TTLA Nghiên cứu thành phần hóa học và sắc ký dấu vân tay của thân rễ hai loài: củ gấu (Cyperus rotundus L.) và củ gấu biển (Cyperus stoloniferus Retz.)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN MINH CHÂU NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ SẮC KÝ DẤU VÂN TAY CỦA THÂN RỄ HAI LOÀI: CỦ GẤU (CYPERUS ROTUNDUS L.) VÀ CỦ GẤU BIỂN (CYPERUS STOLONIFERUS RETZ.) Chuyên ngành: Hóa Hữu Mã số: 62440114 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Hà Nội - 2016 Công trình hoàn thành tại: Trường Đại học Bách khoa Hà Nội Người hướng dẫn khoa học: TS Trần Thượng Quảng TS Nguyễn Tiến Đạt Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án tiến sĩ cấp Trường họp Trường Đại học Bách khoa Hà Nội Vào hồi …… giờ, ngày … tháng … năm ……… Có thể tìm hiểu luận án thư viện: Thư viện Tạ Quang Bửu - Trường ĐHBK Hà Nội Thư viện Quốc gia Việt Nam I GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Mở đầu Việt Nam quốc gia có y học cổ truyền lâu đời với việc sử dụng loại thảo dược phòng chữa bệnh, tăng cường sức khoẻ Một dược liệu sử dụng rộng rãi vị thuốc Hương phụ Dược liệu Hương phụ chế biến từ thân rễ loài củ gấu (Cyperus rotundus L.) Nhưng nay, để phục vụ cho nhu cầu sử dụng nước xuất khẩu, vị thuốc có tên “hương phụ” Việt Nam, chủ yếu khai thác từ loài củ gấu biển (Cyperus stoloniferus Retz.) Tổ chức Y tế Thế giới Bộ Y tế nước ta có quy định việc nhận dạng dược liệu cổ truyền từ nguyên liệu thực vật với việc xây dựng tiêu chuẩn từ nhận dạng cây, phận sử dụng đến việc đảm bảo chất lượng trình chuẩn bị nguyên liệu hay sản phẩm cuối Nếu không xác định hoạt chất cần phải có dấu vân tay sắc ký để xác định chất hỗn hợp chất Chính tác giả lựa chọn loài thực vật làm đối tượng nghiên cứu luận án: Nhiệm vụ luận án - Nghiên cứu thành phần hóa học: phân lập hợp chất từ hai loài củ gấu củ gấu biển phương pháp sắc ký, xác định cấu trúc hóa học chất tách phương pháp phổ kết hợp - Nghiên cứu sắc ký dấu vân tay: xây dựng liệu vân tay sắc ký củ gấu, củ gấu biển sở thị hóa học, xác định hàm lượng số hoạt chất mẫu củ gấu, củ gấu biển dược liệu Hương phụ thu thập địa điểm khác Ý nghĩa khoa học đóng góp luận án 3.1 Ý nghĩa khoa học Luận án đóng góp hiểu biết thành phần hóa học sắc ký dấu vân tay loài thực vật: củ gấu, củ gấu biển Việt Nam Ứng dụng phương pháp vật lý đại nghiên cứu cấu trúc hóa học hợp chất hữu 3.2 Những đóng góp luận án Hai loài củ gấu củ gấu biển Việt Nam lần đầu nghiên cứu cách có hệ thống thành phần hóa học dấu vân tay sắc ký 3.2.1 Về thành phần hóa học ● Từ củ gấu (Cyperus rotundus L.) phân lập xác định cấu tr c hóa học 15 hợp chất ()-3,5,6,7,8,4hexahydroxyflavane (CR1), (+)-Catechin (CR2), Eriodictyol (CR3), Luteolin (CR4), 7,4-dihydroxy-5,3-dimethoxyflavone (CR5), Hovetrichoside C (CR6), Piceatannol (CR7), Resveratrol (CR8), trans-Scirpusin A (CR9), trans-Scirpusin B (CR10), Cassigarol E (CR11), Cyperusol C (1,4-dihydroxyeudesman-11ene) (CR12), 1,4-dihydroxyeudesman-11-ene (CR13), 5,7dihydroxychromone (CR14), (+)-lyoniresinol 3a-O--D-glucoside (CR15) Trong đó, hợp chất ()-3,5,6,7,8,4-hexahydroxyflavane (CR1) hợp chất ● Từ củ gấu biển (Cyperus stoloniferus Retz.) phân lập xác định cấu tr c hóa học 12 hợp chất, (S)-5,5,7trihydroxy-2,4-dimethoxy-6-methylflavanone (CS1), Rengasin (CS2), -Mangostin (CS3), ()-3,5,6,7,8,4-hexahydroxyflavane (CS4), (+)-Catechin (CS5), Eriodictyol (CS6), Luteolin (CS7), Piceatannol (CS8), Resveratrol (CS9), trans-Scirpusin A (CS10), trans-Scirpusin B (CS10), Cyperusol C (1,4-dihydroxyeudesman11-ene) (CS12) Trong số 12 hợp chất th hai hợp chất CS1 ((S)-5,5,7-trihydroxy-2,4-dimethoxy-6-methylflavanone hợp chất ới  Trong số 12 chất phân lập từ củ gấu biển có hợp chất trùng với chất phân lập từ củ gấu 3.2.2 Về sắc ký dấu vân tay: - So sánh thành phần hoá học loài C rotundus C stoloniferus dựa theo kết phân lập xác định cấu trúc hợp chất kết hợp với phân tích hệ thống sắc ký HPTLC HPLC - Thiết lập điều kiện phân tích dấu vân tay sắc ký HPLC Đánh giá độ tương đồng mẫu nghiên cứu kỹ thuật HPLC Kết cho thấy có độ tương đồng cao mẫu thân rễ củ gấu biển lấy từ địa phương khác (từ 0,9424 đến 0,9903) Xác định vùng sắc ký đồ (từ phút thứ đến phút thứ 20) cho việc nhận dạng dấu vân tay sắc ký để phân biệt hai loài - Xây dựng điều kiện định lượng thành phần hoạt chất đối tượng nghiên