Cho tới nay, trong các tài liệu trong nước cũng như nước ngoài chúng tôi tham khảo được, chưa có phương pháp chuẩn nào được thiết lập để phát hiện chất màu bị cấm này trong đối tượng mỹ
Trang 1Tạp chí Nghiên cứu dược vả Thông tin thuốc I Số 1/2010
Ý KIÊN ĐÊ XUẤT
- Bộ y tẽ cần nghiên cứu định mức DSĐH
theo lĩnh vực dược
- Các địa phương cần có chính sách thu hút
nhân lực dược, nghiên cứu xác định nhu cầu
theo loại hình dược và cơ chế phối hợp với các cơ
sở đào tạo trong việc tăng cường nhân lực dược
tại địa phương
- Các Trường Đại học Dược và Đại học Y
DƯỢC cần hợp tác đào tạo đáp ứng nhu cầu của
các cơ sở y tẽ, đào tạo theo nhiều hình thức: đào
tạo định hướng chuyên ngành, đào tạo chuyên
khoa, đào tạo lại, duy trì các loại hình đào tạo
hiện nay (đào tạo chính quy, liên thông, văn
bằng hái) và mở mã ngành đào tạo cao đẳng
dược cho tuyến cơ sở, đặc biệt tuyến huyện và
một số tỉnh vùng sâu, vùng xa, duy trì chỉ tiêu
đào tạo dược sĩ đại học chính quy địa chỉ Nghiên
cứu xây dựng chương trình đào tạo phù hợp thực
tế, đặc biệt là các lĩnh vực được DSĐH lựa chọn
nhiều sau tốt nghiệp
*/ Tăng cường đội ngũ cán bộ và cơ sở vật
chất cho các Trường có đào tạo DSĐH để thực hiện nhiệm vụ tăng chỉ tiêu đào tạo DSĐH
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Chính phủ (2001); Quyết định của thủ tướng Chính phủ về việc phê duyệt chiến lược chăm sóc và bảo vệ sức khỏe nhân dân giai đoạn 2001-2010
2 Vụ KHĐT-BYT (10/2009); Hội thảo tăng
cường công tác đào tạo nhân lực và nghiên cứu khoa học công nghệ dược
3 Thủ tướng chính phủ (2007), "Đào tạo
nhân lực y tế cho vùng khó khăn, vùng núi của các tỉnh thuộc miền Bắc và miên Trung, vùng đồng bằng sông cửu Long và vùng Tây Nguyên theo chế độ cử tuyểri',QĐ số 1544/2007/QĐ-TTG ngày
14/11/2007
4 Armstrong, Micheal (2006), A handbook
o f human resource management practice,
Kogan page, 10th édition, London, pp 1-8
5 Motoko (2008); Pharmacy Education in Asia
XÂY DựNG PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN CHẤT MÀU BỊ CÂM s ử DỤNG
PIGMENT RED 53 TRONG SON MÔI VÀ PHẤN MÁ
Thái Nguyễn Hùng Thú1, H oàng Thanh Tâm2,
Lê Thị Hường Hoa2, Nguyễn Thị Thủy Nguyên1
1 Trường Đ ại học D ược Hà Nội,
2 Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương
Summary
A method using liquid/liquid extraction for sample treatment reversed-phase HPLC with detection VIS for sample analysis was developed for a banned colorant Pigment red 53, which is illegally pre sented in lipstick and nail polish The presence o f Pigment red 53 is identified by comparing retention time and UV-VIS absorption spectrum o f any suspected peak in the chromatogram o f sample prepara tion to that o f the peak o f Pigment red 53 in the chromatogram o f reference preparation The entire method was validated in terons o f specificity, linear range, LOD, LOQ, and validation results proved that this method was suitable for the determination o f Pigment red 53 illegally presented in lipsticks and makeup powders, and having good accuracy The validated method was used to test 20 cosmetic products purchased in the market, 6 o f them were found to contain Pigment red 53.
