KHẢO SÁT TÌNH HÌNH NHIỄM BỆNH VIÊM NÃO NHẬT BẢN TRÊN LỢN NUÔI TẠI HUYỆN GIA LÂM SURVEY INFECTED SITUATION OF JAPANESE ENCEPHALITIS IN PIGS IN GIA LAM DISTRICT Nguyễn Thị Thu Hằng, Lê Thị Dung, Nguyễn Hồng Thái, Hoàng Cảnh Lâm, Trần Thị Vân Anh Khoa thú y, Học Viện Nông nghiệp Việt Nam Địa tác giả liên hệ: hangthu780@gmail.com Tóm tắt Phương pháp RT-PCR (Reverse transcription polymerase chain reaction) ứng dụng để kiểm tra có mặt virus viêm não Nhật Bản (VNNB) mẫu huyết lợn thu thập địa bàn huyện Gia Lâm nhằm tìm hiểu vai trò lợn chu trình truyền bệnh tự nhiên Tổng số 80 mẫu huyết thu thập từ xã thuộc địa bàn nghiên cứu tỷ lệ dương tính với VNNB 6,25% (5/80) mẫu Trong đó, lợn nái có tỷ lệ dương tính với VNNB cao chiếm 10,71% so với lợn đực giống lợn thịt Bên cạnh đó, hình thức chăn nuôi quy mô trang trại có tỷ lệ dương tính với VNNB chiếm 5,88% thấp so với hình thức chăn nuôi quy mô hộ gia đình chiếm 6,52% Trình tự nucleotide đoạn gen E chủng VNNB nghiên cứu có kích thước 1500 bp tương đồng với khoảng 96,13% - 98,07%; mức độ tương đồng axit amin dao động từ 98,8% - 99,8% chủng virus VNNB nghiên cứu có nguồn gốc phát sinh với chủng Thái Lan chủng Việt Nam phân lập trước thuộc genotype Nghiên cứu góp phần tình hình nhiễm bệnh VNNB lợn địa phương nghiên cứu giúp đưa biện pháp phòng khống chế có hiệu bệnh VNNB gây Từ khóa: Viêm não Nhật Bản, RT-PCR, Tình hình nhiễm bệnh,… Summary A RT-PCR method (Reverse transcription polymerase chain reaction) was established to detect the presence of Japanese encephalitis virus (JEV) in sera from pigs belonging to Gia Lam district and determining the role of pigs in the natural infection cycle The results showed that 6,25% (5/80) of sera collected from communes were positive for JEV In which, sows had the highest positive for JEV was 10.71% than boars and porkers Addition to, the form of farms had positive fori JEV was 5.88% lower than the form of household was 6.25% The result the length of E gene was 1500 nucleotides and the homologies were from 96,13% to 98,07%; the similarities of amino acid range from 98,8% to 99,8% Our phylogenetic tree showed that five isolated JEV strains were the same group with isolated strain from Thailand and Vietnam before and were genotype This study contributed to show the infected situation of JEV in pigs in local research and helping prevention and controlling disease caused by JEV Key words: Japan encephalitis, RT-PCR, Infected situation, Đặt vấn đề Ở Việt Nam, ngành chăn nuôi lợn ngành quan trọng hàng đầu cung cấp nguồn thực phẩm cho xã hội Tuy nhiên, bên cạnh phát triển số lượng quy mô ngành chăn nuôi lợn phải liên tục đối mặt với bệnh dịch nguy hiểm như: lở mồm long móng, hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản, gây