Trong các giai đoạn hoạt hóa của enzyme, giai đoạn nào quan trọng để đánh giá hoạt tính của enzyme

Trường đại học Mỏ-Địa Chất Khoa Dầu Khí Bộ môn Lọc Hóa Dầu Tiểu Luận: Công Nghệ Sinh Học Đại Cương Đề tài: Trong giai đoạn hoạt hóa enzyme, giai đoạn quan trọng để đánh giá hoạt tính enzyme Hà Nội, 10/2012 I Mở đầu Trong thể sống (các tế bào) luôn xảy trình trao đổi chất Sự trao đổi chất ngừng sống không tồn Quá trình trao đổi chất tập hợp quy luật nhiều phản ứng hóa học khác Các phản ứng hóa học phức tạp có liên quan chặt chẽ với điều chỉnh lẫn Enzyme hợp chất protein xúc tác cho phản ứng hóa học Chúng có khả xúc tác đặc hiệu phản ứng hóa học định đảm bảo cho phản ứng xảy theo chiều hướng định với tốc độ nhịp nhàng thể sống Chúng có hầu hết loại tế bào thể sống Chính tác nhân xúc tác có nguồn gốc sinh học nên enzyme gọi chất xúc tác sinh học (biocatalysators) nhằm để phân biệt với chất xúc tác hóa học Vì enzyme chất xúc tác nên hoạt tính quan trọng, định đến tính chất loại enzyme Mỗi enzyme có khả xú tác cho phản ứng định Hoạt động hay hoạt tính enzyme mạnh lượng chất chuyển hóa lượng sản phẩm tạo thành đơn vị thời gian lớn Vì đáng giá hoạt tính enzyme cách xác định tốc độ chuyển hóa chất tốc độ tích lũy sản phẩm phản ứng II Nội dung: Cơ chế phản ứng có xúc tác nói chung Vận tốc phản ứng hóa học xác định giá trị lượng hoạt hóa tức mức lượng chất tham gia phản ứng phải đạt để cắt đứt liên kết cần thiết hình thành liên kết Năng lượng hoạt hóa lớn vận tốc phản ứng chậm ngược lại Do làm giảm lượng hoạt hóa phản ứng, chất xúc tác có tác dụng thúc đẩy vận tốc phản ứng hóa học Ví dụ, bột platin chất xúc tác hóa học sử dụng rộng rãi Vì chất tham gia phản ứng bề mặt platin chuyển sang trạng thái có khả phản ứng cao Do lượng hoạt hóa nhỏ tốc độ phản ứng cao hơn.Như vậy, phản ứng có xúc tác, chất xúc tác làm giảm lượng hoạt hóa phản ứng hóa học, có nghĩa tham gia vào phản ứng trung gian mà không đóng vai trò chất tham gia phản ứng Sau phản ứng, chất xúc tác lại phục hồi trạng thái ban đầu để tiếp tục xúc tác Cơ chế xúc tác enzyme Hầu tất biến đổi hóa sinh tế bào thể sống xúc tác enzyme pH trung tính, nhiệt độ áp suất bình thường đa số chất xúc tác hóa học khác lại xúc tác nhiệt độ áp suất cao Chính nhờ việc tạo môi trường đặc hiệu (bởi trung tâm hoạt động enzyme liên kết với chất) có lợi mật lượng để thực phản ứng mà enzyme có khả đặc biệt nêu Trong phản ứng có xúc tác enzyme, nhờ tạo thành phức hợp trung gian enzyme - chất mà chất hoạt hóa Khi chất kết hợp vào enzyme, kết cực hóa, chuyển dịch electron biến dạng liên kết tham gia trực tiếp vào phản ứng dẫn tới làm thay đổi động năng, kết làm cho phân tử chất trở nên hoạt động hơn, nhờ tham gia phản ứng dễ dàng Năng lượng hoạt hóa có xúc tác enzyme nhỏ nhiều so với trường hợp xúc tác mà nhỏ so với trường hợp có chất xúc tác thông thường Ví dụ phản ứng phân hủy H2O2thành H2O O2 chất xúc tác lượng hoạt hóa 18 Kcal/mol, có chất xúc tác platin lượng hoạt hóa 