Nghiên cứu xây dựng phương pháp xác định hoạt tính của 2 chế phẩm thuốc chứa enzym

BỘ Y TẾ BÁO CÁO KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI CẤP BỘ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH CỦA CHẾ PHẨM THUỐC CHỨA ENZYM Chủ nhiệm đề tài: TS ĐOÀN CAO SƠN Cơ quan chủ trì đề tài: Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Năm 2010 MỤC LỤC PHẦN A TÓM TẮT CÁC KẾT QUẢ CỦA ĐỀ TÀI 1 Mục đích nghiên cứu Phương pháp sử dụng để nghiên cứu Kết nghiên cứu Kết luận rút từ nghiên cứu 5.Về cải tiến kỹ thuật Những đóng góp khác Tiến độ thực PHẦN B NỘI DUNG BÁO CÁO CHI TIẾT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI CẤP BỘ ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu TỔNG QUAN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU 2.1 Enzym bromelain 2.1.1 Cấu trúc tính chất enzym bromelain 2.1.2 Cơ chế hoạt động ứng dụng y học 10 2.1.3 Các phương pháp xác định hoạt tính enzym bromelain 13 2.2 Enzym Trypsin 13 2.2.1 Cấu trúc tính chất enzym trypsin 13 2.2.2 Cơ chế hoạt động ứng dụng y học 14 2.2.3 Các phương pháp xác định hoạt tính enzym trypsin 18 2.3 Enzym streptokinase 18 2.3.1 Cấu trúc tính chất enzym streptokinase 18 2.3.2 Cơ chế hoạt động ứng dụng y học enzym streptokinase 19 2.3.3 Các phương pháp xác định hoạt tính enzym streptokinase 22 2.4 Enzym Streptodornase 23 2.4.1 Cấu trúc tính chất enzym streptodornase 23 2.4.2 Cơ chế hoạt động ứng dụng y học enzym streptodornase 24 2.4.3 Các phương pháp xác định hoạt tính enzym streptodornase 25 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1 Hóa chất, chất chuẩn, mẫu nghiên cứu 26 3.1.1 Chất chuẩn 26 3.1.2 Dung môi, hóa chất: 26 3.1.3 Mẫu dùng để nghiên cứu xây dựng thẩm định quy trình 27 3.2 Thiết bị dụng cụ 27 3.3 Phương pháp 28 3.3.1 Bromelain 28 3.3.2 Trypsin 28 3.3.3 Streptokinase 29 3.3.4 Streptodornase 29 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 30 4.1 Xây dựng thẩm định quy trình xác định hoạt tính enzym chế phẩm thuốc chứa bromelain trypsin 30 4.1.1 Xây dựng quy trình xác định hoạt tính bromelain trypsin 30 4.1.2 Thẩm định phươn g pháp xác định hoạt tính enzym chế phẩm thuốc chứa bromelain trypsin 34 4.2 Xây dựng thẩm định quy trình xác định hoạt tính enzym chế phẩm thuốc chứa streptokinase streptodornase 43 4.2.1 Xây dựng quy trình xác định hoạt tính streptokinase streptodornase 43 4.2.2 Thẩm định phương pháp xây dựng để xác định hoạt tính enzym chế phẩm thuốc chứa streptokinase streptodornase 50 4.3 Áp dụng quy trình xây dựng để kiểm tra chất lượng số chế phẩm thị trường 67 4.3.1 Kiểm tra chất lượng số chế phẩm chứa bromelain trypsin 67 4.3.2 Kiểm tra chất lượng số chế phẩm chứa Streptokinase Streptodornase 68 4.4 Bàn luận ý nghĩa thực tiễn đề tài 69 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 70 5.1 Kết luận 70 5.2 Kiến nghị 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO .72 PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Kết khảo sát ảnh hưởng L-cystein đến khả xác định hoạt tính bromelain 32 Bảng 2: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng Tyrosin 34 Bảng 3: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng Bromelain .35 Bảng 4: Khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng Bromelain .36 Bảng 5: Khảo sát độ phương pháp định lượng Bromelain .37 Bảng 6: Khảo sát độ đặc hiệu phương pháp định lượng Bromelain 38 Bảng 7: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng Trypsin 39 Bảng 8: Khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng Trypsin viên Brolasin 40 Bảng 9: Khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng Trypsin viên Kimoral-S41 Bảng 10: Khảo sát độ phương pháp định lượng Trypsin 41 Bảng 11: Khảo sát độ đặc hiệu phương pháp định lượng Trypsin 42 Bảng 12: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng streptokinase phương pháp đo đường kính vòng ly giải fibrin agarose .50 Bảng 13: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng streptokinase phương pháp đo đường kính vòng ly giải fibrin agarose .51 Bảng 14: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng streptokinase phương pháp đo đường kính vòng ly giải fibrin agarose .52 Bảng 15: Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng streptokinase phương pháp đo đường kính vòng ly giải fibrin agarose 53 Bảng 16: Kết khảo sát độ phương pháp định lượng Streptokinase phương pháp đo đường kính vòng ly giải fibrin agarose 54 Bảng 17: Kết khảo sát khoảng tuyến tính phương pháp định lượng Streptokinase phương pháp đo thời gian ly giải khối đông .55 Bảng 18: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng Streptokinase phương pháp đo thời gian ly giải khối đông .56 Bảng 19: Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng Streptokinase phương pháp đo thời gian ly giải khối đông 57 Bảng 20: Kết khảo sát độ phương pháp định lượng Streptokinase phương pháp đo thời gian ly giải khối đông .58 Bảng 21: Kết định lượng Streptokinase số chế phẩm thị trường 59 Bảng 22: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng streptodornase 60 Bảng 23: Thời gian chảy nhớt kế dung dịch chuẩn thử nghiệm khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng streptodornase 61 Bảng 24: Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng streptodornase .62 Bảng 25: Thời gian chảy nhớt kế dung dịch chuẩn thử nghiệm khảo sát độ phương pháp định lượng streptodornase 63 Bảng 26: Kết khảo sát độ phương pháp định lượng streptodornase .64 Bảng 27: Thời gian chảy nhớt kế dung dịch chuẩn thử nghiệm khảo sát tính đặc hiệu phương pháp định lượng streptodornase .65 Bảng 28: Thời gian chảy nhớt kế dung dịch chuẩn thử nghiệm khảo sát tính đặc hiệu phương pháp định lượng streptodornase 66 Bảng 29: Hàm lượng bromelain trypsin số chế phẩm 67 Bảng 30: Hàm lượng streptokinase streptodornase số chế phẩm .68 DANH MỤC HÌNH Hình 1: Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ độ hấp thụ định lượng Tyrosin 34 Hình 2: Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ độ hấp thụ định lượng Bromelain .35 Hình 3: Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ chênh lệch độ hấp thụ định lượng Trypsin 40 Hình 4: Đồ thị biểu diễn mối tương quan logarit nồng độ logarit đường kính vòng ly giải 51 Hình 5: Đồ thị biểu diễn mối tương quan logarit nồng độ logarit đường kính vòng ly giải 52 