1 Đ ă tv ấ n đ ê thống kiểm nghiệm thuốc và mỹ phẩm Trong
đó, quan trọng nhất là việc kiểm soát sự có mặt Kiêm tra, giám sát chất lượng mỹ phậm là cýa cjjc c|1g); bị cgm^ j-jQgc bị gjới hạn về hàm một trong những nhiệm vụ quan trọng của hệ lượng được phép sử dụng nhằm đảm bảo sự an
Trang 2Tạp chi Nghiên cứu dược và Thông tin thuốc I Số 1/2010
toàn cho người sử dụng Pigment red 53 là một
chất màu có mặt trong danh sách các chất bị
cấm sử dụng trong mỹ phẩm theo quy định của
Hiệp định hệ thống hòa hợp ASEAN trong quản lý
mỹ phẩm, bản bố sung mới nhất năm 2007 (Phụ
lục II, phần 1) [1]
Cho tới nay, trong các tài liệu trong nước
cũng như nước ngoài chúng tôi tham khảo được,
chưa có phương pháp chuẩn nào được thiết lập
để phát hiện chất màu bị cấm này trong đối tượng mỹ phẩm, vì vậy, chúng tôi tiến hành nghiên cứu này nhằm xây dựng một quy trình phát hiện Pigment red 53 (PR53) trong son môi
và phấn má đê’ góp phần nâng cao nắng lực của công tác kiểm tra chãt lượng mỹ phẩm tại Việt Nam và tiến tới hòa hợp với các nước ASEAN trong quản lý mỹ phẩm
Tên khoa học: barium bis [2
azo] toluene - 4 - sulphonate]
Mã số màu CI: 15585
chloro - 5 - [(hydroxy -1- naphthy!)
CH3
2.Thực nghiệm
2.1 Hóa chất, thiết b ị
* Hóa chất:
- Chất chuẩn làm việc Pigment red 53 (Hàn
Quốc)
- Methanol tinh khiết phân tích (Merck)
- Dimethylsulfoxid (Merck)
- Tetrahydrofuran (Merck)
* Thiết bị, dụng cụ:
- Máy sắc ký lỏng Shimadzu:
+Bơm: Model LC- lOAtvp
+Detector mảng diod: Model SPD-M10Avp
+Moduleđiều khiển: Model SCL-10Avp
+BỘ loại khí (Degasser): DGU- 14A
+BỘ trộn dung môi: FCV- lOAIvp
- Máy đo pH 691 Metrohm
- Bộ lọc dung môi, lọc mẫu với màng lọc 0,45
ụm
- Cân phân tích Mettler Toledo có độ chính
xác 0,1 mg
- Các dụng cụ thủy tinh chính xác: bình định
mức, pipet chính xác, ống đong
2.3 Phương pháp, đôi tượng nghiên cứu
Hình 1 Công thức cấu tạo của Pigment red 53
* Phương pháp nghiên cứu
Phương pháp phát hiện PR53 có mặt trái phép trong mỹ phẩm được xây dựng dựa trên cơ
sở kỹ thuật sẳc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) sự
có mặt của PR53 trong mẫu mỹ phẩm được đánh giá cả về mặt định tính và định lượng
- Định tính:
+ Dựa vào thời gian luV: so sánh thời gian
lưu giữa pic nghi là PR53 trên sắc ký đồ của mẫu thử với pic của PR53 trên sắc ký đồ của mẫu chuẩn
+ Dựa vào phổ hấp thụ UV-VIS thu được nhờ
detector PDA: so sánh phổ hấp thụ UV-VIS lấy ở
đỉnh pic giữa pic nghi là PR53 trên sắc ký đồ của mẫu thử và pic của PR53 trên sắc ký đồ của mẫu chuẩn, đánh giá hệ số tương đông (similarity index) giữa 2 phổ
-Định lượng:
Khi các chỉ tiêu định tính khẳng định sự có mặt của PR53 trong mẫu mỹ phẩm, hàm lượng PR53 trong mẫu thử được xác định dựa vào diện tích pic PR53 thu được trên sẳc ký đồ của dung dịch chuẩn và dung dịch thử, nồng độ của dung dịch chuẩn, lượng mẫu thử đem phân tích
* Đối tượng nghiên CỨU:
- 20 mẫu mỹ phẩm gồm 7 mẫu son nước
(SN), 7 mẫu son rắn và 6 mẫu phấn má (bảng 9
Trang 3- Sử dụng 3 mẫu (được xác định sơ bộ không
có PR53) để xây dựng, thẩm định phương pháp (bảng 1)
Bảng 1 Các mẫu mỹ phẩm sử dụng để xây dựng, thẩm định phương pháp.