11,7 Kcal/mol, có enzyme catalase xúc tác lượng hoạt hóa 5,5 Kcal/mol Vậy trung tâm hoat động đóng vai trò quan trọng, định đến hoạt tính enzyme 2.1 Trung tâm hoạt động emzyme Trong trình xúc tác enzyme có phần tham gia trực tiếp vào phản ứng để kết hợp với chất gọi “ trung tâm hoạt động” Cấu tạo đặc biệt trung tâm hoạt động định tính đặc hiệu hoạt tính xúc tác enzyme * Trong “emzyme cấu tử” acid amin thường phân bố phần khác mạch polypeptid nằm kề không gian tạo thành trung tâm hoạt động Sự kết hợp nhóm chức acid amin thường gặp –SH cysteine, vòng amidazol histidine, w-COOH asparie acid glutamic, -COOH acid amin cuối mạch… * Trong “enzyme hai cấu tử” mạch polypeptide mà nhóm chức kết hợp để tạo trung tâm hoạt động có nhóm chức coenzyme nhóm ngoại khác kết hợp tạo thành trung tâm hoạt động Trong nhóm nhóm chức tham gia tạo trung tâm hoạt động cần phân biệt hai nhóm: “ tâm xúc tác” ( tham gia trực tiếp vào hoạt động xúc tác emzyme ) “nền tiếp xúc” ( giúp enzyme kết hợp đặc hiệu với chất ) Một enzyme có hai hay nhiều tâm hoạt động, tác dụng trung tâm hoạt động không phụ thuộc vào Vậy: Từ kết nghiên cứu chất hoá học, cấu trúc trung tâm hoạt động, chế tác động, trung tâm hoạt động có số nhận xét chung trung tâm hoạt động sau: - Là phận dùngđể liên kết với chất - Chỉ chiếm tỉ lệ bé so với thể tích toàn enzyme - Gồm nhóm chức amino acid có ion kim loại nhóm chức coenzyme Hình Tâm hoạt động enzyme (màu đỏ) Đối với enzyme thànhphần: Trung tâm hoạt động gồm nhóm chức amino acid nhóm hydroxy serin, carboxy glutamic, vòng imidazol… Các nhóm chức amino acid xa chuỗi polypeptide nhờ cấu trúc không gian nên gần mặt không gian Đối với E hai thành phần: Trung tâm hoạt động trên, nhóm chức amino acid tham gia tạo thành Trung tâm hoạt động liên kết với liên kết hydro Ngoài Trung tâm hoạt động loại có tham gia coenzyme ion kim loại Theo Fisher trung tâm hoạt động có cấu trúc cố định, kết hợp với chất để tạo phức E-S ta hình dung giống chìa khóa ổ khóa Ngày người ta chứng minhđược rằng: Trung tâm hoạt động enzyme có cấu tạo hoàn chỉnh có tương tác với chất (thuyết tiếp xúc cảm ứng Koshland) 2.2 Cơ chế tác dụng Những quan điểm nhằm giải thích chế tác dụng enzyme cho enzyme (E) tương tác với chất (S) làm giảm lượng hoạt hóa phản ứng hóa sinh Muốn làm giảm lượng hoạt hóa phản ứng enzyme cần trải qua nhiều giai đoạn trung gian tạo thành phức chất định E S Khi kết hợp với phân tử enzyme, kết cực hóa, chuyển dịch electron biến dạng mối liên kết tham gia trực tiếp vào phản ứng làm thay đổi động nên phân tử chất trở nên hoạt động dễ dàng tham gia phản ứng Việc tạo thành phức hợp E-S giai đoạn đầu xảy nhanh không bền Do sau thời gian dài chứng minh thực nghiệm Bằng chứng rõ ràng tồn phức hợp E-S thành công hai nhà hóa sinh Nhật Bản K Iaglu T Ozava tách phức E-S phản ứng khử amin cách oxy hóa (loại trừ nhóm amine) dãy amino acid dãy D oxydase xúc tac Nhìn chung hình dung chế tác dụng enzyme lên chất tạo thành sản phẩm phương