sử dụng chỉ thị phân tử xác định và chọn lọc gen kháng bệnh đạo ôn trên các giống lúa địa phương và một số dòng chỉ thị

Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 Phần Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề Lúa ba lơng thực chủ yếu giới (lúa, lúa mỳ ngô),là lơng thực nửa dân số giới phần lớn dân châu á(IRRI 1994) Khoảng 40% dân số sử dụng lúa gạo nguồn lơng thực chính, 25% sử dụng lúa gạo 1/2 phần lơng thực hàng ngày Nh vậy, lúa gạo có ảnh hởng tới 65% dân số giới [9] Hiện giới có khoảng 100 nớc trồng lúa tập trung chủ yếu Châu á, 85% sản lợng lúa giới đợc sản xuất nớc châu á: Trung Quốc, ấn Độ, Inđônêxia, Banglades, Việt Nam, Thái Lan, Myanma Nhật Bản [1] Việt Nam nớc có truyền thống sản xuất lúa nớc từ lâu đời, có diện tích trồng lúa đứng thứ giới (7453000 ha), sau ấn Độ, Trung Quốc, Inđônêsia, Bănglades Thái Lan [3] Trong năm qua nớc ta sản xuất đảm bảo an ninh lơng thực mà vơn lên nớc xuất gạo đứng thứ giới Năm 2005, lợng gạo xuất Việt Nam vợt số 5,2 triệu tấn, chiếm 23% lợng gạo xuất toàn cầu [6] Cho tới nay, với tiến khoa học kỹ thuật, suất chất lợng lúa gạo ngày cáng đợc nâng cao Với mục tiêu tăng nhanh sản lợng, biện pháp thâmcanh đợc áp dụng triệt để, kỹ thuật canh tác có nhiều thay đổi so với trớc, giống lúa đợc đa trồnh mà cha qua kiểm định kỹ lỡng làm cấu giống cân đối.đó cha kể đến lợng khổng lồ phân bón Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 thuốc trừ sâu bệnh nguyên nhân làm cho sâu bệnh thay đổi thành phần, số lợng, mức độ gây hại xuất nòi có tính độc cao, gây hại quy mô lớn giống lúa dần tính kháng dịch bệnh hình thành, phá hại nặng cho vùng trồng lúa Trong bệnh hại lúa, bệnh đạo ôn nấm Pyricularia Oryzae Cav gây đợc coi bệnh hại quan trọng có ý nghĩa kinh tế nớc trồng lúa Theo số liệu Cục BVTV, từ năm 1999-2003, diện tích lúa nhiễm đạo ôn trung bình năm nớc ta khoảng 298.977 [4].năm 2003 nớc có 265.216 bị bệnh đạo ôn diện tích nhiễm nặng 1.532 ; 25.715 bị bệnh đạo ôn cổ diện tích bị nhiễm nặng 166 ha[1] riêng vụ hè thu vụ mùa năm 2004 nớc có 779 bị bệnh đạo ôn , 433 bị bệnh đạo ôn cổ bông[2].Năm 2005, diện tích lúa bị nhiễm đạo ôn khoảng 212.626 ha, diện tích nhiễm nặng khoảng 4.275 Diện tích nhiễm đạo ôn cổ khoảng 23.751 ha, diện tích nhiễm nặng 494 [2] ể phòng trừ bệnh này, nhiều biện pháp khác đợc áp dụng nh:canh tác, dùng thuốc hoá học, chọn tạo giống kháng bệnh;trong biện pháp sử dụng giống kháng đợc coi có hiệu kinh tế không gây ô nhiễm môi trờng tạo nông sản Trong năm gần đây, nhiều giống kháng đợc đa vào sản xuất Tuy nhiên sử dụng giống diện rộng sau vài ba năm chúng lại trở thành nhiễm biến đổi nòi, chủng nấm gây bệnh đạo ôn theo Veraraghavan(1975), giới có 256 chủng nấm gây