thiệt hại lớn kinh tế phát triển chăn nuôi lợn nước ta Bên cạnh có nhiều bệnh truyền lây nguy hiểm lợn người như: bệnh xoắn khuẩn, bệnh viêm não Nhật Bản, bệnh cầu trực khuẩn, Trong đó, virus viêm não Nhật Bản (VNNB) số virus gây viêm não lây truyền qua muỗi, nguy hiểm người Hằng năm, giới ước tính có từ 30000 – 50000 trường hợp mắc có 10000 – 15000 ca chết (Ghosh cs., 2009; Saxena, 2008) Viêm não virus VNNB đặc biệt quan trọng thường viêm não cấp, tỷ lệ tử vong lên đến 30% khoảng 50% bệnh nhân sống sót bị di chứng thần kinh Ở nước ta, từ năm 1960 bệnh có chiều hướng gia tăng trở thành vấn đề nghiêm trọng sức khỏe cộng đồng (Đỗ Quang Hà cs., 1994) Các ca viêm não người thường dạng viêm não cấp tính Việt Nam, miền nam Việt Nam có 1,9 ca mắc 100 000 người giai đoạn 1998 - 2007, với tỷ lệ trung bình ca tử vong 6,4% (Yen NT cs., 2010) Do tính chất nguy hiểm nên bệnh không mối quan tâm lớn ngành y tế mà ngành thú y… Bệnh viêm não Nhật Bản bệnh truyền lây từ động vật sang người Flavivirus gây Trong tự nhiên, virus trì truyền lây qua chu trình bao gồm muỗi (chủ yếu muỗi Culex), chim động vật có vú Lợn coi động vật cảm nhiễm cao ký chủ cho nhân lên virus VNNB Ở vùng có bệnh lưu hành, virus gây rối loạn sinh sản (chết phôi, thai khô, thai chết vô sinh) lợn Theo kết khảo sát nghiên cứu Hồ Việt Thị Thua cộng (2007) có tới 10/11 loài động vật nuôi hoang dã Cần Thơ nhiễm virus VNNB, heo loài động vật có vai trò quan trọng chu trình truyền bệnh vùng Sự diện virus VNNB tác nhân làm giảm suất sinh sản đàn heo mà mối đe dọa đến sức khỏe người vùng Do vậy, nhằm tạo sở để đưa biện pháp phòng khống chế có hiệu bệnh VNNB gây người, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Khảo sát tình hình nhiễm bệnh viêm não Nhật Bản lợn nuôi huyện Gia Lâm” Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật liệu - Mẫu máu lợn nghi nhiễm VNNB lấy xã Phù Đổng, Dương Xá, Lệ Chi, Trâu Quỳ, Dương Quang thuộc địa bàn huyện Gia Lâm - Hóa chất cho phản ứng RT – PCR: Kít tách chiết RNA tổng số (QIAamp), kit dùng phản ứng RT-PCR, - Các trang thiết bị, máy móc khác phục vụ cho nghiên cứu phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam 2.2 Địa điểm, thời gian nghiên cứu - Địa điểm nghiên cứu: Phòng thí nghiệm môn Bệnh lý, Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam - Thời gian nghiên cứu: từ 09/2013 đến 09/2014 2.3 Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp thu thập xử lý số liệu: Số liệu tổng đàn, cấu đàn, tình hình chăn nuôi dịch bệnh khu vực nghiên cứu thu thập từ trạm thú y huyện Gia Lâm Số liệu xử lý phần mềm Microsoft Excel version 2003 - Phương pháp lấy mẫu máu lợn: Các lợn trang trại nông hộ chăn nuôi đánh số ngẫu nhiên, sau tiến hành lấy máu vịnh tĩnh mạch cổ sau đưa phòng thí