Tai lieu chia se tai: wWw.SinhHoc.edu.vn Nguyên n lý kỹ thuật di tru uyền ngượcc Reeverse genetics (kỹ thuuật di truyềền ngược) l thuậật ngữ đượcc sử dụng t ngành virus học ph hân tử để chhỉ việc tạo r virus từ cDNA táchh dòng Hệ thống di trruyền đ tiên áp dụngg cho viruss RNA sợi dương từ năm n 1978 Khác với virus v ngược đầu RNA sợ ợi dương, b thân cáác gen virus RNA A sợi âm không k có khả k tự ự lây nhiễm Do D việc phiên mã v tái virus v sợi âm m đòi hỏi ự đồng biểuu phức p hệ polym merase viru us tạo thành phứcc hệ RN NA nuclleoprotein ` Năăm 1994, Conzelmann cộng ự, với viruss dại tái tổ hợp, h lần đầầu tiên chhứng minh đư ược khả tạo virus RN NA sợi âm hoàn h toàn từ cDNA tácch dòng Yếếu tố định thành côông s tổng hợpp (+) antigeenome từ cD DNA để khhông bắt cặpp với (+)mR RNA mã hóa cho c protein n L, N, P, vìì không cản trở quáá trình tái bảản virus Hình 1: Quy trình tạ ạo virus RNA R sợi âm không phân n đoạn Tế bào b đồng nuôi cấ với pla asmid biểu protein n L, N, P, pla asmid chứa antigenome e virus dại, điề ều khiển a T7 RNA polymerase promoter p Bư ước cuối cù ùng m tế bào với virus vaccinia tái tổ hợp p để cung cấ ấp T7 polymerase, khởi động lây nhiễm trình tái viruss Tai lieu chia se tai: wWw.SinhHoc.edu.vn Tai lieu chia se tai: wWw.SinhHoc.edu.vn Sơ đồ qui trình tái thiết virus tái tổ hợp kỹ thuật di truyền ngược Hình trái: plasmid bao gồm plasmid mang gen chủng virus nhược độc, plasmid mang gen N1 nguyên ven plasmid mang ggen H5 biến đổi nhiễm biến vào tế bào 293T MDCK Thể virus tái thiết hoàn chỉnh nhân lên nhờ tế bào dung hợp 293T MDCK Hình phải: Nhân thể virus tái thiết trứng có phôi 10 ngày tuổi Kết thu thể virus tái tổ hợp với đặc điểm sau: (1) Mang gen chủng virus độc; (2) Mang tính nhước độc bị loại amino acid kiềm; (3) Cho phép nhân nhanh trứng có phôi Tai lieu chia se tai: wWw.SinhHoc.edu.vn Tai lieu chia se tai: wWw.SinhHoc.edu.vn • • • Kỹ thuật di trruyền ngượcc đánh dấuu bước nhảy K n vọt tronng hiểu biết virus sinhh học phhân tử virus gây bệnnh phát triển t vaccinee hiệu chống c lại nhhiều bệnnh virus động vậật gia cầm m G Giúp phát triểển thuốc chủủng ngừa có hiệu vớ ới cúm gia cầầm để ngăn chặn c đại dịchh C thể nói viiệc sử dụng kỹ thuật di truyền ngượ Có ợc hư ướng hợpp lý để tạo chủng c virus phục vụ ụ cho sản xuấất vacxin cúm gia cầm với v tốc độ nhhanh, áp dụnng dòng tếế bào đượ ợc công nhậnn, áp dụng đư ược với mọii chủng viruss gây bệnh thhuộc subbtype khhác đư ược công bố, loại bỏ đượ ợc đoạn độcc gene HA, H tránh đư ược tạp nhiễm n Tai lieu chia se tai: wWw.SinhHoc.edu.vn Tai lieu chia se tai: wWw.SinhHoc.edu.vn (virus hoang dại từ dòng tế bào không chuẩn virus chứa độc tố khác) Tai lieu chia se tai: wWw.SinhHoc.edu.vn ...Tai lieu chia se tai: wWw.SinhHoc.edu.vn Sơ đồ qui trình tái thiết virus tái tổ hợp kỹ thuật di truyền ngược Hình trái: plasmid bao gồm plasmid mang gen chủng virus nhược độc, plasmid mang... Tai lieu chia se tai: wWw.SinhHoc.edu.vn Tai lieu chia se tai: wWw.SinhHoc.edu.vn • • • Kỹ thuật di trruyền ngượcc đánh dấuu bước nhảy K n vọt tronng hiểu biết virus sinhh học phhân tử virus gây... chủủng ngừa có hiệu vớ ới cúm gia cầầm để ngăn chặn c đại dịchh C thể nói viiệc sử dụng kỹ thuật di truyền ngượ Có ợc hư ướng hợpp lý để tạo chủng c virus phục vụ ụ cho sản xuấất vacxin cúm gia