Mã sô' Tên mâu, nơi sản xuất
Sort nước SN07 Lỉpgloss 3D 06 Zhoubang
áããL
Son rắn SR10 Rose Lađy 109 vov Moisturizing coloring effect
Phấn má PM09 Color Song Blusher 04 vov cosmetic Co Ltd., Made in Korea
3 Kết quả và bàn luận
3.1 Xây dựng phương pháp phân tích
3.1.1 Lực chọn dung môi chiết mẫu
Sau khi khảo sát sơ bộ với một số dung môl
hoà tan mẫu như: ethanol, acetonitrll, aceton,
cloroform, methanol, dicloromethan, dimethyl-
solfoxid, hỗn hợp dimethylsulfoxid - acid phos
phoric (95:5), chúng tôi đã lựa chọn được di-
methylsulfoxid là dung môi hoà tan được hoạt
chất cần phân tích và loại được nhiều thành phần
khác trong các mẫu son và phấn má với qui
trình xử lý mẫu đơn giản dễ thực hiện
3.1.2 Quy trình xử lý mẫu mỹ phẩm
- Chuẩn b ị mẫu thử:
- Với đối tượng mẫu son nước, son rắn: cân
chính xác khoảng 0,5 g ch ẽ phẩm vào cốc 50 ml,
thêm lml tetrahydrofuran, dùng đũa thuỷ tinh
khuấy kỹ cho tới khi chẽ phẩm phân tán hoàn
toàn, thêm 10 ml dimethylsulfoxid khuấy kỹ, lắc
siêu âm 10 phút, chuyến sang bình định mức 20
ml và thêm dimethylsulfoxid vừa đủ đến vạch,
lắc đều Lọc qua giấy lọc, bỏ khoảng 5 ml dịch
lọc đầu Hút 5 ml dịch lọc vào bình định mức 25
ml Thêm pha động vừa đủ đến vạch Lọc qua
màng lọc 0,45 |jm để tiêm sắc ký
- Với đối tượng mẫu phấn: cân chính xác
khoảng 0,5 g chế phẩm vào bỉnh định mức 20
ml, thêm 15 ml dimethylsulfoxid lẳc siêu âm 10
phút, thêm dimethylsulfoxid vừa đủ đến vạch
Lọc qua giấy lọc, bỏ khoảng 5 ml dịch lọc đầu
Hút 5 ml dịch lọc vào bình định mức 25 ml Thêm
pha động vừa đủ đến vạch Lọc qua màng lọc
0,45 ụm để tiêm sắc ký
- Chuẩn b ị mẫu chuẩn:
Dung dịch đối chiếu: cân chính xác khoảng
50 mg chất chuẩn PR53 vào bình định mức 100
ml Thêm 40 ml dimethylsulfoxid lắc siêu âm 10 phút, thêm dimethylsulfoxid vừa đủ đến vạch, lắc Hút 2,0ml dung dịch này vào bình định mức
50 ml, thêm dimethylsulfoxid vừa đủ đến vạch, lẳc Hút 3 ml dung dịch này vào bỉnh định mức
50 ml, thêm 7 ml dimethylsulfoxid, và thêm pha động vừa đủ đến vạch Lọc qua màng lọc 0,45pm trước khi tiêm sẳc ký
3.1.3 Quy trình phân tích Pigment red 53 bằng HPLC:
- Điều kiện sắc ký: Triển khai thử nghiệm trên
cơ sở tham khảo các tài liệu [2, 3], chúng tôi chọn được điều kiện sắc ký như sau:
- Cột Apollo C18 (250 X 4,6 mm, 5 |jm)
- Detector PDA quét phổ trong dải bước sóng
từ 200 đến 800 nm Bước sóng lấy sắc ký đồ:
490 nm