Hình 6: Đồ thị biểu diễn mối tương quan logarit nồng độ logarit đường kính vòng ly giải 53 Hình 7: Đồ thị biểu diễn mối tương quan logarit nồng độ logarit thời gian ly giải khối đông định lượng streptokinase 55 Hình 8: Đồ thị biểu diễn mối tương quan logarit nồng độ logarit thời gian ly giải khối đông định lượng Streptokinase 56 Hình 9: Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ hệ số giảm độ nhớt định lượng streptodornase 60 Hình 10: Đường hồi quy tuyến tính biểu diễn độ giảm độ nhớt theo thời gian dung dịch chuẩn thử nghiệm khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng streptodornase 61 Hình 11: Đường tuyến tính biểu diễn giảm độ nhớt theo thời gian dung dịch chuẩn thử nghiệm khảo sát độ phương pháp định lượng streptodornase 63 Hình 12: Đường tuyến tính biểu diễn giảm độ nhớt theo thời gian dung dịch chuẩn thử nghiệm khảo sát tính đặc hiệu phương pháp định lượng streptodornase 66 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT KDa : Kilo Dalton SK : Streptokinase Arg : Arginin Val : Valin Asp : Asparagin Lys : Lysin Leu : Leucin Plgn : Plasminogen Pm : Plasmin RSD TB : Độ lệch chuẩn tương đối : Trung bình PHẦN A TÓM TẮT CÁC KẾT QUẢ CỦA ĐỀ TÀI Mục đích nghiên cứu: - Xây dựng phương pháp xác định hoạt tính enzym: Bromelain, Trypsin, Streptokinase Streptodornase chế phẩm hỗn hợp chứa enzym Bromelain, Trypsin chế phẩm hỗn hợp Streptokinase, Streptodornase - Áp dụng phương pháp xác đinh hoạt tính enzym Bromelain, Trypsin, Streptokinase Streptodornase để kiểm tra chất lượng số thuốc lưu hành thị trường thẩm định, xét duyệt tiêu chuẩn Phương pháp sử dụng để nghiên cứu: Đề tài Khoa học - Công nghệ “Nghiên cứu xây dựng phương pháp xác định hoạt tính chế phẩm thuốc chứa enzym” nghiên cứu thực cách có hệ thống để thiết lập quy trình xác định hoạt tính enzym chế phẩm chứa hỗn hợp enzym Những kết nghiên cứu đề tài có ý nghĩa thực tiễn cao Các quy trình xác định hoạt tính thiết lập đề tài thẩm định chu chứng minh phù hợp, độ tin cậy áp dụng xác định hoạt tính thành phần enzyme chế phẩm thuốc chứa hỗn hợp enzym, góp phần nâng cao khả kỹ thuật hệ thống kiểm nghiệm giám sát chất lượng thuốc Các phương pháp định lượng xây dựng hướng tới phù hợp mặt kỹ thuật với điều kiện trang thiết bị Viện kiểm nghiệm thuốc trung ương sở thuộc hệ thống kiểm nghiệm thuốc nói chung Trong số trường hợp, chưa có phương pháp phù hợp, sau trình khảo sát sơ bộ, nhóm nghiên cứu phải tiến hành cải tiến điều kiện phân tích cho phù hợp với đối tượng mẫu thuốc cần kiểm tra điều kiện trang thiết bị có Cụ thể, số phương pháp xác định hoạt tính enzym có phương pháp xác định hoạt tính enzym Streptokinase (BP CP) Trypsin (USP) có sẵn dược điển chuyên luận thuộc nguyên liệu Còn phương pháp xác định hoạt tính Bromelain chưa có dược điển Streptodornase có chuyên luận Streptokinase nguyên liệu giới hạn Streptodornase, nhóm nghiên cứu thực bước sau: 1- Tham khảo tài liệu để xây dựng phương pháp xác định hoạt tính enzym Bromelain chế phẩm chứa hỗn hợp Bromelain Trypsin 2- Tham khảo tài liệu USP để xây dựng phương pháp xác định hoạt tính Trypsin chế phẩm chứa hỗn hợp Bromelain Trypsin 3- Tham khảo tài