trình tổng quát sau: E + S ES P + E Giai đoạn 1: E kết hợp với S để tạo thành E-S Giai đoạn xảy nhanh, nhờ liên kết không bền liên kết hydro, tương tác tĩnh điện, tương tác Vander Waals… Mỗi loại liên kết đòi hỏi liên kết đòi hỏi điều kiện khác chịu ảnh hưởng khác có nước Giai đoạn 2: Sau tạo phức, chất có biến đổi định mật độ điện tử, cấu hình làm chất trở nên hoạt động hơn, phản ứng dễ dàng để tạo thành sản phẩm P Trong nhiều phản ứng enzyme xúc tác có hay nhiều loại chất, ví dụ hexokinase xúc tác phản ứng: ATP + glucose hexokinase ADP + glucose photphate Cơ chế enzyme xúc tác cho phản ứng chất sau: a/ Cơ chế tạo phức thành phần b/ Cơ chế không tạo phức thành phần Đây trường hợp chất thứ (S2) kết hợp vào enzyme (ở trạng thái E’) sau P1 tạo thành 2.3 Nhận xét Vì tâm hoạt động enzyme định đến hoạt tính emzyme, qua giai đoạn hoạt hóa emzyme tâm hoạt động nơi xảy tất phản ứng, nơi tạo điều kiện thuận lợi để phản ứng xảy dễ dàng Vì theo quan điểm em giai đoạn hoạt hóa enzyme, giai đoạn thứ tức giai đoạn: “Sau tạo phức, chất có biến đổi định mật độ điện tử, cấu hình làm chất trở nên hoạt động hơn, phản ứng dễ dàng để tạo thành sản phẩm P.” giai đoạn quan trọng để đánh giá hoạt tính enzyme Vì: 1.Giai đoạn thứ nhất: Enzyme kết hợp với chất liên kết yếu tạo thành phức hợp enzyme - chất (ES) không bền, phản ứng xảy nhanh đòi hỏi lượng hoạt hóa thấp Giai đoạn phản ứng enzyme bắt đầu nên không ảnh hưởng nhiều đến vận tốc phản ứng Giai đoạn thứ hai giai đoạn xảy biến đổi chất dẫn tới kéo căng phá vỡ liên kết đồng hóa trị tham gia phản ứng đồng thời tạo sản phẩm trả lại (hoàn nguyên) enzyme Giai đoạn giai đoạn định đên vận tốc phản ứng, ta có: Xét phản ứng: Gọi v1 vận tốc thành phức chất ES phản ứng tạo Gọi v-1 vận tốc phản ứng phân ly phức chất ES để tạo thành E S Gọi v2 vận tốc phản ứng tạo thành E P (sản phẩm) v1 = k1[E][S] v-1 = k-1[ES] v2 = k2[ES] Khi hệ thống đạt cân trạng thái ta có: k-1[ES] + k2[ES] = k1[E][S] (k-1+k2) [ES] = k1[E][S] (1) Gọi E0 nồng độ ban đầu: [E0] = [E] +[ES] [E] = [E0] – [ES] (2) Thay giá trị số [E] từ (2) vào phương trình (1) ta có (k-1+k2) [ES] = k1([E0] – [ES])[S] [ES] = Nếu đặt km = k-1 + k2/k1 (km số Michaelis Menten) Ta có: [ES] = [E0][S]/km + [S] Mặt khác vận tốc phản ứng tạo thành sản phẩm P là: V = k2[ES] Thay [ES] giá trị ta thu được: V= Vậy vận tóc phản ứng là: V = Ta thấy vận tốc phản ứng phụ thuộc vào k2 km (ở ta không xét đến nồng độ enzyme chất) Do để đánh giá hoạt tính enzyme giai đoạn tức giai đoạn “Giai đoạn 2: Sau tạo phức, chất có biến đổi định mật độ điện tử, cấu hình làm chất trở nên hoạt động hơn, phản ứng dễ dàng để tạo thành sản phẩm P” quan trọng để đánh giá hoạt tính enzyme Sau ví dụ khảo sát hoạt tính enzyme mà em tìm hiểu được: Phân lập xạ khuẩn khảo sát hoạt tính số enzyme thủy phân Steptomycess spp 1.Nguyên liệu - Các mẫu đất dùng để phân lập xạ khuẩn thu nhận Vườn quốc gia Nam Cát Tiên, mẫu xác bã thực vật thu nhận Bến Tre - Các dòng xạ khuẩn