- Pha động: Methanol - đệm pH 6,2 (65: 35)
- Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút
- Thể tích tiêm mẫu: 20 ụl
- Nhiệt độ cột: 30°c Dung dịch đệm pH 6,2 được chuẩn bị bằng cách dùng acid acetic 30% chinh dung dịch triethylamin 3 mM trong nước về pH 6,2 Lọc bằng bộ lọc dung môi, màng lọc 0,45 ịjm
- Cách tiến hành:
Tiêm riêng biệt dung dịch thừ, dung dịch chuẩn vào hệ thống HPLC với các điều kiện sắc
ký như trên Ghi lại sắc ký đồ
- Cách đánh giá kết quả: theo các tiêu chí ở
mục 2.3
Trang 43.2 Thẩm định phương pháp
3.2.1 Độ đặc hiệu
Sử dụng các điều kiện phân tích đã trình bày
ở 3.1.3., chúng tôi đã tiến hành phân tích các
mẫu (được xử lý theo qui trình nêu ở mục 3.1.2)
gồm:
- Mẩu trắng: mẫu son nước không chứa PR53 (SN07)
- Mau tự tạo: mẫu son nước không chứa PR53 (SN07) được trộn với theo một lượng chính xậc PR53 chuẩn để cho nồng độ PR53 cuối cùng đem tiêm sắc ký có nồng độ 1,2 Ịjg/ml
- Mau dung dịch chuẩn PR53
• SSKBTTTBR 1 “
■ ãh ÜJ a)
Hình 2 - Sắc ký đô của mẫu trắng (a),
Kết quả thu được như ở hình 2, cho thấy:
- Đối với dung dịch chuẩn, trên sắc ký đồ chỉ
xuất hiện một pic rõ ràng của PR53
- Đối với mẫu trẳng, trên sắc ký đồ không có
pic nào xuất hiện tương ứng với thời gian lưu của
PR53
- Đối với mẫu tự tạo, sẳc ký đồ cho ta một
pic tương ứng với pic của PR53 trên sắc ký đồ
của dung dịch chuẩn về thời gian lưu, độ tương
thích khi so sánh phố UV-VIS, đồng thời được
tách riêng khỏi các pic khác
- Thời gian lưu tR: Thời gian lưu của pic trong
mẫu thử giống thời gian lưu của pic trong mẫu
chuẩn (khoảng 6,70 phút)
- Phổ uv -VIS: Chồng phổ ở dải sóng từ
dung dịch chuẩn PR53 (b) và mẫu tự tạo (c)
600 nm, phổ của dung dịch chuẩn và phô’ của dung dịch thử đạt bước sóng cực đại ở 490 nm
và hệ số similarity là 0,9954 (hình 3)
Hình 3—Kết quả so sánh phổUV—VIS của pic PR53 trên mẫu chuẩn và tự tạo
Các kết quả trên cho thấy phưđng pháp có độ đặc hiệu đê’ xác định PR53
3.2.2 Khoảng tuyẽn tính
Dung dịch
Bảng 2 Kết quả khảo sát khoảng tuyến tính của PR53
Nồng độ c (ụg/ mi) 1,157 1,542 2,314 2,892 3,856 5,784 7,712
Diện tích pic s (mAU.s) 56415 83537
Đê’ đánh giá khoảng tuyến tính, chúng tôi
chuẩn bị một dãy 7 dung dịch PR53 chuẩn trong
dimethyl suloxid: pha động (20: 80) có nồng độ
như ở bảng 2 Tiến hành phân tích theo điều
kiện sắc ký như mục 3.1.3 Kết quả thu được cho
thấy trong khoảng nồng độ 1,2 - 7,7 ng/ml có sự
