Khảo sát sự hình thành và phát triển của mô sẹo từ lát cắt mô dâu tằm trắng (morus alba l ) trên môi trường MS rắn và lỏng

MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC B ẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi TÓM TẮT CHƢƠNG I MỞ ĐẦU I LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI II MỤC ĐÍCH CỦA ĐỀ TÀI III KHÁCH THỂ NGHIÊN CỨU IV ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU V NỘI DUNG NGHIÊN CỨU CHƢƠNG II TỔNG QUAN TÀI LIỆU I CÂY DÂU TẰM 1.1 Vị trí phân loại 1.2 Đặc điểm hình thái 1.3 Thành phần hóa học 1.4 Điều kiện tự nhiên số đặc điểm nông học 1.4.1 Ánh sáng 1.4.2 Nhiệt độ 1.4.3 Nƣớc 1.4.4 Đất 1.4.5 Khơng khí 1.4.6 Dịch bệnh sâu hại 1.5 Giá trị kinh tế y dƣợc II NUÔI CẤY MÔ VÀ MỘT SỐ KẾT QUẢ NHIÊN CỨU TRÊN CÂY DÂU TẰM 2.1 Lƣợc sử phát triển công nghệ nuôi cấy tế bào thực vật i 2.2 Những phƣơng pháp nuôi cấy mô 2.2.1 Phƣơng pháp nuôi cấy lớp mỏng tế bào TCL (Thin Cell Layer) 2.2.2 Nuôi cấy mô sẹo: 10 2.2.3 Phƣơng pháp nuối cấy tế bào môi trƣờng lỏng lắc 11 2.3 Ảnh hƣởng chất điều hoà sinh trƣởng thực vật 12 2.4 Một số nghiên cứu nuôi cấy mô dâu tằm 13 2.4.1 Các nghiên cứu nuôi cấy mô dâu tằm giới 13 2.4.2 Các nghiên cứu dâu tằm nƣớc 15 CHƢƠNG III 16 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 16 I VẬT LIỆU 16 1.1 Vật liệu tạo mô sẹo môi trƣờng rắn 16 1.2 Vật liệu tạo dịch huyền phù tế bào 16 II THIẾT BỊ VÀ DỤNG CỤ 16 III MÔI TRƢỜNG VÀ ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY 16 IV PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 4.1 Khảo sát quy trình khử trùng mẫu 17 Tạo in vitro phƣơng pháp đánh thức chồi ngủ 19 Khảo sát ảnh hƣởng hormon sinh trƣởng lên tạo thành mô sẹo từ cắt lát mỏng dâu tằm môi trƣờng MS rắn 20 4.3.1 Ảnh hƣởng BA 2, – D lên tạo mô sẹo 20 3.2 Ảnh hƣởng BA NAA lên tạo mô sẹo 22 4.3.3 Khảo sát tăng trƣởng mô sẹo môi trƣờng rắn 23 4.4 Khảo sát môi trƣờng lỏng, lắc thích hợp để ni dịch huyền phù tế bào 24 4.4.1 Tạo dịch huyền phù tế bào 25 4.4.2 Kiểm tra khả sống tế bào dịch huyền phù phƣơng pháp nhuộm TTC 25 4.4.3 Khảo sát ảnh hƣởng thể tích dịch huyền phù ban đầu đến tăng trƣởng tế bào 25 ii 4.4.4 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ saccharose đến tăng trƣởng dịch huyền phù tế bào 26 4.4.5 Khảo sát ảnh hƣởng vitamin đến tăng trƣởng dịch huyền phù tế bào 27 4.4.6 Xác định đƣờng cong tăng sinh trƣởng dịch huyền phù tế bào dâu tằm 27 4.4.6 Thử nghiệm tạo dịch huyền phù tế bào trực tiếp từ lát mỏng tế bào 29 4.5 Xử lý số liệu 30 CHƢƠNG IV 31 KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 31 I QUI TRÌNH KHỬ MẪU 31 II SỰ TẠO CÂY CON IN VITRO BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐÁNH