâm, thành ngoài của đĩa Kiểm tra sinh hóa 3.4 Dụng cụ và nguyên liệu: 3.4.1 Dụng cụ + Auto clave + Que c y thẳng, que c y vòng + Ống nhỏ giọt + Tủ s y, tủ c y + Microwave + Ống nghiệm + Giá đựng ống nghiệm + Đĩa petri, que c y (tròn, thẳng,) 3.4.2 Nguyên vật liệu + Cồn + Môi trường kiểm tra sinh hóa: chuẩn bị 5 ống... vô trùng + Thước đo mm 4.6 Phương pháp 25 • Nuôi c y vi khuẩn g y bệnh : Bằng cách l y mẫu vi khuẩn từ cơ quan, mô, máu của bệnh súc cho phát triển trân đĩa thạch có chứa môi trường dinh dưỡng đặc biệt • Sau khi được định danh qua phản ứng sinh hóa, vi khuẩn được ria c y trên môi trường TSA để tăng sinh, ủ ở 37oC/24h • L y 1 khuẩn lạc hòa vào 1,5 ml nước sinh lý để đạt độ đục tương đương với ống so... trường nuôi c y Đem ống nghiệm chứa môi trường đi thanh trùng, môi trường KIA là môi trường có thạch nghiêng để đảm bảo môi trường đúng để tiến hành thí nghiệm Hình 29: Môi trường nuôi c y + Thuốc thử và hóa chất kiểm tra sinh hóa: Kovac’s, methyl red, KOH 40%, α napthol, gi y tẩm ure 15 Hình 30: kiểm tra Hóa chất hóa sinh 3.5 c y vi coli và khuẩn E Salmonella trên môi trường để kiểm tra hóa sinh 3.5.1... nghiệm, khu y nhẹ cho vi khuẩn vào môi trường + Ủ trong 24h ở 37o Ống nghiệm 5: Chứa mối trường Ci + Dùng que c y l y khuẩn lạc trên môi trường cho vào ống nghiệm, di chuyển que c y theo hình chử Z trong ống nghiệm + Ủ trong 24h ở 37o + Sau 24h ủ, môi trường không đổi màu Hình 31: Thao tác c y khuẩn lac để kiểm tra hóa sinh Hình 32: Thao tác c y Salmonella giống như thao tác c y trên E.coli 3.6 C y khuẩn... trường nuôi c y Salmonella - Chia 3 đĩa mỗi đĩa thành 10 phần (số phần được chia bằng số khuẩn lạc được 13 chọn) - Trong đó, vi khuẩn Sal148aIchia làm 6 phần và Sal139aI làm 4 phần Chú ý: • Chỉ l y khuẩn lạc một lần duy nhất cho cả môi trường nuôi c y cho cả E.coli và Salmonella và hải có cùng vị trí đánh dấu trên 3 đĩa môi trường • C y vào phần đã chọn để chứa vi khuẩn và chỉ c y một đường duy nhất... c y vòng kéo sang đường thứ hai, đường chan hơi d y và sát với thành đĩa - Que c y thứ 2 c y đường thứ 3 và đường c y thứ 4, ta kéo từ đường thứ 2 đi ra theo đường zigzag -Đường thứ 4, ta kéo theo đường thứ 3 đi ra vẫn theo đường zigzag thưa dần 3.7 Nuôi c y E coli gà trong môi trường NA Hơ que c y cho đến khi que c y ch y đỏ Dùng que c y vô trùng l y lạc khuẩn từ đĩa môi trường chứa khuẩn lạc E coli ... code mẫu c y MC c y EMB - Mỗi code mẫu c y đường c y, đường c y thứ thứ d y, đường c y thứ thứ thưa dần - Dùng que c y vòng, hơ que c y đèn cồn cho ch y đỏ, để nguội, chấm nhẹ vào vi khuẩn mẫu... đường c y, đường c y thứ thứ d y, đường c y thứ thứ thưa dần để l y vi khuẩn đơn lẻ - Dùng que c y vòng, chấm nhẹ vào vi khuẩn mẫu phân gà gà - Dùng que c y có vi khuẩn dàn góc phía để đường c y thứ... XLD BGA Dùng que c y vòng c y môi trường với đường c y - Que c y thứ c y đường c y thứ đường c y thứ Dùng vi khuẩn l y dàn góc phía để đường c y thứ - Từ đường thứ dùng que c y vòng kéo sang đường