tương quan tuyến tính giữa diện tích pic và nồng
120814 155739 211317 310885 413030
độ PR53 với hệ số tương quan r là 0,9997 Phương trình đường chuẩn thu được là: s = 54105,5x c - 2108,31
3.2.4 Độ lặp lạ i - Độ đủng:
- Việc đánh giá độ lặp lại và độ đúng được thực hiện đồng thời trên 3 mẫu tự tạo: trên nền
11
Trang 5Tạp chí Nghiên cứu dược và Thông tin thuốc I sô' 1/2010
son nước (SN07), trên nền son rắn (SR10), trên
nền phấn má (PM09) Một lượng chính xác PR53
chuẩn được đưa vào nền mẫu mỹ phẩm sao cho
có nồng độ PR53 nằm trong khoảng nồng độ
tuyến tính Mỗi mẫu tự tạo sẽ được Jiẽn hành xử
lý theo qui trình ở 3.1.2 và phân tích theo điều
kiện ở 3.1.3 với 6 lần phân tích độc lập Độ lặp
lại của cả phương pháp được đánh giá qua kết quả hàm lượng PR53 lần phân tích độc lập trong mẫu tự tạo Độ đúng của phương pháp được đánh giá bằng cách so sánh lượng PR53 tìm lại được trong mẫu tự tạo so với IƯỢng PR53 cho vào ban đầu Kết quả được trình bày ở bảng 3
Bảng 3 Khảo sát độ đúng - độ lặp lại với PR53 trên nền mẫu tự tạo
Ì -
Ỉ
-Nền mẫu mỹ phẩm
sử dụng
Đánh giá độ lặp lại
qua RSD (% )
Đánh giá độ đúng
qua tỳ lệ (%) tìm lại
Kết quả thực nghiệm trên 3 loại mẫu tự tạo
cho thấy, phương pháp có độ lặp lại tốt qua 6 lần
phân tích độc lập (đều có RSD thấp, dao động từ
0,65% đến 1,39%) Tỷ lệ thu hồi PR53 trên cả 3
loại nền mẫu đều cao (99,43% đến 101,09%)
Như vậy, phương pháp phân tích xây dựng đã
thể hiện độ lặp lại, độ đúng tốt, phù hỢp với mục
đích của phương pháp là phát hiện PR53 có mặt
trái phép trong son và phấn má
3.2.5 Giới hạn phát hiện- Giới hạn định lượng
Dung dịch mẫu tiêm sắc ký có nồng độ PR53
là 0,4 mg/ml cho đáp ứng pic của PR53 gấp 3 lần
so với nhiễu đường nền Nên giới hạn phát hiện
PR53 của phương pháp xác định được là 0,4 fjg/
99,43%
ml (tương ứng với 80 pg/g mẫu mỹ phẩm)
Dung dịch mẫu tiêm sẳc kỷ có nồng độ PR53
là 1,2 ịjg/ml cho đáp ứng pic của PR53 gấp 10 lần so với nhiễu đường nền Nên giới hạn định lượng với PR53 của phương pháp xác định được
là 1,2 ụg/ml (tương ứng với 240 ụg/g mẫu mỹ phẩm)
3.3 Áp dụng phương pháp để kiểm tra một sô'mẫu mỹ phẩm mua trên thị trường
Áp dụng phương pháp vừa xây dựng để kiểm tra 14 mẫu son môi, 6 mẫu phẩn má mua trên thị trường Danh sách các mẫu được kiểm tra và kết quả thu được như ở bảng 4
Bảng 4 Kết quà kiểm tra các mẫu mỹ phẩm đ ể phát hiện PR53.