THỨC CHỒI NGỦ 32 III SỰ TẠO THÀNH VÀ TĂNG TRƢỞNG MÔ SẸO TRÊN MÔI TRƢỜNG RẮN 34 IV KHẢO SÁT MƠI TRƢỜNG LỎNG THÍCH HỢP ĐỂ NI DỊCH HUYỀN PHÙ TẾ BÀO …………………………………………………………………………… 40 4.1 Sự hình thành cuả dịch huyền phù tế bào 40 4.2 Kiểm tra khả sống tế bào dịch huyền phù tế bào phƣơng pháp nhuộm TTC 42 4.3 Ảnh hƣởng tích tế bào ban đầu đến tăng trƣởng dịch huyền phù tế bào 43 4.3 Ảnh hƣởng saccharose lên tăng trƣởng dịch huyền phù tế bào 44 4.4 Ảnh hƣởng hàm lƣợng vitamin tổng lên tăng trƣởng dịch huyền phù tế bào 46 4.3 Khảo sát sinh trƣởng dịch huyền phù tế bào môi trƣờng lỏng lắc 47 3.6 Thử nghiệm tạo dịch huyền phù tế bào trực tiếp từ lát mỏng tế bào 49 CHƢƠNG 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 I KẾT LUẬN 51 1.1 Quy trình khử trùng mẫu 51 1.2 Nhân giống dâu tằm in vitro từ chồi bên 51 iii 1.3 Ảnh hƣởng hormon sinh trƣởng lên tạo mô sẹo từ cắt lát mỏng thân non dâu tằm 51 1.4 Tạo dịch huyền phù tế bào 51 1.5 Thể tích tế bào lắng ban đầu để thích hợp cho tăng trƣởng dịch huyền phù 52 1.6 Nồng độ đƣờng saccharose thích hợp cho dịch huyền phù tế bào tăng trƣởng 52 1.7 Thể tích vitamin tổng mơi trƣờng MS lỏng thích hợp cho dịch huyền phù tế bào tăng trƣởng 52 1.8 Xác định đƣờng cong tăng trƣởng dịch huyền phù tế bào 52 1.9 Tạo dịch huyền phù tế bào trực tiếp từ lát cắt mỏng tế bào 52 II KIẾN NGHỊ 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 PHỤ LỤC 57 iv DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BA : Benzyladenin NAA : Naphthaleneacetic acid KIN : Kinetin 2,4 – D : 2,4 – Dichlorophenoxyacetic acid IAA : Indoleacetic acid IBA : Indolebutyric acid MS : Murashinge and Skoog, 1962 TCL : Thin Cell Layer v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ Ca(OCl) thời gian lắc mẫu lên trình khử trùng 19 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng BA NAA khác lên tạo phƣơng pháp đánh thức chồi ngủ 20 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng BA 2, - D khác lên tạo sẹo 21 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng BA NAA khác lên tạo sẹo 23 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng BA NAA khác lên tăng trƣởng mô sẹo 24 Bảng 3.7 Khảo sát ảnh hƣởng thể tích ban đầu lên tăng trƣởng dịch huyền phù tế bào 25 Bảng 3.8 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ saccharose lên tăng trƣởng dịch huyền phù tế bào 26 Bảng 3.9 Khảo sát ảnh hƣởng vitamin lên tăng trƣởng dịch huyền phù tế bào 27 Bảng 4.1 Kết ảnh hƣởng nồng độ Ca(OCl)2 thời gian lắc mẫu lên trình khử trùng mẫu 31 Bảng 4.2 Kết tạo chồi in vitro phƣơng pháp đánh thức chồi ngủ tuần 04 33 Bảng 4.3 Kết khảo sát ảnh hƣởng nồng độ BA 2, – D lên tạo mô sẹo số tăng trƣởng mô sẹo từ ngày 14- ngày 21 37 Bảng 4.4 Kết khảo sát ảnh hƣởng nồng độ BA NAA lên tạo mô sẹo số tăng trƣởng mô sẹo từ ngày 14- ngày 21 37 Bảng 4.7 Kết khảo sát ảnh hƣởng tích tế bào lắng ban đầu lên tăng trƣởng dịch huyền phù tế bào 43 Bảng 4.8: Kết ảnh hƣởng saccharose lên tăng trƣởng dịch huyền phù tế bào 45 Bảng 4.9: Kết ảnh hƣởng vitamin lên tăng trƣởng dịch huyền phù tế bào 47 Bảng 4.10 Kết khảo sát sinh trƣởng tế bào mô sẹo 48 vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1: Cành Dâu tằm Morus alba L Hình 2.2: Hình dạng hoa dâu tằm Hình 2.3: Quả hạt dâu tằm Hình 3.1 Sơ đồ quy trình khử trùng mẫu 18 Hình 3.2: Buồng đếm tế bào Neubauer ngun tắc đếm lớn tích 0.1 mm3 29 Hình 4.1 Kết khử trùng nghiệm thức 32 Hình 4.2 Kết tạo chồi in vitro phƣơng pháp đánh thức chồi ngủ 34 Hình 4.3 Lát cắt ngang thân dâu tằm 35 Hình 4.4 Hai loại mô sẹo dâu tằm sau tuần nuôi cấy 36 Hình 4.6:Sự tăng sinh mô sẹo môi trƣờng T5 39 Hình 4.7 Mơ sẹo hóa nâu sau tuần ni cấy 40 Hình 4.8 Dịch huyền phù tế bào (ảnh chụp từ đáy bình thủy tinh 100 ml) 41 Hình 4.9 Màu sắc dịch nuôi cấy thay đổi qua ngày 41 Hình 4.10: Các tế bào dịch huyền phù dƣới kính hiển vi 42 Hình 4.11: Tế bào dịch huyền phù đƣợc nhuộm TTC (mũi tên tế bào phân chia)………………………………………………………………………… …………… 43 Hình 4.12: Đồ thị biểu diễn ảnh hƣởng thể tích tế bào lắng ban đầu đến tăng trƣởng dịch huyền phù 44 Hình 4.13: Đồ thị biểu diễn ảnh hƣởng nồng độ saccharose đến tăng trƣởng dịch huyền phù 45 Hình 4.14:Tế bào mơi trƣờng có nồng độ saccharose 40 g/l trạng thái co nguyên sinh 46 Hình 4.15 Đồ thị biểu diễn ảnh hƣởng thể tích vitamin đến tăng trƣởng dịch huyền phù 47 Hình 4.16: Đồ thị biểu diễn tăng trƣởng số lƣợng tế bào dịch huyền phù tế bào 49 Hình 4.17 Tế bào dịch huyền phù bắt màu hồng với thuốc nhuộm TTC cấy 50 vii TÓM TẮT Dâu tằm chứa nhiều chất có giá trị mặt y học nhƣ acid hữu cơ, flavonoid, tanin, pectin, chlorophyl, coumarin, acid amin, cellulose, anthocyan, đƣờng, vitamin B1, vitamin C, vitamin D…và nhiều hợp chất có giá trị khác tiếp tục đƣợc nghiên cứu cô lập Những nghiên cứu dâu tằm ngày đƣợc mở rộng nhiều lĩnh vực đặc biệt Y học Việc tạo nguồn nguyên liệu in vitro khởi đầu để phục vụ cho nghiên cứu cần thiết Đề tài “KHẢO SÁT SỰ HÌNH THÀNH VÀ PHÁT TRIỂN CỦA MƠ SẸO TỪ LÁT CẮT MÔ DÂU TẰM TRẮNG (Morus alba L.) TRÊN MÔI TRƢỜNG MS RẮN VÀ LỎNG” nhằm mục đích tìm mơi trƣờng thích hợp cho việc hình thành phát triển mô sẹo từ lát cắt mỏng dâu tằm trắng Morus alba L cung cấp nguyên liệu khởi đầu in vitro cho thí nghiệm nghiên cứu dâu tằm Mơi trƣờng MS rắn có bổ sung 2,0 mg/l BA, 0,5 mg/l NAA thích hợp cho tạo chồi Số lƣợng chồi trung bình khoảng 1,97 chồi Mơi