cứu hệ thống HPLC việc sử dụng chất phân lập làm chất đối chứng Bố cục luận án Luận án dày 146 trang với 34 bảng số liệu, 101 hình 174 tài liệu tham khảo trình bày sau: Mục lục, Danh mục kí hiệu chữ viết tắt, Danh mục bảng, Danh mục hình ảnh, đồ thị Mở đầu (2 trang) Chương 1: Tổng quan (33 trang) Chương 2: Đối tượng phương pháp nghiên cứu (4 trang) Chương 3: Thực nghiệm Kết (17 trang) Chương 4: Kết Bàn luận (72 trang) Kết luận kiến nghị (2 trang) Danh mục công tr nh liên quan đến luận án (1 trang) phần tài liệu tham khảo (15 trang), luận án có phần phụ lục gồm phổ hợp chất phân lập được, kết phân tích sắc ký dấu vân tay II NỘI DUNG LUẬN ÁN MỞ ĐẦU Phần mở đầu đề cập đến ý nghĩa khoa học, tính thực tiễn, đối tượng nhiệm vụ nghiên cứu luận án CHƢƠNG TỔNG QUAN Giới thiệu sơ lược thực vật họ Cói (Cyperaceae) Giới thiệu chi Cyperus L., nghiên cứu công dụng, hoạt tính sinh học, thành phần hóa học sắc ký dấu vân tay chi Cyperus L Giới thiệu sơ lược củ gấu củ gấu biển Các nghiên cứu công dụng, hoạt tính sinh học, thành phần hóa học sắc ký dấu vân tay Việt Nam giới củ gấu củ gấu biển T V U 2.1 Mẫu thực vật Củ gấu (Cyperus rotundus L.) thu hái Đông Anh, Hà Nội củ gấu biển (Cyperus stoloniferus Retz.) thu hái Tiền Hải, Thái Bình Các mẫu giám định PGS.TS.Trần Huy Thái Mẫu nghiên cứu dấu vân tay sắc ký bao gồm 06 mẫu củ gấu, 06 mẫu củ gấu biển 04 mẫu dược liệu Hương phụ thu thập vào tháng năm 2015 từ địa điểm khác 2.2 Phƣơng pháp phân ập hợp chất Mẫu thân rễ củ gấu củ gấu biển sơ chế, phơi khô bóng râm, xay nhỏ, chiết siêu âm với methanol Dịch chiết cô cạn áp suất giảm thu cặn chiết methanol Hòa cặn chiết với nước, chiết phân bố cặn chiết thân rễ củ gấu n-hexane, cặn chiết thân rễ củ gấu biển chloroform sau ethyl acetate thu cặn chiết n-hexane, chloroform tương ứng, cặn chiết ethyl acetate cặn nước Sắc ký cột tiến hành với pha tĩnh Silica gel 60 pha đảo RP-18, nhựa trao đổi ion Diaion HP-20, Sephadex LH-20 2.3 Phƣơng pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất Sử dụng phương pháp phổ như: phổ hồng ngoại (FT-IR), phổ khối phun mù điện tử (ESI-MS), phổ khối phân giải cao (HR-ESIMS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT), hai chiều (HSQC, HMBC, NOESY) 2.4 Phƣơng pháp xây dựng dấu vân tay sắc ký Sử dụng phương pháp sắc ký lớp mỏng phân tích sắc ký lỏng hiệu cao CHƢƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 3.1 Chiết phân lập chất từ thân rễ củ gấu Hình 3.1 Sơ đồ chiết phân bố mẫu thân rễ củ gấu Hình 3.2 Sơ đồ phân lập cặn chiết n-hexane thân rễ củ gấu Hình 3 Sơ đồ phân lập cặn chiết ethyl acetate thân rễ củ gấu Hình 3.4 Sơ đồ phân lập cặn nƣớc thân rễ củ gấu Thông số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập từ củ gấu Hợp chất CR1: ()-3,5,6,7,8,4-hexahydroxyf avane (Hợp chất ới Chất bột màu trắng SKLM pha thường: Rf = 0,45 (chloroform:methanol 5:1 v/v), vết thuốc thử H2SO4 10% 25 [] D = 0,0 (c 0,1, MeOH) IR max(KBr): 3400, 1620, 1530, 1470, 1150 cm-1 H-NMR (500 MHz, CD3OD):  7,23 (2H, d, J = 8,0 Hz, H-2',6'), 6,80 (2H, d, J = 8,0 Hz, H-3',5'), 4,60 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-2), 3,99 (1H, m, H-3), 2,89 (1H, dd, J = 5,5, 16,5 Hz, Hb-4), 2,52 (1H, dd, J = 8,0, 16,5 Hz, Ha-4) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD):  82,8 (C-2), 68,8 (C-3), 28,8 (C-4), 158,3 (C-5), 157,7 (C-6), 158,3 (C-7), 157,4 (C-8), 156,9 (C-9), 100,9 (C-10), 131,5 (C-1'), 129,6 (C-2'), 116,0 (C-3'), 156,9 (C-4'), 116,0 (C-5'), 129,6 (C-6') HR-ESI-MS m/z: 307,0810 [M + H]+ (calcd 307,0818 cho C15H15O7) ợp chất R2: (+)-catechin Tinh thể màu trắng, mp 173-175oC SKLM pha thường: Rf = 0,35 (chloroform:methanol:nước 5:1:0,01 v/v), vết UV 254 nm thuốc thử H2SO4 10% 25 [] D = +17 (c 0,1, CH3COCH3) H-NMR (500 MHz, DMSO-d6):  6,72 (1H,br s, H-2'), 6,68 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5'), 6,59 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-6'), 5,89 (1H, br s, H6), 5,70 (1H, br s, H-8), 4,48 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-2), 3,83 (1H, m, H-3), 2,64 (1H, dd, J = 5,0, 16,0 Hz, Ha-4), 2,35 (1H, dd, J = 8,0, 16,0 Hz, Hb-4) 13 C-NMR (125 MHz, DMSO-d6):  81,1 (C-2), 66,5 (C-3), 27,9 (C4), 156,3 (C-5), 95,3 (C-6), 156,6 (C-7), 94,1 (C-8), 155,5 (C-9), 99,3 (C-10), 130,8 (C-1'), 114,6 (C-2'), 145,0 (C-3'), 145,0 (C-4'), 115,3 (C-5'), 