bệnh đạo ôn tơng ớng với chủng có gen kháng khác nhau.Hiện Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 có 30 locus gen kháng bệnh.mỗi gen kháng đợc số chủng định Có gen kháng mạnh với chủng nhng lại bị nhiễm nặng chủng khác Để tạo giống kháng bền vững với bệnh đạo ôn, việc tìm nguồn gen kháng việc cần thiết tập đoàn giống lúa địa phơng Việt Nam đa dạng phong phú, nguồn gen quý giá cho nhà chọn giống sử dụng để lai tạo muốn khai thác sử dụng nguiồn gen cần phảI có nghiên cứu kỹ lỡng đặc điểm nông sinh học, khả kháng bệnh, đồ genom vị trí gen kháng đồ.bằng kỹ thuật tiên tiến công nghệ sinh học nh PCR, RFLPthì việc phát gen kháng đạo ôn giống trở lên đơn giản Chính chúng tôI tiến hành đề tài:Sử dụng thị phân tử xác định chọn lọc gen kháng bệnh đạo ôn giống lúa đị phơng số dòng thị 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích -Nghiên cứu khả kháng bệnh đạo ôn giống lúa địa phơng -sử dụng thị phân tử tìm gen kháng bệnh đạo ôn hữu hiệu Pi-ta giống 1.2.2 Yêu cầu -Nghiên cứu đặc điểm nông sinh học liên quan tới tính kháng đạo ôn giống lúa địa phơng Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 -Nuôi cấy lây nhiễm nhân tạo Isolate phân lập miền bắc Việt Nam cho giống đánh giá khả kháng bệnh chúng -Sử dụng thị phân tử tìm gen kháng bệnh Pi-ta giống lúa địa phơng Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 Phần Tổng quan tình hình nghiên cứu nớc 2.1 Tình hình nghiên cứu nớc Bệnh đạo ôn lần đợc phát Italia năm 1560, sau Trung Quốc năm 1637 Soong Ying Shin, Nhật năm 1740 Tsuchiya (Goto,1953) Nguyên nhân gây bệnh nấm Pyricularia oryzae Cav đợc xác định Cavara Italia [21] Mỹ Mct Calf (1906,1907) cho biết miền Nam Carolina bệnh đạo ôn xuất sớm vào năm 1876 ấn Độ, bệnh đợc biết đến vùng đồng Thajaru miền Nam ấn Độ năm 1918 (Mc Rae, 1922) gây thành dịch tàn phá nghiêm trọng vào năm 1919 (Padmanabhan, 1965) Việc nghiên cứu ngày đợc đẩy mạnh Nhật, ấn Độ, Philippin Mỹ Những công bố, nghiên cứu bệnh đạo ôn thời gian qua ngày nhiều Padwick (1950), Ou (1985), Further Pabmanabhan (1965), Gangopadhyay (1983), Gangopadhyay Pabmanabhan (1987), K.Manibhushan.Rao (1990) 2.1.1 Phân bố địa lý Bệnh đạo ôn bệnh hại phổ biến lúa, bệnh xuất gây hại hầu hết vùng trồng lúa giới, ngoại trừ bang California Mỹ Bệnh xuất vùng đất trũng ngập nớc vùng đất cao ma nhiều, vùng trồng lúa ngập nớc hay vùng nớc sâu Trong điều kiện khô hạn, đặc biệt vùng xích đạo, nơi nhiệt độ cao, ẩm độ thấp, nơi cánh đồng có mực nớc lớn, bệnh thờng lây qua đốt [21] Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 2.1.2 Nguyên nhân gây bệnh Bệnh đạo ôn hại lúa bệnh truyền nhiễm nấm Pyricularia oryzae Cav gây Bệnh đợc phát từ lâu song phải đến năm 1871 Garovario Italia