trƣờng thích hợp cho tạo mơ sẹo, tăng trƣởng mô sẹo MS rắn bổ sung 0,5 mg/l BA nồng độ 1,0 mg/l NAA Tỉ lệ % tạo sẹo trung bình mẫu 86%, số tăng trƣởng trung bình mơ sẹo 1,96 đƣờng kính độ dày trung bình mơ sẹo tƣơng ứng khoảng 12,54 mm 10,79 mm Mô sẹo phải đƣợc cấy chuyền sau 04 tuần nuôi cấy chuyền Dịch huyền phù tế bào đƣợc tạo từ 3g mô sẹo 27 ml môi trƣờng MS lỏng tăng trƣởng cực đại vào khoảng ngày nuôi cấy thứ 10 Nồng độ thích hợp saccharose vitamin mơi trƣờng MS lỏng cho tăng trƣởng dịch huyền phù tƣơng ứng 30,0 g 10 ml Tỉ lệ thể tích tế bào lắng ban đầu thể tích mơi trƣờng thích hợp cho tăng trƣởng dịch huyền phù tế bào 2:15 Dịch huyền phù tạo trực tiếp cách cấy lát cắt mỏng tế bào mơi trƣờng MS lỏng có bổ sung 0,5 mg/l BA nồng độ 1,0 mg/l NAA Nhƣ vậy, mơi trƣờng MS rắn có bổ sung 2,0 mg/l BA, 0,5 mg/l NAA thích hợp cho tạo chồi dâu tằm trắng Mơi trƣờng thích hợp cho tạo mô sẹo, tăng trƣởng mô sẹo MS rắn, lỏng bổ sung 0,5 mg/l BA, 1mg/l NAA, 30 g /l sucrose 10 ml/l Mô sẹo phải đƣợc cấy chuyền sau tuần nuôi cấy dịch huyền phù tế bào đƣợc cấy chuyền khoảng ngày nuôi cấy thứ 10 với tỉ lệ thể tích tế bào lắng ban đầu thể tích mơi trƣờng 2:15 CHƢƠNG I MỞ ĐẦU I LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI Dâu tằm trắng (Morus alba L.) thuộc họ Moraceae Dâu tằm từ lâu trở thành lồi có giá trị cao nhiều mặt Nghề trồng dâu chế biến sản phẩm từ tơ tằm có từ lâu đời Việt Nam Đó nghề truyền thống quan trọng vùng nông thôn Trồng dâu nuôi tằm đem lại hiệu kinh tế cao nhiều so với trồng khác, sản phẩm dâu tằm có giá trị cao, vịng quay lứa tằm ngắn có 20 ngày Cây dâu tằm trồng đƣợc vùng có điều kiện đất đai xấu khí hậu khắc nghiệt Trồng dâu tằm không đáp ứng thu nhập quanh năm mà cịn giải nhiều lao động nhàn rỗi nơng thơn, xóa đói giảm nghèo Mặt khác, trồng dâu tằm làm tăng độ che phủ xanh bãi đất hoang tham gia vào điều hịa tiểu khí hậu Dâu tằm cịn có nhiều cơng dụng quan trọng y học Trong Đông y, dâu tằm đƣợc gọi tang ngọc tồn thân cây, vỏ, lá, trái dâu đến sâu đục ruột đƣợc dùng chế tác thuốc Quả dâu chín (Tang thầm) vị pha chua, tính mát, ăn tƣơi hay ngâm rƣợu dùng bồi bổ gan, thận, dƣỡng kinh mạch, trừ cảm mạo, phong hàn, chữa bệnh đái tháo đƣờng, thiếu máu, trị ngủ Lá dâu (Tang diệp) chữa mồ hôi trộm, đau họng, ho, nhức đầu bốc hỏa, làm sáng mắt Cành dâu (Tang chi) chữa chứng đau khớp, co quắp tay chân, đau nhức tứ chi, phù tứ chi, hạ huyết áp, lợi tiểu…Rƣợu dâu để lâu năm giúp giảm ho có đờm xanh, hạ suyễn Các loại ký sinh dâu nhƣ tầm gửi (Tang ký sinh), tổ bọ ngựa (Tang phiêu tiêu), sâu dâu, mộc nhĩ dâu… khơng có phận khơng đƣợc dùng làm thuốc (Đỗ Tất Lợi, 2004) Mỗi phận khác vị thuốc tuyệt vời cho