nghiệm để chắt huyết bảo quản -200C trước xét nghiệm - Phương pháp RT-PCR: RNA virus tách chiết kit QIAamp để tiến hành phản ứng RT- PCR Quy trình tách chiết RNA virus theo hướng dẫn nhà sản xuất Kit Cặp mồi sử dụng cho phản ứng RT-PCR gồm mồi xuôi Ef (5’-TGYTGGTCGCTCCGGCTTA- 3’) mồi ngược Er (5’-AAGATGCCACTTCCAYCTC- 3’) nhằm khuyếch đại đoạn gien E dài 1500 bp (Hồ Thị Việt Thu Phan Thị Ngà, 2012) - Kỹ thuật giải trình tự gene: Sử dụng cặp mồi (Ef Er) để giải trình tự gen E virus JEV máy giải trình tự gen tự động Beckman Coulter CEQ 8000 (Mỹ) phòng thí nghiệm trọng điểm CNSH khoa Thú y Kết thu xử lý phần mềm Seq 8000 Blast, ngân hàng gen (GenBank) (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov) xử lý kết MEGA6 genetyx version 5.0 - Phân tích, xây dựng sinh học phân tử: Từ trình tự gen E, tiến hành truy cập Ngân hàng gen để có thông tin gen E chủng virus tham chiếu tiến hành so sánh đặc điểm di truyền thiết lập sinh học phân tử phần mềm MEGA6 Kết quả và thảo luận 3.1 Tình hình chăn nuôi địa bàn huyện Gia Lâm Trong trình thực nghiên cứu này, tiến hành thu thập thông tin số lượng lợn địa bàn huyện Gia Lâm giai đoạn 2011-2014 từ trạm thú y Kết trình bày bảng 3.1 Bảng 3.1 Số lượng lợn số xã thuộc huyện Gia Lâm giai đoạn 2011– 2014 Số lượng lợn ( con) Năm STT Xã Năm 2011 Năm 2012 Năm 2013 Năm 2014 Phù Đổng 3830 3454 3443 3420 Dương Xá 1720 1820 2062 2037 Lệ Chi 2850 3550 3205 3605 Trâu Quỳ 2297 1764 2224 1928 Dương Quang 3075 3650 4700 8040 (Theo số liệu thống kê của trạm thú y huyện Gia Lâm) Qua bảng 3.1, số lượng lợn có xu hướng chung tăng mạnh xã Dương Xá (+18,43%), Lệ Chi (+26,49%), Dương Quang (+161,46%), hai xã Phù Đổng (-10,7%) Trâu Quỳ (-16,06%) có xu hướng giảm so sánh năm 2014 năm 2011 Nhìn chung, tình hình chăn nuôi có xu hướng tăng lên số lượng quy mô chăn nuôi có chiều hướng chuyển dịch theo định hướng phát triển chăn nuôi theo xã dẫn đến sai khác xã huyện Gia Lâm 3.2 Hồ sơ mẫu sử dụng nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành thu thập mẫu máu từ xã địa bàn huyện Gia Lâm sau chắt huyết bảo quản -20 0C phòng thí nghiệm Các thông tin nguồn gốc mẫu máu ghi chép hệ thống lại bảng 3.2 Bảng 3.2 Thông tin mẫu sử dụng nghiên cứu Số lượng STT Xã Đối tượng lợn Ghi mẫu máu Tiêm phòng bệnh đỏ Phù Đổng 15 Lợn thịt, lợn nái Dương Xá Lợn thịt, lợn nái Tiêm phòng bệnh đỏ Lợn thit, lợn nái, lợn đực Tiêm phòng bệnh đỏ, PRRS Lệ Chi 18 giống Lợn thịt, lợn nái, lợn đực Tiêm phòng bệnh đỏ, PRRS, Trâu Quỳ 15 giống FMD Dương Quang 25 Lợn thịt Tiêm phòng bệnh đỏ Tổng 80 Từ bảng 3.2, cho thấy mẫu huyết lấy ngẫu nhiên từ nhóm lợn riêng biệt nhiều độ tuổi khác Và lợn chưa tiêm phòng vắc xin phòng bệnh Viêm não Nhật Bản 3.3 Tình hình nhiễm bệnh VNNB lợn huyện Gia Lâm 3.3.1 Tình hình nhiễm