liệu BP 2003 CP 2005 nguồn tài liệu khác để xây dựng phương pháp xác định hoạt tính enzym Streptokinase chế phẩm chứa hỗn hợp Streptokinase Streptodornase 4- Tham khảo tài liệu có để xây dựng phương pháp xác định hoạt tính enzym Streptodornase chế phẩm chứa hỗn hợp Streptokinase Streptodornase 5- Áp dụng phương pháp xác định hoạt tính enzym Bromelain Trypsin xây dựng để kiểm tra chất lượng chế phẩm chứa hỗn hợp enzym có thị trường 6- Áp dụng phương pháp xác định hoạt tính enzym Streptokinase Streptodornase xây dựng để kiểm tra chất lượng chế phẩm chứa hỗn hợp enzym có thị trường Kết nghiên cứu: - Đã thiết lập quy trình xác định hoạt tính enzym để định lượng hoạt tính enzym chế phẩm hỗn hợp chế phẩm chứa hỗn hợp gồm enzym Bromelain Trypsin chế phẩm chứa hỗn hợp enzym Streptokinase Streptodornase đạt yêu cầu: • Khoảng tuyến tính hệ số tương quan • Độ lặp lại độ đạt yêu cầu • Phù hợp với điều kiện trang thiết bị, hóa chất Viện Kiểm nghiệm thuốc trung ương - Đã thiết lập báo cáo kết xác định hoạt tính enzym Bromelain Trypsin 09 chế phẩm chứa hỗn hợp enzym - Đã thiết lập báo cáo kết xác định hoạt tính enzym Streptokinase Streptodornase 09 chế phẩm chứa hỗn hợp enzym .- Đã hoàn thiện nội dung báo khoa học, đó: 1/ Xây dựng phương pháp xác định hoạt tính Bromelain chế phẩm hỗn hợp chứa Bromelain trypsin (Đã đăng tạp chí Kiểm nghiệm số 2/2010) 2/ Xây dựng phương pháp xác định hoạt tính enzym Streptokinase chế phẩm hỗn hợp chứa Streptokinase Streptodornase phương pháp đo vòng ly giải (Đã đăng tạp chí Kiểm nghiệm số 3/2010) báo lại chuẩn bị hoàn tất nội dung, nhóm nghiên cứu gửi đăng vào tháng 10/2010, cụ thể gồm báo sau đây: 3/ Xây dựng phương pháp xác định hoạt tính Trypsin chế phẩm hỗn hợp chứa Bromelain trypsin 4/ Xây dựng phương pháp xác định hoạt tính Streptodornase chế phẩm hỗn hợp chứa Streptokinase Streptodornase Kết luận rút từ nghiên cứu: - quy trình định lượng xác định hoạt tính enzym Bromelain, Trypsin, Streptokinase Streptodornase chế phẩm chứa hỗn hợp enzym xây dựng, thẩm định dựa đối tượng nghiên cứu sản phẩm lưu hành thị trường Việt Nam Những quy trình chứng minh tính khả thi điều kiện sở vật chất nước ta, đối tượng áp dụng chế phẩm chứa hỗn hợp enzym, giải pháp kỹ thuật có ý nghĩa ứng dụng thực tiễn cao kiểm tra giám sát chất lượng thuốc chứa hoạt chất enzym Việt Nam - Trong trình thực đề tài, qua kết thực nghiệm, có số nhận xét tính sau: a) Xây dựng phương pháp xác định hoạt tính enzyme Bromelain chế phẩm hỗn hợp chứa enzyme Bromelain trypsin: - Đã xây dựng cách xử lý mẫu thử nồng độ dung dịch thử phù hợp với phương pháp quang phổ UV-VIS Phụ lục CÁC TÀI LIỆU LIÊN QUAN - Chứng phân tích chuản chất dùng định lượng - Bài báo khoa học - Danh sách đăng ký đề tài tốt nghiệp thạc sĩ dược học Phụ lục MỘT SỐ DỮ LIỆU NGHIÊN CỨU - Phổ hấp thụ sáng - Đường biến đổi độ hấp thụ Hóa chất, thuốc thử dùng định lượng Bromelain, Trypsin, Streptokinase, Streptodornase Định lượng Streptokinase phương pháp đo đường kính vòng ly giải fibrin agarose A C B D Định lượng Streptokinase phương pháp đo thời gian ly giải khối đông A : Giai đoạn tạo đông ống thử ống đối chứng B, C, D : Quá trình ly