sức khỏe Ngoài ra, dâu tằm đƣợc sử dụng nhiều lĩnh vực làm đẹp Những nghiên cứu dâu tằm cho thấy có đƣợc cơng dụng tuyệt vời chúng có chứa nhiều chất có giá trị mặt y học nhƣ acid hữu cơ, flavonoid, tanin, pectin, chlorophyl, coumarin, acid amin, cellulose, anthocyan, đƣờng, vitamin B1, vitamin C, vitamin D…và nhiều hợp chất khác tiếp tục đƣợc nghiên cứu cô lập Những nghiên cứu dâu tằm ngày đƣợc mở rộng nhiều lĩnh vực đặc biệt Y học Để tiếp tục thực nghiên cứu xung quanh dâu tằm, cần tạo nhiều nguồn nguyên liệu khởi đầu in vitro phục vụ cho nghiên cứu Đề tài “KHẢO SÁT SỰ HÌNH THÀNH VÀ PHÁT TRIỂN CỦA MÔ SẸO TỪ LÁT CẮT MÔ DÂU TẰM TRẮNG (Morus alba L.) TRÊN MÔI TRƢỜNG MS RẮN VÀ LỎNG” đƣợc thực nhằm tìm mơi trƣờng thích hợp cho việc hình thành phát triển mô sẹo từ lát cắt mỏng dâu tằm trắng Morus alba L cung cấp nguyên liệu khởi đầu in vitro cho thí nghiệm nghiên cứu dâu tằm II MỤC ĐÍCH CỦA ĐỀ TÀI Mục đích đề tài tìm mơi trƣờng MS lỏng, rắn thích hợp cho việc hình thành sinh trƣởng mơ sẹo từ lát cắt mỏng dâu tằm trắng Morus alba L III KHÁCH THỂ NGHIÊN CỨU Cây dâu tằm trắng (Morus alba L.) IV ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU Môi trƣờng thích hợp cho hình thành phát triển mô sẹo từ lát cắt mỏng phận dâu tằm trắng (Morus alba L.) V NỘI DUNG NGHIÊN CỨU - Định danh dâu tằm thu ngồi mơi trƣờng - Khử trùng nguyên liệu - Tạo dâu tằm in vitro - Khảo sát quy trình tạo sẹo từ lát cắt mỏng mô dâu tằm trắng môi trƣờng rắn lỏng - Khảo sát sinh trƣởng tế bào mô sẹo môi trƣờng rắn lỏng - Thu nhận sinh khối mô sẹo 15 7000 13628 03519 6245 7755 50 90 135 1.0363 56046 04824 9409 1.1317 10 2.70 15 1.0213 55420 14309 7144 1.3282 00 2.00 15 3.5540 48360 12486 3.2862 3.8218 2.67 4.67 15 1.1560 68774 17757 7751 1.5369 00 2.67 15 2.4007 60768 15690 2.0641 2.7372 1.33 3.33 15 5.7340 65688 16961 5.3702 6.0978 4.67 6.67 15 1.4613 58166 15018 1.1392 1.7834 60 2.67 15 1.2440 65975 17035 8786 1.6094 00 2.67 15 4.0440 73301 18926 3.6381 4.4499 2.67 5.33 15 9780 60890 15722 6408 1.3152 00 2.00 135 2.3993 1.70932 14711 2.1083 2.6902 00 6.67 Total tiletaoseoN Total ANOVA Sum of Squares chisotangtruongD tiletaoseoD 28.719 3.590 Within Groups 18.351 126 146 Total 47.069 134 391.413 48.927 64.034 126 508 455.447 134 Between Groups 29.012 3.627 Within Groups 13.080 126 104 Total 42.092 134 342.567 42.821 48.950 126 388 391.517 134 Between Groups Total tiletaoseoN Mean Square Between Groups Within Groups chisotangtruongN df Between Groups Within Groups Total chisotangtruongD Duncan Subset for alpha = 0.05 nghiemt huc N 1 15 5467 15 5533 65 F Sig 24.649 000 96.274 000 34.934 000 110.223 000 15 5733 15 5800 15 6533 15 8933 15 9067 