bệnh theo địa bàn các xã nghiên cứu Từ mẫu huyết thu thập được, tiến hành kiểm tra có mặt virus VNNB phản ứng RT-PCR với cặp mồi đặc hiệu với gen E virus VNNB Kết mẫu huyết chẩn đoán dương tính phản ứng RT-PCR xã nghiên cứu trình bày bảng 3.3 STT Bảng 3.3.Tình hình nhiễm bệnh VNNB số xã nghiên cứu Số mẫu Số mẫu Số mẫu dương Tỷ lệ dương tính Xã xét nghiệm âm tính tính (%) Phù Đổng 15 15 0 Dương Xá 7 0 Lệ Chi 18 16 11,11 Trâu Quỳ 15 15 0 Dương Quang 25 22 12,0 Tổng 80 75 6,25 Kết bảng 3.3 cho thấy tỷ lệ nhiễm VNNB xã nghiên cứu chiếm 5/80 mẫu (6,25%) Riêng xã Phù Đổng, Dương Xá Trâu Quỳ mẫu huyết có mặt virus VNNB Kết nghiên cứu thấp so với nghiên cứu Hồ Thị Việt Thua,b cộng (2008) tỷ lệ dương tính với virus VNNB 8,33% mẫu não thu thập từ heo con, thai sẩy, thai chết lưu An Giang Vĩnh Long 3.3.2 Tình hình nhiễm bệnh theo các nhóm lợn Sau thu thông tin mẫu chẩn đoán dương tính với VNNB phương pháp RT-PCR theo xã, tiếp tục hệ thống thông tin mẫu theo nhóm lợn chính: lợn nái, lợn đực giống, lợn thịt Kết trình bày bảng 3.4 Bảng 3.4 Tình hình nhiễm bệnh VNNB theo các nhóm lợn STT Nhóm lợn Số mẫu máu Số mẫu âm tính Số mẫu dương Tỉ lệ (%) xét nghiệm tính dương tính Lợn nái 28 25 10,71 Lợn đực giống 23 22 4,35 Lợn thịt 29 28 3,45 Tổng 80 75 6,25 Kết bảng 3.4 cho thấy: Trong nhóm lợn lợn nái cho tỷ lệ dương tính với VNNB cao chiếm 10,71%, sau tới lợn đực giống lợn thịt 4,35% 3,45% Kết nghiên cứu nhóm lợn có sai khác với nghiên cứu Hồ Thị Việt Thua cộng (2008) tỷ lệ dương tính với virus VNNB lợn nái 14,63% Đặc biệt, lợn nái có nhiều hội phơi nhiễm virus VNNB so với lợn đực giống lợn thịt nên khả nhiễm VNNB nguy 3.3.3 Tình hình nhiễm bệnh theo hình thức chăn nuôi Các mẫu huyết thu thập từ đàn lợn chăn nuôi theo quy mô khác chẩn đoán phương pháp RT-PCR Kết trình bày bảng 3.5 STT Bảng 3.5 Tình hình nhiễm bệnh VNNB theo hình thức chăn nuôi Quy mô chăn Số mẫu xét Số mẫu dương Tỷ lệ dương tính Số mẫu âm tính nuôi nghiệm tính (%) Hộ gia đình 46 43 6,52 Trang trại 34 32 5,88 Tổng 80 75 6,25 Từ kết bảng 3.5, nhận thấy có sai khác hai hình thức chăn nuôi quy mô hộ gia đình trang trại Trong đó, chăn nuôi quy mô trang trại có tỷ lệ dương tính với virus VNNB thấp so với chăn nuôi quy mô hộ gia đình Điều lý giải trại chăn nuôi lợn đại có công tác vệ sinh thú y phòng bệnh, diệt trừ ruồi muỗi thiết kế chuồng nuôi đảm bảo nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng, mật độ đàn nuôi hợp lý nên giúp hạn chế tỷ lệ mắc bệnh VNNB so với lợn chăn nuôi theo hộ gia đình Trong nghiên cứu Hồ Thị Việt Thub cộng (2008) yếu tố bụi rậm (nơi trú ẩn muỗi Culex), môi trường có nhiều ao nước tù đọng (nơi sinh sản muỗi Culex) yếu tố quan trọng làm tăng nguy nhiễm virus VNNB Điều giúp giải thích cho kết nghiên cứu tỷ lệ nhiễm bệnh