Phát tác nhân gây bệnh sinh từ thực phẩm Phát tác nhân gây bệnh sinh từ thực phẩm Bởi: Nguyễn Lân Dũng buivietha Một vấn đề việc trì an toàn thực phẩm việc cần thiết phải nhanh chóng tìm vi sinh vật để hạn chế bùng phát, lây lan cộng đồng Quá trình quan trọng phân phối lan tràn nguồn thực phẩm dễ ôi thiu Các kĩ thuật nuôi cấy vi sinh đạt tiêu chuẩn đòi hỏi hàng ngày đến hàng tuần để phát cách chắn mầm bệnh Việc phát thường phức tạp tồn mầm bệnh so với vi sinh vật địa Hơn nữa, thành phần cấu tạo hóa học vật lí khác thực phẩm làm cho việc phân lập trở nên khó khăn Kĩ thuật kháng thể huỳnh quang, kỹ thuật ELISA, kỹ thuật miễn dịch phóng xạ cho kết công nhận Những kĩ thuật sử dụng để phát lượng nhỏ kháng nguyên gây bệnh đặc hiệu Các kĩ thuật sinh học phân tử sử dụng thêm việc phát vi sinh vật gây bệnh Các phương pháp cho mục đích: (1) phát có mặt mầm bệnh cách đặc hiệu; (2) phát loại virus sinh trưởng cách thuận lợi (3) phát mầm bệnh sinh trưởng chậm nuôi cấy Các mầm bệnh nhận diện trình tự bazơ DNA RNA với mẫu dò đặc hiệu, thường từ 14 đến 40 bazơ Chúng tạo nên nhờ endonuclease giới hạn tổng hợp hóa học trực tiếp Các mẫu dò đánh dấu cách kết hợp với marker enzym, đồng vị, phát quang/huỳnh quang Ưu điểm việc sử dụng phương pháp độ đặc hiệu tốc độ tìm kiếm vi sinh vật môi trường nuôi cấy 1/4 Phát tác nhân gây bệnh sinh từ thực phẩm Các mẫu dò phân tử vi sinh vật thực phẩm Ngày nay, kĩ thuật sinh học phân tử sử dụng nhiều phân tích vi sinh vật học thực phẩm Ảnh phóng xạ tự chụp của mẫu dò Listeria monocytogenes gắn phóng xạ dựa vào 100 môi trường Listeria Chỉ có môi trường nuôi cấy Listeria monocytogenes cho trình tự tương ứng liên kết với mẫu dò DNA, làm tối phim ảnh phóng xạ tự chụp, loài Listeria khác không phản ứng với mẫu dò (Theo Prescott-Harley-Klein, 2002) Trong ví dụ này, hệ thống màng kẻ ô kị nước sử dụng Các môi trường Listeria monocytogenes môi trường gắn phóng xạ nhờ chúng liên kết với mẫu dò, loài Listeria khác liên kết Một ví dụ khác việc sử dụng kĩ thuật sinh học phân tử phát E coli.E coli O157:H7 phân lập xác định môi trường chọn lọc, kit phát nhanh (xem hình 12), kỹ thuật nhận diện nhanh dựa mẫu dò, hay mẫu dò huyết đặc hiệu kĩ thuật PCR Các kĩ thuật mở rộng cho phép tìm số tế bào đích quần thể lớn vi sinh vật Ví dụ như, việc sử dụng PCR, có tới 10 tế bào E coli sinh độc tố phát quần thể 105 tế bào phân lập từ mẫu phomat mềm Nhờ vào hệ thống PCR, phát đơn vị hình thành khuẩn lạc Salmonella từ 24 đến 48 giờ, phải đến ngày nuôi cấy khẳng định có mặt Salmonella Để cải thiện độ nhạy làm tăng tốc độ phương pháp này, bước làm giàu thường xuyên sử dụng trước dùng tới PCR 2/4 Phát tác nhân gây bệnh sinh từ thực phẩm Một thử kit nhanh để phát Escheriachia coli O157: H7 sau trình sinh trưởng môi trường làm giàu (Theo Prescott-Harley-Klein, 2002) Hiện nay, PCR sử dụng để phát nhanh nhân tố gây bệnh sinh từ thực phẩm Các nghiên cứu gần cho thấy việc xây dựng nên sản phẩm PCR đặc hiệu có từ 159 đến 1223 cặp bazơ phân tách cách riêng rẽ trình điện di phát Campylobacter jejuni Arcobacter butzleri mẫu vòng tiếng Phương pháp dò tìm mầm bệnh dựa PCR So sánh độ nhạy phương pháp PCR với trình sinh trưởng việc kiểm tra Salmonella agona Hệ thống Probalia™ PCR tìm đơn vị hình thành khuẩn lạc tác nhân gây bệnh (2 CFU) (Theo Prescott-HarleyKlein, 2002) Một tiến việc tìm nhân tố gây bệnh thực phẩm việc sử dụng đoạn DNA gây bệnh tiêu chuẩn hóa, “in dấu nhân tố gây bệnh từ thực phẩm” Trung tâm kiểm soát ngăn ngừa bệnh Mỹ (CDC) thành lập chương trình mới, có tên PulseNet, phương PFGE (pulsed-field gel electrophoresis) sử dụng để kiểm tra mẫu DNA khác biệt loại vi khuẩn gây bệnh Với phương pháp đồng này, thấy mối liên hệ nhân tố gây bệnh, bùng phát bệnh nơi khác giới với nguồn thực phẩm đặc 3/4 Phát tác nhân gây bệnh sinh từ thực phẩm trưng Tài liệu thu thập toàn giới sử dụng FoodNet, mạng lưới giám sát nhạy bén, để theo dõi loại bệnh từ thực phẩm Bằng việc sử dụng phương pháp FoodNet biết tiến trình nguyên nhân lây nhiễm vài ngày vài tuần Ví dụ, bùng phát Shigella vùng khác Bắc Mỹ lan đến tận mùi tây Mexico ô nhiễm nguồn nước tưới tiêu Chương trình dẫn đến thiết lập nhanh chóng mối liên hệ mặt dịch tễ học giảm gần bệnh sinh từ thực phẩm 4/4 .. .Phát tác nhân gây bệnh sinh từ thực phẩm Các mẫu dò phân tử vi sinh vật thực phẩm Ngày nay, kĩ thuật sinh học phân tử sử dụng nhiều phân tích vi sinh vật học thực phẩm Ảnh phóng... tra mẫu DNA khác biệt loại vi khuẩn gây bệnh Với phương pháp đồng này, thấy mối liên hệ nhân tố gây bệnh, bùng phát bệnh nơi khác giới với nguồn thực phẩm đặc 3/4 Phát tác nhân gây bệnh sinh từ. .. trình sinh trưởng môi trường làm giàu (Theo Prescott-Harley-Klein, 2002) Hiện nay, PCR sử dụng để phát nhanh nhân tố gây bệnh sinh từ thực phẩm Các nghiên cứu gần cho thấy việc xây dựng nên sản phẩm