15 1.7267 15 1.7467 Sig .6533 505 088 886 Means for groups in homogeneous subsets are displayed tiletaoseoD Duncan Subset for alpha = 0.05 nghiemt huc N 15 7567 15 8013 15 8887 15 9333 15 1.2880 15 15 15 15 2.3560 3.4667 4.5780 5.4673 Sig .070 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed chisotangtruongN Duncan Subset for alpha = 0.05 nghiemt huc N 1 15 6333 15 6467 15 6533 15 7000 15 7200 66 1.000 15 1.0733 15 1.3600 15 1.5733 15 1.9667 Sig .521 1.000 072 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed tiletaoseoN Duncan Subset for alpha = 0.05 nghiemt huc N 15 9780 15 1.0213 15 1.1560 15 1.2440 15 1.4613 15 15 15 15 Sig 2.4007 3.5540 4.0440 5.7340 059 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 67 1.000 1.000 Phụ lục 5: Tăng trƣởng mô sẹo sau tuần cấy chuyền Descriptives 95% Confidence Interval for Mean N Mdoa Mean Std Deviation Std Error Lower Upper Bound Bound Minimum Maximum 4.2133 03215 01856 4.1335 4.2932 4.19 4.25 6.9767 08737 05044 6.7596 7.1937 6.88 7.05 3 4.4100 04359 02517 4.3017 4.5183 4.36 4.44 7.2633 05686 03283 7.1221 7.4046 7.20 7.31 10.7933 11930 06888 10.4970 11.0897 10.66 10.89 7.3900 08185 04726 7.1867 7.5933 7.30 7.46 4.6300 02000 01155 4.5803 4.6797 4.61 4.65 9.0833 20008 11552 8.5863 9.5804 8.88 9.28 4.4567 07024 04055 4.2822 4.6311 4.39 4.53 27 6.5796 2.25253 43350 5.6886 7.4707 4.19 10.89 Mduo 6.9900 20075 11590 6.4913 7.4887 6.78 7.18 ngkinh 9.1600 07937 04583 8.9628 9.3572 9.10 9.25 3 6.9933 05774 03333 6.8499 7.1368 6.96 7.06 10.5867 02517 01453 10.5242 10.6492 10.56 10.61 12.5400 08718 05033 12.3234 12.7566 12.44 12.60 10.8267 09609 05548 10.5880 11.0654 10.74 10.93 7.0033 05508 03180 6.8665 7.1401 6.94 7.04 10.9600 07000 04041 10.7861 11.1339 10.88 11.01 7.0533 01155 00667 7.0246 7.0820 7.04 7.06 27 9.1237 2.09418 40303 8.2953 9.9521 6.78 12.60 y Total Total ANOVA Sum of Squares Mdoay Between Groups Mean Square 131.761 16.470 160 18 009 Total 131.921 26 Between Groups 113.875 14.234 151 18 008 Within Groups Mduongkinh df Within Groups 68 F Sig 1.851E3 000 1.698E3 000 ANOVA Sum of Squares Mdoay Between Groups Mean Square F 131.761 16.470 160 18 009 Total 131.921 26 Between Groups 113.875 14.234 151 18 008 114.026 26 Within Groups Mduongkinh df Within Groups Total Sig 1.851E3 000 1.698E3 000 Mdoay Duncan Subset for alpha = 0.05 nghiemt huc N 3 4.4100 4.4567 3 7.2633 7.3900 Sig 4.2133 4.6300 6.9767 9.0833 10.7933 1.000 552 1.000 1.000 117 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Mduongkinh Duncan Subset for alpha = 0.05 nghiemt huc N 1 6.9900 3 6.9933 7.0033 7.0533 3 9.1600 10.5867 69 1.000 10.8267 10.9600 Sig 12.5400 448 