V1, V2, V3, V4, V5, V6, V7 cung cấp Bộ môn Sinh hóa, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Tp.HCM - Các dòng xạ khuẩn HX5, HX8, HX11, HX14, HX16, HX16,18, HX24, HX40, H20, H5,15 cung cấp ThS Nguyễn Thị Diệu Hạnh – Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Tp.HCM - Môi trường Gause điều chỉnh (g/l): 20g tinh bột; 3g MgSO4.7H2O; 3g K2HPO4; 1g KNO3; 0,5g NaCl; 0,01g FeSO4.7H2O; 20g agar Hấp khử trùng 1210C 30 phút [4] Phương pháp - Phương pháp phân lập xạ khuẩn: phân lập môi trường Gause bổ sung tetracycline nồng độ 20µg/ml - Phương pháp định tính hệ enzyme thủy phân: nuôi cấy dòng Streptomyces spp môi trường Gause (thay tinh bột chất thích hợp) ngày nhiệt độ phòng, đo đường kính vòng phân giải - Phương pháp thu dịch chiết enzyme: nuôi cấy dòng Streptomyces spp môi trường cảm ứng 96 nhiệt độ phòng, ly tâm 4000 vòng/phút, lọc dịch bên qua giấy lọc - Phương pháp xác định hoạt độ cellulase, mannanase: sử dụng CMC, guargum làm chất; dựa định lượng glucose phóng thích theo phương pháp Miller [2] - Phương pháp xác định hoạt độ pectinase: sử dụng pectin làm chất, dựa định lượng sản phẩm cuối galacturonic acid phương pháp so màu [4] - Phương pháp xác định hoạt độ protease: sử dụng casein làm chất, xác định hoạt độ dựa phương pháp Anson cải tiến [2] - Phương pháp xác định hoạt độ amylase: định lượng tinh bột bị phân giải dựa sở xác định mức độ giảm cường độ màu hỗn hợp phản ứng với dung dịch Iod [2] -D-glucosamine phương pháp Elson-Morgan [2]β- Phương pháp xác định hoạt độ chitinase: sử dụng chitin huyền phù làm chất, dựa định lượng sản phẩm cuối N-acetyl- Phương pháp định danh vùng 16S rRNA Streptomyces Kết phân lập xạ khuẩn Từ mẫu thu thập, tiến hành phân lập 35 dòng xạ khuẩn Trong đó, 23 dòng/4 mẫu Nam Cát Tiên 12 dòng/5 mẫu Bến Tre Kết cho thấy mật độ xạ khuẩn khác tùy thuộc vào địa điểm lấy mẫu, mẫu lấy Nam Cát Tiên đa dạng chủng loại xạ khuẩn so với mẫu lấy Bến Tre Quan sát đặc điểm hình thái môi trường Gause sau nuôi cấy ngày nhiệt độ phòng dựa hình dạng khuẩn lạc, màu sắc khuẩn ty khí sinh, màu sắc khuẩn ty chất, sắc tố khuếch tán môi trường Đặc điểm hình thái dòng phân lập đa dạng Khuẩn lạc chủ yếu hình tròn, mép trơn hay phóng xạ, thường có màu trắng xám, số dòng sinh sắc tố khếch tán môi trường Tiến hành quan sát vi thể tiêu phòng ẩm sau ngày môi trường Gause kính hiển vi quang học có độ phóng đại 40X, 100X Nhận thấy dòng phân lập có đặc điểm hình dạng khuẩn ty, cuống sinh bào tử đặc trưng Streptomyces nên bước đầu khẳng định dòng xạ khuẩn phân lập thuộc giống Streptomyces Hình 1: Một số khuẩn lạc Streptomyces môi trường ISP2 28-30oC, ngày (a) V2; (b) HX11; (c) HX14;(d) T22; (e) T13; (f) X15; (g) LA83; (f) LA60; (i) R2 Hình 2: Một số hình dạng khuẩn ty cuống sinh bào tử tiêu phòng ẩm, độ phóng đại 40X (a) T11; (b) LA28; (c) X5; (d) LA57; (e) B1; (f) LA88 4.Kết khảo sát hoạt tính hệ enzyme thủy phân dựa vòng phân giải chất Khảo sát hoạt tính enzyme