118,6 (C-6') ESI-MS (positive) m/z 291 [M+H]+ ợp chất R3: eriodictyol Chất bột màu vàng nhạt SKLM pha thường: Rf = 0,45 (chloroform:methanol 4:1 v/v), vết thuốc thử H2SO4 10% H-NMR (500 MHz, CD3OD):  6,93 (1H, s, H-2'), 6,80 (2H, m, H5', H-6'), 5,85 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 5,83 (1H, d, J = 2,0 Hz, H6), 5,28 (1H, dd, J = 3,0, 12,5 Hz, H-2), 3,05 (1H, dd, J = 13,0, 17,0 Hz, Hb-3), 2,69 (1H, dd, J = 3,0, 17,0 Hz, Ha-3) 13 C-NMR (125MHz, CD3OD):  80,4 (C-2), 44,0 (C-3), 197,6 (C-4), 165,3 (C-5), 97,0 (C-6), 168,6 (C-7), 96,2 (C-8), 164,7 (C-9), 103,2 (C-10), 131,7 (C-1'), 114,7 (C-2'), 146,4 (C-3'), 146,8 (C-4'), 116,2 (C-5'), 119,2 (C-6') ESI-MS (positive) m/z 289 [M+H]+ ợp chất R4: luteolin Chất bột màu vàng SKLM pha thường: Rf = 0,45 (chloroform:methanol:nước 10:1:0,01 v/v), vết UV 254 nm thuốc thử H2SO4 10% H-NMR (500 MHz, DMSO-d6):  7,26 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-6'), 7,24 (1H, br s, H-2'), 6,65 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5'), 6,38 (1H, br s, H-6), 6,19 (1H, br s, H-8), 5,93 (1H, s, H-3) 13 C-NMR (125 MHz, DMSO-d6):  166,4 (C-2), 102,1 (C-3), 181,2 (C-4), 161,3 (C-5), 99,3 (C-6), 163,7 (C-7), 94,1 (C-8), 157,4 (C-9), 102,7 (C-10), 120,4 (C-1'), 112,8 (C-2'), 146,2 (C-3'), 151,2 (C-4'), 116,0 (C-5'), 118,8 (C-6') ESI-MS (positive) m/z 287 [M+H]+ ợp chất R5: 7,4-dihydroxy-5,3-dimethoxyflavone Chất bột màu vàng SKLM pha thường: Rf = 0,45 (chloroform:methanol:nước 10:1,5:0,01 v/v), vết UV 254, 366 nm thuốc thử H2SO4 10% H-NMR (500 MHz, CD3OD):  7,48 (1H, dd, J = 2,0, 8,5 Hz, H6'), 7,45 (1H, d, J = 2,0, H-2'), 6,94 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5'), 6,58 (1H, d, J = 2,0, H-8), 6,57 (1H, s, H-3), 6,43 (1H, d, J = 2,0, H-6), 3,97 (3H, s, OCH3), 3,91 (3H, s, OCH3) ESI-MS (positive) m/z 315 [M+H]+ ợp chất R6: hovetrichoside Chất bột màu vàng SKLM pha thường: Rf = 0,35 (chloroform:methanol:nước 3,5:1:0,01 v/v), vết thuốc thử H2SO4 10% 25 [] D = -18,0 (c 0,1, MeOH) H-NMR (500 MHz, DMSO-d6):  6,92 (2H, d, J = 8,0 Hz, H-2', H6'), 6,54 (2H, d, J = 8,0 Hz, H-3', H-5'), 5,99 (1H, s, H-5), 5,91 (1H, s, H-7), 4,95 (1H, d, J = 7,0 Hz, H-1''), 3,48-3,62 (2H, m, H-6''), 3,25 (1H, m, H-2''), 3,25 (1H, m, H-3''), 3,25 (1H, m, H-5''), 3,19 (1H, m, H-4''), 2,90 (2H, m, H-b) 13 C-NMR (125 MHz, DMSO-d6):  105,5 (C-2), 192,3 (C-3), 101,3 (C-3a), 156,7 (C-4), 95,1 (C-5), 169,0 (C-6), 91,5 (C-7), 171,8 (C7a), 40,4 (C-b), 124,1 (C-1'), 131,2 (C-2', C-6'), 114,6 (C-3', C-5'), 155,8 (C-4'), 99,5 (C-1), 72,8 (C-2), 76,7 (C-3), 69,2 (C-4), 77,1 (C-5), 60,3 (C-6) ESI-MS (positive) m/z 451 [M+H]+ ợp chất R7: piceatannol Chất bột màu trắng SKLM pha thường: Rf = 0,3 (chloroform:methanol 4:1 v/v), vết UV 254, 366 nm thuốc thử H2SO4 10% H-NMR (500 MHz, CD3OD):  6,99 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2), 6,92 (1H, d, J = 16,0 Hz, H-), 6,85 (1H, dd, J = 2,0, 8,0 Hz, H-6), 6,77 (1H, d, J = 16,0 Hz, H-), 6,76 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5), 6,45 (2H, d, J = 2,5 Hz, H-2, H-6), 6,17 (1H, t, J = 2,5 Hz, H-4) 5'), 105,9 (C-6'), 128,4 (C-7'), 129,4 (C-8'), 132,6 (C-9'), 115,9 (C-10'), 145,4 (C-11'), 145,0 (C-12'), 118,1 (C-13), 121,0 (C-14) ESI-MS (positive) m/z 487 [M+H]+ ợp chất R12: cyperusol (1,4-dihydroxyeudesm-11-ene) Chất bột màu trắng SKLM pha thường: Rf = 0,3 (n-hexane:ethyl acetate 5:1 v/v), vết thuốc thử H2SO4 10% 25 [] D = -42,0 (c 0,1, MeOH) H-NMR (500 MHz, CDCl3):  4,72 (2H, m, H-12), 3,32 (1H, dd, J = 4,0, 11,0 Hz, H-1), 1,75 (3H, s, H-13), 1,13 (3H, s, H-15), 0,89 (3H, s, H-14) 13 C-NMR (125 MHz, CDCl3):  79,4 (C-1), 28,5 (C-2), 40,8 (C-3), 71,6 (C-4), 53,0 (C-5), 25,8 (C-6), 45,7 (C-7), 26,4 (C-8), 40,5 (C9), 39,0 (C-10), 150,3 (C-11), 108,3 (C-12), 21,0 (C-13), 13,0 (C14), 22,8 (C-15) ESI-MS (positive) m/z 239 [M + H]+ ợp chất R13: 1β,4β-dihydroxyeudesm-11-ene Tinh thể h nh kim màu trắng, mp 171-173oC SKLM pha thường: Rf = 0,3 (chloroform:ethyl acetate:methanol 4:1:0,1 v/v), vết thuốc thử H2SO4 10% 25 [] D = -16,0 (c 0,1, MeOH) H-NMR (500 MHz, CDCl3):  4,73 (1H, br s, Hb-12), 4,71 (1H, br s, Ha-12), 3,26 (1H, dd, J = 4,0, 11,5 Hz, H-1), 1,75 (3H, s, H-13), 1,05 (3H, s, H-14), 1,15 (3H, s, H-15) 13 C-NMR (125 MHz, CDCl3):  79,6 (C-1), 25,6 (C-2), 39,3 (C-3), 71,3 (C-4), 50,4 (C-5), 26,4 (C-6), 