giải Ống mao quản Định lượng Streptodornase phương pháp đo độ nhớt Bể ổn nhiệt Labec BÁO CÁO KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI CẤP BỘ Tên đề tài: NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH CỦA CHẾ PHẨM THUỐC CHỨA ENZYM Chủ nhiệm đề tài: TS ĐOÀN CAO SƠN Cơ quan chủ trì đề tài: Viện Kiểm nghiệm thuốc TƯ, Bộ Y tế 48 Hai Bà Trưng, Hà Nội Cơ quan quản lý đề tài: Bộ Y tế Thư ký đề tài: Hà Thị Minh Châu Danh sách người thực chính: ThS Bùi Thị Hòa DS Hà Thị Minh Châu ThS Nguyễn Đăng Lâm DS Lê Thị Thu Hiền TS Trần Thị Hồng Anh ThS Lục Thị Vân DS Nguyễn Thị Hồng Yến TS Nguyễn Thị Kim Hương DS Trần Thị Thanh Huế Thời gian thực đề tài: Từ tháng 06/2008 đến tháng 06/2010 MỤC LỤC PHẦN A TÓM TẮT CÁC KẾT QUẢ CỦA ĐỀ TÀI 1 Mục đích nghiên cứu Phương pháp sử dụng để nghiên cứu Kết nghiên cứu Kết luận rút từ nghiên cứu 5.Về cải tiến kỹ thuật Những đóng góp khác Tiến độ thực PHẦN B NỘI DUNG BÁO CÁO CHI TIẾT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI CẤP BỘ ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu TỔNG QUAN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU 2.1 Enzym bromelain 2.1.1 Cấu trúc tính chất enzym bromelain 2.1.2 Cơ chế hoạt động ứng dụng y học 10 2.1.3 Các phương pháp xác định hoạt tính enzym bromelain 13 2.2 Enzym Trypsin 13 2.2.1 Cấu trúc tính chất enzym trypsin 13 2.2.2 Cơ chế hoạt động ứng dụng y học 14 2.2.3 Các phương pháp xác định hoạt tính enzym trypsin 18 2.3 Enzym streptokinase 18 2.3.1 Cấu trúc tính chất enzym streptokinase 18 2.3.2 Cơ chế hoạt động ứng dụng y học enzym streptokinase 19 2.3.3 Các phương pháp xác định hoạt tính enzym streptokinase 22 2.4 Enzym Streptodornase 23 2.4.1 Cấu trúc tính chất enzym streptodornase 23 2.4.2 Cơ chế hoạt động ứng dụng y học enzym streptodornase 24 2.4.3 Các phương pháp xác định hoạt tính enzym streptodornase 25 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1 Hóa chất, chất chuẩn, mẫu nghiên cứu 26 3.1.1 Chất chuẩn 26 3.1.2 Dung môi, hóa chất: 26 3.1.3 Mẫu dùng để nghiên cứu xây dựng thẩm định quy trình 27 3.2 Thiết bị dụng cụ 27 3.3 Phương pháp 28 3.3.1 Bromelain 28 3.3.2 Trypsin 28 3.3.3 Streptokinase 29 3.3.4 Streptodornase 29 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 30 4.1 Xây dựng thẩm định quy trình xác định hoạt tính enzym chế phẩm thuốc chứa bromelain trypsin 30 4.1.1 Xây dựng quy trình xác định hoạt tính bromelain trypsin 30 4.1.2 Thẩm định phươn g pháp xác định hoạt tính enzym chế phẩm thuốc chứa bromelain trypsin 34 4.2 Xây dựng thẩm định quy trình xác định hoạt tính enzym chế phẩm thuốc chứa streptokinase streptodornase 43 4.2.1 Xây dựng quy trình xác định hoạt tính streptokinase streptodornase 43 4.2.2 Thẩm định phương pháp xây dựng để xác định hoạt tính enzym chế phẩm thuốc chứa streptokinase streptodornase 50 4.3 Áp dụng quy trình xây dựng để kiểm tra chất lượng số chế phẩm thị trường 67 4.3.1 Kiểm tra chất lượng số chế phẩm chứa bromelain trypsin 67 4.3.2 Kiểm tra chất lượng số chế phẩm chứa Streptokinase Streptodornase 68 4.4 Bàn luận ý nghĩa thực tiễn đề tài 69 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 70 5.1 Kết luận 70 5.2 