cellulase, pectinase, mannanase, chitinase, protease, amylase 53 dòng Streptomyces, vòng phân giải chất đo sau ngày nuôi cấy nhiệt độ phòng Kết cho thấy 53 dòng khảo sát có khả sinh tổng hợp loại enzyme với mức độ khác Bảng Tỷ lệ đường kính vòng phân giải chất enzyme từ dịch nuôi cấy Streptomyces spp Bảng cho thấy đa số dòng Streptomyces spp có khả phân giải chất mạnh nhiều dòng có khả phân giải mạnh nhiều nguồn chất khác Điều chứng tỏ hầu hết dòng khảo sát có hoạt tính enzyme cao Tuy nhiên, hoạt tính protease amylase, hoạt tính amylase thấp so với enzyme lại Chitinase mannanase có hoạt tính cao enzyme khác với số lượng dòng có đường kính vòng phân giải chất lớn 3cm chitinase 29 dòng (chiếm 54,72%) mannanase 22 dòng (chiếm 41,51%) Các dòng T11, LA35, LA60, LA61, LA83, V2, V3, V5, V6, H20 dòng có hoạt tính cao enzyme khảo sát, dòng sàng lọc tiếp tục khảo sát hoạt độ Kết khảo sát hoạt độ hệ enzyme thủy phân dựa định lượng sản phẩm cuối Tiến hành khảo sát hoạt độ enzyme 10 dòng Streptomyces spp kể trên, kết trình bày bảng Theo số nghiên cứu hoạt độ enzyme xạ khuẩn trước đây, dòng khảo sát có hoạt độ tương đối cao Bảng Hoạt độ (Hđ) enzyme 10 dòng Streptomyces spp có hoạt tính cao Từ kết này, chọn lọc dòng có tiềm phục vụ lĩnh vực ứng dụng enzyme, tùy vào đặc tính dòng: - Dòng T11 có hoạt độ chitinase (0,909 UI/ml), mannanase (77,533 UI/ml) cao số dòng khảo sát, enzyme lại không vượt trội so với dòng lại so với số nghiên cứu trước mức cao nên vừa nghiên cứu ứng dụng tác động cộng hợp nhiều loại enzyme tác động chitinase, mannanase - Dòng LA35 có hoạt độ cao tất enzyme khảo sát với hoạt độ cellulase (50,000 UI/ml), pectinase (18,920 UI/ml), chitinase (0,682 UI/ml), mannanase (62,000 UI/ml), protease (2,204 UI/ml), amylase (908,100 UI/ml) Kết định danh cho thấy LA35 có độ tương đồng cao gen với loài: S citricolor, S sayamaensis - Dòng LA83 có hoạt độ tương đối cao tất enzyme khảo sát với hoạt độ cellulase (31,250 UI/ml), pectinase (23,420 UI/ml), chitinase (0,273 UI/ml), mannanase (54,267 UI/ml), protease (3,071UI/ml), amylase (1220,220 UI/ml) nên sử dụng số chế phẩm vi sinh phân giải xác bả thực vật - Dòng V2 có hoạt độ cellulase (87,500 UI/ml), protease (2,470 UI/ml), amylase (1049,940 UI/ml) tương đối cao so với số nghiên cứu Streptomyces trước đây, cần nghiên cứu thêm đặc tính Kết định danh cho thấy V2 có độ tương đồng cao gen với số loài: S gougerotii, S griseoaurantiacus, S viridochromogene, S ansochromogenes, S misionensis - Dòng V3 có hoạt độ cellulase (112,500 UI/ml) cao vượt trội so với dòng khác, gấp 2,4 lần hoạt độ trung bình (46,875 UI/ml) 4,5 lần so với dòng LA61 H20 có hoạt độ thấp (25,000 UI/ml), có triển vọng cao việc nghiên cứu sản xuất cellulase Kết định danh cho thấy V3 có độ tương đồng cao gen với số loài: S costaricanu, S graminearus, S murinu, S griseofuscus - Dòng V5 có hoạt độ amylase cao (1558,800 UI/ml) gấp 5,5 lần dòng có hoạt độ amylase thấp H20 (281,790 UI/ml) Tuy nhiên, hoạt độ enzyme lại đạt mức