46,1 (C-7), 26,8 (C-8), 39,3 (C9), 38,9 (C-10), 150,4 (C-11), 108,5 (C-12), 20,7 (C-13), 12,5 (C14), 29,9 (C-15) ESI-MS (positive) m/z 239 [M + H]+ ợp chất R14: 5,7-dihydroxychromone Chất bột màu trắng SKLM pha thường: Rf = 0,45 (chloroform: methanol:nước 6:1,5:0,01 v/v), vết thuốc thử H2SO4 10% H-NMR (500 MHz, DMSO-d6):  8,17 (1H, d, J = 6,0 Hz, H-2), 6,36 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 6,26 (1H, d, J = 6,0 Hz, H-3), 6,20 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6) 13 C-NMR (125 MHz, DMSO-d6):  157,3 (C-2), 110,4 (C-3), 181,2 (C-4), 161,5 (C-5), 98,9 (C-6), 164,2 (C-7), 93,9 (C-8), 157,7 (C-9), 104,4 (C-10) 11 ESI-MS (positive) m/z 179 [M+H]+ ợp chất R15: (+)-lyoniresinol 3a-O--D-glucoside Chất bột màu trắng SKLM pha thường: Rf = 0,3 (chloroform: methanol:nước 5:1:0,01 v/v), vết UV 254 nm thuốc thử H2SO4 10% 25 [] D = +21,4 (c 0,1, MeOH) H-NMR (500 MHz, CD3OD):  6,60 (1H, s, H-8), 6,44 (2H, s, H2,6), 4,43 (1H, d, J = 6,0 Hz, H-4), 4,29 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1), 3,84-3,92 (2H, m, H6), 3,87 (3H, s, 7-OCH3), 3,84 (1H, m, H4), 3,76 (6H, s, 3',5'-OCH3), 3,67 (1H, m, Hb-2a), 3,66 (1H, m, H5), 3,56 (1H, m, Ha-2a), 3,47 (1H, m, Ha-3a), 3,36 (3H, s, 5-OCH3), 3,32 (1H, m, Hb-3a), 3,28 (1H, m, H3), 3,24 (1H, m, H2), 2,74 (1H, dd, J = 5,0, 15,0 Hz, Ha-1), 2,63 (1H, dd, J = 11,5, 15,0 Hz, Hb-1), 2,10 (1H, m, H-3), 1,72 (1H, m, H-2) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD):  33,8 (C-1), 40,6 (C-2), 66,2 (C2a), 46,6 (C-3), 71,5 (C-3a), 42,7 (C-4), 148,6 (C-5), 138,9 (C-6), 147,5 (C-7), 107,8 (C-8), 130,2 (C-9), 126,4 (C-10), 139,3 (C-1'), 106,9 (C-2'), 148,9 (C-3'), 134,5 (C-4'), 148,9 (C-5'), 106,9 (C-6'), 104,8 (C-1''), 75,1 (C-2''), 78,2 (C-3''), 71,6 (C-4''), 77,9 (C-5''), 62,8 (C-6''), 60,2 (5-OCH3), 56,6 (7-OCH3), 56,8 (3',5'-OCH3) ESI-MS (positive) m/z 583 [M+H]+ 3.2 Chiết phân lập hợp chất từ thân rễ củ gấu biển Hình 3.5 Sơ đồ chiết phân bố mẫu thân rễ củ gấu biển 12 ình Sơ đồ phân lập cặn chiết chloroform thân rễ củ gấu biển Hình 3.7 Sơ đồ phân lập cặn chiết ethyl acetate thân rễ củ gấu biển 13 Hình 3.8 Sơ đồ phân lập cặn nƣớc thân rễ củ gấu biển Thông số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập từ củ gấu biển Hợp chất CS1: (S)-5,5,7-trihydroxy-2,4-dimethoxy-6ethy f avanone (Hợp chất ới Chất bột màu vàng SKLM pha thường: Rf = 0,5 (chloroformmethanol-nước 5:1:0,05 v/v), vết UV 254 nm thuốc thử H2SO4 10% 25 [] D = – 88,0 (c 0,1, MeOH) CD (c 1,4 × 10–3 M, MeOH): λmax(∆) nm 295 (–13,7), 345 (+2,1) IR max(KBr): 3393, 1637, 1516, 1303, 1158 cm-1 H-NMR (500 MHz, CD3OD):  7,00 (1H, s, H-6'), 6,69 (1H, s, H-3'), 5,97 (1H, s, H-8), 5,60 (1H, dd, J = 3,0, 13,0 Hz, H-2), 3,90 (3H, s, OCH3), 3,83 (3H, s, OCH3), 2,95 (1H, dd, J = 13,0, 17,0 Hz, Hb-4), 2,68 (1H, dd, J = 3,5, 17,5 Hz, Ha-4), 1,97 (3H, s, CH3) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD):  75,2 (C-2), 43,4 (C-3), 198,0 (C4), 162,6 (C-5), 105,3 (C-6), 166,1 (C-7), 95,2 (C-8), 162,6 (C-9), 103,0 (C-10), 120,5 (C-1'), 151,2 (C-2'), 98,7 (C-3'), 149,5 (C-4'), 14 141,4 (C-5'), 114,5 (C-6'), 6,9 (6-CH3), 56,9 (2'-OMe), 56,6 (4'OMe) HR-ESI-MS m/z: 347,1109 [M + H]+ (calcd 347,1130 cho C18H19O7) ợp chất S2: 3,4,6-trihydroxy-4-methoxyaurone Chất bột màu vàng SKLM pha thường: Rf = 0,45 (chloroformmethanol-nước 10:1:0,01 v/v), vết UV 254, 366 nm thuốc thử H2SO4 10% H-NMR (500 MHz, acetone-d6): δ 7,52 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2’), 7,27 (1H, dd, J = 2,0, 8,5 Hz, H-6’), 6,90 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5’), 6,51 (1H, s, H-10), 6,40 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-7), 6,24 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-5), 3,89 (3H, s, 4-OCH3) 13 C-NMR (125 MHz, acetone-d6): δ 147,3 (C-2), 179,8 (C-3), 160,7 (C-4), 95,2 (C-5), 168,1 (C-6), 92,2 (C-7), 169,3 (C-8), 104,9 (C-9), 110,7 (C-10), 125,6 (C-1'), 118,4 (C-2'), 146,1 (C-3'), 147,9 (C-4'), 116,4 (C-5'), 125,1 (C-6'), 56,3 (4-OCH3) ESI-MS (positive) m/z 301 [M+H]+ ợp chất S3: -mangostin Chất bột màu vàng nhạt SKLM pha thường: Rf = 0,35 (chloroformmethanol 15:1 v/v), vết thuốc thử H2SO4 10% H-NMR (500 MHz, acetone-d6):  13,78 (1H, s, C-5-OH), 9,55 (2H, brs, C-2-OH, C-7-OH), 6,81 (1H, s, H-1), 6,38 (1H, s, H-8), 5,27 (1H, m, H-2, H-2), 4,11 (2H, d, J = 6,5, H-1), 3,79 (3H, s, 3-OCH3), 3,33 (2H, d, J = 7,0, H-1), 1,82 (3H, s, H-4), 1,78 (3H, s, H-4), 1,65 (3H, s, H-5), 1,64 (3H, s, H-5) 13 C-NMR (125 MHz, acetone-d6):  102,6 (C-1), 157,3 (C-1a), 156,1 (C-2), 144,4 (C-3), 138,0 (C-4), 111,9 (C-4a), 161,6 (C-5), 103,6 (C-5a), 111,0 (C-6), 162,8 (C-7), 93,1 (C-8), 155,6 (C-8a), 182,8 (C-10), 26,8 (C-1), 124,7 (C-2), 131,3 (C-3), 18,2 (C-4), 25,8 (C-5), 21,9 (C-1), 123,4 (C-2), 131,3 (C-3), 17,8 (C-4), 25,8 (C-5), 61,3 (3-OCH3) ESI-MS (positive) m/z 411 [M+H]+ ợp chất S4 (trùng với R1): ()-3,5,6,7,8,4hexahydroxyflavane Chất bột màu trắng SKLM pha thường: Rf = 0,45 (chloroform:methanol 5:1 v/v), vết thuốc thử H2SO4 10% ESI-MS m/z: 307 [M + H]+ 15 ợp chất S5 (trùng với R2): (+)-catechin Tinh thể màu trắng, mp 173-175oC SKLM pha thường: Rf = 0,35 (chloroform:methanol:nước 5:1:0,01 v/v), vết UV 254 nm thuốc thử H2SO4 10% ESI-MS (positive) m/z 291 [M+H]+ ợp chất S6 (trùng với R3): eriodictyol Chất bột màu vàng nhạt SKLM pha thường: Rf = 0,45 (chloroform:methanol 4:1 v/v), vết thuốc thử H2SO4 10% ESI-MS (positive) m/z 289 [M+H]+ ợp chất S7 (trùng với R4): luteolin Chất bột màu vàng SKLM pha thường: Rf = 0,45 (chloroform:methanol:nước 10:1:0,01 v/v), vết UV 254 nm thuốc thử H2SO4 10% ESI-MS (positive) m/z 287 [M+H]+ ợp chất S8 (trùng với R7): piceatannol Chất bột màu trắng SKLM pha thường: Rf = 0,3 (chloroform:methanol 4:1 v/v), vết UV 254, 366 nm thuốc thử H2SO4 10% ESI-MS (positive) m/z 245 [M+H]+ ợp chất S9 (trùng với R8): resveratrol Chất bột màu trắng đục SKLM pha thường: Rf = 0,40 (chloroform:methanol:nước 6:1:0,01 v/v), vết UV 254, 366 nm thuốc thử H2SO4 10% ESI-MS (positive) m/z 229 [M+H]+ ợp chất S10 (trùng với R9): trans-scirpusin A Chất bột màu trắng đục SKLM pha thường: Rf = 0,35 (chloroform:methanol:nước 4:1:0,01 v/v), vết UV 254, 366 nm thuốc thử H2SO4 10% ESI-MS (positive) m/z 471 [M+H]+ ợp chất S11 (trùng với R10): trans-scirpusin B Chất bột màu vàng nâu SKLM pha thường: Rf = 0,33 (chloroform:methanol:nước 4:1:0,01 v/v), vết UV 254, 366 nm thuốc thử H2SO4 10% ESI-MS (positive) m/z 487 [M+H]+ ợp chất S12 (trùng với R12): cyperusol (1,4dihydroxyeudesm-11-ene) Chất bột màu trắng SKLM pha thường: Rf = 0,3 (n-hexane:ethyl acetate 5:1 v/v), vết thuốc thử H2SO4 10% ESI-MS (positive) m/z 239 [M + H]+ 16 3.3 Phân tích định tính sắc ký dấu vân tay Chuẩn bị dung dịch thử: mẫu sấy khô đến khối lượng không đổi Cân 5,00 g bột mẫu sấy khô, nghiền nhỏ, thêm 25ml metanol, lắc siêu âm 30 phút nhiệt độ 40oC, lọc (chiết lần lần 25ml metanol) Gộp dịch lọc, loại bớt dung môi áp suất giảm nhiệt độ 50oC điều chỉnh đến thể tích 50ml dung dịch phân tích sắc ký Chuẩn bị mẫu đối chứng: mẫu đối chứng chuẩn bị cách pha dung dịch chất thị gốc có nồng độ 2000µg/ml methanol Các chất thị gốc phân tích sắc ký HPTLC với điều kiện phân tích mẫu để xác định giá trị Rf cho chất thị Từ dung dịch thị gốc, tiến hành pha mẫu đối chứng hỗn hợp chất thị có nồng độ 100 µg/ml methanol Kết phân tích đặc điểm dấu vân tay 16 mẫu HPTLC HPLC bàn luận chương CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 4.1 Các hợp chất phân lập đƣợc từ thân rễ củ gấu củ gấu biển Từ cặn chiết n-hexane, ethyl acetate cặn nước thân rễ củ gấu, sau tiến hành kết tinh, sắc kí cột nhiều lần cột silica gel, pha đảo, sephadex diaion, thu 15 hợp chất CR1-CR15 Các hợp chất bao gồm: hợp chất thuộc lớp chất flavonoid (CR1-CR6), hợp chất thuộc lớp chất stilbenoid (CR7-CR11), hợp chất khung sesquiterpen (CR12, CR13), hợp chất thuộc lớp chất chromone (CR14), hợp chất lignan (CR15) 17 Cấu trúc hợp chất phân lập đƣợc từ thân rễ củ gấu Từ cặn chiết chloroform, ethyl acetate cặn nước thân rễ củ gấu biển, sau tiến hành kết tinh, sắc kí cột nhiều lần cột silica gel, pha đảo, sephadex diaion, thu 12 hợp chất CS1CS12 Các hợp chất bao gồm: hợp chất thuộc lớp chất flavonoid (CS1-CS7), hợp chất thuộc lớp chất stilbenoid (CS8-CS11), hợp chất khung sesquiterpen (CR12) 18 Cấu trúc hợp chất phân lập đƣợc từ thân rễ củ gấu biển 4.2 Nghiên cứu định tính dấu vân tay sắc ký TLC Kết phân tích đặc điểm hóa học 16 mẫu mẫu đối chứng TLC thể qua hình ảnh sắc ký đồ hình 4.19 4.20 Giá trị Rf vết sắc ký đồ ghi bảng 4.20 Các đánh số từ đến tương ứng với mẫu CGB1 đến CGB6, mẫu đối chứng, từ đến 13 tương ứng với mẫu CGV1 đến CGV6, từ 14 đến 17 tương ứng