BƯỚC ĐẦU NGHIÊN cứu NUÔI CẤY VI SINH VẢT VÀ LY TRÍCH ENZYME ĐỂ CHUYỂN HÓA LIPID

LV LV LV LV LV LV LV TỐT TỐT TỐT TỐT TỐT TỐT NGHIỆP NGHIỆP NGHIỆP NGHIỆP NGHIỆP NGHIỆP ĐẠI ĐẠI ĐẠI ĐẠI ĐẠI ĐẠI HỌC HỌC HỌC HỌC HỌC HỌC LV TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC TRƯỜNG TRƯỜNG TRƯỜNG TRƯỜNG TRƯỜNG TRƯỜNG TRƯỜNG ĐẠI ĐẠI ĐẠI ĐẠI ĐẠI ĐẠI ĐẠI HỌC HỌC HỌC HỌC HỌC HỌC HỌC CẦN CẦN CẦN CẦN CẦN CẦN CẦN THƠ THƠ THƠ THƠ THƠ THƠ THƠ TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ I.Lipase Phương tiện nghiên cứu MUC LUC 0.05: nồng độ NaOH sử dụng chuẩn độ DANH SÁCH HÌNH ẢNH III.2 Hóa *cấu Chỉ chất ❖♦♦♦ số Nguồn Tiến Kết Iod hành lỉpase từ thực vật kích thích > Mỗi 4: dầu điểm trình chiên lấy tổng vịt ởenzyme, 3đường họp vị trí Trần enzyme Văn Hoài cảm ứng gọi chất cảm ứng Muốn điều Theo nhẹ môi trường Dịch dõi Các giai trích có nuôi Phản Độ sinh thể đoạn ẩm cấy xúc ứng trưởng làm với tác transester giàu ủester phản ởcủa 4°c mật ứng độ hóa diện thuận mẫu vi sinh 12 nghịch vật ngày tiếp để sau theo hình không điều ly thành cách tâm thực dầu ởlipase quan Các 12.000 sản sát đĩa phẩm vòng/phút giai petri độ khác giảm đoạn lượng ủtam Nhiệt Do tạp thể phẩm ký ứng Tỉ thô hòa 13 với dự lệ độ dạng Như Q: II.2.1.3 tránh tan Có trúc nồng trữ 4*chỉ phun Lipoxygenas mẫu rắn cần bất làm số pH bậc độ Sterid: (từ màu việc iod kỳ thiết dầu: biến ba sinh nuôi nhiệt (g ly cho tính dầu chất I2/100 trích vật có cấy độ 1, hỗn phân tổng thể bề enzyme 3.4.22.2 dầu g) họp mặt điều họp hoạt tử 4, giá người rượu ethanokacid tạo protein dầu chỉnh động thành làm thành môi sterol 2, ta Mủ loại thường lại -dầu trường đu ester enzym thấp loại enzyme lb phản sulíuric đủ acid thực Các người bán (NH4) ứng mà béo không mẫu rắn) (30:1, Nhóm Ngoại nhóm mạnh, thủy Rưọu S04 protein Chế ức v/v) phân hydroxyl sterol sinh chế phẩm cấy trình không hữu vật xúc ++ sấy có hấp ích khác vòng enzyme khô tác phải tham không thụ cho có enzyme, Thịt ởserin enzyme, ởbình gia tính nhiệt khả trọng Mỗi vào chứa độ mà 25 III.3.3 IV.4 Lỉpase ưu điểm tồng vsv so với hữu động Ctf yật II.3.3 b Sự Sự halogen chuyển hoá hóa lipid xúc tác •Để K2HP04 0.05% Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ứng dụng ỉipase [17] Chương 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU TÓM LƯỢC II Lipid Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ♦>IV Mấue không dầu oOo bào Chương 3:vsv PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 1Sự ml dd KOH 0.05 N tương ứng với 2.805 mg KOH DANH SÁCH BẢNG BIỂU D: thể tích nước hay độ pha loãng (ml) 1.1 Địa điểm thu mẫu thời gian thí nghiệm .25 Cấy 100 pl vào môi trường lỏng mẫu lắc với vận tốc 200 khiển trình la: dầu sinh dừa Nơi tổng tiếp khu họp xúc phố enzyme với 2, Bến dầu Tre nhiều chất cảm ứng phải ýrất đến hai điểm sau: Sự transester Ngoài hóa nguồn bao gồm: trên, alcoholysis, vsv acidolysis có nhu cầu nước cho hoạt Các động phản sinh enzyme vòng lượng nhiệt bền 80-110°c giác nước, enzyme chuyển tổng độ imidazol 250 trình phân enzyme thủy họp 0°c ml hóa đến ngoại phản enzyme Sau tử phân gồm: thành sinh ứng bào xuất có histidin học 150 lớn, hấp phần xảy mà yếu ml thụ sterol nhiệt khác gần môi vết nhanh chứa gũi độ rõ tiêu trường, enzyme có tế biểu pH hoàn chất bào khả enzyme Khi tối ml kỵ toàn ưu khỏi cholesterol, nước vsv ly nội riêng tổng trích enzyme bào tạo họp 1.5 nhóm thành Sau ml enzyme acid Một chiều hydroxyl dầu dung mật tương thu khác sản môi Acid phản ứng phẩm thích serin mạnh chế béo ứng Các phương hữu họp phẩm thường thủy mẫu Ngay nguyên ích phân enzyme Sử là7) Hiểu dầu 32°c cho Phương phát vào chế triển ban pháp hoạt đầu nuôi động vi sinh cấy vật bề lipase mẫu mặt nuôi đĩa giúp petri cấy chúng ta theo dõi kiểm soát ngày sản phẩm tạo Acid lipase béo không no kết họp với nguyên tố thuộc họ halogen (F, Cl, Br, I) đểpháp So với nguồn khai thác enzyme từ động vật thực vật, nguồn enzyme từ vsv có 10 phút Dịch loại bỏ kết tủa cho vào 1interesteriíication ml đệm phosphat (pH = a: thể tích dd Na s 0.1 N (ml) dùng để chuẩn độ bình thử không 2thác thu • MgS04.7H20 0.03% Chương 1: ĐẶT VẤN ĐÈ -oOo -Ta khai TRƯỜNG nhận enzyme ĐẠI amilaza HỌC CẦN từ mầm THO lúa, papain từ nhựa đu (NH4)2S04, K2HP04, MgS04.7H20, nấm men, CaC03, agar (Prolabo, EC), Việc sử dụng lipase tổng họp chất hữu trở nên ngày quan Papain 3.dụng Khảo sát tạo thành lỉpase vỉ sinh vật đất Lipase sử dụng rộng rãi trình chế biến dầu mỡ, chất tẩy rửa chất 103 :enzyme hệ số cho pmol vòng/phút sau 12,24, 36, 48, 60, 72, 96 1.2 Nguyên liệu .25 Bảng 4: Thể tích Na2s203 0.01N dùng chuẩn lượng Iod thừa +oleic, Muốn lb: dầu thu dừa nhận Cách ởlượng khu enzyme nơi phố tiếp 3, xúc cảm Bến khoảng ứng Tre 30 thỉ -để 50 phải cm cho chất cảm ứng ứng lý, minh sinh hóa họa sau: tế bào, bao gồm: hàm lượng nước sản phẩm độ ẩmvà tương có tử palmitic, Phương nuôi tinh nitơ Nhiệt dạng thể cấy kiểm ♦♦♦ bậc thô > pháp độ ởQuá thể Quá ba soát nhiệt (dạng lipase đóng sắc đa ricinoleic trình trình độ bào lỏng ký imidazol tạo vai phòng kết hay kĩ từ nhiệt thuật dạng có tạo vi quan sinh độ thành rắn), sắc trọng lắc dung vật dụng: ký pH liên với [6] ảnh quan môi kết tốc xử tanào hưởng líđộ hidro tổng tiến 200 phân hành họp vòng/phút đến hủy tinh hoạt chất chế oxy độ chúng enzyme béo nhóm và enzyme dầu khác thu hydroxyl ởmỡ dạng Phản enzyme thô, Do thu ứng thành acid II.3.3.1 béo no Phản ứng thủy phân Qua để đạt ♦♦♦ 3sạch ngày hiệu Bố trí suất quan thí cao nghiệm sát dầu NGHIÊN giảm rõ CƯU Tiến hành chuyển sang giai đoạn làm nhiều ưu điểm quan trọng sau Dịch trích lipase thô bảo quản ở84 4người °để c  [11] Nguồn vi khuẩn u/ml =và (Va — Vc )sử X 103 X 0.05 X DNhờ -oOo -11.1.ra Khái niệm Vđộ c: Thể tích NaOH chuẩn b: thể tích dd Na strò 0tủa N (ml) dùng để chuẩn độ bình thử thật Bước đầu nghiên cứu cấy vi sinh vật từ mẫu đất nhiễm dầu, dầu 2nuôi 2của 0.1 LỜI CẢM TẠ đủ bromelin từ khóm • Dịch nấm men 0.03% trọng Lĩnh vực lipase dùng để xúc tác hóa hữu có nguồn gốc từ chất chống nấm Cycloheximide, Sigma I ❖Giói thiệu iỉpase Kiểm tra chất lượng nguyên liệu KHOA CÔNG NGHỆ 1.2 Ưu nhược điểm phản ứng thủy phân với lỉpase [6] R-(CH2)„ CH = CH(CH2) n-COOH + I2 Chúng em xin chân thành gửi lời cảm tạ lòng biết ơn sâu sắc đến: khử dầu mỡ, chế biến thực phẩm, tổng họp chất hóa học dược phẩm, sản xuất Các mẫu đối chứng bao gồm: môi trường môi trường có bổ sung lọai dầu 3.62 : tổng thể tích môi trường R-(CH2)„ pH pH(CH2) vào môi 2: dầu trường olive Cách Ví nơi dụ tiếp xúc muốn dầu nhận m lipase cho lipid (chất béo), muốn nhận Alcoholysis 1.3 đối Dụng không cụ khí thiết bị .27 II.2.2 Phương xảy việc dạng xem Nước tính Dựa II.3.3.2 xác pháp nhanh ❖ chất tinh o có định Tiến Chuẩn gây thể khiết Lipid Phản chiến loài hành nhân hòa sở biến bị tăng hom phức ứng sinh tan lược tính nhiệt phản biến mỏng có Tùy vật tạp: chọn thể theo đổi thú độ, ứng tương lọc dầu vị, dung trao mục quan nhiên tác đổi đích môi tổng mỡ ion sản hữu nhiệt sử động, họp phẩm dụng với độ thực liên protein tăng mà ethanol, kết vật người loại lên nhị tan enzyme làm có ta dương isopropanol ưu sử biến dụng nước mà tính ta enzyme nhanh ứng tác acetone cần dụng nhân chất xúc dạng cho tác Ý nghĩa phản ứng thủy phân Mầu Thể tích Na2S2C>3 0.01N (ml) giàu mật độ vi sinh giai đoạn • CaC030.05% Chất • vsv xúc có tác chu sinh kỳ học sinh enzyme trưởng phát triển họp chất ngắn hữu Do có đó, hoạt cường tính độ sinh học phản cao ứng ♦> Thử hoạt tính chế phẩm enzyme thô 3.1 Phương pháp nuôi cấyvật (trong môi trường lỏng) 14 a-Amylase 3.2.11 Baciỉỉus sp.Thơ ++ Tinhcóbột Hình 1: Sự sinh trưởng vi sinh đất môi trường lỏng không qua sử dụng vàdầu chưa sử dụng ởchìm hai tỉnh cần vàNgoại Bến Trecó đểhoặc ly trích m: khối lượng (g) trường vsv Những enzyme hoạt động ởyật bề mặt ưa nước -môi kỵ nước dung môi hữu MỤC LỤC Lipid hay chất béo nhỏm họp chất hữu tự chứng nhiên biến tếâm bào động Tween 80, NaOH 0.05 N, KOH 0.05 N,cơ dung dịch Iphổ Nchứng alcol 95°, 0.1 n-COOH Nguồn lỉpase từ vi sinh (VSV) 1.3 Dụng cụ trang thiết bị a.III.3 Ưu điểm bào + 1.1 Lỉpase Mầu Thí nghiệm Đối Đối 0O0 tương ứng giấy, Thầy sản Lê xuất Thanh mỹ Phước phẩm (Rubin hướng & dẫn, Dennis, truyền 1997a, thụ kỉnh b; Kazkauskas nghiệm & Bomscheuer, tri thức II.3 Khảo sát chuyển hóa lỉpid với xúc tác lipase 15 P-Amylase 3.2.1.2 Bacillus sp Ngoại + Tinh bột protease > Cho phải đất cho vào protein, mâm trộn (để đất khô tự nhiên bóng tối đất Nước o sản phẩm bao gồm phần nước liên kết ° phần nước không liên kết khoa [6] trao công Sự enzyme, thô • đổi hòa nghiệp, Trong hay Phương Nước ion, tan mục Phương tinh o phân Chấm người cất Esterhóa đích tương khiết pháp có 1000 tử pháp dung ta ứng khả lipid tác enzyme áp ml kiểm dụng dịch dựa kị dụng phức nước tra cụ lên phân kết phương thể tạp giảm tủa hủy tác mỏng: điều mạnh pháp mỡ động acid sắc Chẳng cần dầu kết béo ký nhiệt thiết tủa trao hạn rượu độ, đổi nước pH, ion khảo thải làm dung để có làm sát biến môi khử nhiệt tính thành nước độ enzyme chọn phần trình chứa lọc khác xử chất Các trình lí Phản ứng thủy phân phản ứng phổ biến quan trọng bảo quản Với Giai chất đoan làsố 2Phương protein, enzyme xúc tác ứng đến tạo ravi 100% sản sinh hóa xảy rấtchất mạnh, làhóa độ sinh tổng họp hoạt enzyme I.Nguyên Hóa 28 ❖ tắc Lần 1nghĩa Lẩn enzyme Lẩn cácphẩm, Mục đích: Kiểm tra thuộc tính thủy phân phản enzyme sau khicùng ly Bảng 1:thô Một nguồn enzym enzym quan trọng 16 lipase nhằm thực chuyển nhận thấy hệ sinh vật I trích Itính dầu 43 3.2 pháp nuôi cấy bềlipid, mặt (trên môi trường agar) 100: tính 100 g chất béo không bị phản ứng phản ứng hóa học Việc sử dụng lipase tổng họp • Chỉ số acid vật thực vật Các lipid có thảnh phần hóa học cấu tạo bào khác chứng có DANH SÁCH BẢNG Rj c o -R' X + OHR’2 ^ Rj c o R' + OHR'i - Do lipase có tính đặc hiệu cao nên không tạo thành sản phẩm phụ, dịch thủy Na s 0.1 N, HC10.1 N, acid oxalic, ethanol, diethyl ete, ete dầu hỏa, H S0 đậm đặc, 2 I Phương tiện nghiên cứu CÓ thể dùng phản ứng để xác định số nối đôi phân tử acid béo Phản ứng Lipase (triacylglycerol acylhydrolase) nhỏm enzyme xúc tác phản ứng thủy phân Dầu qua sử CT-ĐH(IX-) CT-CA(l) (-) MT agar (-) ❖ Sử dụng máy đo mật độ quang: 1998) •xuất Bố trí thí nghiệm học, tạo điều kiện tốt giúp em hòan thành luận văn tốt nghiệp ướt) +xúc Tác động cảm ứng đạt hiệu cao ởcác liều lượng định (nước tự do), vsv sử dụng phần nước tự có sản phẩm Enzyme tác loại sơ không transester nhân acid protein [18] Cách dẫn Bản trao > phosphoric, Cơ tạp Thí điện chấm: đổi hóa chất tác chế nghiêm ion Phương phản tác Dùng sau: nói bazơ, dầu enzyme dụng ứng cách 1phản ống pháp cọ nitơ, ester với khác mao enzyme đường protein dialkyl hóa quản nước thích chấm hình Một có hydrolase carbonates hoạt số họp thành dung lipid tính ứng với quanh dịch làm xúc dụng phức enzyme lên nguồn