Kiến nghị 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO .72 PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Kết khảo sát ảnh hưởng L-cystein đến khả xác định hoạt tính bromelain 32 Bảng 2: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng Tyrosin 34 Bảng 3: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng Bromelain .35 Bảng 4: Khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng Bromelain .36 Bảng 5: Khảo sát độ phương pháp định lượng Bromelain .37 Bảng 6: Khảo sát độ đặc hiệu phương pháp định lượng Bromelain 38 Bảng 7: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng Trypsin 39 Bảng 8: Khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng Trypsin viên Brolasin 40 Bảng 9: Khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng Trypsin viên Kimoral-S41 Bảng 10: Khảo sát độ phương pháp định lượng Trypsin 41 Bảng 11: Khảo sát độ đặc hiệu phương pháp định lượng Trypsin 42 Bảng 12: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng streptokinase phương pháp đo đường kính vòng ly giải fibrin agarose .50 Bảng 13: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng streptokinase phương pháp đo đường kính vòng ly giải fibrin agarose .51 Bảng 14: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng streptokinase phương pháp đo đường kính vòng ly giải fibrin agarose .52 Bảng 15: Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng streptokinase phương pháp đo đường kính vòng ly giải fibrin agarose 53 Bảng 16: Kết khảo sát độ phương pháp định lượng Streptokinase phương pháp đo đường kính vòng ly giải fibrin agarose 54 Bảng 17: Kết khảo sát khoảng tuyến tính phương pháp định lượng Streptokinase phương pháp đo thời gian ly giải khối đông .55 Bảng 18: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng Streptokinase phương pháp đo thời gian ly giải khối đông .56 Bảng 19: Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng Streptokinase phương pháp đo thời gian ly giải khối đông 57 Bảng 20: Kết khảo sát độ phương pháp định lượng Streptokinase phương pháp đo thời gian ly giải khối đông .58 Bảng 21: Kết định lượng Streptokinase số chế phẩm thị trường 59 Bảng 22: Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp định lượng streptodornase 60 Bảng 23: Thời gian chảy nhớt kế dung dịch chuẩn thử nghiệm khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng streptodornase 61 Bảng 24: Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng streptodornase .62 Bảng 25: Thời gian chảy nhớt kế dung dịch chuẩn thử nghiệm khảo sát độ phương pháp định lượng streptodornase 63 Bảng 26: Kết khảo sát độ phương pháp định lượng streptodornase .64 Bảng 27: Thời gian chảy nhớt kế dung dịch chuẩn thử nghiệm khảo sát tính đặc hiệu phương pháp định lượng streptodornase .65 Bảng 28: Thời gian chảy nhớt kế dung dịch chuẩn thử nghiệm khảo sát tính đặc hiệu phương pháp định lượng streptodornase 66 Bảng 29: Hàm lượng bromelain trypsin số chế phẩm 67 Bảng 30: Hàm lượng streptokinase streptodornase số chế phẩm .68 DANH MỤC HÌNH Hình 1: Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ độ hấp thụ định lượng Tyrosin 34 Hình 2: Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ độ hấp thụ định lượng Bromelain .35 Hình 3: Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ chênh lệch độ hấp thụ định lượng Trypsin 40 Hình 4: Đồ thị biểu diễn mối tương quan logarit nồng độ logarit đường kính vòng ly giải 51 Hình 5: Đồ thị biểu diễn mối tương quan logarit nồng độ logarit đường kính vòng ly giải 52 Hình 6: Đồ thị biểu diễn mối tương quan logarit nồng độ logarit đường kính vòng ly giải 53 Hình 7: Đồ thị biểu diễn mối tương quan logarit nồng độ logarit thời gian ly giải khối đông định lượng streptokinase 55 Hình 8: Đồ thị biểu diễn mối tương quan logarit nồng độ logarit thời gian ly giải khối đông định lượng Streptokinase 56 Hình 9: Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ hệ số giảm độ nhớt định lượng streptodornase 60 Hình 10: Đường hồi quy tuyến tính biểu diễn độ giảm độ nhớt theo thời gian dung dịch chuẩn thử nghiệm khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng streptodornase 61 Hình 11: Đường tuyến tính biểu diễn giảm độ nhớt theo thời gian dung dịch chuẩn thử nghiệm khảo sát độ phương pháp định lượng streptodornase 63 Hình 12: Đường tuyến tính biểu diễn giảm độ nhớt theo thời gian dung dịch chuẩn thử nghiệm khảo sát tính đặc hiệu phương pháp định lượng streptodornase 66 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT KDa : Kilo Dalton SK : Streptokinase Arg : Arginin Val : Valin Asp : Asparagin Lys : Lysin Leu : Leucin Plgn : Plasminogen Pm : Plasmin RSD TB : Độ lệch chuẩn tương đối : Trung bình [...]... có mặt của enzym trypsin đến phương pháp xác định hoạt tính của bromelain trong chế phẩm chứa hỗn hợp 2 enzym này Kết quả trypsin không ảnh hưởng đến phương pháp xác định hoạt tính của bromelain b) Xây dựng phương pháp xác định hoạt tính của enzym Trypsin trong chế phẩm hỗn hợp chứa 2 enzyme Bromelain và trypsin: - Đã xây dựng được cách xử lý mẫu thử và nồng độ dung dịch thử phù hợp với phương pháp đo... khảo sát sự ảnh hưởng bởi sự có mặt của enzym bromelain đến phương pháp xác định hoạt tính của trypsin trong chế phẩm chứa hỗn hợp 2 enzym này Kết quả bromelain không ảnh hưởng đến phương pháp xác định hoạt tính của trypsin c) Xây dựng phương p háp xác định hoạt tính của enzyme Streptokinase trong chế phẩm hỗn hợp chứa 2 enzyme Streptokinase và streptodornase: - Đã xây dựng được cách xử lý mẫu thử và nồng... với phương pháp đo thời gian ly giải khối đông và phương pháp đo đường kính vòng ly giải fibrin trong agarose - Đã khảo sát sự ảnh hưởng bởi sự có mặt của enzym streptodornase đến phương pháp xác định hoạt tính của streptokinase trong chế phẩm hỗn hợp chứa hỗn hợp 2 enzyme này Kết quả streptodornase không ảnh hưởng đến phương pháp xác định hoạt tính của streptokinase d) Xây dựng phương pháp xác định hoạt. .. các phương pháp xác định hoạt tính các enzym rất đa dạng, cách biểu thị hoạt tính enzyme tùy thuộc vào từng cơ sở sản xuất (có thể xác định theo IU hoặc mg hoặc các đơn vị khác theo qui định) Vì vậy để xây dựng được một phương pháp xác định hoạt tính của mỗi enzym sẽ góp phần nâng cao năng lực đánh giá chất lượng của nhóm hoạt chất "khó tính" này, đặc biệt là trên đối tượng chế phẩm phối hợp các enzym. .. chế phẩm kết hợp 2 enzym bromelain và trypsin 2 Xây dựng và thẩm định phương pháp xác định hoạt tính của chế phẩm kết hợp 2 enzym streptokinase và streptodornase 3 Áp dụng các phương pháp để kiểm tra chất lượng một số chế phẩm tương tự lưu hành trên thị trường 2 TỔNG QUAN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU 2. 