với mẫu HP1 đến HP4 Các chất đối chứng đánh số 1* đến 4* 19 Hình 4.19 Sắc ký lớp mỏng mẫu quan sát dƣới ánh sáng UV 366 nm trƣớc phun thuốc thử Các sắc ký đồ cho vết tách tương đối rõ ràng, chế độ quan sát trước sau phun thuốc thử, mẫu thuộc nhóm CGV, CGB HP cho sắc đồ tương đối giống Vết có Rf=0,40 (chất đánh dấu 4*: 7,4-dihydroxy-5,3dimethoxyflavone) có cường độ mạnh mẫu CGB, mẫu HP cường độ thấp chút, 06 mẫu CGV cường độ thấp nhiều Trên kết dấu vân tay TLC sử dụng vết Rf để phân biệt mẫu củ gấu biển dược liệu Hương phụ với mẫu củ gấu Vết có Rf =0,22 (chất đánh dấu 3*: piceatannol) mẫu HP có cường độ mạnh nhất, sau mẫu CGB, mẫu CGV có cường độ thấp trừ mẫu CGV3 mọc cát có cường độ mạnh tương đương mẫu HP mẫu CGB1,2,4,6 4.3 ghiên cứu định tính dấu vân tay sắc ký L Xuất phát từ nghiên cứu phổ chất đánh dấu, dựa kết sắc đồ 16 mẫu nhiều bước sóng nghiên cứu, bước sóng lựa chọn để xây dựng dấu vân tay sắc ký 275 nm bước sóng píc xuất thể rõ Trên sở sắc ký đồ bước sóng 275 nm, 32 píc lựa chọn làm píc đặc trưng cho nhận dạng dấu vân tay sắc ký 20 Hình 4.25 Sắc ký đồ 16 mẫu nghiên cứu bước sóng 275 nm Từ việc xem xét đánh giá tín hiệu diện tich píc, rút số nhận xét sau: - Píc thời gian lưu 1,44 ph t có diện tích lớn mẫu CGV mẫu CGB2 (mọc đất), với mẫu CGB lại diện tích nhỏ đặc biệt mẫu HP diện tích nhỏ - Nhóm mẫu CGB HP có diện tích píc thời gian lưu 12,04; 12,67; 18,21; 18,89 phút lớn hẳn mẫu thuộc nhóm CGV Đây lại píc có tỷ trọng lớn sắc ký đồ - Nhóm mẫu HP có diện tích píc thời gian lưu 8,98 ph t lớn mẫu thuộc nhóm CGV CGB Trên sở số liệu thời gian lưu tín hiệu píc (ở diện tích píc), luận án sử dụng thuật toán đánh giá mức độ tương đồng sắc ký đồ theo công thức sau [62, 167, 55]: ∑ √∑ √∑ Trong đó: S: độ tương đồng mẫu x mẫu y S có giá trị từ ≤ S ≤ Khi S gần hai mẫu giống xi: diện tích píc thứ i mẫu x yi: diện tích píc thứ i mẫu y n: số lượng píc tham gia tr nh đánh giá So sánh hai mẫu CGV1 CGB1 với mẫu lại Kết thu sau: 21 Mẫu CGV1 có độ tương đồng không cao với mẫu CGV khác Mẫu CGB1 có độ tương đồng cao với mẫu CGB khác trừ mẫu CGB2 Điều lý giải mẫu CGB2 mẫu củ gấu biển mọc đất mẫu CGB khác mọc cát Trên sắc ký đồ thấy mẫu CGB2 có diện tích píc thời gian lưu 1,44 ph t cao hẳn mẫu CGB1, thêm phần lại sắc ký đồ th có píc Điều lý giải hệ số tương đồng mẫu CGB2 thấp so với mẫu CGB khác Các mẫu HP có độ tương đồng với mẫu CGB1 cao mẫu CGV1 Điều minh chứng cho thấy dược liệu Hương phụ chế biến từ củ gấu biển Số liệu cho thấy khác biệt mẫu CGV lớn so với mẫu CGB Sự khác mặt hóa học củ gấu điều kiện thổ nhưỡng nơi củ gấu mọc khác Do dược liệu Hương phụ chế biến từ củ gấu có chất lượng không đồng so với chế biến từ củ gấu biển 4.4 ghiên cứu định lượng số thành phần HPLC Các số liệu phân tích HPLC cho kết tương đồng với kết phân tích dấu vân tay sắc ký lớp mỏng Kết phân tích sắc ký dấu vân tay cho thấy nhìn chung sắc ký đồ mẫu củ gấu củ gấu biển có píc tương tự chứng tỏ thành phần hoá học loài có nét tương đồng khác hàm lượng Tuy nhiên kết cho thấy hàm lượng hầu hết chất củ gấu biển cao mẫu củ gấu Cụ thể với nhóm chất flavan-3-ol (+)-catechin, ()-3,5,6,7,8,4-hexahydroxyflavane, nhóm chất flavanone eriodictyol, (S)-5,5,7-trihydroxy-2,4-dimethoxy-6methylflavanone, nhóm chất stilbenoid piceatannol, transscirpusin B, hợp chất lignan (+)-lyoniresinol 3a-O--Dglucoside hàm lượng chất củ gấu biển mẫu dược liệu Hương phụ cao so với củ gấu Điều minh chứng nhận định việc “sử dụng củ gấu biển để chữa bệnh vị Hương phụ lại có tác dụng rõ rệt hơn” [15] 22 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Về nghiên cứu thành phần hóa học  Từ thân rễ củ gấu phân lập xác định cấu tr c hóa học 15 hợp chất có: hợp chất thuộc lớp flavonoid gồm: ()-3,5,6,7,8,4-hexahydroxyflavane (CR1), (+)-catechin (CR2), eriodictyol (CR3), luteolin (CR4), 7,4-dihydroxy-5,3dimethoxyflavone (CR5), hovetrichoside C (CR6) hợp chất thuộc lớp chất stillbenoid gồm: Piceatannol (CR7), Resveratrol (CR8), trans-Scirpusin A (CR9), trans-Scirpusin B (CR10), Cassigarol E (CR11) hợp chất thuộc lớp chất terpenoid gồm: Cyperusol C (1,4-dihydroxyeudesm-11-ene) (CR12), 1,4dihydroxyeudesm-11-ene (CR13) hợp chất thuộc lớp chất chromone 5,7-dihydroxychromone (CR14) hợp chất lignan (+)- lyoniresinol 3a-O--D-glucoside (CR15)  Trong 15 hợp chất có hợp chất ()-3,5,6,7,8,4hexahydroxyflavane (CR1) hợp chất lần công bố; có hợp chất lần phân lập từ loài C rotundus L CR3, CR5, CR6, CR11, CR14, CR15  Từ thân rễ củ gấu biển phân lập xác định cấu tr c hóa học 12 hợp chất có: hợp chất thuộc lớp flavonoid gồm: (S)-5,5,7-trihydroxy-2,4-dimethoxy-6-methylflavanone (CS1), Rengasin (CS2), -Mangostin (CS3), ()-3,5,6,7,8,4hexahydroxyflavane (CS4), (+)-Catechin (CS5), Eriodictyol (CS6), Luteolin (CS7) hợp chất thuộc lớp chất stillbenoid gồm: Piceatannol (CS8), Resveratrol (CS9), trans-Scirpusin A (CS10), trans-Scirpusin B (CS11) hợp chất thuộc lớp chất terpenoid Cyperusol C (1,4-dihydroxyeudesm-11-ene) (CS12)  Trong 12 hợp chất có hợp chất (S)-5,5,7-trihydroxy2,4-dimethoxy-6-methylflavanone (CS1) hợp chất lần công bố; 11 hợp chất lại phân lập lần từ loài C stoloniferus Retz Trong số 12 chất có hợp chất trùng với chất phân lập từ loài C rotundus L 23 Về nghiên cứu sắc ký dấu vân tay - Luận án lần so sánh thành phần hoá học loài C rotundus C stoloniferus dựa theo kết phân lập xác định cấu trúc hợp chất kết hợp với phân tích hệ thống sắc ký TLC HPLC - Thiết lập điều kiện phân tích dấu vân tay sắc ký HPLC Đánh giá độ tương đồng mẫu nghiên cứu kỹ thuật HPLC Kết cho thấy có độ tương đồng cao mẫu thân rễ củ gấu biển lấy từ địa phương khác (từ 0,9424 đến 0,9903) Xác định vùng sắc ký đồ (từ phút thứ đến phút thứ 20) cho việc nhận dạng dấu vân tay sắc ký để phân biệt hai loài - Xây dựng điều kiện định lượng thành phần hoạt chất đối tượng nghiên cứu hệ thống HPLC việc sử dụng chất phân lập làm chất đối chứng Như vậy, kết luận án làm rõ mục tiêu đề đề tài xác định thành phần hóa học đối tượng nghiên cứu xây dựng dược liệu vân tay sắc ký Đã t m chất tổng số 18 chất phân lập xác định cấu trúc Các kết nghiên cứu luận án đăng tạp chí chuyên ngành có uy tín có báo quốc tế KIẾN NGHỊ: Trên sở kết thu từ luận án, có số kiến nghị sau: - Tiến hành khảo sát hoạt tính sinh học chất phân lập đặc biệt chất chất có hàm lượng lớn để hiểu rõ thành phần hóa học tạo hoạt tính dược liệu Hương phụ - Xây dựng phần mềm chuyên dụng để so sánh, đánh giá độ tương đồng sắc ký đồ HPLC - Tiếp tục hoàn thiện liệu sắc ký dấu vân tay để đánh giá phân tích chất lượng dược liệu Hương phụ dựa theo thành phần hoạt chất với tiêu chí: khác thành phần hoá học dược liệu địa điểm thời điểm thu hái khác nhau; ảnh hưởng điều kiện thổ nhưỡng đến thành phần hoá học; thay đổi hàm lượng hoạt chất trình bảo quản, chế biến dược liệu; hàm lượng hoạt chất sản phẩm bào chế 24 DANH MỤC C C C NG TR NH ĐÃ C NG BỐ CỦA UẬN N Trần Thị Hồng Hạnh, Nguyễn Minh Châu, Đan Thị Thúy Hằng, Lê Hoàng Trâm, Nguyễn Thị Luyến, Phạm Thanh Bình, Nguyễn Tiến Đạt (2012) Hai hợp chất eudesmen sesquiterpen phân lập từ củ gấu Tạp chí Dược liệu 17 (1), tr 39-41 Nguyễn Minh Châu, Trần Thị Hồng Hạnh, Lê Hoàng Trâm, Nguyễn Thị Luyến, Phạm Thanh Bình, Trần Thượng Quảng, Nguyễn Tiến Đạt (2012) Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất phenolic từ củ gấu Cyperus rotundus L Tạp chí Hóa học, T50 (4A), tr 155-157 Nguyen Minh Chau, Tran Thi Hong Hanh, Nguyen Thi Luyen, Chau Van Minh, Nguyen Tien Dat (2013) Flavanones and stilbenes from Cyperus stoloniferus Retz Biochemical Systematics and Ecology 50, pp 220-222 (SCI) Tran Thi Hong Hanh, Nguyen Minh Chau, Le Hoang Tram, Nguyen Thi Luyen, Pham Thanh Binh, Chau Van Minh, Nguyen Hoai Nam, Nguyen Tien Dat (2014) Inhibitors of α-glucosidase and α-amylase from Cyperus rotundus Pharmaceutical Biology 52 (1), pp 74-77 (SCI-E) Phạm Thanh Bình, Nguyễn Minh Châu, Trần Thượng Quảng, Nguyễn Hải Đăng, Nguyễn Tiến Đạt (2014) Phân lập xác định cấu trúc hai hợp chất polyphenol từ củ gấu biển Tạp chí Dược liệu 19(6), tr 348-351 Nguyen Minh Chau, Pham Thanh Binh, Tran Thuong Quang, Nguyen Tien Dat (2015) Isolation and structural identification of a xanthone and an aurone from the rhizomes of Cyperus stoloniferus Tạp chí Hoá học, T53 (2e1), pp.36-39 [...]