tác tạp phổ sinh protein chịu gồm: alkyl biến mỏng học acid glycerophospholipid ởvà Các cách khoảng dung 2bền công mép sinh nhiệt môi nhiệt nghiệp bên vật hữu độ Ở tổng 40 41 16 Asparaginas 3.5.1.1 E.coli Nội bào Sức khỏe sản thực phẩm Do ứng thủy phân mà chất lượng sản phẩm thực phẩm bị Trong ba nguồn sinh vật lithủy trích enzyme vsv sử dụng nhiều đồng thời không tạo sản phẩm phụ, tốn lượng thân thiện với môi ■ Tủ cấy vô trùng (Laminar flow, Việt Nam) manh Cưởng độ phản ứng enzyme từ vsv vượt xa nhiều so với cường _► vsv giống Một đơn vị hoạt động xác định số enzyme cần thiết để giải phóng 1độ Ca Chỉ số acid (mg KOH/g) Cách thử hoạt tính enzyme thô xác định theo phương pháp (+) dầu (-) dầu (+) dầu (-) dầu (+) dầu (-) dầu II Phương pháp nghiên cứu 28 Bảng 2: Kết dùng KOH để trung hòa acid béo tự dầu mẫu đất khảo sát có khả phân loại dầu Tuy nhiên, I Khảo sát hoạt tính enzyme ❖ Nguyên tắc ♦♦♦ Bố trí thí nghiệm Hình 2: Sự sinh trưởng vsv đất chưa nhiễm dầu cồn Ấu, cần Tho nuôi Chỉ số xà phòng hóa: họp chất khảo sát Berglund & Hutt (2000) dụng CT-ĐH(1)(+) CT-CA(1)(+)(1) MT agar (+) (1) đặc tính chung không tan nước, tan dung môi hữu (ete, e DANH SÁCH HÌNH phân thu có độ khiết cao acid acetic, CaCl2 dễ dàng hay khó xảy tuỳ thuộc vào vịcó trí nối đôi nhóm carboxyl, nối đôi triacylglycerols thành diacylglycerols, monoacylglycerols, acid béo glycerol ởQua bề •Nồi Công sản xuất enzyme từ vsv tiến hành động hóa giới hóa [1] Acidolysis *của Nguyên tắc > Chia đất làm 4ướt phần nhau, 2và phần để thí nghiệm (minh họa phần nước thực trao đổi qua lại với nước có không khí Tâm (phosphatid), điều đến họp cải có kiện khoảng Nhựa Cho 80°c thể Động biến nhân nhiệt làm 1Glucose trao 2nghệ Thì sphingophospholipid, chất ml mm, dịch thấy đổi lượng thực cao enzyme khoảng chuyển ion mẫu vật dầu nhiệt pH Dẩn cách vsv mỡ thấp, độ vi tương lipid vào xuất động, sinh 60°c glycolipid enzyme lân ester vật tác thực cận chấm ống làtrực đến vật tạo nghiệm bị 4giảng tiếp mm đáp cellulose biến thành giới với ứng protein Các có tính ester sinh chứa nhu vết Sau Quá vật chấm cầu 2.5 carboxymethyl-cellulose, cao trình sản ml gồm: hai có hổn phẩm kết khả phương nguyên Nếu tủa họp tinh dầu nhiệt pháp sạch, tửtổng dung :càng tích độ nước ly ítM, họp lớn giảm đi, nhiên phản ứng thủy phân làm tăng phẩm chất cho thành phẩm Hiện nay, enzyme trích từ vsv ứng dụng nhiều đời trường Ngày nay, gần 4000 enzyme phát nghiên cứu khoảng 17 Cô Nguyễn Thị Phi Oanh 5.3.1.1 tận Bacillus tình sp dạy Nội cung bào cấp ++ kiến Sừoíruco thức ban ■ khử trùng nhiệt (t = 120°C; phòa =ịlấy 1dầu bar) HVE -tự 50 phản a: ứng Thể tích (ml) enzyme dd KOH từ sử dụng nguồn sinh vật khác dụ, 24 giờ, vsv đầu pmole béo tự tạo ml 1Ví phút (Peled, N & Krenz Okumura eThể tacid avật, lđộ ,trong 1980 (1) 8.2 9.0 7.0 9.1 8.5 8.8 Trong năm gần đây, lipase sử dụng nhiều công nghiệp như: bột II Kiểm tra chất lượng nguyên liệu 28 IV Lỉpase công nghiệp chất tẩy rửa CT-ĐHC(2)(-) CT-CA (2) (-) MT agar (+) (2) hệ vi sinh vật mẫu đất nhiễm có khả thủy phân dầu cao Bảng 3: tích HC10.1 M để trung KOH 0.1 N thừa 41 > Muc đích Do môi trường nuôi cấy có bổ sung dầu, vsv có khả phân hủy ❖ Nguyên tắc: môi trường có loại dầu sử dụng .44 cloroíorm, bezen, toluen ) Lipid thành phần cấu tạo quan trọng Dấu chưa sử dụng (NO) Bảng 2: Thể tích KOH dùng trung hòa acid béo tự có dầu - III.3.4 Phản ứng thủy phân enzyme tiến hành nhiệt độ thấp pH cao, nghĩa Cơ chế hoạt động enzyme vsv TÓM LƯỢC p ọ 1.1 Địa điểm thòi gian Dấu chưa sử dụng (NO) gần nhóm carboxyl phản ứng khó xảy mặt phân cách pha nước lipid Lipase xúc tác phản ứng thủy phân Chất thị màu: Heliantin, phenolphtalein Trong thời gian theo dõi sinh trưởng vsv điều kiện nghiệm CT-ĐHC(2)(+ )Trung CT-CA(2)(+) (2) MT agar (+) (4) hình vẽ) Độ ẩm không khí lệtrong phần trăm nước không khí ởthí nhiệt độ hóa điện dietylamino-etyl-cellulose tâm vết (1:1 môi enzyme chất dương chấm (v/v)), hữu 70°c phục phương chuẩn: 1% bị vụ sản liên ảnh Tween pháp cho phẩm kết dầu nguồn bị nhiệt lọc 80 tương ester thủy (làm ta người (DEAE cung độ, có tạo phân ứng, chất liên thể thành cấp Tương kết loại nhũ -hữu thời enzyme giảm ion cellulose) bỏ hóa) tự điểm mạnh pH Tuy thành to 0.02 nhiên chất (thời Hoặc dung ml phần xúc CaCl2 diểm dịch không Sephadex, tác chúng ban 0.02 khác, phải đầu M có enzym dẫn Thí điểm enzyme nghiệm xuất khác phản mà biệt ảnh ứng) tanhất phản ứng thủy phân, tính chất cảm quan mà tính chất hóa học sống sản xuất 200 loại sử dụng thị trường Phần lớn enzyme công nghiệp có nguồn Nhân giống ■ Máy ly tâm (Centriíuge model, Quốc) chuyển b: Khối hóa lượng thức dầu ăn gấp ứng 30 -tỉ 40 lần so với trọng lượng tếđệm bào chúng Trong somerase 1981) đề tài Hoạt tạo độ điều kiện enzyme giúp đỡ lượng em kiềm cần trình thực để trung đề hòa tài acid hình Cách thực hiện: giặt, công nghiệp giấy, tổng họp chất Trong tương lai, triển vọng ứng dụng (4) 8.3 9.2 7.8 9.3 7.1 9.0 hệ vi sinh vật mẫu đất đối chứng Vi sinh vật mẫu 11.2 II N -O-R' Xác định hoạt tính enzyme phương pháp thủy phân chất dầu khảo dầu gia tăng mật số đồng tạo acid tựthiết Dựa vào đặc điểm ta sửsátgốc dụng Bảng 4: Ri Thể -c tích Na2s203 0.0 IN dùng để chuẩn độ lượng Iod thừa 42 Cho chất cần thử kết họp với lượng KOH thừa để xà phòng hóa tấtđất chất II.3 Tính chất vật lý hóa học lỉpỉd [6] Hình 3: Sự sinh trưởng vsv ởthời mẫu đất Ben Tre nuôi môi trường dầu II IIlipid màng tế bào bào quan tế bào Ngoài ra, nguồn cung cấp Nước cất, giấy lọc, giấy sắc ký mỏng (Merck) Do CT-ĐH khả (1) (+) CT-TVH (1) chúng (4) thủy (-) phân CT-CA BTchất KP2 béo, (4) (-) (la) lipase (+) ứng dụng chất điều kiện tạo thành tạp chất Do vừa giảm yêu cầu độ khiết Để xác định số nối đôi người ta vào số Iod liên kết ester phân tử mà không cắt đứt ba liên kết ester lúc Một vài Mầu khảo sát Mầu đối chứng Mầu khảo sát Mấu đối chứng nêu trên, môi trường nuôi cấy trở nên đục nghĩa vsv bắt đầu sinh sản Do > Cho đất vào bọc kiếng ghi ký hiệu viết dầu định với lượng nước bảo hòa không khí ởoleic nhiệt độ hưởng Enzyme polysaccaride mong Riêng thực Nước lớn Các muốn đến đối làm có protein giống với chiều vai dextran tăng dầu trò phản phổ (2) biến cho ứng, khuyết khác có thêm electron thời kết vết gian tủa xác chấm khoảng vốn định môi chuẩn trường 40% tồn làhơn nhiệt acid phản trước động rượu, ứng học đó, protein phản cách đóng ứng với tạo vai bề Ví thành mặt trò dụở sản phẩm bị biến đổi Địa 18 điểm: Phòng Penecillin thí nghiệm 3.5.1.11 Công Nghệ Sinh Bacillus Học, sp môn Nội Sinh bào Học, khoa Dược vsv có đặc điểm khác thể động vật thực vật Điểm khác lớn khoa từ vi sinh vật Vào năm 1960, tổng enzyme bán vài triệu đô la hàng ■ Máy ly tâm lạnh (Hettich zentaifuge D 78532 Tuttlingen, Đức) hệ enzyme Xác đinh tiêu hóa số iod: lợn ngày chuyển hóa 3acid -Khoa 4thô, kg ăn thành 0.25 g72 chất dầu tương ứng phản ứng với 1lông gcó enzyme 1thức ml đệm thuộc tính vốn có lipase phát huy xa nhờ vào thành tựu công nghệ Chúng em xin chân thành cám ơn thầy, cô ởsố môn Hóa môn Sinh, Chương (lb) 1: ĐẶT VẤN 9.1 ĐỀ 9.0 7.9 9.0 9.1 9.2 có mật số cao ởnhiều nuôi cấy môi trường có bổ sung dầu hoạt tính lipase ởgiờ thời điểm tương ứng chất thị màu để định tính diện acid uôi cấy vi sinh vật đất 30 béo Phần KOH thừa định lượng dung dịch chuẩn, với Bảng 5: Tổng hợp số acid, số xà phòng hóa Iod loại dầu 42 Gen tổng họp CT-ĐHC (2) ( +) (2) BTKP2 (2) (+) Interesterificatìon lượng, nguồn cung cấp vitamin A, D, E, K F cho thể [6] tưcmg ứng 45 phụ gia công nghiệp bột giặt bột giặt hộ gia đình Các lipase chọn CT-TVH (4) (+) (4) CT-CA(4)(+) 4) nguyên liệu, vừa có hiệu xuất cao II Phương pháp nghiên cứu Thể tích KOH (ml) Chỉ sổ Iod: số gam Iod cần thiết để tác dụng lên 100 gam chất béo Do số II.3.1 lipase Tính tính chất đặc vật hiệu, lý chúng xúc tác phản ứng ởquang tất vị trí Sản xuất chế phẩm ► CT-ĐH cách đo (1) mật (+) độ (1) quang CT-ĐH môi (1) trường (-) (1) nuôi cấy BT-KP2 (la) máy (+) đo BT-KP2 phổ bước (la) (-) sóng 600 Sản xuất _ ứng dụng cân liên kỵ Phương vết quan nước kết chấm Hiện tương trọng pháp > ởThí lipase ứng phản kết nghiêm với tủa thời ứng cấu có Bảng phân tan trúc gian 2chất với đoạn 1: không phương ởxúc tương Một ởCaCl2 những tác gian số ứng pháp nhóm vị nguồn điều trí chuẩn protein, hydrolase kiện nhiều enzyme sau: gần trình và thật Nồng hòa với enzyme khảo thay liên tan độ có tốt kết sát đổi rượu hiệu quan chất bị hoạt nồng thủy từ trọng rắn 80 tính độ phân Sự -phòng tác 90% việc nhân enzyme diện làm cần Phản ứng thủy phân thường mở đầu cho loạt phản ứng khác tiếp diễn Các Học, thể vsv trường chúng Đại Học thuộc cần Thơ thể đơn bào Chính chúng tạo từ tếlà bào nên đến thị trường phát triển ngoạn mục hiểu biết sản xuất > ■ sấy (Memmer, Đức) amidase Hệ enzyme vsv vô phong phú Cùng lúc ta khai thác nhiều ❖Tủ Nguyên tắc: Gen điều khiển Do môi trường nuôi cấy bố sung lượng dầu xác định Trong phosphat (pH =chưa 7) 0.01 ml 0.02 M Hỗn hợp lắc ởcấu nhiệt độ với vận sinh học công nghệ hóa học 11.2.năm, Phân loại (2) 8.1 8.8 8.5 9.0 6.7 9.1 Khoa Học, trường Đại Học cần Thơ tận tình giúp đỡ chúng em phương tiện nghiên Khi bổ sung dầu vào môi trường nuôi cấy có vimột khuẩn phân hủy dầu, xung quanh > Tiến hành thí nghiệm phenolphthalein làm chất thị Trong mẫu khảo sát, nhìn chung, lipase vi sinh vật mẫu 11.3 Khảo sát chuyển hóa lipid với xúc tác lipase .38 Bảng 6: Lượng M lipase sinh o mẫu sau 24 48 51 o o CT-3/2 (3) (+) (3) BTKP3 (lb) (+) Phần đánh lọc đặc biệt theo yêu cầu: (1) chất đặc biệt thấp, có khả thủy phân chất béo Hình 4: Sự sinh trưởng vsv mẫu đất chưa nhiễm dầu 46 ~T - Khi thủy phân enzyme cho phép điều chỉnh thành phần hóa học BT-KP2(la) (+) CT-CA (la) (+) MT agar (-) enzyme Chương 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU Lần Lần Lần vsv cố định lên men Iod lớn số nối đôi nhiều Điểm triacylglycerols nóng chảy Phần lớn lipases có tính đặc hiệu tính chọn lọc, enzyme xúc ❖ Nhiệt độ nm cho phép xác định thời điểm mà môi trường nuôi cấy có mật số vsv cao CT-ĐHC(2) ( +) (2) CT-ĐHC (2)(-) (2) BT-KP2 (2) (+) BT-KP2 (2) (-) Rj -ứng c -nếu o -R !của + R -bền c -nhiệt o -Bacillus R' -hoạt -► Rj -thúc cnuôi -1đôi ochất -R + R -dịch c -rachọn o -R'j lượng Do thiết nước cấu enzyme cho nước phản Tương trúc quan trình Do tự bậc cân thủy trọng phương ba kết phân thí việc tủa cho nghiệm pháp làm phân thay độ tinh tử đổi Nồng Tuy protein-enzyme theo nhiên độ enzyme, protein sau thật thời phương cao tính mà gian có nhỏm pháp hiệu enzyme, mg/ml kết cấy, hydroxyl ly làm tâm tatế dung hữu biết tăng 10 ml dụng lựa serin tính đệm dẻo mẫu và phản ứng xảy phản ứng thủy phân kết Dầu chưa sử chứng có tính chất chuyên 2nghiệm biệt Ví 2dụ, trao đổi 2tủa bào 2tiến vsv môi chất 19 xúc tác Protontin sinh học trình 3.4.21.1 lên men, phương sp pháp Ngoại ly trích ++ cải Chất tẩy nhu Tủ ủkhác (Memmer, Đức) Ạlipase loại enzyme khác thu số enzyme chuyên biệt LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Trong điều kiện thí xác định nối -cấy CH =là CHxảy phản -■ Thời gian thực hiện: 15/08/08 -enzyme 31/10/08 tốc 200 vòng/phút 30 phút Sau đó, dùng NaOH 0.05 M định lượng lượng acid béo trinh theo dõi, lượng dầu giảm nghĩa vi sinh vật tổng họp enzyme phân hủy dầu cứu kiến thức môi trường trở nên thuộc tính acid Khi cho vào môi trường nuôi chất thị theo pH, Lipase có nguồn gốc từ động vật, thực vật vi sinh vật, nhiên phần lớn ■ Thí nghiệm Enzyme E2 ❖ Tiến hành BT-KP2(la) (-) CT-CA (la) (-) MT agar (+) (la) đất nhiễm dầu tổng hợp có hoạt tính cao sau 24 nuôi cấy Lipase vi Enzyme Nguồn Mức 11.4 Kết tủa lipase thô .39 CT-TVH (4) (+) (4) BTKP3 (2) (+) Bảng 7:ứng Hoạt độ lipase vsv tạo (U/ ml) khi0.3 nuôi cấy môi trường có dầu II.tác 1của Kiểm tra chất lượng nguyên dấu lấy Dựa vào thành phần cấu tạo, 4Mã chia lipid thành hai nhóm bào [6] rửa họp chất khác nhau; (2) có khả chịu đựng điều kiện khắc nghiệt sản phẩm Hình 5: sinh trưởng vsv ởliệu mẫu đất đãacid nhiễm dầu qua sử dụng môi trường -+Rf (1) 0.5 0.3 số ứng dụng Nội bào, c Sự thuỷ phân: phản Điểm nóng cách chảy bám phụ vào thuộc vào vị trí số đặc cmặt biệt béo, phân acid tử [7] béo có chuỗi ccó dài điểm Khả hấp thụ hay thoát nước sản phẩm có liên quan đến nhiệt *sinh Tiến hành I Giới thiệu lipase CT-3/2 (3) (+) (3) CT-3/2 (3) (-) (3) BT-KP3 (lb) (+) BT-KP3 (lb) (-) Vài vòng thấp hoạt phù phương ester imidazol 25 Từ họp tính 50 phút, kết quan với pháp mM tốc enzyme trọng riêng, Dung chấm độ histidin qui 1500 mô dịch kết sắc Lượng glycerides gần vòng/phút sản họp ký xuất dung với nước mỏng, nhau, lớn Khi môi có Mẩu có hữu mặt tạo chứng sau nhỏ Phương ta nhóm ly tính môi tâm hệ dầu giữ thống hydroxyl pháp gồm: trường mỡ ấm gồm kết động, phản hỗn giá tủa thực trị serin họp gồm ứng phương phải vật tương 4(2) nguyên pháp có giữ loại: ứng nối kết sử tử với giới mặt học, phản ứng thủy phân thường đặc trưng cho giai đoạn phân giải, dụng trường 20 xung Pollulanase quanh trao 3.2.1.41 đổi trực tiếp Klobaỉolla Do vsv thường Ngoại có khả thích Tinh ứng bột nhanh cầu sử dụng enzyme ngày cao Hơn nữa, đặc tính xúc tác enzyme không giống nhau, ■ Micropipette 20,100,200, 1000, 5000 pl BT-KP3 (lb) (+) CT-CA (2) (+) MT agar (+) Việc cải tạo giống vsv, để tạo chủng có khả sinh tổng họp Các phản ứng tạo thành họp chất trung gian acyl-enzyme tác kích ứng cộng với halogen phản ứng tạo ra, với chất thị phenolphtalein [9] sinh acid tự môi trường 1.2 Nguyên liệu * Từ kết định lượng chất lượng nguyên liệu số tương ứng tổng phát thủy phân lipid đổi màu [16] Ví dụ, với vi lipase thương mại có nguồn gốc từ vi sinh vật (R.Sharma et aỉ, 2001) Các vi sinh vật Hoạt tính lipase xác định theo phương pháp Salleh Hỗn họp phản ứng bao Bình tam giác 1: 0.3 g dầu tưong ứng + ml dd KOH 0.1 N alcol Chân thành cám ơn thầy Chơn, anh chị môn Sinh Hóa, khoa Nông Nghiệp, sinh vật nuôi môi trường có bổ sung dầu tổng họp diện đ CT-CA (1) (+)(1) CT-CA (la) (+) ị Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 41 bào II.2.1 Lipid đơn giản: ester rượu enzyme với acid béo tương đối trình giặt (pH 1011, 30 60°C); (3) khả chống lại chất hoạt không dầu sau 24 48 53 Lipase thủy phân điều kiện nồng độ chất cao giảm CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ HÓA HỌC có không bổ sung dầu sử dụng sau 24 47 BT-KP3 (lb) (-) CT-CA (2) (-) MT agar (+) (lb) enzyme công ngoại bào Ester thuỷ phân tạo thành rượu glycerol acid béo Tác nhân thủy phân làviệc (4) 0.8 0.6 0.6 chảy Phản cao ứng thủy ngược phân lại với Những xúc tác acid lipase béo có có cthể lẻgiờ làm có điểm dịch nóng chuyển chảy phản thấp ứng thủy acid phân béo ❖ nóng Muc đích: độ môi trường, phần lớn vsv có khoảng nhiệt độ thích họp 15 -hydroxyl 30°c [4] Cũng tương tựđất phương pháp chuẩn độ, đo mật độ quang vsv môi 1.1 Lipase CT-TVH (4) (+) (4) CT-TVH (4) (-) (4) BT-KP3 (2) (+) BT-KP3 (2) (-) dụng nitơ tiếp 0°c tủa Phần hạn bậc mẫu I: tiêu dung ba hài dầu chuẩn công hòa dung trình dịch nhân nghiệp thêm sau dịch thời imidazol ly muối, dung thực tâm điểm phẩm môi kết chấm tạo hữu tủa thành mẫu liên theo dung ngành kết công môi hydro công thức: hữu nghiệp cơ, oxy kết khác tủa với nhóm Enzymes, thay đặc đổi pH, biệt thu giai đoạn kết trình sinh học ❖ Ký hiệu nhiễm dầu vị trí với thay đổi môi trường sống số enzyme có mặt thị trường tăng gấp nhiều lần [17] ô ■ Tim hút loại enzyme theo ý muốn thực thời gian ngắn Trong nhân Sự khác lớn phản ứng acidolysis interesteriíĩcation phản ứng Chỉ số iod xác định dựa khả iod kết họp với acid béo Nuôi Nuôi cấy chìm ❖ Tiến hành thí nghiệm Cơ chất y Sản phẩm họp sau: •nơichúng khuẩn Bacto lipase dùng spirit blue agar để0.1 nhận biết có trường màu tím nhạt Spirit blue agar tổng họp lipase diện nước thải công nghiệp, đất ởkiện sản xuất dầu gồm 2.5 ml nhũ dầu nước (1:1, v/v), 1% Tween 80, 0.02 ml CaCỈ2 0.02 M lml Bình tam giác 2: 0.3 g nước + ml dd KOH N alcol tế bào (lipase nội bào), phần tiết môi nuôi cấy tham trường Đại Học cần Thơ nhiệt tình giúp đỡ tạo điều cho em hoàn thành BT-KP3 (2) (+) CT-CA (115) (+) CT-CA (2) (+) (2) CT-CA (lb) (+) I Kiểm tra chất lượng nguyên liệu 41 Lipid (dầu) n.2.1.1 Glycerìd: Là ester rượu glycerol acid béo, mỡ dự trữ phổ biến động bề mặt có hại enzyme, chất có thành phần quan trọng công thức chi phí 1.4.acid, Phương xác định khả xúc tác2.0 enzyme Bảng 8: Mật sốnay vsv theo thời gian (OD 600 nm) 55 nghiệp Hình 6: Sự sinh trưởng vsv đất cồn Ấu, cần Tho môi trường có không bổ kiềm, nước hay enzyme có số ctạo nhỏ kết glycerol 1pháp ester đơn vị tổng Ngoài họp độ nóng glycerol chảy ester phụ Phản thuộc ứng vào số minh nối đôi họa Hiện người ta ly trích tinh lipase từ ba nguồn bản: (lb) 2.0 2.0 Đánh giá chất lượng nguyên liệu: dầu chưa sử dụng chưa tinh chế, dầu trường nuôi cấy ởsơ khoảng thời gian khác Phần lipase, Khi kết ❖liên tính tủa II: Quá tái kết có chất sử trình nhiều tủa dung dụng tế nhân kết mục bào môi xúc tủa đích có nước tác thể nghiền sử polymer enzyme, cách tương dụng thay tác sản sóng đỗi việc phẩm pH siêu với xử liên âm líhóa ester kết chế tạo nhị biến dương thành dầu giảm mỡ động, đến chất 2-3 thực [6] lần vật Trong sản xuất thực phẩm, phản ứng thủy phân có vai trò quan trọng Để giảm CT-CA (1) (+)(1) CT-CA (1) (-) (1) CT-CA (la) (+) CT-CA (la) (-) Trên giới, khoảng 60% số enzyme công nghiệp sản xuất ởhiệu Châu Âu ■ Máy 1.2 đo pH (Thermo Ưu nhược election điểm Corporation, phản Mỹ) ứng thủy phân với lipase cải giống động vật thực vật đòi hỏi thời gian dài thủy phân phải thay đổi vị trí nhân đầu tiên, sau tác kích vào acyl-enzyme tạo thành Địa điểm thu mẫu Dầu Ký mẫu nối đôi Cho chất béo cần phân tích tác dụng với lượng iod thừa tối để phản Pha dung dịch NaOH 0.05 N chuẩn dựa vào acid oxalic 0.1 N III.3.2 Quá trình trao đỗi chất vsv sản Bảng 5: Tổng hợp số acid, số xà phòng số Iod loại dầu chuyển III.3.1 sang xanh đậm Điều quanh kiện vi sinh khuẩn trưởng phát triển vsv ăn, đất nhiễm dầu (Sztajer et al., 1998) Trong môi trường đất, vi sinh vật có khả dịch trích enzyme Phản ứng thực 30 phút nhiệt độ phòng lắc vận Tiến hành đun cách thủy bình 30 phút Khi dung dịch suốt, để nguội, gia vào trình thủy phân lipid (lipase ngoại bào) Hàm lượng lipase thô BT-KP3 (2) (-) CT-CA (lb) (-) luận văn CT-CA (3) (+) (3) CT-CA (2) (+) Thí nghiệm 3enzyme loại dầu động vật vật bột giặt R f = -enzyme Nhược điểm Người tathực xác định khả xúc tác thông qua việc xác định hoạt độ II Sự diện vinăng sinh vật thủy phân dầu 43 Khảo sát enzyme vsv tạo tham gia trình phân hủy lỉpỉd Bảng 9: Hoạt độ phản ứng thủy phân sau 30đất phút 56 *b.sau: Thủy phân nước cần nhiệt độ áp suất cao ĐỂ phân [8] tử acid béo, acid béo chứa nhiều nối đôi điểm nóng chảy thấp chưa sử dụng tinh chế, dầu qua sử dụng sung dầu sử dụng sau 24 48 (2) 0.4 0.2 0.3 Nguồn enzyme Chếphấm Những enzyme Có ❖TẢI: Cho thuận Kết hai tái Một 1tủa cách lợi sử ml số dụng dung gần kết đặc dung đến tủa điểm dịch lần dịch sau thứ ly nghiên phản muối thay 2, tâm đổi ứng cứu pH, tiếp thực lml enzyme kết tục kết phẩm, giảm tủa tủa ởxúc điểm quan tế(+) tác enzyme bào đẳng trọng được điện nghiền tái làcứu kết sử dụng tủa tương acid thuộc tiếp béo ứng bớt tổn thất phẩm chất thực phẩm, người ta phải tìm biện pháp kỹ thuật tương 75% tổng enzyme công nghiệp (gồm lipase) có hoạt tính thủy phân [17] CT-CA (2) (+) (2) CT-CA (2) (-) (2) CT-CA (lb) CT-CA (lb) (-) ■ Máy nghiền tế bào sóng siêu âm (Branson Soniíier 150, Đức) Sơ đồl: Quá trình điều khiển sinh tổng hợp enzyme cảm ứng fdo Khi sinh vật có cường độ sinh sản mạnh, thời gian ngắn ta thu phần acyl ester [13] 1.3 Phương pháp tách làm lipase nghiên ứng cộng xảy hoàn toàn Phần iod thừa định phân dd Na2s203 0.1 N chuẩn Nhiễm Không Do Trong môi trường trình nuôi trao cấy đổi chất bổ với sung môi dầu trường Vì vậy, bên trước ngoài, hết ta vsv cần biểu chuẩn độ dầu trình có xuất III.l Nguồn lỉpase từ động vật Lipase Nguồn enzyme b ❖ Tiến hành 3.1.1 Điều kiện sinh trưởng tổng họp lipase phổ biến (W.H Ko, I.T.Wang &anh, P.JKhi Ann, 2005), làứng nguồn nguyên tốc 200 vòng/phút Dùng 729, ml ethanokacetone (1:1, v/v) để dừng phản Lượng acidviệc 4tại thêm vào bình 2của ml nước 2(+) giọt phenolphthalein, dung dịch sẽđộ có màu hồng, sau ngoại bào thuphân làcác 20, 24 16 mg/ml tương ứng với hoạt 56.7, 94,5, BT-KP2 (2) BT-MC (1A) (+) Nguồn động vật CT-CA (4) (+) (4) BT-MC (la) (+) Chúng em xin cảm ơn cô Thoa chị học viên cao học làm Dầu olive mua siêu thị, kí hiệu: (2) Glycerol: triol không màu, vị ngọt, nhờn đốt glycerol hay lipid có chứa Esteriíicatỉon -* IV Thời gian thủy lipase dài so với acid chúng Enzyme định lượng trực tiếp mà phải xác định gián tiếp thông tử thirr vât -► , ^ , II Sự sinh trưởng vi sinh đất môi trường lỏng có Bảng 10: Thể tích NaOH 0,05 M dùng để chuẩn độ mẫu nuôi cấy với loại dầu Thủy phân kiềm: NaOH hay Đô sôi Xác đinh số acid Lỉpase công nghiệp thực phẩm Hình 7: Sự sinh trưởng vsv ởKOH mẫu đất nhiễm dầu chưa sử dụng môi không tính với Dung acid a bão nồng Thứ môi Tuy mẫu hòa bậc độ nhiên, vào muối nguy đóng phản kết thích ống vai tủa bị ứng họp, nghiệm, trò isomer tính quan tính tan hóa sau trong acid dạng cho nước cis 2.5 thích thành môi ml họp trường hổn trans phân cho họp phản tử dầu:nước kích ứng, protein thước trình (1:1; có hydro lớn thể bền, v/v), tương có hóa 1% ứng để ngăn ngừa hạn chế phản ứng thủy phân Trái lại, qua phản ứng thủy phân Ở Việt Nam, việc ứng dụng enzyme làm chất xúc tác công nghiệp ■ Máy đo quang phổ (Pharmacia LKBUltrospec Plus Spectrophotometer, Mỹ) CT-CA (3) (+) (3) CT-CA (3) (-)(3) CT-CA (2) (+) CT-CA (2) (-) nhận lượng sinh khối lớn Do đó, với quy mô định thời Trong điều chế tổng họp nhiên liệu sinh học, biodiezel Lipase sử dụng ❖ Nguyền tắc với