1 Enzym bromelain 2. 1.1 Cấu trúc và tính chất của enzym bromelain Enzym bromelain lần đầu tiên được phát hiện... định hoạt tính của enzyme Streptodornase trong chế phẩm hỗn hợp chứa 2 enzyme Streptokinase và streptodornase: - Đã xây dựng được cách xử lý mẫu thử và nồng độ dung dịch thử phù hợp với phương pháp đo thời gian giảm độ nhớt của dung dịch cơ chất AND - Đã khảo sát sự ảnh hưởng bởi sự có mặt của enzym streptokinase đến phương pháp xác định hoạt tính của streptodornase trong chế phẩm chứa hỗn hợp 2 enzyme... sở sản phẩm tạo thành để xác định hoạt tính của trypsin, giá trị hấp thụ của dung dịch biến đổi theo thời gian và hoạt tính của Trypsin được xác định bằng cách quy đổi từ sự biến thiên giá trị của độ hấp thụ [28 ] - Xây dựng quy trình xác định hoạt tính: Qua tham khảo tài liệu, xác định được phương pháp chuẩn bị các dung dịch thuốc thử và cơ chất N-benzoyl Larginin ethyl ester hydroclorid Xác định được... mới dừng lại ở một số chế phẩm enzym đơn thành phẩn và đơn giản Chính vì vậy, việc nghiên cứu đề tài Nghiên cứu xây dựng phương pháp xác định hoạt tính của 2 chế phẩm thuốc chứa enzym là thực sự cần thiết và hữu ích nhằm nâng cao năng lực kiểm tra, giám sát chất lượng đối với các sản phẩm thuốc có nguồn gốc sinh học với điều kiện trang thiết bị hiện có của Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương và các... xây dựng các phương pháp xác định họat tính của các chế phẩm enzym nhằm áp dụng cho công tác kiểm tra chất lượng thuốc trong điều kiện hiện có của hệ thống kiểm nghiệm Trong thời gian gần đây, Viện Kiểm nghiệm thuốc trung ương đã tiến hành nghiên cứu và xây dựng được một số phương pháp, quy trình kiểm tra chất lượng của một số dạng chế phẩm enzym Tuy nhiên, do điều kiện kinh phí hạn hẹp, việc nghiên cứu. .. độ nhỏ hơn 400C, enzym có hoạt tính ổn định, nhưng khi ủ trước ở 50-600C hoạt tính của enzym bị giảm hoạt động ở dải nhiệt độ rộng, từ 10-600C Trong nghiên cứu tác động của nhiệt độ cao hơn 600C, nhận thấy rằng hoạt tính của enzym giảm đi rõ rệt do hình thành dạng bán biến tính bền vững (không phục hồi) của phân tử streptodornase [13] 2. 4 .2 Cơ chế hoạt động và ứng dụng trong y học của enzym streptodornase ... 100ml, ho tan ho n toàn dung dịch ho tan enzym vừa đủ 100ml Dung dịch chuẩn 2: Hút xác ml dung dịch cho vào bình định mức 20 ml làm vừa đủ dung dịch ho tan enzym Dung dịch chuẩn 3: Hút xác 5ml dung. .. nước cất vừa đủ 500ml (Dung dịch B) Lấy 13ml dung dịch A trộn với 87ml dung dịch B Điều chỉnh pH dung dịch đến 7,6 (nếu cần) dung dịch A dung dịch B - Dung dịch chất: Hòa tan khoảng 85,7 mg N- Benzoyl... trypsin a) Chuẩn bị dung dịch thuốc thử: - Dung dịch đệm phosphat 0,067M – pH 7,6 (Theo D VN III) Hòa tan khoảng 4,54g KH2PO4 với nước cất vừa đủ 500ml (Dung dịch A) Hòa tan khoảng 4,73g Na2HPO4