... [M+H]+ 3.2 Chiết và phân lập các hợp chất từ thân rễ củ gấu biển Hình 3.5 Sơ đồ chiết phân bố mẫu thân rễ củ gấu biển 12 ình 3 6 Sơ đồ phân lập cặn chiết chloroform của thân rễ củ gấu biển Hình 3.7 Sơ đồ phân lập cặn chiết ethyl acetate của thân rễ củ gấu biển 13 Hình 3.8 Sơ đồ phân lập cặn nƣớc của thân rễ củ gấu biển Thông số vật lý và dữ kiện phổ của các hợp chất phân lập từ củ gấu biển Hợp chất CS1:... nơi củ gấu mọc khác nhau Do đó dược liệu Hương phụ chế biến từ củ gấu sẽ có chất lượng không đồng đều so với chế biến từ củ gấu biển 4.4 ghiên cứu định lượng một số thành phần chính bằng HPLC Các số liệu phân tích trên HPLC cho kết quả tương đồng với kết quả phân tích dấu vân tay trên sắc ký lớp mỏng Kết quả phân tích sắc ký dấu vân tay cho thấy nhìn chung sắc ký đồ của 2 mẫu củ gấu và củ gấu biển. .. từ nghiên cứu phổ của các chất đánh dấu, dựa trên kết quả các sắc đồ của 16 mẫu tại nhiều bước sóng nghiên cứu, bước sóng lựa chọn để xây dựng dấu vân tay sắc ký là 275 nm do tại bước sóng này các píc đều xuất hiện và thể hiện rõ Trên cơ sở sắc ký đồ tại bước sóng 275 nm, 32 píc chính đã được lựa chọn làm các píc đặc trưng cho nhận dạng dấu vân tay sắc ký 20 Hình 4.25 Sắc ký đồ của 16 mẫu nghiên cứu. .. 3a-O--Dglucoside hàm lượng các chất này trong củ gấu biển và mẫu dược liệu Hương phụ cao hơn so với củ gấu Điều đó cũng minh chứng nhận định việc “sử dụng củ gấu biển để chữa các bệnh như vị Hương phụ lại có tác dụng rõ rệt hơn” [15] 22 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN 1 Về nghiên cứu thành phần hóa học  Từ thân rễ củ gấu đã phân lập và xác định được cấu tr c hóa học của 15 hợp chất trong đó có: 6 hợp chất... (CS8-CS11), 1 hợp chất khung sesquiterpen (CR12) 18 Cấu trúc các hợp chất phân lập đƣợc từ thân rễ củ gấu biển 4.2 Nghiên cứu định tính dấu vân tay sắc ký bằng TLC Kết quả phân tích đặc điểm hóa học của 16 mẫu và mẫu đối chứng bằng TLC được thể hiện qua hình ảnh sắc ký đồ ở hình 4.19 và 4.20 Giá trị Rf của các vết trên sắc ký đồ được ghi ở bảng 4.20 Các làn đánh số từ 1 đến 6 tương ứng với mẫu CGB1 đến CGB6,... stoloniferus Retz Trong số 12 chất này có 9 hợp chất trùng với chất phân lập được từ loài C rotundus L 23 2 Về nghiên cứu sắc ký dấu vân tay - Luận án lần đầu tiên so sánh thành phần hoá học của 2 loài C rotundus và C stoloniferus dựa theo kết quả phân lập và xác định cấu trúc các hợp chất sạch kết hợp với phân tích trên hệ thống sắc ký TLC và HPLC - Thiết lập được các điều kiện phân tích dấu vân tay. .. tượng nghiên cứu trên hệ thống HPLC bằng việc sử dụng các chất sạch đã phân lập được làm chất đối chứng Như vậy, các kết quả của luận án đã làm rõ những mục tiêu đề ra của đề tài là đã xác định được thành phần hóa học chính của 2 đối tượng nghiên cứu và xây dựng dược bộ dữ liệu vân tay sắc ký Đã t m ra 2 chất mới trong tổng số 18 chất đã được phân lập và xác định cấu trúc Các kết quả nghiên cứu của luận... tính sinh học của các chất phân lập được và đặc biệt là các chất mới và các chất có hàm lượng lớn để hiểu rõ hơn thành phần hóa học tạo ra hoạt tính của dược liệu Hương phụ - Xây dựng phần mềm chuyên dụng để so sánh, đánh giá độ tương đồng của các sắc ký đồ HPLC - Tiếp tục hoàn thiện bộ dữ liệu sắc ký dấu vân tay này để có thể đánh giá phân tích chất lượng dược liệu Hương phụ dựa theo thành phần hoạt... dấu vân tay sắc ký bằng HPLC Đánh giá độ tương đồng giữa các mẫu nghiên cứu trên kỹ thuật HPLC Kết quả cho thấy có độ tương đồng cao của các mẫu thân rễ củ gấu biển lấy từ các địa phương khác nhau (từ 0,9424 đến 0,9903) Xác định vùng trên sắc ký đồ (từ phút thứ 8 đến phút thứ 20) cho việc nhận dạng dấu vân tay sắc ký để có thể phân biệt hai loài - Xây dựng được điều kiện định lượng 7 thành phần hoạt... kết quả dấu vân tay bằng TLC có thể sử dụng vết Rf này để phân biệt mẫu củ gấu biển và dược liệu Hương phụ với mẫu củ gấu Vết có Rf =0,22 (chất đánh dấu 3*: piceatannol) ở các mẫu HP có cường độ mạnh nhất, sau đó là các mẫu CGB, các mẫu CGV có cường độ thấp hơn trừ mẫu CGV3 mọc trên nền cát có cường độ mạnh tương đương các mẫu HP và các mẫu CGB1,2,4,6 4.3 ghiên cứu định tính dấu vân tay sắc ký bằng ... từ hai loài củ gấu củ gấu biển phương pháp sắc ký, xác định cấu trúc hóa học chất tách phương pháp phổ kết hợp - Nghiên cứu sắc ký dấu vân tay: xây dựng liệu vân tay sắc ký củ gấu, củ gấu biển. .. gấu củ gấu biển Việt Nam lần đầu nghiên cứu cách có hệ thống thành phần hóa học dấu vân tay sắc ký 3.2.1 Về thành phần hóa học ● Từ củ gấu (Cyperus rotundus L.) phân lập xác định cấu tr c hóa học. .. L., nghiên cứu công dụng, hoạt tính sinh học, thành phần hóa học sắc ký dấu vân tay chi Cyperus L Giới thiệu sơ lược củ gấu củ gấu biển Các nghiên cứu công dụng, hoạt tính sinh học, thành phần hóa