hồ tinh bột làm thị Như vậy, số iod xác định tổng quát acid béo không no nhiễm đồng hóa dịtìm hóa rõ ởthuộc động vật thực vật Đe thực trình đồng hóa dị môi 1.4 trường Phương NaOH pháp để xác xác định định khả số acid xúc dầu tác enzym R J COOII + R,OH ^ ^ R1COOR2 + H O _> enzyme thô thu Dùng chất thị heliantin để nhận biết có mặt acid từ động vật Môi trường dinh dưỡng vsv bao gồm nhiều thành phần dinh dưỡng cần thiết Khi BƯỚC chất, chất ĐẦU ức NGHIÊN chế có cứu NUÔI tế bào CẤY tương VI SINH tác với gen điều khiển, liệu rẻ chuẩn tiền độ dung dễ dịch với HC1 0.1 N đến dung dịch màu, ta xác địng thể béo tự hỗn họp phản ứng định lượng nhờ phương pháp chuẩn độ 65.0 94,5 u/ml nuôi cấy vi sinh vật môi trường có mẫu dầu 1, Mầu Ở động vật, tế bào có khả tạo enzyme mà ta CT-CA (-) BT-KP2 (2) (-) BT-MC (la) (-) Catalase 1.11.1.6 Gan động Nội bào Thực phẩm Dầu dừa có nguồn gốc Bến Tre glycerol Trong với chất hút nước tạo acrolein có mùi khét phòng thí nghiệm Công Nghệ Sinh Học, khoa Khoa Học giúp đỡ chúng em Dung dịch lipase thủy phân thường khó lọc thủy phân acid, qua hoạt độ chúng thông qua khả làm giảm chất sau thời gian • Chỉ số xà phòng hóa dầu .43 Chỉ sổ xà phòng hoá: sổ mg KOH cần để trung hoà g chất béo Chỉ sổ xà phòng Acid béo có chuỗi c dài độ sôi cao, tính chất thường áp dụng để tách ❖ Định nghĩa BT-MC (lb) (+) sau 60 phút 57 ynồng dầu protein tự Tween không thực Sơ protein thô 80 đồ vật có (làm chung thúc sử tăng không dụng chất đẩy Hơn nhũ bền dung phản nữa, hóa) môi ứng trình giới thủy tăng 0.02 Sự hạn sinh thay phân ml acid học CaCl2 đổi độ phát muối độ enzyme 0.02 bền triển M làm có cắt thể enzyme đứt kết biểu tủa mạch protein diễn có dầu liên thực quan sau vật đến Sự việc thay lựa mà chất lượng thành phẩm tăng lên người ta phải tạo điều kiện cho phản ứng xảy trường có không bổ sung dầu sử dụng sau 24 .49 Trước enzyme thường trích từ động vật thực vật nên quy trình sản ■ Cân phân tích (Mettler Toler, Switzerland) hydrolysỉs gian ngắn ta thu nhận lượng enzyme lớn Trong số trường họp ta chất xúc tác cho phản ứng transester hóa dầu mỡ động, thực vật Lipase xúc tác tổng họp CT-CA (4) (+) (4) CT-CA (4) (-) (4) BT-MC (la) (+) BT-MC (lb) (-) Do môi trường nuôi cấy vsv có bổ sung dầu, vsv nuôi cấy có khả nlịận vật có chất béo hóa đó, vsv tổng họp enzyme tương ứng: Thể tích môi trường nuôi cấy vsv ống nghiệm nhau, môi Cần Thơ Đại Học CT-ĐH (1) II Lipid Dầu mỡ thành phần quan trọng thực phẩm Giá trị dinh dưỡng, cảm quan Đầu tiên, xác địnhchỉ đổi màu heliantin ởlipase, dung dịch khác nhau: nước cất, khác Thành phần chất dinh dưỡng tùy thuộc vào nhu cầu cần củacó toàn trình tổng họp enzyme không hoạt động tích HC1 sử dụng NaOH 0.05 M với chất thị phenolphtalein [9] 4, lb, theo thứ tự 2chu Chymotrypsi 3.4.21.1 Tụy tạng Ngoại bào Thuộc da hydrolase >của ứng dụng chế Với ưu điểm khả ứng dụng mục tiêu đề tàithiết là: “Bước mong muốn BT-MC (lb) (+) Dầu dừa lấy sở khác nhau: Acid béo: acid béo thường gặp acid béo có số carbon chẵn, mạch thẳng, a: khỏang cách từ đường chấm vết đến mức chạy dung môi (cm) có kỳ sản xuất kéo dài phản ứng Hiện nhiều phòng thí nghiệm sử dụng ba nhóm phương pháp trình thực đề tài lớn độ dài mạch ngắn, nên dùng để xác định độ dài mạch c acid béo khỏi A-B + H20 AH +dầu BOH II.2.Sự sinh trưởng vi sinh vật môi trường agar có không Chỉ số acid làcủa số miligam KOH cần thiết để trung hòa hết lượng acid tự có BT-MC (2) (+) Bảng 11: Hoạt độ enzyme phản ứng thủy phân sau 60 phút .57 nđầu Các số Dầu (1) (lb) (2) (4) đổi ❖một Dung Quá Các số dung acid thí trình dịch môi nghiệm béo muối kết cho tủa chất phụ triglycerides điện thuộc thực dung môi, vào từ dịch pH dung nước 30 nhiệt môi loại phút, polymer phân độ 60 Các khác cực phút, hay enzyme nhau, ởnăm tương nhiệt nhằm hòa độ tác tan biến phòng ion tính với protein chất quanh lýlắc Độ đến tận [6] xuất gặp nhiều khó khăn giá thành đắt Trong 30 gần đây, nhà khoa ■ lọc áp suất thấp VẢT VÀ LY TRÍCH ENZYME ĐẺ CHUYỂN HÓA Tùy theo mục đích tổng họp tùy vào tính hiệu lipase Phản ứng thủy Hình 8: dùng Màu sinh đối chứng khối acid với nguồn chất enzyme thị dùng heliantin 50 cho sản xuất mà không cần qua tinh ester đơn giản từ nguồn lipid khác điều kiện có có tổng họp lipase thủy phân dầu tạo acid béo tự môi trường Bằng CT-CA (-) BT-MC (lb) (+) BT-MC (la) (-) -thể ❖Máy Thí nghiệm Các enzyme đồng hóa tổng họp tế bào thực hoạt động trường bắt đục có gia tăng mật số VSV), lượng dầu giảm so với ban 2chọn Cần Thơ -(nghĩa Đường 3/2 3màu CT-3/2 (3) Kết thuộc tính vật lý triglycerides bị ảnh hưởng lớn yếu tố như: vị trí NaOH, acid oxalic II Khái niệm loại vsv, yêu cầu nghiên cứu Nhìn chung nguyên tố không thiếu Khi cho chất vào môi trường nuôi cấy, cơđặc chất tương tác với chất ức chế, gen ♦> Kết tính theo công thức: ■ Thí nghiệm Lipase 3.1.1.3 Tụy tạng Ngoại bào Thực phẩm phẩm enzyme đầu nghiên Hiện cứu nay, nuôi người cấy vi ta sinh vật đất ly để trích ly trích enzyme lipase từ thực tuyến dịch chuyển hóa lipid” quan > Cơ sở phường 7khu phố 2, kí hiệu: BT-MC (la) (lb) (-) thể no hay không no chuỗi c xếp theo hình chữ chi b: khỏang cách từ đường chấm vết đến tâm vết (cm) lipase - Muốn có hiệu suất cao chất lượng sản phẩm tốt phải có chế phẩm enzyme tinh sau để xác định khả xúc tác enzyme: Bảng 3: Thể tích HC10.1 N dùng để trung hòa lượng KOH 0.1luôn N thừa Và người mà chúng em ngàn lần biết ơn cha mẹ, người sát cánh động viên Ngoài để xác định tính chất chất béo người ta vào số số Tính hoà tan g chất béo ị dầu hóa điểm vận đẳng Quá chuyển dinh tốc trình điện 200 dưỡng, hóa kết vòng/phút điện tủa vị chúng ngon tích Để dung dừng biến nguyên dịch íttương hòa đổi phản nước liệu vị tan ứng tríthấp polymer Ví hoạt cho dụ động vào việc hỗn chọn phân dung phương họp cực 7này dịch ml Ví pháp lipase đệm, ethanokacetone dụ đơn cho nói giản vị cách biến trí cho khác 10.1 đổi (1:1, Đặc điểm Cff chất bị enzyme thủy phân Bảng 12: Thể tích NaOH 0.05 M dùng để chuẩn độ loại dầu hoạt độ lipase học quan tâm đến nguồn enzyme vô phong phú rẻ tiền enzyme từ vi ■ Thiết bị đông khô (ILSHIN, Hàn Quốc) chế phân xảy theo chế sau [14] dung môi hữu Trước việc sản xuất ankyl ester sử dụng chất xúc tác phương pháp chuẩn độ, định lượng acid béo tự từ dự tính có dầu Hình 9: Sự chuyển màu bề mặt môi trường nuôi cấy vsv mẫu đất cằn Môi trường (-) BT-MC (2) BT-MC (2) (-) đồng hóa xảy tế bào Bình tam giác 1: 0.2 gcủa dầu ứng +có 10 ml alcol tuyệt đối +họp 10 ml dd iod N Cô chaâ + nõôà ► saâ phaẩh đầu, ta tiến hành chuẩn độ mẫu với NaOH 0.05 N dùng phenolphetalein làm chất 3bền 2hơn CT-ĐHC (2) acid béo mạch glycerol, chiều dài chuỗi acid béo, độ chưa bão Sau nhỏ heliantin lên đĩa petri vsv sau 2(+) ngày nuôi cấy, cho đĩa vào trình sinh trưởng phát triển vsv c, H, N nguyên tố vi lượng Fe, Cu, điều khiển thoát khỏi ức chế chất ức chế gen tổng tương ứng 1(+): ml KOH 0.1N tương ứng 5.6 mg KOH Ca 11.2 Phân loại Cách bố trí thí nghiệm giống thí nghiệm 1, khảo sát hoạt độ lipase theo Cần Thơ -trích Đại học cổng ctrình 1.25 8.73 1.25 3.43 4Tuy Rennet 3.4.23.4 Da múi khế Ngoại bào + enzyme Phô mai Thu nhận kết -► trực tiếp, gián tiếp vào tiêu hóa động vật Enzyme khai thác chủ Các nội dung nghiên cứu bao gồm: > Cơ sở phường 7khu phố 3, kí hiệu: (lb) nhiên có acid béo nhóm chức acid chứa nhóm chức II.4 Kết tủa lỉpase thô BT-MC (2) (+) khiết Tiến hành đo lượng chất bị hay lượng sản phẩm tạo thành sau số acid tạo điều kiện thuận lợi cho chúng em hoàn thành luận ❖ khác Nguyền tắc: Trong nước, acid béo có chuỗi cđộ, ngắn LIPID (4,6,8) dễ tan, cvăn khó tan, Ci2 không tan 3được kết v/v) tổng tủa mạch sự có glycerol lượng kết mặt dính tự muối, kết protein thuận họp nhiệt lợi, với Nhiều hầu protein trình hết protein sovat dễ kết nhìn hóa triglycerides tủa chung 10 có kết quan tủa dung trọng diện nhiệt môi có khác độ cao 47 Các chất enzyme thủy phân thường chất đạm (protein), tinh bột sinh vật Nguồn enzyme ưu điểm như: vi sinh vật tổng họp enzyme có tốc ■ Máy lắc (Heidolph MR3001, Đức) ứng dụng ngoại vsv không bào sau đòi 30 hỏi phút nghiêm ngặt ta dễ dàng tìm kiếm nguyên liệu dùng hóa học acid, base Nhưng phương pháp tồn nhiều hạn chế phục lượng enzyme vsv sinh (-): không dầu Các enzyme dịhoạt hóa tổng họp tế bào hoạt động tế 58 Sơ đồ phản ứng cho thấy phản ứng thủy phân enzyme phản ứng lưỡng phân alcol BT-MC (-) Thơ thị Khi có ta có tích có NaOH diện tổng dầu với chất thị heliantin 51 Cần Thơ Trần Văn Hoài CT-TVH (4) Tính chất lipid thay đổi cách thay đổi vị trí chuỗi acid béobị 1.3 tủ ủ 32°c Phương theo dõi pháp đến tách ngày làm lỉpase nghiên cứu [19] Mg, Mn, Zn, K, Ca, Cl, Bo, I với chất động, enzyme tổng họp phân hủy chất Đến chất enzyme ^ _ 5.6 x(ữ-ô) Cxp thời gian thủy phân chất (dầu) thời điểm to, 60 phút, 90 phút, 120 phút, 150 phút, độngvật 11.3 Tí 9.82 49.55 29.9 22.4 yếu nhóm protease, có hoạt tính cao ổn định Mặc dù có hoạt tính cao Môi trường (+) dầu Chọn lọc gia tăng mật số vi sinh vật phân hủy dầu từ nguồn đất nhiễm - gian Dầu qua sử dụng mua cần Thơ khác rượu, cetone, mạch carbon có vòng hay nhánh thời định lượng enzyme xác định trước Phương pháp áp BT-MC (2) (-) Mầu Thể tích HC10.1N Chỉ số acid: làloại số mg KOH dùng để trung hoà tất acỉd béo tự cóphẩm 1nguyên gxuất chất Dùng KOH để trung hòa acid béo tự có chất béo để phân tích với Ỷ ❖ Mục đích: bơ dung [15] cocoa dung dịch Sau chứa nước dịch đó, hỗn đệm polymer acid họp palmitic không chuẩn ion độ strearic với polyethylene dung vị dịch trí NaOH glycerol 3, 0.05 (PEG acid M, 2000, oleic pH=10, 4000, vị với trí chất 6000), 2, (glucid), chất béo (lipid), v.v ^XP ~ ■ độ sinh trưởng nhanh, enzyme ly trích có hoạt tính cao, nguyên liệu dùng để sản rẻ Nếu acid béo dạng muối dễ hòa tan ■ Bình tam giác (50 ml; 250 ml) 11.3 Định lượng acid sinh thủy phân dầu enzyme từ lipase thô vi sinh vật 49 để sản xuất chế phẩm enzyme từ vsv Trong nhiều trường họp, nguồn liệu hồi glycerin bỏ xúc tác khó khăn, phá hủy số sản phụ có giá trị ❖Bình Mục đích: ❖10: Các bước tiến hành Bảng 13: Họat tính lipase ngoại bào theo thời gian định lượng NaOH tếThơ bào gọi làprotein enzyme bào (endoenzyme) ngoại bào (exoenzyme) Nhưng nồng độ nước rấtức lớn coi không thay đổi suốt thời gian phản tam giác 2: 0.2 ml nước +nội 10 ml alcol tuyệt đối +hay 10 ml dd iod 0.1 Để khảo sát khả tổng họp lipase vsv, thí nghiệm tiến hành sau: X loại tổng họp tế bào Phần lớn chúng tồn tạiN tếứng, Hình Sự chuyển màu bề mặt môi trường nuôi cấy vsv mẫu đất ởđạm Bến glycerol Cần -hết, Cồn Ắu CT-CA (-) -5bào nitơ: vsv cần nitơ ởcủa nhiều dạng khác Một số vsv cố định có khả enzyme phân hủy chất chế không bị bất hoạt trở lại tương tác, kết làda 180 phút, 240 phút, 300 phút, 360 phút Sau dùng phương pháp định lượng Khảo sát thòi gian mật độ vỉ sinh vật phát triển mạnh Trypsin 3.4.21.4 Tụy tạng Ngoại bào + Thuộc