cho bệnh nấm Pleospora oryzae Cav Năm 1891, Cavara ngời mô tả nấm bệnh lúa, xác định thức nấm Pyricularia oryzae Cav nguyên nhân gây bệnh đạo ôn lúa, theo phân loại nấm Saccardo Nấm Pyricularia oryzae Cav có tên khác Pyricularia grisea, Magnaporthe gresea Nấm Pyricularia oryzae Cav thuộc họ Moniliaceae, Moniliales, lớp nấm Bất toàn Cành bào tử phân sinh nấm hình trụ, đa bào không phân nhánh, đầu cành thon gấp khúc Nấm thờng sinh từ cụm cành từ 3-5 Bào tử phân sinh hình lê hình nụ sen, thờng có từ 2-3 ngăn ngang, bào tử không màu, kích thớc trung bình bào tử nấm 19-23 x 10-12 àm Nhìn chung kích thớc bào tử nấm biến động phụ thuộc vào isolate, điều kiện ngoại cảnh giống lúa Nấm đạo ôn thờng sinh trởng phát triển thuận lợi nhiệt độ 25-280C ẩm độ không khí 93% Phạm vi nhiệt độ nấm sản sinh bào tử từ 10-300C Điều kiện ánh sáng âm u có tác dụng thúc đẩy trình sản sinh bào tử nấm Bào tử nấm nảy mầm tốt nhiệt độ 24-28 0C có giọt nớc Quá trình xâm nhập nấm vào phụ thuộc nhiều vào nhiệt độ, ẩm độ không khí ánh sáng điều kiện bóng tối, nhiệt độ 24 0C ẩm độ bão hoà điều kiện thuận lợi cho nấm xâm nhập vào Trong trình gây bệnh, nấm tiết số độc tố nh nh axit piconinic (C6H5N02) piricularin (C18H14N2O3) kìm hãm hô hấp phân huỷ enzim chứa kim loại cây, kìm hãm sinh trởng lúa Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 2.1.3 Triệu chứng bệnh đạo ôn Nấm gây bệnh đạo ôn công gây hại hầu hết giai đoạn sinh trởng lúa Triệu chứng điển hình bệnh vết đốm lá, lúc đầu đốm nhỏ hình tròn hình bầu dục có màu xanh xám xám sẫm, vết bệnh lan rộng, nhanh điều kiện ẩm ớt có hình dạng mắt én, hình thoi có mầu xám trắng, có đờng viền xung quanh mầu nâu nâu đỏ Trên giống lúa nhiễm bệnh, điều kiện độ ẩm cao, vết bệnh phát triển kéo dài tới 1- 4,5 cm rộng từ 0.3 0.5 cm Nấm bệnh có khả xâm nhiễm gây hại bẹ lá, đốt thân, đặc biệt giai đoạn trởng thành, bệnh cổ gốc gây thiệt hại cho suất [12] 2.1.4 Những thiệt hại bệnh đạo ôn gây sản xuất lúa Bệnh đạo ôn bệnh hại nghiêm trọng lúa phát tán sức tàn phá rộng Nó làm cho nhiều vùng trồng lúa đạt đợc kết mong muốn áp dụng nhiều biện pháp phòng chống Hạt giống nhiễm bệnh thờng làm chết, bệnh đạo ôn cổ làm nửa chí lúa, làm giảm suất Những nghiên cứu thiệt hại có ý nghĩa nh: Italia (Baldacci, 1947), ấn Độ (Padmanabhan, 1967), Nhật (Goto, 1963), Hàn Quốc (Crill cộng sự, 1982), Philippin (Ou, 1985), Ai cập (Readdy Bon man, 1987) ấn Độ, Padmanabhan (1967) nghiên cứu mối quan hệ suất với tỉ lệ mắc bệnh đạo ôn, tìm tỉ lệ mắc bệnh 2% suất giảm 4% Kato (1974) đa phơng pháp tính thiệt hại suất theo đạo ôn cổ bông, đốt thân Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 Earlier Kuribayashi Ichikawa (1982) tính toán thiệt hại đạo ôn gây