Kết quả phát hiện PR53
2 SN02 Son nước Prielry diamond gloss 44 (Hàn Quốc)
-3 SN03 Son nước Blooming gloss 51 Crystal Shimmering (Hàn Quốc)
-4 SN04 Son nước p+ cos Professional (Hàn Quốc)
-7 SN07 Son nước Lipgloss 3D 06 Zhoubang
-10 SR10 Son rắn Rose Lady 109 vov Moisturizing coloring effect
Trang 6Tạp chí Nghiên cứu dược và Thông tin thuốc I Số 1/2010
11 SR11 Son rắn Lacvert Essance RD201 LG Vina Cosmetics Joint Venture Co +
12 SR12 Son rắn Lustre 09 Make-uphần Cosmetics Toronto (Canada) +
13 SR13 Son rắn MayberlineWater Shine Pune Lỉpcolon 06 (Mỹ)
-14 SR14 Son rắn Lacvert EssanceRD225 LG Vina Cosmetics Joint Venture Co +
15 PM03 Phấn má Make-up blue 016 v o v cosmetic Co, Ltd +
-17 PM09 Phấn má Color Song Blusher 04 vov cosmetic Co, Ltd (Hàn Quốc)
-18 PM10 Phấn má Ludanmei No:D208 Ludanmei Cosmetics Co Ltd *
19 PM11 Phấn má Ludanmei No:B493 Ludanmei Cosmetics Co Ltd
-20 PM12 Phấn má Color Song Blusher 21 vov cosmetic Co, Ltd (Hàn Quốc) +
Trong 20 mẫu kiểm tra, đã phát hiện được 6 ngờ trùng với thời gian lưu của pic PR53 chuẩn, mẫu có chứa PR53,trong số đó có 4 mẫu son So phổ UV-VIS của các pic này với pic PR53
/ s - I ■ ■ J~| I ‘ L _l — \ ^ , \ — _ X A ' _ _ r I A* 4 ^ , I ^ J I I /\ A» , I , _ J ' _ I _ I A*
(SN01, SR11, SR12 và SR14) và 2 mẫu phấn má
(PM04 và PM12) Thời gian lưu của các pic nghi
chuẩn đều thu được Hệ số tương thích phổ (Similarity) rất cao Tiến hành định lượng PR53
Bảng 5 Kết quả định lượng các mẫu phát hiện có Pigment Red 53
thử(g)
m»
H ệ sô'tương thích phô’ Lượng PR53 có (Similarity) khi so với phổ trông mẫu thử
Hàm lượng
■1
(0,085) (0,016)
(0,097) (0,018)
Ghi chú: Các giá trị trong ngoặc đơn là các giá trị ước lượng vì nằm dưới LOQ
trong 6 mẫu này Kết quả thu được như ở bảng
5
Kẽt quả cho thấy: Hàm lượng PR53 trong các
mẫu son là tương đối nhỏ nhưng tỳ lệ ở 2 mẫu
phấn má là khá cao Tuy số mẫu được kiểm tra
chưa nhiều nhưng tỳ lệ có chứa PR53 đáng lo
ngại (30%) Chứng tỏ nguy cơ lạm dụng PR53
trong mỹ phẩm là rất cao Do vậy cần mở rộng
thêm việc kiểm tra PR53 trong mỹ phẩm để có
kết luận chính xác hơn
4 Kết luận
- Đã chọn được dung môi cho phép chiết hết
PR53 trong mẫu cho nền mẫu tương đối sạch
- Đã chọn được điều kiện sẳc ký lỏng hiệu
năng cao phù hợp cho phép phát hiện PR53 trong các mẫu mỹ phẩm với giới hạn phát hiện là 0,4|jg/ml mà không bị lẫn các tạp chất khác trong nền các mẫu
- Phương pháp xây dựng có tính đặc hiệu,
khoảng tuyến tính, độ lặp lại, độ đúng và giới
hạn phát hiện chấp nhận được đối với việc phân tích xác định PR53 trong các chẽ phẩm son và phấn má
- Trong 20 mẫu mỹ phẩm được kiếm tra PR53, đã phát hiện được một tỷ lệ mẫu có chứa PR53 khá cao
Tài liệu tham khảo
(Xem tiếp trang 37)
13