nh chất vật Ci lý hóa học 6.77 lipid 2.33 7.61 9.03 việc lyEnzyme trích khó khăn tương ứng dầu -5Nguồn dầu mỡ qua sử dụng chưa sử dụng Có loại dầu qua sử dụng: II.2.1.2 Cerid: ester rượu acid béo, nhiệt độ thường thể rắn, cóbằng ởgen dụng rộng rãi xác định tương đối xác béo Lần Lần Lần phenolphtalein làm chất thị Cần Thơ, Ngày 27 tháng 11 năm 2008 Thu lipase thô để nghiên cứu đặc tính khác lipase ứng dụng lipase m IV Lỉpase công nghiệp giấy phản methyl thị ứng celluso, phenolphtalein ester polyvinyl hóa (cho alcohol vào phân khoảng (PVA) tử 2-3 dextrans xúc giọt tác phenolphtalein), hóa (DEX) học để thực xác định lượng Nó acid Theo Bemard Pullman Alberte Pullman, đặc điểm chung chất tiền, dễ kiếm, nuôi cấy vi sinh vật không phụ thuộc vào thời tiết thực qui ■ Ống nghiệm loại lớn (50 ml) Trong dung môi hữu không cực benzen, ether, ether dầu hoả béo muối dùng để kết tủa enzyme như: (NH4)2SC>4; Na2SC>4; K2SƠ4; dùng đểcó nuôi cấy vsv thu enzyme hòan toàn nguyên liệu thực phẩm tocopherol, tocotrienol lipid nhạy cảm khác DHA (Docosahexaenoic Kiểm tra enzyme vsv tiết tham gia vào trình phân hủy lipid làacid nội bào - Các Chuẩn bị Tre-Khu 400 ml môi trường (theo thành phần nêu trên) cho vào bình chịu 11.4 Mật số vi sinh vật .55 Enzyme nội bào bao hàm loại enzyme tham gia tổng hợp, enzyme doalcol vận tốc phản ứng phụ thuộc nồng độ chất Như vậy, phản ứng thủy phân 0.05M 59 bào enzyme thường không cóphân khả di chuyển qua màng tếBT-KP2 bào Ly trích nhận nitơ từ không khí nên chúng không cần cung cấp nitơ trình nuôi cấy tổng họp enzyme không hoạt động, trình tổng họp bị ngưng trệ Như vậy, muốn 6như Bến Phố 2nhận la (la) Tre diện dầu với chất thị heliantin 51 MT: GVHD: Môi trưởng SVTH: NaOH 0.05M với chất thị phenolphtalein để xác định hoạt tính lipase thời diểm Do mục tiêu chăn nuôi lấy thịt, sữa, da việc lấy enzyme phụ Xác định thời gian nuôi cấy đạt mật số vi sinh vật cao III Nguyên liệu sản xuất số lipase quan trọng 15 > Dầu chiên cá nhà ăn sinh viên Đại Học cần Thơ, kí hiệu:(l) động thực vật, thực vật thường tạo thảnh lớp mỏng phủ lên lá, thân, Thể tíchbiến NaOH hành xác định thời gian cần thiết để thuchếnhận Va: lượng đổi Mầu có dầu: d Sự ôi hóa: (+) dầu (-) dầu (+) dầu (-) dầu (+) dầu (-) dầu ❖ Tiến Thí nghiệm Tinh vào chuyển hóa lipid Cxp: số xà phòng (mg KOH/g) Nguôn thực vật béo thực tự Các dung sinh xúc môi tác nước tồn hổn polymer họp phản có dạng ứng khả mononăng lấy nước diglycerides, từ xung quanh sử protein dụng Các có “ Các liên kết bị thủy phân” cho thấy dầu nguyên qua tử sử tích dụng điện có dương số tạo acid nên cao Người (dầu ta gọi 4) liên mô công nghiệp ■ ĐĩaPetri dễ tan Tuy nhiên dung môi hữu phân cực aceton, acid béo khó hoà tan hay cho người, chí dùng phế liệu nông nghiệp, công nghiệp để sản xuất enzyme acid), EPA, acid linoleic Cho nên chất xúc tác sinh học, lipase, ứng dụng vào ♦> Sử dụng phương pháp chuẩn độ acid bazơ: hay ngoại bào xác định hoạt độ lipase sinh [9] nhiệt tham gia trình oxy hóa enzyme tham gia chuyển hóa vật chất tế enzyme phản ứng đơn phân bậc MgS04 hòa tan loại muối phụ thuộc vào nhiệt độ loại muối không 11.5 Enzyme vi sinh vật sinh tham gia trình thủy phân lipid 56 Lắc yên tối 30 phút, sau chuẩn độ Na scác 0.01 N(lb) đến ❖lớn Tiến hành thí nghiệm giai đoạn 2khả enzyme khỏi tếđể bảo khó vì: Hàm lượng enzyme tế bào 2sử 20dụng 60 3sinh vật Bảng 14: Họat độ lipase ngoại bào theo thời gian .59 Phần vsv tự nhiên nuôi cấy vsv này, tổng họp ta cho vào môi trường lên men chất cảm ứng với “Hắc ín” thành phần kỵ nước gỗ (chủ yếu 7enzyme Bến Tre-Khu Phố 3ngoại lb BT-KP3 Hình 11: Họat độ lipase theo thời gian dầu chưa khảo sát TS LÊ THANH PHƯỚC ĐÀO THỊ PHƯƠNG THẢO ílấy ,triglycerides nên có trường họp chăn nuôi enzyme Enzyme chiếm nhỏ 17 III Nguyên liệu sản xuất số ỉỉpase quan trọng Xác định lipase vi sinh vật tổng họp để thủy phân chất béo lipase nội bào hayliều >lượng Dầu chiên chuối ởphải cổng cbào Đại Học cần Thơ, đường 3/2, kí hiệu: (2), (3)lượng III Lipase từ động vật định chất hay lượng sản phẩm tương ứng với lượng enzyme định -ml chuẩn dung dịch cấy Dầu mỡ để lâu có mùi vị khó chịu gọi ôi hóa, nguyên nhân Dùng bình tam giác 100 ml cho vào ml alcol tuyệt đối eter (theo tỉ lệ (1) 9.10 9.70 9.05 9.40 8.90 9.00 ❖ Tiến hành thí nghiệm a : thể tích dung dịch HC1 IN (ml) dùng để chuẩn độ bình thử không Actinidin 3.4.22.1 Trái Kiwi Ngoại bào Thực phẩm enzyme protein Hoạt liên đặc ♦> kết độ biệt Tiến lipase với hành để thí polymer di tính chuyển nghiệm theo nhóm công liên acyl thức kết [10] hydro, sản sau xuất hỗn triglycerides họp kết tủa từ glycerol kết (dầu “ 1) liên kết số nhị acid dương” dầu chưa sử dụng (dầu 2) Theo lý thuyết, số acid dầu Lipase nhóm enzyme có khả xúc tác trình thủy phân ■ Ống đong (10 ml, 25 ml, 100 ml) hoà tan từ vsv Điều giúp ta thu nhận nguồn lợi lớn sản xuất công nghiệp với qui mô lớn để sản xuất ankyl ester phương pháp * Nguyên tắc * Bố trí thí nghiệm Môi trường, que cấy khử trùng nhiệt ướt 121°c, áp suất bar 20 bào b Yếu tố điều chỉnh có màu hồng vàng sậm, thêm 1-2 giọt tinh bột 1% Nếu có màu xanh xuất tiếp Đào Thị Phương Thảo Lê Thị Thùy giai đoạn sử3nitơ dụng nghiệm lớn đậy nút gòn khử trùng sấy khô lớn III soỞsản với Sự chuyển thành hóa phần khác lipid Do với xúc việc tác tách để thu nhận thành phần nhỏ điều 58 ảnh hưởng thuộc tính tự nhiên enzyme cần cung vào trường nuôi cấy phù họp Đồng thời pH môi trường, nhiệt độ, hoạt tính nước nhu cầu oxygen ”0có Sản xuât enzyme Bảng sáp); 15 :đến nguyên Giá trị Rf nhân của các vết vấn chấm bột dầu giấy 1lipase sản thời xuất điểm giấy khảo Lipase sát 62 dùng để loạiLinh60 8lượng Bến Tre -cấp Khu Phố 2ống 2và BT-KP2 (2) ■> Thí nghiệm Hình 12: Họat độ lipase ngoại bào thời gian dầu sử dụng ThS NGUYỄN PHI MSSV: 2041670 phẩm ngành chăn nuôi 43.2.1.1 ngoại bào Dầu chiên vịt ởTHỊ đường Hoài, kícác hiệu: (4) Cerid có công thức tổng quát lTrần àOANH : đề R -Văn 0thiết -Malt Ctheo -để -tạo R Tiến hành chọn nồng độ enzyme cần thời gian định thu 111.2 Li vb: Thể tích NaOH gây oxy không khí kết họp vào nối đôi thành peroxide Nếu oxy kết họp vào a-Amylase Ngoại bào +++ Bia 1:1) cho thêm vào bình 2-3 giọt phenolphthalein dùng dung dịch KOH 0.05 N (4) 7.40 8.10 7.50 8.00 20.90 22.10 Cho % dầu tương ứng 1% Tween 80 vào bình tam giác chứa môi trường 4bhoặc vsv từ mẫu: CT-ĐH (1), CT-TVH (4), BT-P7-KP3 (lb), BT-P7-KP2 (2) :mẫu thể tích dung dịch HC1 0.hoàn IN dùng để chuẩn độmôi bình thử thật u/ml = (V akhảo — V b) X 103 X 0.05 X D chất rắn acid béo đôi tự sử dụng chất lipase sền đặc sệt hiệu cho vị trí 1, Sự chưa thủy sử dụng phân thấp enzyme số acid dễ(ml) dầu dàng qua sử khuyết dụng electron Sự khác biệt kết liên kết nghiên bị triglycerol xúc tác số phản ứng transeter hóa điều kiện định ■ Beaker II.3.2 Tính chất hóa học Sản xuất enzyme từ vsv toàn thực theo qui mô công nghiệp Khi transester hóa [15] Dựa vào khả phân hủy dầu vsv trường nuôi cấy tạo Thí nghiệm sát phương pháp sau: không ly tâm dung dịch sau phút Các dụng cụ sau khử trùng sấy khô 65°c Phần lớn enzyme ngoại bào thuộc enzyme cảm ứng Do việc điều Đối với phản ứng thủy enzyme nước môi trường để tục chuẩn độ xuất màu vàng rơm nhạt Đong 10 ml môi trường cho vào ống nghiệm Dùng pipet hút 100 pl dầu khó Hơn enzyme chất hữu không bền, chúng dễ bị biến tính bị tác Thu nhận enzyme * không hòa tan Nguồn carbon: IV Dựa phải Chế vào phẩm khả điều chỉnh kết thô tủa bổ từ xung vi sinh enzyme họp vật lý nồng độ muối khác nhau, người ta bỏRượu hắc bột giấy để xuất giấy Công ty Nippan, Nhật Bản phát triển Enzyme có chất protein chúng tổng họp đường sinh Bảng 16 :ín Giá trị Rf vết chấm dầu lbở2ởmẫu thời điểm khảo sát 62 u/ml (Vs -hay Vb) X 0.05 X 103 Xvật D X 3.62 9cũng Bến Tre -enzym Khu Phố 3=sản BT-KP3 (2) Cũng bố trí giống thí nghiệm 2, không dùng hỗn họp dung dịch Hiện nay, chưa có nghiên cứu tạo giống động nhằm vào mục tiêu tạo 64 Hình 13: Kết phân tích sắc ký mỏng nuôi cấy từ chưa sử dụng (dầu LÊ THỊ THÙY LINH Đất nhiễm dầu cerid rượu cao phân tử, chứa nhóm OH ,dầu mạnh cđó không phân biến đổi định chất sản phẩm sát phản ứng thủy phân từ nguồn lipase thu pase từ thực vật 18 nguyên tử carbon đứng cạnh liên kết đôi tạo thành hydrogen chuẩn môi peroxide trường Sau với alcol để trung hòa hỗn họp đến xuất màu hồng nhạt Sau thêm vào hỗn P-Amylase 3.2.1.2 Malt Ngoại bào +++ Bia agar khử trùng để nguội bớt tủ sấy Hỗn họp phải trộn lẫn (lb) nuôi cấy 8.00 bình tam 9.70 giác 250 7.60 ml có chứa 9.50 150 ml môi trường, 7.45 ml vsv 9.50 m: khối lượng chất béo (g) c Khảo Phản Phương ứng pháp ester hấp hóa thụ chọn xúc lọc tác lipase ứng dụng để tổng họp số ester từ thủy cứu phân so với lý thuyết lớn [6] nguồn dầu nghiên cứu sử dụng, số tương [8] Lipase tham gia vào chu trình hòa tan chất hữu không hòa tan tự ■ Ống chuẩn buret a Sự hydrogen hoá tham gia vào phản ứng phân giải chất có diện *enzyme Các yếu tổquả: ảnh hưởng đến trình transester hóa xúc tác lipase acid tựtán do, sử dụng NaOH chuẩn độ để xác định lượng acid sinh Khi thể tích NaOH nuôi cấy, lymuốn tâm dung dịch sau nuôi cấy để tách riêng dung dịch tếquan bào, tế Cân 2.5 gKết mẫu đất cho vào bình tam giác (50 ml) tương ứng chứa 180 khiển sinh tổng họp enzyme ta áp dụng quy luật cảm ứng thu kết khuếch enzyme chất mà tác nhân tham gia vào phản ứng tinh khiết ❖ 100 pl dịch nuôi cấy giai đoạn cho vào ống nghiệm Các thao tác thực động yếu tố bên nhiệt độ, pH Do chất protein, enzyme vsv cần carbon để tổng họp chất khác cho tế bào Ở động vật thực vật, việc thu enzyme phụ thuộc vào có chứa phương pháp điều khiển hắc ín việc sử dụng lipase từ nấm Candida rugosa thủy thường sử dụng (NH4)2S04 để kết tủa phân đoạn enzyme Ngoài số dung môi hữu học Do đó, thu nhận enzyme có đường thu nhận chúng từ X IV Thu chế phẩm enzym thô 10 Bến Tre -nguồn Mỏ Cày BT-MC (-) ethanokacetone để dừng phản ứng Sản phẩm định tính và2041638 bán lượng Bảng 17 : Giá trị Rf vết chấm dầu ứng ởđược thời điểm khảo sát 63 enzyme protease mạnh dùng công nghiệp thực phẩm Người ta-định coi enzyme 64 Thu mẫu đất dầu dầu tương ởtạo địa điểm nhánh, mạch c nhiễm có vòng (Rượu cetol) lbtrích vàvừa 2) 61 MSSV: Ly lipase thô từ vi sinh vật nuôi cấy peroxide hydrogen peroxide bị phân giải để thành aldehyde cetone Các 111.3 Lipase từ vi sinh vật 18 họp trung hòa 0.3 g dầu tương ứng Trung hòa hỗn họp dung dịch KOH dầu tương ứng II.2 Nuôi cấy vsv trước cho vào môi trường Sau cho hỗn họp Tween dầu vào môi trường, lắc Bromelin 3.4.22.4 Dịch dứa Ngoại bào Bia 1.5 ml dầu tương ứng Các mẫu ủ nhiệt độ phòng, lắc 120 vòng/phút (2) 7.30 7.40 5.20 7.60 7.10 7.80 dầu Chất acid hấp béo thụ tương ứng, cho tổng trực họp tiếp ester vào sáp dung dịch sử dụng enzyme, sản cho xuất dung mỹ phẩm dịch ứng thay Đặc đổi điểm Hơn chung nữa, tâm hoạt loại động dầu khảo enzyme sát thủy số phân acid dầu (lb) cao nhiên tổng họp sản phẩm có giá trị cao, có lợi sản ■ Máy khuấy từ (Magnetic stirrer SM1, UK) Acid béo chưa no kết họp với H2để tạo thành acid no chất môi trường nuôi cấy, lượng enzyme tổng họp cao rấtquá nhiều lần so Nguồn alkyl có vai trò quan trọng động học phản ứng sử dụng enzyme dùng để chuẩn độ cao nghĩa lượng acid sinh trình thủy phân dầu nhiều, điều bào nghiền sóng siêu âm để khảo sát lipase nội bào Thời gian thí nghiệm môi trường 180 gl dầu Các thao tác thực tủbéo cấy vô trùng mong muốn Nước ảnh hưởng đến vận tốc mà chiều hướng phản ứng thủy tủml cấy 0.01269: vô trùng lượng Iot (g) tương đương với lml dung dịch Na2s203 0.1 N thường liên kết với loại protein khác thuộc tính enzyme Nguồn khoáng chất sinh trưởng: enzyme Ngược lại, vsv người ta thu enzyme dạng thô lỏng (từ trình nuôi phân đến 90% triglycerides gỗ thể sinh vật Tất tế bào động vật, thực vật vi sinh vật có enzyme mức sử dụng để kết tủa enzyme Phương pháp kết tủa thường làm enzyme biến IV.2 Thử hoạt tính enzym thô 64 phương pháp sắc ký mỏng (TLC) thời điểm khảo sát với thí nghiệm Dung phần đương nhiên thu nhận sinh khối từ chăn nuôi Bảng 18 : Giá trị Rf vết chấm dầu thời điểm khảo sát 63 ❖ Dụng cụ lấy đất: Sáp ong, sáp cá voi (spermaceti) ester rượu cetol palmitic acid i Ni,t° Thực chuyển hóa lipid từ chế phẩm lipase thô thu aldehyde cetone chất có mùi vị“công khó chịu 0.05 N alcol có màu hồng bền vững sau 30 phút 10 P-Glucanase 3.2.1.6 Malt Ngoại bào ++ Bia bình rót môi trường vào đĩa petri IV ứng dụng lipase 23 72 [13] enzyme chạy qua cột có chứa chất hấp thụ Chất hấp thụ thường sử dụng Đa nhất, số điều enzyme có thủy thể phân dầu (hydrolase) (lb) chưa không tinh có chế, nhóm ngoại dạng Như dầu thô bắt buộc tâm số truyền thống Chu kỳ vật liệu gọi nghệ làm sạch”, vật ■ Máy lắc với độ trung bình chất, gọi enzyme cảm ứng Chúng thuộc loại làm xúc tác đồng R-(CH2)n-CH nghĩa với mật = độ CH-(CH2)n-COOH vi sinh vật mẫu + H2 phát triển mạnh ► R-(CH2)„ CH2 chọn thời điểm mà vsv có mật số cao Thí nghiệm bố trí cho mẫu Các mẫu nuôi cấy máy lắc với tốc độ 150 vòng/phút nhiệt độ phòng phân enzyme Do nước dùng để tăng cường hay kiềm hãm phản ứng thủy ứng dụng Trong đó: Các mẫu lắc ởĐại vận tốc 150 vòng/phút vàtếtheo dõi sinh trưởng vikết sinh vật 66 protein lại có đặc tính lý hóa tương tựdụng enzyme 1: dầu nhà ăn Học cần Thơ Môi trường nuôi cấy lỏng Các chất khoáng vi lượng cần thiết với số lượng nhỏ Tuy sốtự lượng ítv/v/v) cấy chìm) Dịch nuôi cấy chủ yếu chứa enzyme ngoại bào cóbéo thể thu chế phẩm enzyme độ enzyme loại khác cho loại bào tính nhanh Vì trước tiến hành kết tủa, người ta phải làm chất tủachất CH2(CH2) n-COOH môi dùng để thử TLC Petroleum ether:diethyl ether:acid acetic (100:30:1, sắc ứng Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Spatula, túi nylon kiếng, mâm Ngoài sáp ong sáp cá voi có rượu tự do, acid Bảng 19: Hàm lượng lipase ngoại bào thô thu mẫu 64 4)Sau 11 Ficin ly tâm lạnh 3.4.22.3 mẫu dị 8500 Mủ vòng/phút sung 20 bào phút ởmôi 4°c để thu Bia tế 10° bào.- 62 Pha loãng vi sinh vật nuôi cấy ởchất giai 3Ngoại thành dãy pha loãng từ IV Lipase công nghiệp rửa hydroxyapatie Bằng phương pháp này, hấp thụ enzyme hấp thụ protein hoạt xà phòng động hóa chúng dầu phải (lb) có cao gốc acid (Bảng amine 5) đặc hiệu liệu tổng họp sử dụng tái sử dụng mang lại gia tăng lớn sản ■ Ống mao quản nhóm enzyme thủy phân enzyme hóa Những chất đưa vào trường để theo thứ tự sau: CT-ĐH (1), CT-TVH (4), BT-P7-KP2 (2), BT-P7-KP3 (lb), tương Quá trĩnh ta gọi giai đoạn làm giàu vitẩy sinh ở(ml) giai đoạn phân có xúc tác enzyme Vs: Thể tích NaOH chuẩn ởchế thời gian t đoạn phút ống nghiệm dựa vào lượng dầu giảm độ đục củakết mội trường nuôi cấy so 23 2: dầu chiên chuối cổng c Đại Học cần Thơ khoáng quan trọng chúng đóng vai trò giữ pH môi trường ổn định ❖ Nguyên liệu Người ta dùng phản ứng để tạo thực phẩm margarin dung dịch enzyme (NH ) S04 có hiệu cho trình tủa chúng có I.❖ 20: Kết Cách luận 66 lấyđộmẫu thí nghiệm đồ 2:bào Sựsau tạo thành enzyme vsv hydrocarbon 1,3-DG l-MG glyCero1 0.01269 Bảng Hoạt củađất lipase thôSơ ngoại 30 phút 64 1hoạt 1.13.11 Đậu nành Nội bào Thực phẩm Phần dung dịch sẽcủa cho amonium sunfat vào cho tớiphẩm khiXl00(fl-ft) dịch lên bão khuấy Tâm động enzyme hydrolase thường chứa nhóm imidazol củahòa, 10-7 chủng 50 plchiên mẫu vi sinh vật pha loãng lên các80% đĩa petri cóhistidin chứa IV 2.dầu Lipase công nghiệp thực 23 Vb: Thể tích NaOH chuẩn thời gian t0 (ml) với mẫu đối chứng 3: chuối đường 3/2 • (NH4)2SO40.5% 2 II Đe nghị .66 CẰN THƠ, THÁNG 12 NĂM 2008 nhóm hydroxyl gốc serin IV 3.của Lipase trongsố công nghiệp giấy 23 Trang Trang Trang Trang Trang Trang Trang 13 12 11 10 25 38 12456789328 34 30 40 39 37 36 35 32 31 29 27 26 41 42 33 24 23 22 21 20 14 19 17 16 15 18 24 IV.4 Lipase tổng hợp hữu LV TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ II Sự diện (VSV) thủy phân dầu đất II.l Sự sinh trưởng vsv đất môi trường lỏng khỉ có dầu Dầu qua sử dụng (WO) a Mẩu đất nhiễm dầu (a) (b) (c) Hình 1: Sự sinh trưởng vsv mẫu đất cần Thơ nuôi môi trường có dầu tương ứng (a):CT- TVH (4); (b):CT- ĐHC(2); (c): CT- ĐH (1) Ông nghiệm 1: môi trường; 2: môi trường có dầu tương ứng; 3:VSV nuôi môi trường không dầu; 4: vsv nuôi môi trường có dầu tương ứng Khi nuôi vsv mẫu đất bị nhiễm dầu thu cần Thơ: đất nhà ăn sinh viên Đại Học Cần Thơ (CT- ĐH (1)), đất nơi chiên chuối trước cổng c, Đại Học cần Thơ (CT- ĐHC(2)), đất nơi chiên vịt đường Trần Văn Hoài (CT- TVH (4)), kết thí nghiệm cho thấy tất mẫu đất khảo sát bị nhiễm dầu sử dụng, có khác biệt rõ mật số vsv nuôi cấy môi trường có diện dầu tương ứng (Hình 1, ống nghiệm 3) Mật số vsv môi trường có dầu cao mật số vsv môi trường dầu tương ứng Kết cho thấy vsv đất nơi nhiễm dầu qua sử dụng mẫu đất thu cần Thơ có khả thủy phân dầu Trang 43 LV TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ b Mẩu đất chưa nhiễm dầu (a) (b) (c) Hình 2: Sự sinh trưởng vsv đất chưa nhiễm dầu cồn Ấu, cần Thơ khỉ nuôi môi trường có loại dầu sử dụng, (a): CT- CA (1); (b): CT- CA (2); (c): CT- CA (4) Ông nghiệm 1: môi trường; 2: môi trường có dầu, 3: vsv chưa tiếp xúc với dầu nuôi môi trường không dầu, 4: vsv tiếp xúc với dầu nuôi môi trường không dầu, 5: vsv tiếp xúc với dầu nuôi môi trường có dầu Khi nuôi vsv từ mẫu đất đối chứng chưa nhiễm dầu Cồn Ắu, Cần Thơ môi trường có không bổ sung dầu sử dụng, kết nghiên cứu cho thấy vsv mẫu đất có khả phân hủy dầu (Hình 2, ống nghiệm 5) Tuy nhiên nuôi môi trường với loại dầu mật số vsv mẫu đất nhiễm dầu (CTTVH, CT- ĐHC CT- ĐH) cao mật số vsv mẫu đất đối chứng (CT-CA) (Hình 1, ống nghiệm Hình 2, ống nghiệm 5) Trang 44 LV TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ Dầu chưa sử dụng (NO) a Đất nhiễm dầu (a) (b) (c) (d) Hình 3: Sự sinh trưởng vsv mẫu đất Bến Tre nuôi môi trường dầu tương ứng (a):BT-KP (la); (b): BT-KP (lb); (c): BT-KP (2); (d): BT-KP (2) Ông nghiệm 1: Môi trường; 2: môi trường có dầu tương ứng; 3: vsv nuôi môi trường không dầu; 4: vsv nuôi môi trường có dầu tương ứng Khi nuôi vsv mẫu đất thu sở sản xuất dầu dừa Bến Tre (BTKP2 BT-KP3) môi trường có không bổ sung dầu dừa tương ứng (dầu la dầu lb) dầu olive (dầu 2), kết thí nghiệm cho thấy mật độ vsv nuôi môi trường có bổ sung loại dầu cao mật số vsv nuôi môi trường không dầu (Hình 3, ống nghiệm 3) Như vsv mẫu đất có khả thủy phân dầu chưa sử dụng (dầu dừa) Hơn nữa, kết nuôi cấy vsv môi trường có không bổ sung dầu olive cho thấy vsv đất thu sở sản xuất dầu dừa Bến Tre có khả phân hủy dầu (Hình (c) (d), ống nghiệm 4) Trang 45 LV TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ b Mầu đất chưa nhiễm dầu (a) (b) (c) Hình 4: Sự sinh trưởng vsv mẫu đất chưa nhiễm dầu (a) BT-MC (1B); (b): BT-MC (2); (c): BT-MC (1B) Ông nghiệm 1: môi trường; 2: môi trường có dầu; 3: vsv chưa tiếp xúc với dầu nuôi môi trường không dầu; 4: vsv tiếp xúc với dầu nuôi môi trường không dầu, 5: vsv nuôi môi trường có dầu Khi nuôi vsv thu mẫu đất đối chứng chưa nhiễm dầu môi trường có không bổ sung dầu dừa dầu olive, kết thí nghiệm cho thấy vsv mẫu đất có khả thủy phân dầu dừa dầu olive (Hình 4, ống nghiệm 5) Tuy nhiên, nuôi vsv mẫu đất thu Ben Tre (đất nhiễm dầu sở sàn xuất dầu dừa đất đối chứng chưa nhiễm dầu) loại môi trường bổ sung loại dầu, kết cho thấy vsv mẫu đất nhiễm dầu (BT-KP2 BTKP3) có mật số cao so với vsv mẫu đất đối chứng (BT-MC) (Hình 4, ống nghiệm Hình 3, ống nghiệm 4) Từ kết khảo sát khả thủy phân dầu vsv mẫu đất nhiễm dầu đất đối chứng chưa nhiễm dầu thu hai tỉnh cẩn Thơ Bến Tre, nhận thấy vsv mẫu đất có khả phân hủy dầu Mặt khác, nuôi loại môi trường có bổ sung loại dầu, vsv mẫu đất nhiễm dầu có mật số cao vsv mẫu đất đối chứng Kết họp lý phương diện di truyền, nghĩa sống môi trường có dầu, vsv hình thành chế Trang 46 LV TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ thích nghi, khả thủy phân dầu, để tồn môi trường có diện họp chất Do tiếp xúc với dầu, vsv phân hủy dầu nhanh tạo sinh khối cao so với vsv đất chưa bị nhiễm dầu Kết nghiên cứu cho thấy khả làm dầu ô nhiễm đất đường sinh học nhờ vào diện vsv địa phân hủy dầu II.2 Sự sinh trưởng vsv đất môi trường agar có dầu ❖ Dầu sử dụng (WO) a Đất nhiễm dầu Hình 5: Sự sinh trưởng vsv mẫu đất nhiễm dầu qua sử dụng môi trường có không bổ sung dầu sử dụng sau 24 Trang 47 LV TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ b Đất chưa nhiễm dầu Hình 6: Sự sinh trưởng vsv đất cồn Ấu, cần Thơ môi trường có không bổ sung dầu sử dụng sau 24 Kết nuôi cấy vsv mẫu đất thu cần Thơ nhiễm dầu sử dụng (CTDH, CT-DHC CT-TVH) đất đối chứng (CT-CA) môi trường agar có không bổ sung dầu tương ứng tương tự kết nuôi cấy môi trường lỏng, nghĩa vsv mẫu đất có khả thủy phân dầu khảo sát, đồng thời, mật số vsv từ mẫu đất nhiễm dầu cao so với mật số vsv mẫu đất đối chứng (Hình 6) ♦♦♦ Dầu chưa sử dụng Trang 48 LV TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ Hình 7: Sự sinh trưởng vsv mẫu đất nhiễm dầu chưa sử dụng môi trường có không bỗ sung dầu sử dụng sau 24 Kết nuôi cấy vsv mẫu đất nhiễm dầu chưa sử dụng (dầu dừa) thu sở sản xuất dầu dừa Bến Tre môi trường agar có dầu dừa, dầu olive tương tự kết nuôi cấy môi trường lỏng, nghĩa vsv mẫu đất có khả thủy phân dầu dừa dầu olive (Hình 7) Tóm lại, qua thí nghiệm khảo sát diện vsv đất có khả phân hủy dầu, nhận thấy vsv mẫu đất khảo sát (bao gồm đất nhiễm dầu đất đối chứng) có khả thủy phân loại dầu như: dầu chiên thức ăn, dầu dừa dầu olive Khả thủy phân dầu vsv có lẽ sinh vật tổng họp lipase phân hủy dầu Tuy nhiên, vsv mẫu đất nhiễm dầu có khả phân hủy dầu nhanh so với vsv mẫu đất chưa bị nhiễm dầu Kết hoàn toàn phù họp với kết nghiên cứu trước đây: vsv có khả tổng họp lipase phổ biến đất có khả hấp thụ dầu [7] II.3 Định lượng acid sinh thủy phân dầu từ lipase vsv 2.3.1.1 Định tính lipase: Để chứng minh