VNNB cao hộ chăn nuôi 3.3.4 Kết quả giải trình tự gen các chủng virus VNNB Từ mẫu huyết chẩn đoán dương tính RT-PCR (hình 3.1), tiến hành đặt tên cho chủng virus VNNB (Japanese encephalitis virus - JEV) tương ứng VNUA_Vetlab_JEV01, VNUA_Vetlab_JEV02, VNUA_Vetlab_JEV03, VNUA_Vetlab_JEV04, VNUA_Vetlab_JEV05 Sản phẩm thu sau tiến hành phản ứng RT-PCR tinh sạch, sau chạy phản ứng PCR sequence với mồi đơn (Ef Er) Tiến hành tinh sản phẩm phản ứng PCR sequence với hóa chất hướng dẫn sử dụng nhà sản xuất (Beckman Coulter), sau tiến hành giải trình tự gen Trình tự nucleotide xử lý phần mềm Seq 8000 genetyx version 5.0 máy tính cho kết đoạn gen dài 1500 bp Trình tự nucleotide chủng virus JEV khẳng định xác lại việc tham chiếu từ ngân hàng gen thông qua chương trình Blast (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov) 1500 bp Hình 3.1 Kết điện di sản phẩm phản ứng RT-PCR (Thang chuẩn Maker:2000bp; giếng từ 1-5 mẫu của chủng virus JEV nghiên cứu; giếng đối chứng dương; giếng đối chứng âm) 3.3.5 Kết quả so sánh trình tự nucleotide đoạn gen E các chủng JEV nghiên cứu Kết so sánh trình tự nucleotide chủng JEV nghiên cứu cho thấy chúng có sai khác 89 vị trí nucleotide (44, 73, 75, 87, 99, 107, 114, 123, 186, 198, 210, 240, 243, 249, 258, 294, 297, 306, 341, 368, 411, 425, 450, 451, 458, 477, 501, 516, 522, 540, 546, 570, 585, 588, 796, 810, 826, 837, 852, 867, 870, 912, 951, 987, 996, 1002, 1005, 1017, 1029, 1080, 1087, 1092, 1134, 1143, 1146, 1176, 1178, 1179, 1191, 1212, 1218, 1221, 1236, 1248, 1320, 1326, 1332, 1338, 1347, 1353, 1359, 1387, 1401, 1407, 1415, 1424, 1444, 1445, 1447, 1450, 1454, 1465, 1481, 1497, 1500) (minh họa hình 3.2) có mức độ tương đồng nucleotide từ 96,13% 98,07% chủng nghiên cứu Hình 3.2 So sánh trình tự nucleotide đoạn gen ORF1 chủng virus JEV nghiên cứu vị trí 243, 249, 258, 294, 297 Chú giải: Sai khác nucleotide ký hiệu nucleotide đường giới hạn đỏ 3.3.6 Kết quả so sánh trình tự amino acid các chủng JEV nghiên cứu Sau tiến hành so sánh trình tự nucleotide, tiếp tục so sánh trình tự axit amin phần mềm genetyx (version 5.0) có vị trí sai khác axit amin (15, 36, 81, 123, 142, 151) (minh họa hình 3.3) có mức độ tương đồng axit amin dao động từ 98,8% - 99,8% chủng nghiên cứu Hình 3.3 So sánh trình tự axit amin đoạn gen E chủng virus JEV nghiên cứu vị trí 123, 142, 151 Chú giải: Sai khác axit amin ký hiệu axit amin đường giới hạn đỏ 3.3.7 Kết quả xây dựng sinh học phân tử các chủng virus JEV nghiên cứu Sau so sánh mức độ tương đồng nucleotide chủng virus JEV, dựa vào phần mềm MEGA6 tiến hành xây dựng sinh học phân tử để xác định nguồn gốc phát sinh chủng virus nghiên cứu Kết hình 3.4 cho thấy chủng virus JEV nằm nhánh phát sinh không nhánh phát sinh với chủng virus JEV Malaysia (1970), Indonesia (1981), Singapore (1952), Nhật Bản (1935), Trung Quốc (1949), Ấn Độ (1956), Hàn Quốc (1987) Chủng VNUA_Vetlab_JEV01 nằm nhánh với chủng AB728498 (Hà Tây, 2006) chủng VNUA_Vetlab_JEV02 nằm nhánh với chủng AB728499 (Kon Tum, 2007) Ba chủng VNUA_Vetlab_JEV03, VNUA_Vetlab_JEV04, VNUA_Vetlab_JEV05 nằm nhánh phát sinh với chủng DQ343290 (Thái Lan, 2006), AB728501 (Tây Ninh, 2008), HQ009266 (Cần Thơ, 2005) nhánh khác với nhánh chủng khác VNUA_Vetlab_JEV01 VNUA_Vetlab_JEV02 Qua kết phân tích sinh học phân tử chủng virus JEV nghiên cứu thuộc genotype khác với nhánh phát sinh genotype khác genotype 2, 3, 4, Điều chứng minh có lây truyền mầm bệnh quốc gia giới (có thể nhiều nguyên nhân) AY376465 VN22/Viet Nam/2002/Swine blood 62 AY376464 VN88/Viet Nam/2001/Swine blood AB728498 VNHT /07/2006 Culex t ritaeniorhynchus 49 70 VNUA Vetlab JEV01 76 KC196115 CNS769/Lao/2009/Homo sapiens 2009 83 7884 GU108335 09P141/Japan/2009/Serum swine DQ404094 SC04-25/China/2004/Culex sp VNUA Vetlab JEV02 AB728499 VNKT /479/2007 Culex vishnui 71 80 GU556217 JX61/China/2008/pig 74 KJ000037 ZJ1311/China/2013/Culex trit aeniorhynchus 92 DQ404100 SH03-124/China/2003/Culex t ritaeniorhynchus 84 60 51 Genotype 97 FJ185146 JaNAr13-04/Japan/2004/mosquito GQ415355 JE91/Korea/1991/mosquito AY377578 95-91/Japan/1995/Swine blood 97 AB471669 JEV/sw/Okinawa/377/2008 Sus scrofa DQ343290 JEKK1116/T hailand/2006 98 VNUA Vet lab JEV03 74 98 100 100 AB728501 VNT N/04/2008 Culex trit aeniorhynchus VNUA Vetlab JEV04 VNUA Vetlab JEV05 81 HQ009266 CT -MO-P7 pig 97 FJ185155 LAH 2079-05 mosquito 100 U70391 B2239/T hailand/1984/Pig U70421 WT P-70-22/Malaysia/1970/Mosquito U70406 JKT 5441/Indonesia/1981/Mosquit o 100 41 82 98 60 Genotype AY376463 VN50/Viet Nam/1989/Human brain AY376461 VN207/Viet Nam/1986/Human brain U34927 K87P39/Korea/1987/Culex t ritaeniorhynchus U14163 SA14/China/1954 51 U70417 PhAn1242/t he Philippines/1984/Pig/serum 50 U70403 826309/India/1982/Human U70394 G8924/India/1956/Mosquito 100 99 65 19 35 Genotype L48961 Beijing/China/1949 U70420 VN118/1979/Vietnam/Mosquit o 88 U03696 Saigon U03694 Japan/Nakayama/1935 S47265 Japan/1966 U70409 JKT 9092/Indonesia/1981/Mosquit o 100 U70408 JKT 7003/Indonesia/1981/Mosquito Genotype Genotype KM677246 T engah/Singapore/1952/Homo sapiens 0.02 Chú giải: Hình 3.4 Cây sinh học phân tử chủng virus JEV nghiên cứu Chú giải: : Ký hiệu cho chủng JEV nghiên cứu : Ký hiệu cho chủng JEV phân lập trước Việt Nam Kết luận Bằng phương pháp RT-PCR tỷ lệ nhiễm VNNB xã nghiên cứu chiếm 6,25% Trong đó, lợn nái có tỷ lệ dương tính với VNNB cao chiếm 10,71% so với lợn đực giống lợn thịt Bên cạnh đó, hình thức chăn nuôi quy mô trang trại có tỷ lệ dương tính với VNNB chiếm 5,88% thấp so với hình thức