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 70 091 1.000 Phụ lục 6: Ảnh hƣởng thể tích tế bào lắng ban đầu lên tăng trƣởng dịch huyền phù tế bào Descriptives 95% Confidence Interval for Mean Std N Mean Deviation Std Error Lower Upper Bound Bound Minimum Maximum SCV14ngay 2.9700 06042 02014 2.9236 3.0164 2.84 3.02 6.2289 03444 01148 6.2024 6.2554 6.19 6.29 7.8733 05766 01922 7.8290 7.9177 7.73 7.93 10.0133 05500 01833 9.9711 10.0556 9.92 10.10 36 6.7714 2.60940 43490 5.8885 7.6543 2.84 10.10 chisotangtru 4878 03073 01024 4642 5114 42 51 ong 5578 00833 00278 5514 5642 55 57 3133 01000 00333 3056 3210 29 32 2522 00833 00278 2458 2586 24 26 36 4028 12725 02121 3597 4458 24 57 Total Total ANOVA Sum of Squares SCV14ngay Between Groups Mean Square 238.224 79.408 089 32 003 238.314 35 Between Groups 557 186 Within Groups 009 32 000 Total 567 35 Within Groups Total chisotangtruong df SCV14ngay Duncan Subset for alpha = 0.05 SCVba ndau N 2.9700 71 F Sig 2.840E4 000 627.894 000 9 Sig 6.2289 7.8733 10.0133 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed chisotangtruong Duncan Subset for alpha = 0.05 SCVba ndau N 9 9 Sig 2522 3133 4878 5578 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 72 1.000 Phụ lục 7: Ảnh hƣởng nồng độ đƣờng lên phát triển dịch huyền phù tế bào dâu tằm Descriptives 95% Confidence Interval for Mean Std N SCV14ngay Mean Deviation Std Error Lower Upper Bound Bound Minimum Maximum 20 5.7022 04324 01441 5.6690 5.7355 5.63 5.77 30 6.2378 02048 00683 6.2220 6.2535 6.20 6.27 40 5.2022 04658 01553 5.1664 5.2380 5.13 5.27 27 5.7141 43249 08323 5.5430 5.8852 5.13 6.27 Chisotangtruong 20 4267 01000 00333 4190 4344 41 44 30 5600 00500 00167 5562 5638 55 57 40 3022 01302 00434 2922 3122 28 32 27 4296 10768 02072 3870 4722 28 57 Total Total ANOVA Sum of Squares SCV14ngay Between Groups Mean Square 4.828 2.414 036 24 001 4.863 26 Between Groups 299 150 Within Groups 002 24 000 Total 301 26 Within Groups Total Chisotangtruong df SCV14ngay Duncan Subset for alpha = 0.05 SCVba ndau N 40 20 30 Sig 5.2022 5.7022 6.2378 1.000 73 1.000 1.000 F Sig 1.624E3 000 1.524E3 000 SCV14ngay Duncan Subset for alpha = 0.05 SCVba ndau N 40 20 30 Sig 5.2022 5.7022 6.2378 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Chisotangtruong Duncan Subset for alpha = 0.05 SCVba ndau N 40 20 30 Sig 3022 4267 5600 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 74 Phụ lục 8: Ảnh hƣởng hàm lƣợng vitamin tổng lên sinh trƣởng dịch huyền phù tế bào Descriptives 95% Confidence Interval for Mean Std N SVC Mean Deviation Std Error Lower Upper Bound Bound Minimum Maximum 6.2367 04041 02333 6.1363 6.3371 6.20 6.28 5.6400 05292 03055 5.5086 