vsv đất có khả tổng họp lipase nuôi môi trường agar có bổ sung dầu, dùng heliantin để chứng minh diện acid béo sinh từ thủy phân dầu Hình minh họa màu đối chứng chất thị heliantin với acid Trang 49 LV TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ Ông nghiệm l:Nước cất + heliantin; 2: Nước cất; 3:Acid + heliantin; 4: Acỉd; 5: NaOH + helỉantin; 6: NaOH Trang 50 TỐT NGHỆP ĐẠI HỌC LVLV TỐT NGHIỆP NGHIỆP ĐẠI ĐẠI HỌC HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẨN THƠ TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN CẦN THƠ BT-KP2(2)(-) CT-CA(-)+(2) 0.05 14.5 5.1 0.201 BT-KP2(la)(-) BT-MC(-)+(la) 0.245 0.352 2.693,6 0.410 5.8 0.152 Bảng 13: Họat tính lipase ngoại bào theo thời gian định lượng NaOH nghiệm hay nói cách Hơn khác sau lipase 24 giờ0.134 vsv nuôi tổng cấy, họp chúng tôisinh nhận mẫu thấy đấtlượng khảo acid sát béo diện vsv ở3.936, nội Khi khảo sát hoạt tính lipase vsv ởcấy mẫu đất Bến Tre, Hình 9: nữa, Sự chuyển màu bề mặt môỉ trường nuôỉ vsv mẫu đất ởcả6.0 8 0.05M CT-CA(-)+(4) 12.6 BT-KP3-(lb)(+) 23.3 Bảng 10: Thể tích NaOH 0,05 dùng chuẩn độ mẫu nuôi cấy với cácdụng loại3.693, dầu nhận vsv nuôi cấy môi trường có bổ sung dầu chưa sử thì9.7 hoạt bào mẫu vàthấy ngoại đất bào nhiễm (Bảng dầu 8, sinh 9,10,11) raMcũng cao so với vsv mẫu đất đối chứng Cần Thơ có không có10.7 sựđể diện dầu với chất thị heliantin BT-MC(-)+(lb) 1.554,0 - 4.8bổ saudầu; 60dầu phút Bảng cho 72 mẫu cấy, vsv đạt mật số cao đómẩu thời CT-CA(l) (+) 7.8 9.3 BT-KP3-(lb)(-) 8.4chọn độ lipase vsv thấy trongsaucác nhiễm sodovới nuôi cấy không đĩanuôi ỉ:đất không đĩacao 2: có dầu BT-MC(-)+(2) 569,8 5.6 4.7 BT-KP2(2)(+) 24.6 điểm nuôi cấy 72lỉpase đểdo ly trích lipase thô III.CT-CA(l) Sự chuyển hóa lipid vói xúc tác lỉpase sung dầu ởHoạt vsv hai thời điểm khảo sát Tuy nhiên, đốinuôi với mẫu đất đối chứng chưa Bảng 7:(-) độ vsv tạo (U/ ml) cấy môi trường có19.1 Mẩ Thể tích NaOH 0.05 M (ml) u Mẩu CT-CA(2) 7.2 10.6 BT-KP2(2)(-) 8.0cấy không 5.5bổ dầu dường không dầu sau 24trong 48 môi nhiễm dầu,(+) độngoặc: lipase nhưtích caoNaOH trường nuôi 0.05M (ml) Các sổhoạt loại bổThể sung vào to 30 60 dầu 90 12 môi trường 15 18 240 300 360 II.5Do Enzyme vsv sinh tham gia trình phân hủy0sát lỉpỉd CT-CA(2) (-) 6.8 4.8 BT-KP3(2)(+) 11.0 10.3 thời gian nghiên cứu có hạn, khảo hoạt tính lipase ngoại 0 sung dầu trường nuôi dầu ởdịch hai thời điểm khảo ngoạilytrừ Tế bào ly tâm Mầusát không tâmmẫu (+),so (-):với có, môi không bổnghiền sung dầucấy có Dung (lb) 3.7 5.7 11.4 3.8 dung 1.7 3.7 3.5 để tiến 3.9hành thí 5.1 nghiệm 4.0 CT-CA(4) (+) ly tâm 8.0sauBT-KP3(2)(-) 7.7 5.5 Hoạt5.1 bào cách thu dịch ly tâm tính BT-MC(2) Điều có cạnh tranh acid béo tự môi trường Hoạt độ (U/ ml) Dầu chưa sử dụng Hoạt độ (U/ ml) MT: môi trường nuôi cấy vsv Chúng khảo sát lipase vsv sinh CT-CA(lb)(+) tham gia trình phân dầu nội 8.5 (1)CT-CA(4) 1.2 2.2 0.6 1.24.8 1.4 1.3quá 1.3thủy 1.9 9.3 1.8 (-) hoạt lipaseđộng chấtphân dầu5.6 tương ứng thời gian thủy phân 30 phút được1.6 định lượng thủy dầu chưa sử dụng (dầu dừa dầu olive) 24 48 24 48vsv giờcó to 60 phút to 60 phút to 60 phút Bảng cho thấy chuẩn độ môi trường có bổ sung loại dầu không bào hay ngoại bào theogiờ phương pháp Salleh.CT-CA(lb)(-) giờ CT-ĐH(l) (+) 9.5 10.7 7.2 6.4 (2)MT+(1) 1.7 0.05bào 1.4 1.5với NaOH 1.5 1.5 2.0 4,3 2.1 1.7 dung 1.4 dịch NaOH M.vsv để1.4 6,7 5,0 ứng MT 4,3 phospholipid phản màng VSV:tếMT(+1), MT(+4) đối 2.4 với dầu 1.9 sử dụng 1.8 MT(+la), (1) diện 0.5 1.0 MT(+2), 1.9 CT-ĐH(l) (-) 8.0 5.2 CT-CA(2)(+) 10.8 8.5 (4)MT+(2) 1.2 3.6 2.0 2.0ở5,5 2.2 điểm2.1 1.9chúng 2.3 3.0 4,9 MT+(la) 8,3 2.6 5,3 Khi so sánh hoạt độ lipase hai thời khảo sát, nhận thấy hoạt độ MT(+la), MT(+2) dầu chưa sử dụng, nhận thấy lượng NaOH dùng Bảng 8: Thể 0,05 M7.2 dùng với (4) 1.2tích NaOH 1.8 2.8để chuẩn độ 3.0các mẫu nuôi 2.8 cấy 2.9loại CT-ĐHC(2)(+) 7.8 CT-CA(2)(-) 7.7 5.9 Bảng 12: Thể tích NaOH 0.05 M dùng để chuẩn độ loại dầu hoạt độ MT+(4) 6,2 kể 5,2đất MT+(lb) 7,6 lipase sinh từ vsv ừong Điều mẫu thu Bến Tre không sau 24có giờsựgần caocủa so8,0với dầu sau 30 ởphút chuẩn không đáng chứng diện (lb) độ thấp3.0 4.4bào 4.8 4.8 10.4 5.2 9.5vsv lipase5.7 ngoại sautỏ30khi phút CT-ĐHC(2)(-) 7.4 3.6 BT-MC(lb)(+) 48 CT-CA(-) giờ, ngoại trừ BT-MC(2) 1.476 (Bảng 407,2 6).acid MT+(2) 7,2 7,9 Bảng 14: Họat độ lỉpase ngoại bàora theocấy thời gian 10: Sựmẫu chuyển màu bề mặt môi trường nuôi mẫu đất có tổng họp lipase béo tạo (2)khảHình 0.5 2.1 2.1 vsv 2.1các7.3 2.5ở 5.9 CT-TVH(4)(+) ,124.6 2.7 18.3 BT-MC(lbX-) CT-CA(-)+(l) BT-KP2(la)(+) 5.180,0 5.853,4 Bắn Tre khỉ cỗ3.833,2 không cỗhành diện củađể dầuchứng với chất chỉliệu thị helỉantìn Ngoài ra, tiến1.036, thí nghiệm minh acid CT-TVH(4)(-) 8.0 6.9 BT-MC(2)(+) 9.0 béo 15.3 Mẩu Thể tích NaOH 0.05 M (ml) Qua kết quả4.972,8 nghiên cứu hoạt độ enzyme, nhận thấy, nhìn356,3 chung CT-CA(-)+(2) 414,4 BT-KP2(la)(-) đĩa ỉ: không dầu; đĩa 2:cỏ dầu thân vsvMầu có ảnh đến kết chuẩn độ hay Thật vậy,lykết hoạt Tếhưởng bào nghiền Dung dịch lyNaOH tâm Mẩu không tâm Thể tích NaOH 0,05 BT-MC(2)(-) M (ml) Tổng độ763,5 6.1 lipase 4.35 Bảng 11: Hoạt độ enzyme phản ứng thủy phân sau 60 phút Mẩu Họat độ lipase (U.ml ) không lipase vsv mẫu đất đãđối nhiễm dầuởtổng họp (pmol) tính cao môi sau 880,6 24 CT-CA(-)+(4) 3.315,2 BT-KP3-(lb)(+) 8.132,6 nuôi cấy vsv từ mẫu chứng Thơnên có Bếnhoạt Tre trường 3.3 t„60 đất2.849,0 phút cần to 30 90 30BT-MC(-) 120 150 180 240 7.9 30 360 nuôi cấy Sự chuyển màu với heliantin môi trường nuôi cấy có bổ sung dầu so không bổ sung dầu (CT-CA(-) 2.227,4 BT-MC(-)) cho thấy lượng NaOH dùng để 30 chuẩn254,5 độvới CT-CA(l) (+) 569,8 BT-KP3-(lb)(-) 2.056,9 13.5 30 phút 30độ phút Mầu (pmol) (1) 1.2 2.2 226.25 (lb) to 452 22 to BT-MC(-)+(la) 0.0 Hoạt 0.0 45 to 316 407phút12.9 67 II.4.các Mât số vsv 661,7 dĩa không dầu 6và 10) tỏBT-MC(-)+(lb) vsv thủy phân tạo béo 5(Hình Điều dầu 80.3 acid 9tổng môi trường vsv tương đối chứng cao nàyđãcho thấy thân 10.6 vsv 13.2 CT-CA(l) (-)có 203,6 BT-KP2(2)(+) 9.013,2 5.801,6 (1) 1.6 2.2 1.9 2.2 ly (lb) 3.7 5.7 452.50 Tế nghiền tâm 158 Mẩu không ly tâm (1) 226 0.0bào 45 Dung 22.dịch 22 90 0.4 135 Đồng thờilượng chênh lệch vềcho sựMật thay đổi màu mẫu dầu qua sử dụng mẫu dầu chưa Bảng 8: số vsv theo thòi gian (OD 600 nm) BT-MC(-)+(2) 8.3 6.2 3 6 họp lipase cần hoạt động sống tế bào vsv, nhiên phần CT-CA(2)(1) BT-KP2(2)(-) 1.883 158 2.7 610,8 (4) 1.0 2.4 (2) 1.4 1.7 67.87 0.00 (2) 0(+) 67.9 1.191 0.01.0 2.641,8 0.113.122.9 22 22 3.6 113.12 22 135 67 ,4 vàvới ,3 lượng sử dụng (Hình 10, liên đĩa 2kết Hình 2) 6có lẽ do6 dầu qua dụng acid béo đĩanối sử 84.7thì thành lớn NaOH các9,254,5 cầu ester phân tử phospholipid, phần CT-CA(2) (-) 1.272 BT-KP3(2)(+) 1.968 1.243, (lb) 3.2 4.3 5.4 5.7 (4) 1.2 135.75 3.6 45.25 543.00 22.62 (4) 543 181 181 226 203 158 248 316 5.8 407 ,5 ,4 nhiều dầu chưa sử dụng sổ dấu ngoặc: loại dầu cấu tạo màng tế bào vsv 0 Thời gian (giờ) 0.3 2.698,8 0.3 1.450, CT-CA(4) (+) BT-KP3(2)(-)2.4 90.50 1.51.730 407,2 (2) 1.7 (lb) 135.751.6 90.50 Ket Bảng 12 cho thấy enzyme ngoại bào vsv tổng họp có khả phân Định lượng acid sinh thủy phân dầu từ lỉpase vsv ,6 (+): cóthời bổ điểm sung dầuđầu Đối với vsv đất36nhiễm dầu48đã sử dụng thu cần 12trong 24thỉmẫu 60 72 Thơ, chúng 84 to: bắt nghiệm CT-CA(4) (-) 661,7 254,5 CT-CA(lb)(+) 880,6 259,0 (2) 497.75 0.00 90.50 Từ số liệu Bảng 14, có đồ thị biểu diễn hoạt độ lipase hủy dầu Trên cơbổ sởsung đó, tiếp tục lipase khảo sát họat thủy phân lipase ngoại (-):Bảng không nhận thấy sau 24 nuôi cấy, hoạt độ cáctính mẫu cósau không dầu 9: Hoạt độdầu enzyme phảntrong ứng thủy phân 30 phút.bổ sung CT-ĐH(1)(+) 0.28 0.438 0.380 0.538 0.830 0.869 0.680 CT-ĐH(l) (+) 1.450 2.952,6 CT-CA(lbX-) 1.476 1.068, ngoại bào theo thời gian ứng với mẫu dầu khảo sát sau: bào điểm 30, vsv 60, 90,kể120, 150,mẫu 180,đất 240, 300bổvàsung 360 dầu phút chất tonuôi ,4biệt ,1 4.với dầu MT: môi trường dường thời không khác đáng trừ0.406 Tuycơnhiên, sau CT-ĐH(IX-) 0.27 0.227 0.319 0.446 0.668 0.480 Bảng 6: Lượng lỉpase sình mẫu sau 24 48 CT-ĐH(l) (-) 1.883 458,1 CT-CA(2)(+) 1.864 310,8 tương ứng cách dùng dịch NaOH đểđất định với phenolphthalein 2lipase Trong thời giandodung nuôi mẫu thulượng ởcấy tỉnh Thơ ,3 ,8 48giờ, hoạt độcùng vsv cấy sinhvsv trong0.05 môiM trường nuôi có cần dầu cao hơnBến so CT-TVH(4)(+) 0.181.502 0.406NaOH 0.277 0.487 0.830 0.841 0.850 Mầu Từ kết chuẩn Hoạt độ định (pmol) CT-ĐHC(2)(+) 880,6 CT-CA(2)(-) 1.730 814,4 độ 0.05 M để xác hoạt độ lipase thời VNaOH0.05M(ml) VNaOH0.05M(ml) làm thị Dầu sửtôi dụng dụngdùng để,6 chuẩn độ Lượng Tre, chúng nhận7cấy thấy có khác dầu biệt(Bảng vềDầu thể6).chưa tích sử NaOH với môi trường nuôi không bổ sung ,2 CT-TVH(4)(-) 0.18 0.217 0.435 0.675 0.771 Tế bào nghiền Dung dịch thấy ly tâm Mẩu không tâm điểm nuôi cấy sau 30 24 phút 60 48 phút, 0.412 nhận mẫu khảoly48 sát, hoạt CT-ĐHC(2)(-) 1.577 738,1 BT-MC(lb)(+) 1.450 777,0 giờ0.323 24 giờ đển,9độ NaOH Khi 0.05M dùnghoạt chuẩn độ cácở môi trường nuôi vsvcấycócác dầumẩu cao so với so sánh lipase hai thời điểm nuôi vsv thu đất cần ,40.769 BT-KP3(lb)(+) 0.35 0.334 0.479 MT+(1) 6.70.382 5.00.015 MT 3.4 dung22.625 3.4 ly (1) 135.750 độ enzyme mẫu không ly tâm thấp hon tổng0.251 hoạt độ 67.875 enzyme1.527 dịch CT-TVH(4)(+) 9.531,2 6.785,8 BT-MC(lbX-) 814,4 thấy: môi nuôinhận vsv không quảsauBảng cho chung,cóvsv Thơ, trường đốibổvớisung đất dầu nhiễmKết dầu, 24 giờ, nhìnthấy, chung enzyme hoạtở ,0nhìn MT+(2) 4.9này 5.5 MT+(la) 8.3 vsv 67.875 5.3 BT-KP3(lb)(-) 0.19 0.241 0.285 0.452 0.691 0.701 0.532 (4) 0.000 158.375 tâm tế bào nghiền Điều chứng tỏ lipase đuợc tổng họp tế bào có lẽ CT-TVH(4)(-) 1.883 1.323, BT-MC(2)(+) 932,4 3.833,2đã mẫu đất nhiễm dầu tạo acid béo cao sau 24 nuôi cấy so với sau 48 giờ, độ cao trừ mẫu CTĐH(1) Tuy nhiên, mẫu đất đối chứng có hoạt độ cao sau 488.0 ,3 6.2 5.2 MT+(lb) MT+(4) 7.6 tiết phần môi trường nuôi cấy để tham gia thủy phân dầu môi trường, (lb) 248.875 67.875 248.875 BT-KP2(2)(+) 0.05 0.209 0.052 0.189 0.352 0.614 0.461 BT-MC(2)(-) 916,2 ngoại trừCT-CA(4) mẩu CT-DH(l), khác biệt thể sai số trình tiến hành thí 25,5 trừ mẫu (Bảng 6) CT-CA(-) 7.2 5.1cóMT+(2) 7.2 - 7.9 (2) 0.000BT-MC(-) 181.000 45.250 1.832 CT-CA(-)+(l) 14.1 7.0 BT-KP2(la)(+) 16.6 ,418.3 Trang 5951 58 57 56 55 54 53 52 Trang LV TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ Bảngquả 19: Hàm lượng lỉpase ngoại thôLUẬN thu mẫu Trên sở điểm mà lipase ngoại bào có hoạt tínhtương cao, chúng dùng Kết thời cho thấy lượng lipase ngoại bào thu đối caotôivàthử hoạt độ Chương 5:bào KẾT VÀ ĐÈ NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO 0O0— Bảng 17 Giáso trịvới Rrcủa vếtđểcứu chấm củavừa dầu ởthô các(mg/ml) thời điểm khảo sát chúng (TLC) nghiên trước (Bảng 19 20) Tuy nhiên lượng phương pháp sắc:cao ký mỏng định tính