trung bình thấp nên ứng dụng V5 vào lĩnh vực liên quan đến amylase III Kết luận Qua trình tìm hiểu ví dụ ta thấy muốn đánh giá hoạt tính enzyme ta phải dựa vào giai đoạn phản ứng chất với tâm hoạt động Đặc biệt giai đoạn tức giai đoạn “Giai đoạn 2: Sau tạo phức, chất có biến đổi định mật độ điện tử, cấu hình làm chất trở nên hoạt động hơn, phản ứng dễ dàng để tạo thành sản phẩm P” vận tốc phản ứng trình V = phụ thuộc vào k2 số cân giai đoạn (ở ta không xét đến nồng độ chất nồng độ enzyme) IV Tài liệu tham khảo TS Tống Thị Thanh Hương, giảng công nghệ sinh học đại cương, Đại học Mỏ-Địa Chất Phạm Thị Trân Châu, Trần thi Áng 1999 Hoá sinh học, NXB Giáo dục, Hà Nội Đỗ Quý Hai 2004 Chuyên đề enzyme, Tài liệu lưu hành nội Trường ĐHKH Huế Trần Thanh Phong 2004 Chuyên đề enzyme, Tài liệu lưu hành nội Trường ĐHKH Huế 5 Bergmeyer H U 1968 Methods of enzymatic analysis, translated from the third German edition, Academic Press, New York Copeland R A 2000 Enzymes,copyright by Wiley-VCH, Inc Gilbert H F 1992 Basic concepts in biochemistry, Copyright by the McgrawHill companies, Inc Lehninger A L 2004 Principles of Biochemistry, 4th Edition W.H Freeman http://baigiang.violet.vn/present/show/entry_id/7256338 [...]... hoạt độ amylase thấp nhất là H20 (281,790 UI/ml) Tuy nhiên, hoạt độ ở các enzyme còn lại chỉ đạt mức trung bình hoặc thấp nên có thể ứng dụng V5 vào những lĩnh vực liên quan đến amylase III Kết luận Qua quá trình tìm hiểu và các ví dụ ta có thể thấy muốn đánh giá hoạt tính của các enzyme ta phải dựa vào các giai đoạn phản ứng của cơ chất với tâm hoạt động Đặc biệt là giai đoạn 2 tức là giai đoạn Giai. .. khảo sát hoạt độ enzyme của 10 dòng Streptomyces spp kể trên, kết quả được trình bày trong bảng 2 Theo một số nghiên cứu hoạt độ enzyme của xạ khuẩn trước đây, những dòng khảo sát có hoạt độ tương đối cao Bảng 2 Hoạt độ (Hđ) enzyme của 10 dòng Streptomyces spp có hoạt tính cao Từ kết quả này, có thể chọn lọc ra những dòng có tiềm năng phục vụ trong những lĩnh vực ứng dụng enzyme, tùy vào đặc tính của từng... phân giải cơ chất của các enzyme từ dịch nuôi cấy Streptomyces spp Bảng 1 cho thấy đa số các dòng Streptomyces spp đều có khả năng phân giải cơ chất mạnh và nhiều dòng có khả năng phân giải mạnh nhiều nguồn cơ chất khác nhau Điều này chứng tỏ hầu hết các dòng khảo sát có hoạt tính enzyme cao Tuy nhiên, hoạt tính protease và amylase, nhất là hoạt tính amylase thấp hơn so với các enzyme còn lại Chitinase... mannanase có hoạt tính cao hơn các enzyme khác với số lượng các dòng có đường kính vòng phân giải cơ chất lớn hơn 3cm của chitinase là 29 dòng (chiếm 54,72%) và mannanase là 22 dòng (chiếm 41,51%) Các dòng T11, LA35, LA60, LA61, LA83, V2, V3, V5, V6, H20 là những dòng có hoạt tính cao ở cả 6 enzyme khảo sát, các dòng này được sàng lọc và tiếp tục khảo sát hoạt độ 5 Kết quả khảo sát hoạt độ hệ enzyme thủy... Dòng T11 có hoạt độ chitinase (0,909 UI/ml), mannanase (77,533 UI/ml) cao nhất trong số