5.7714 5.60 5.70 3 5.1700 03000 01732 5.0955 5.2445 5.14 5.20 Total 5.6822 46440 15480 5.3253 6.0392 5.14 6.28 chisotangtruo 5592 01010 00583 5341 5843 55 57 ng 4100 01323 00764 3771 4429 40 42 3 2925 00750 00433 2739 3111 28 30 Total 4206 11610 03870 3313 5098 28 57 ANOVA Sum of Squares SVC Between Groups Mean Square 1.715 857 011 002 1.725 Between Groups 107 054 Within Groups 001 000 Total 108 Within Groups Total chisotangtruong df SVC Duncan Subset for alpha = 0.05 nghiemt huc N 3 3 Sig 5.1700 5.6400 6.2367 1.000 75 1.000 1.000 F Sig 482.256 000 482.256 000 SVC Duncan Subset for alpha = 0.05 nghiemt huc N 3 3 Sig 5.1700 5.6400 6.2367 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed chisotangtruong Duncan Subset for alpha = 0.05 nghiemt huc N 3 3 Sig 2925 4100 5592 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 76 Phụ lục 9: Xác định mật độ tế bào dịch huyền phù tế bào dâu tằm Descriptives soluongtb 95% Confidence Interval for Mean Std N Mean Deviation Upper Std Error Lower Bound Bound Minimum Maximum 31.6667 2.12132 70711 30.0361 33.2973 29.00 35.00 34.2222 2.63523 87841 32.1966 36.2478 30.00 37.00 52.5556 9.60613 3.20204 45.1716 59.9395 40.00 65.00 64.3333 3.27872 1.09291 61.8131 66.8536 60.00 70.00 1.0233E2 9.74679 3.24893 94.8413 109.8254 91.00 115.00 2.1311E2 2.61937 87312 211.0977 215.1245 210.00 218.00 2.0622E2 6.62906 2.20969 201.1267 211.3178 197.00 215.00 63 1.0063E2 73.11884 9.21211 82.2202 119.0497 29.00 218.00 Total ANOVA soluongtb Sum of Squares Between Groups Mean Square 329392.381 54898.730 2082.222 56 37.183 331474.603 62 Within Groups Total df F Sig 1.476E3 000 soluongtb Duncan Subset for alpha = 0.05 nghiemt huc N 31.6667 34.2222 9 9 Sig 52.5556 64.3333 1.0233E2 2.0622E2 2.1311E2 378 1.000 1.000 77 1.000 1.000 1.000 soluongtb Duncan Subset for alpha = 0.05 nghiemt huc N 31.6667 34.2222 9 9 Sig 52.5556 64.3333 1.0233E2 2.0622E2 2.1311E2 378 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 78 1.000 1.000 1.000 Phụ lục 10: Định danh dâu tằm trắng (Morrus alba L.) 79 ... SÁT SỰ HÌNH THÀNH VÀ PHÁT TRIỂN CỦA MÔ SẸO TỪ L? ?T CẮT MÔ DÂU TẰM TRẮNG (Morus alba L. ) TRÊN MÔI TRƢỜNG MS RẮN VÀ L? ??NG” đƣợc thực nhằm tìm mơi trƣờng thích hợp cho việc hình thành phát triển mô sẹo. .. THÀNH VÀ PHÁT TRIỂN CỦA MƠ SẸO TỪ L? ?T CẮT MÔ DÂU TẰM TRẮNG (Morus alba L. ) TRÊN MÔI TRƢỜNG MS RẮN VÀ L? ??NG” nhằm mục đích tìm mơi trƣờng thích hợp cho việc hình thành phát triển mô sẹo từ l? ?t cắt mỏng... rắn Thân non dâu tằm trắng (Morus alba L. ) cắt thành l? ?t mỏng dày khoảng 34 mm 1.2 Vật liệu tạo dịch huyền phù tế bào Mô sẹo dâu tằm (Morus alba L. ) từ môi trƣờng MS rắn sau tuần thứ chuyển vào