vàvàbán định lượng sản Mầu lipase 3.3.1.1.1 Kết luận lipase tạo dạng thô, đóthời hàmđiểm lượng cao có Ánh thể có sựLêtham gia phẩm phân thành ởdocác Dầu Nguyễn aNguyễn = 3.7 (cm) (1)thủy Lượng, Cao Tiênhọp & Qua kết quảĐức nghiên cứu khảCường, phân hủy dầu đãTuyết, sử dụng vàThị chưaThủy sử dụng CT-ĐH(l) 20 240 chất khác lipase to, acid dầu Công 30 p 120 pxuất pĐại Học 300 Quốc p 360 Tp p Ngọc chúng Gia vsv ởHuỳnh mẫu đấtOanh., 2004 chưa nhiễm Nghệ dầu Enzym cần ThơNhà Bến Tre, nhận thấy hệ CT-TVH(4) 29 olei Hồ Chícác Minh vsv cmẫu đất khảo sát có khả thủy phân loại dầu Tuy nhiên, hệ BT-P7-KP2(2) 24 b(cm) 2,20 2,40 2,21 2,85 2,30 1,80 (2)trong Nguyễn Hữuđất Chấn, 1983 Enzym xúc tác sinh học Nhà xuất Y hệ Học vsv 1,80 mẫu nhiễm dầu cóvà khả thủy phân dầu caobản vsv 2,15 BT-P7-KP3(lb) /ỉ/cm) 0,49 0,65 0,60 thời chúng 0,7716 0,62 xác 0,49 đối chứng 0,60 chưa Đồng định được0,58 thời (3)mẫuLêđất Xuân Phương, 2001.nhiễm Vi sinhdầu công nghiệp Nhà xuấttôi bảncũng xây dựng gian vsv mẫu đất nuôi cấy có bổ sung dầu có mật số cao 72 nuôi cấy (4) Nguyễn Đức Lượng, 1996 Công Nghệ Vi sinh vật Nhà xuất Đại Học Quốc Bảng 18 : Giá trị Rf vết chấm dầu thời điểm khảo sát IV Thử hoạt enzyme thô Trong mẫu đất sát, nhìnbào chung, vsv cácchưa mẫu sử đấtdụng nhiễm Hình 11:tính Họat củakhảo lipase ngoại theolipase thời gian đối vói dầu Gia Tp Hồ ChíđộMinh dầu tổng họp nênhoạt có hoạt cao sau 24 nuôi cấy KetNguyễn đo tính tính enzyme thô (5) Văn Mùi, 2001 Thực hành Hóa Sinh Học Nhà xuất Đại Học Quốc Dầu a = 3.7 (cm) Các vsv mẫu đất khảo sát nuôi môi trường có Trong đó: Gia Hà Nội dầu to 30 p 240 p 300 p 360 p diện vcủa dầu có khả tổng họp lipase Lipase phần diện tế : Thể tích NaOH thời gian ban đầu (ml) Hình 14: Kết phân tích sắc kýThị bảnThu, mỏng mẫu nuôi cấyBùi từ dầu sử&dụng (6) Lê Ngọc Tú, La Văn Chứ, Đặng Nguyễn Thị Thịnh, Đức Hợi Lê b(cm) 1,70 1,70 1,75 1,90 1,80 1,80 bào, phần tiết ngoài(dầu môi 1trường nuôi cấyB:tham gia vào trình thủy phân 4) A: dầul, dầu Doãn Diên, 2004 Sinh 0,46 Công Nghiệp Nhà xuất Khoa Học0,49 Và Kỹ Thuật Hà Ry(cm) 0,46Hóa 0,47 0,51 0,49 Vt: Thể tích NaOH thời gianngoại khảobào sát phản ứng thủy phân sau 30 phút dầu 1: Hoạt độ thủy phân lipase xác định 30 phút dầu (Hình A), dầu (Hình B), 2: to, 3: 30 phút, 4: 240 phút, 5: 300phút, 6: 360 Nội phút Hàm lượng lipase thô ngoại bào thu 20, 29, 24 16 mg/ml tương ứng với (7) W.H Ko, I.T 20: Wang, P.J 2005 thô A simple method for phút detection of lipolytic Bảng Hoạt độAnn, lipase ngoại bào sau 30 A B hoạt Dựa độ 56.7, 94,5, 65.0 94,5 u/ml nuôi cấy vsv môi trường phân mẫu vào kết tính toán giá trị Ry thời điểm khảo sát hoạt độngcóthủy microorganisms in soils Soil Bioỉogy & Bỉochemỉstry, 37, 597- 599 dầulipase 1, 4, 2ngoại lb,bào theo thứ tự.4 Rf Mầu Thể tích 0.05M độ sátlệch Bảng 15 : Giá củadầu các1,vết dầu 1(ml) nhận thời đối vớitrị mẫu lb,chấm 2NaOH 4, chúng thấyđiểm cóHoạt sựkhảo chênh (8)Hình Xiao Yan Wu, Sanna & Yu-Yen Linko, 1996 An investigation of crude lipase for 13: Kết ký mỏng từ dầu chưa sửkhẳng dụng giá trị R/ thờiphân điểm tích thủysắc phân so với vết mẫu chấmnuôi mẫucấy chuẩn, điều 3.3.1.1.2 Đề nghị to transeteriíication.30Enzyme phút and Microbỉal (U.ml ) hydrolysis, eteriíication, and Technology, (dầu lb 2) định lầnlập nữathuần có sản xảy tác dụng củatrên lipase a = 3.6 (cm) Phân cácphẩm dòngthủy vsv phân có khả thủy phân lipid, ngoại sở bào trình (19), 226231 A: dầulb, 1:dầu dầu lb, vsv 2: to 3:0.9 30phút, 6: 300phút, 7: T30 h4:180phút, pilipase g idầu a n (sẽ p240 hthuận ú5: t ) p240phút, CT-ĐH(l) 1.8 56.7 môisát trường nuôi cóvà bổ sung loại 1cấy to, 360360phút p khảo tổng họp, tiết hoạt độcác lợi hơn.300 p (9) C.N.A Razak, A.B Salleh, R Musani, M.Y Samad & M Basri, 1997 B: dầuTrên 1:cơ Acid oleic, :quả dầunghiên 2, 4: trên, 30 phút, 5: 2.1 120 phút, 6: 240 phút,enzyme 7: 300 Some phút, CT-TVH(4) 0.63: t0 94.5 kết tôi2,150 tiến hành ly trích ngoại b (cm)Tiếp 1,600 2,200 1,800 1,900 2,000 tục sở khảo sát hoạt tính củacứu lipase nộichứng bào mối tương quan chúng với characteristics of from thermophilic íungi isolated from palm oil mill effluent 8: 360phút Hìnhcác 12:mẫu Họatđất độ lỉpase ngoại bào môi theo thời gian với sử BT-P7-KP2(2) 0.5 1.80,597 65.0 bào từ vsv trong trường có đối bổ0,528 sungdầu cácđãloại dầu R^cm) 0,444 0,611 0,500 0,556 lipase ngoại bào trìnhđược thủy nuôi phân cấy lipid Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, (3), 153-159 (e-a) BT-P7-KP3(lb) 2.2 94.5 dụng Dầu 1(*—»), dầu 40.7 Khảo sát yếu tố nhiệt độ, pH, hoạt độ nước, ảnh hưởng lên trình nuôi Naci16 Degerli & M Alivết Puriíication IV (10)Bảng Chế phẩm thô từAkapinar, vsv : Giá trịenzyme Rrcủa chấm của2002 dầu lbPartial thòi điểm khảoofsátIntestinal cấy vsv ly trích lipase Từ Hình 11Lipase Hình 12,Cyprinion macrostomus nhận thấy: với dầu chưa dụng Triglyceride from Heckel, and100 Effect of pHdich on Theo kết nghiên cứu V.M.G và(cm) csv [11]chất thì1843 mlsửdung aLima = 3.65 Từng bước hoànthô thiện qui(26), trìnhđiểm: nuôi143 cấy120, vsv 240, ly300 trích lipase để thu sản IV họat Chế phẩm enzyme lipase ngoại bào caoJ.dần ởBiol thời 30, 360 phút đốiđược với dầu Enzyme Activity Turk 133trích tính (đã thẩm thu 1.36 mg hoạt (lb) Dầu lbtích qua to dung30dịch phútđệm) 180chỉ phút 240 phút 300ml1 phútprotein 360 phút phẩm lipase tinh 2tính và80 30, 180, 240, 300 360 dầu lb loại Với cơquả dầucứu tiếp sử tâm dụng Các mẫu vsv sau nuôiphút cấy 72 giờ, ly tâm bỏ tếchất bào,dịch sau ly u ml1 trích từ 1,8 chủng Bacillus megaterium Kết nghiên theo b (cm) 1,8 1,9 2,100 1,850 1,900 1.75được Tiếp(NH tục có thực chuyển hóa lipid với chế30, phẩm thu360 lipase ngoại hoạt tính các00 thời điểm: 240,lipase 300 phút cho hai loại 00 50cao kết tủa để thu sảnởphẩm lipase 4)2S04 ôngR/(cm) [12] chobào thấy 20 trích thôthô (sau tích) có hàm lượng 0,4 0,5ml dịch0,5 0,575 0,507thẩm 0,521 0.479 dầu vàlà4.0.3 mg ml"1 93 hoạt 07độ 39.3 21 u ml1 trích từ Penicillium aurantiogriseum protein Trang 66 63 62 61 60 64 65 [...]... trích lipase Từ Hình 11Lipase và Hình 12,Cyprinion chúng tôi macrostomus nhận thấy: với cơ là dầu chưa dụng thì Triglyceride from Heckel, and100 Effect of pHdich on Theo kết quả nghiên cứu của V.M.G và( cm) csv [11]chất thì1843 trong mlsửdung aLima = 3.65 Từng bước hoànthô thiện qui(26), trìnhđiểm: nuôi1 43 cấy1 20, vsv 240, và ly3 00 trích lipase để thu sản IV họat 1 Chế phẩm enzyme lipase ngoại bào caoJ.dần... đốiđược với dầu Enzyme Activity Turk 13 3trích tính (đã được thẩm thu được 1.36 và mg và hoạt (lb) Dầu lbtích qua to dung30dịch phútđệm) 180chỉ phút 240 phút 300ml1 phútprotein 360 phút phẩm lipase tinh sạch hơn 2tính và8 0 30, 180, 240, 300 và 360 đối với dầu lb loại Với cơquả là dầucứu đã tiếp sử tâm dụng thì Các mẫu vsv sau nuôiphút cấy 72 giờ, ly tâm bỏ tếchất bào,dịch sau ly u ml1 được trích từ 1,8... phân cấy lipid Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, (3), 153-159 (e-a) BT-P7-KP3(lb) 2.2 94.5 trên dụng Dầu 1(*—»), dầu 40.7 Khảo sát các yếu tố nhiệt độ, pH, hoạt độ của nước, ảnh hưởng lên quá trình nuôi Naci16 Degerli & M các Alivết Puriíication IV (10)Bảng Chế phẩm thô từAkapinar, vsv : Giá tr enzyme Rrcủa chấm của2002 dầu lbPartial ở các thòi điểm khảoofsátIntestinal cấy vsv và ly trích. .. tác sinh học Nhà xuất Y hệ Học vsv các 1,80 mẫu đã nhiễm dầu c và khả năng thủy phân dầu caobản hơn vsv 2,15 trong BT-P7-KP3(lb) /ỉ/cm) 0,49 0,65 0,60 thời chúng 0,7716 0,62 xác 0,49 các đối chứng 0,60 chưa Đồng định được0,58 thời (3)mẫuLêđất Xuân Phương, 2001.nhiễm Vi sinhdầu công nghiệp Nhà xuấttôi bảncũng xây dựng gian vsv trong các mẫu đất nuôi cấy có bổ sung dầu có mật số cao ở 72 giờ nuôi cấy. .. Kết nghiên theo của b (cm) 1,8 khi 1,9 2,100 1,850 1,900 1.75được Tiếp(NH tục có thực hiện chuyển hóa lipid với chế30, phẩm thu360 được lipase ngoại hoạt tính các00 thời điểm: 240,lipase 300 và phút cho cả hai loại 00 50cao kết tủa bằng để thu sảnởphẩm lipase 4)2S04 ôngR/(cm) [12] chobào thấy trong 20 trích thôthô (sau khi được tích) có hàm lượng 0,4 0,5ml dịch0,5 0,575 0,507thẩm 0,521 0.479 dầu 1 vàlà4.0.3... Chứ, Đặng Nguyễn Thị Thịnh, Đức Hợi Lê b(cm) 1,70 1,70 1,75 1,90 1,80 1,80 bào, một phần được tiết ra ngoài(dầu môi 1trường nuôi cấyB:tham gia vào quá trình thủy phân và 4) A: dầul, dầu 4 Doãn Diên, 2004 Sinh 0,46 Công Nghiệp Nhà xuất bản Khoa Học0,49 Và Kỹ Thuật Hà Ry(cm) 0,4 6Hóa 0,47 0,51 0,49 Vt: Thể tích NaOH ở thời gianngoại khảobào sát cũng phản ứng thủy phân sau trong 30 phút dầu 1: Hoạt độ thủy... 1.8 56.7 các môisát trường nuôi c và bổ sung loại trên 1cấy to, 360360phút p khảo sự tổng họp, bài tiết hoạt độcác của lợi hơn.300 p (9) C.N.A Razak, A.B Salleh, R Musani, M.Y Samad & M Basri, 1997 B: dầuTrên 2 1:cơ Acid oleic, 2 :quả dầunghiên 2, 4: trên, 30 phút, 5: 2.1 120 phút, 6: 240 phút ,enzyme 7: 300 Some phút, CT-TVH(4) 0.63: t0 94.5 các kết tôi2,150 tiến hành ly trích ngoại b (cm)Tiếp 1,600... tôi thời cho thấy lượng lipase ngoại bào thu được đối caotôivàthử hoạt độ Chương 5:bào KẾT VÀ ĐÈ NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO 0O0— Bảng 17 Giáso trịvới Rrcủa các vếtđ cứu chấm củavừa dầu 2 ởthô các(mg/ml) thời điểm khảo sát các của chúng cũng các (TLC) nghiên trước đây (Bảng 19 20) Tuy nhiên lượng phương pháp sắc:cao ký bản mỏng có thể định tính vàvàbán định lượng sản Mầu lipase 3.3.1.1.1 Kết luận lipase... Nghệ Vi sinh vật Nhà xuất bản Đại Học Quốc Bảng 18 : Giá trị Rf của các vết chấm của dầu 4 ở các thời điểm khảo sát IV 2 Thử hoạt của enzyme thô Trong các mẫu đất sát, nhìnbào chung, do vsv cácchưa mẫu sử đấtdụng đã nhiễm Hình 11:tính Họat củakhảo lipase ngoại theolipase thời gian đối trong vói dầu Gia Tp Hồ ChíđộMinh dầu tổng họp nênhoạt có hoạt cao sau 24 giờ nuôi cấy KetNguyễn quả đo tính tính của enzyme. .. 300phút, 6: 360 Nội phút Hàm lượng lipase thô ngoại bào thu được là 20, 29, 24 và 16 mg/ml tương ứng với (7) W.H Ko, I.T 20: Wang, P.J 2005 thô A simple method for phút detection of lipolytic Bảng Hoạt độAnn, của lipase ngoại bào sau 30 A B hoạt Dựa độ 56.7, 94,5, 65.0 và 94,5 u/ml khi nuôi cấy vsv trong môi trường các phân mẫu vào kết quả tính toán giá trị Ry ở các thời điểm khảo sát hoạt độngcóthủy microorganisms ... nhiễm sodovới nuôi cấy không đĩanuôi ỉ:đất không đĩacao 2: có dầu BT-MC(-)+(2) 569,8 5.6 4.7 BT-KP2(2)(+) 24.6 điểm nuôi cấy 72lỉpase đểdo ly trích lipase thô III.CT-CA(l) Sự chuyển hóa lipid vói... Phương, 2001.nhiễm Vi sinhdầu công nghiệp Nhà xuấttôi bảncũng xây dựng gian vsv mẫu đất nuôi cấy có bổ sung dầu có mật số cao 72 nuôi cấy (4) Nguyễn Đức Lượng, 1996 Công Nghệ Vi sinh vật Nhà xuất... 8.132,6 nuôi cấy vsv từ mẫu chứng Thơnên có Bếnhoạt Tre trường 3.3 t„60 đất2.849,0 phút cần to 30 90 30BT-MC(-) 120 150 180 240 7.9 30 360 nuôi cấy Sự chuyển màu với heliantin môi trường nuôi cấy