các dòng khảo sát, các enzyme còn lại tuy không vượt trội so với các dòng còn lại nhưng so với một số nghiên cứu trước đây thì đây là một mức rất cao nên vừa có thể nghiên cứu ứng dụng tác động cộng hợp của nhiều loại enzyme hoặc tác động của chitinase, mannanase - Dòng LA35 có hoạt độ cao đều ở tất cả các enzyme khảo... biệt là giai đoạn 2 tức là giai đoạn Giai đoạn 2: Sau khi tạo phức, cơ chất có những biến đổi nhất định về mật độ điện tử, cấu hình làm cơ chất trở nên hoạt động hơn, phản ứng dễ dàng để tạo thành sản phẩm P” vì vận tốc phản ứng của cả quá trình là V = phụ thuộc vào k2 là hằng số cân bằng của giai đoạn 2 (ở đây ta không xét đến nồng độ cơ chất và nồng độ enzyme) IV Tài liệu tham khảo 1 TS Tống Thị... LA57; (e) B1; (f) LA88 4.Kết quả khảo sát hoạt tính hệ enzyme thủy phân dựa trên vòng phân giải cơ chất Khảo sát hoạt tính 6 enzyme cellulase, pectinase, mannanase, chitinase, protease, amylase trên 53 dòng Streptomyces, vòng phân giải cơ chất được đo sau 6 ngày nuôi cấy ở nhiệt độ phòng Kết quả cho thấy cả 53 dòng khảo sát đều có khả năng sinh tổng hợp 6 loại enzyme trên với mức độ khác nhau Bảng 1... V3 có hoạt độ cellulase (112,500 UI/ml) cao vượt trội so với các dòng khác, gấp 2,4 lần hoạt độ trung bình (46,875 UI/ml) và 4,5 lần so với dòng LA61 và H20 có hoạt độ thấp nhất (25,000 UI/ml), có triển vọng cao trong việc nghiên cứu sản xuất cellulase Kết quả định danh cho thấy V3 có độ tương đồng cao về gen với một số loài: S costaricanu, S graminearus, S murinu, S griseofuscus - Dòng V5 có hoạt độ... Châu, Trần thi Áng 1999 Hoá sinh học, NXB Giáo dục, Hà Nội 3 Đỗ Quý Hai 2004 Chuyên đề enzyme, Tài liệu lưu hành nội bộ Trường ĐHKH Huế 4 Trần Thanh Phong 2004 Chuyên đề enzyme, Tài liệu lưu hành nội bộ Trường ĐHKH Huế 5 Bergmeyer H U 1968 Methods of enzymatic analysis, translated from the 6 7 8 9 third German edition, Academic Press, New York Copeland R A 2000 Enzymes,copyright by Wiley-VCH, Inc Gilbert... ở tất cả các enzyme khảo sát với hoạt độ cellulase (50,000 UI/ml), pectinase (18,920 UI/ml), chitinase (0,682 UI/ml), mannanase (62,000 UI/ml), protease (2,204 UI/ml), amylase (908,100 UI/ml) Kết quả định danh cho thấy LA35 có độ tương đồng cao về gen với loài: S citricolor, S sayamaensis - Dòng LA83 cũng có hoạt độ tương đối cao đều ở tất cả các enzyme khảo sát với hoạt độ cellulase (31,250 UI/ml), ... quan trọng để đánh giá hoạt tính enzyme Vì: 1 .Giai đoạn thứ nhất: Enzyme kết hợp với chất liên kết yếu tạo thành phức hợp enzyme - chất (ES) không bền, phản ứng xảy nhanh đòi hỏi lượng hoạt hóa. .. trình tìm hiểu ví dụ ta thấy muốn đánh giá hoạt tính enzyme ta phải dựa vào giai đoạn phản ứng chất với tâm hoạt động Đặc biệt giai đoạn tức giai đoạn Giai đoạn 2: Sau tạo phức, chất có biến... tâm hoạt động enzyme định đến hoạt tính emzyme, qua giai đoạn hoạt hóa emzyme tâm hoạt động nơi xảy tất phản ứng, nơi tạo điều kiện thuận lợi để phản ứng xảy dễ dàng Vì theo quan điểm em giai đoạn