chăn nuôi quy mô hộ gia đình chiếm 6,52% Trình tự nucleotide đoạn gen E chủng JEV nghiên cứu có kích thước 1500 bp tương đồng với khoảng 96,13% - 98,07%; mức độ tương đồng axit amin dao động từ 98,8% - 99,8% chủng virus JEV nghiên cứu có nguồn gốc phát sinh với chủng Thái Lan (DQ343290) chủng Việt Nam phân lập trước (AB728498, AB728499, AB728501, HQ009266) thuộc genotype Tài liệu tham khảo a Hồ Thị Việt Thua, Huỳnh Ngọc Trang, Trần Thị Hoàng Oanh, Trần Đình Từ, Châu Bá Lộc (2007), “Khảo sát tỷ lệ lưu hành kháng thể viêm não Nhật Bản số loài động vật nuôi hoang dã Cần Thơ”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, tập XIV, số 3, trang 10-13 b Hồ Thị Việt Thub, Huỳnh Kim Loan, Huỳnh Ngọc Trang, Vũ Thị Quế Hương, Trần Đình Từ (2007), “Khảo sát tính chất mùa bệnh viêm não Nhật Bản heo thành phố Cần Thơ”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, tập XIV, số 3, trang 14-19 c Hồ Thị Việt Thua, Huỳnh Kim Loan, Huỳnh Ngọc Trang, Trần Đình Từ (2008), “Chẩn đoán bệnh viêm não Nhật Bản hội chứng rối loạn sinh sản heo”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, tập XV, số 1, trang 5-12 d Hồ Thị Việt Thub, Huỳnh Kim Loan, Nguyễn Thị Hoàng Oanh, Huỳnh Ngọc Trang, Trần Đình Từ (2008), “Ứng dụng kỹ thuật Mac-ELISA để xác định tỷ lệ nhiễm virut viêm não Nhật Bản heo thành phố Cần Thơ”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, tập XV, số 1, trang 13-18 e Hồ Thị Việt Thu, Phan Thị Ngà (2012), “Phân tích di truyền virut viêm não Nhật Bản chủng CTMP-7”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, tập XIX, số 3, trang 10-17 f Do Quang Ha, Vu Que Huong, Huynh Kim Loan, Dinh Quoc Thong, Vincent D (1994), “Current situation of Japanese encephalitis in the South of Vietnam, 1976-1992”, Tropical Medicine, 36 (4), pp 202-214 g Ghosh D, Basu A (2009): Japanese Encephalitis-Pathological and Clinical Perspective, PloS Negl Trop Dis, 3; e437 h Saxena SK (2008): Japanese encephalitis: perspectives and new developments Future Neurol; 3:515-521 i Yen NT, Duffy MR, Hong NM, Hien NT, Fischer M (2010) Surveillance for Japanese Encephalitis in Vietnam, 1998-2007 Am J Trop Med Hyg 83:816-819 ... phòng khống chế có hiệu bệnh VNNB gây người, tiến hành nghiên cứu đề tài: Khảo sát tình hình nhiễm bệnh viêm não Nhật Bản lợn nuôi huyện Gia Lâm Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật... phòng bệnh đỏ Tổng 80 Từ bảng 3.2, cho thấy mẫu huyết lấy ngẫu nhiên từ nhóm lợn riêng biệt nhiều độ tuổi khác Và lợn chưa tiêm phòng vắc xin phòng bệnh Viêm não Nhật Bản 3.3 Tình hình nhiễm bệnh. .. thập thông tin số lượng lợn địa bàn huyện Gia Lâm giai đoạn 2011-2014 từ trạm thú y Kết trình bày bảng 3.1 Bảng 3.1 Số lượng lợn số xã thuộc huyện Gia Lâm giai đoạn 2011– 2014 Số lượng lợn (