phơng trình đờng thẳng: y = 0.69x + 2,8 Trong y : tỉ lệ thiệt hại x : tỉ lệ lúa mắc bệnh đạo ôn Tuy nhiên phơng trình tính đợc ảnh hởng bệnh đạo ôn bông, mà không tính đợc ảnh hởng bệnh Nhiều công trình nghiên cứu tác giả đánh giá thiệt hại bệnh nh: Ou Nuque (1963), Goto (1965), Padmanbhan (1965), Tien va Harang (1975) Những báo cáo thiệt hại đạo ôn cổ gây tác giả nh: Ktasube Koshimizu (1970), Kapoo Sigh (1983), Sharama cộng (1988) quan trọng Theo Supad (1982) quan sát thấy hạt giống nhiễm bệnh đạo ôn suất giảm 30% (Malaysia) Trong Brazil, Prabhu Moris (1986) cho biết hạt giống nhiễm bệnh đạo ôn trồng vùng đất cao làm giảm suất tới 61% Thái Lan, Loehken (1980) thấy suất giảm từ 44 54% trồng hạt giống vùng nớc chảy Tác giả Reddy cộng (1988) đa phơng trình thể mối quan hệ suất tỷ lệ bệnh: y = 4306.4- 67.7 x ( r = 0.9427 ) Trong y : suất tính đợc x : tỉ lệ bệnh ( % ) Tác giả Surin cộng (1989, 1991) đánh giá thiệt hại suất nhiều vụ lúa kết luận vùng bị nhiễm bệnh đạo ôn 1% suất giảm 3% Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 Theo Torres Teng (1989,1991 ) sử dụng phơng pháp cải tiến đánh giá thiệt hại suất cho đạo ôn (LBl ) đạo ôn (PBl): Y = 5.0725 + 0.3664LBl + 0.3301PBl (r2 = 0.72, p = 0.01) [21] Về thiệt hại đồng ruộng, hàng năm ngời ta có ghi nhận đáng kể thiệt hại bệnh đạo ôn gây nhiều địa phơng, sử dụng rộng rãi nhiều loại thuốc hoá học Năm 1850, ấn Độ sản lợng bị thiệt hại lên tới 75%, Philippin có vài nghìn hecta bị hại bệnh đạo ôn sản lợng thất thu ớc tính khoảng 50% Nhật Bản (1950-1960) thiệt hại bình quân 2,89% tổng sản lợng lúa, có nỗ lực sử dụng thuốc phòng trừ bệnh Năm 1988, dịch bệnh đạo ôn gây thiệt hại nặng vùng duyên hải phía bắc Nhật Bản, tổng sản lợng bị thiệt hại quận Fukusima 24%, có nơi bị thiệt hại lên tới 90% Philippin (1962 1963) suất lúa bị giảm bệnh đạo ôn gây ớc tính 90% số nơi từ 50-60% tỉnh Bicol tỉnh Leyte Hàn Quốc (1989) báo cáo thiệt hại sản lợng đạo ôn gây 4.2% năm 1978 3.9% năm 1980 [12] 2.1.5 ảnh hởng dinh dỡng đến phát triển nấm Pyricularia oryzae Cav gây bệnh đạo ôn Những nghiên cứu ảnh hởng dinh dỡng đến nấm gây bệnh đạo ôn cho thấy số axit amin cần thiết cho sinh trởng phát triển nấm nh: Biotin, Thiamime Theo nghiên cứu Otani (1952) cho thấy KNO 3, NaNO3, axit aspartic có tác dụng kích thích phát triển sợi nấm Nguồn dinh dỡng cacbon dùng nuôi cấy nấm sử dụng nhiều loại đờng khác nh Maltose, Saccarose, Glucose, Insulin, Mannitol Ngoài dùng axit hữu nh axit Succinic Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 Những môi trờng giàu dinh dỡng đạm từ Peptone dịch chiết nấm men làm tăng khả sản sinh bào tử nấm Pyricularia oryzae Cav Môi trờng bột mạch agar (OMA), đợc sử dụng phổ biến nuôi cấy nấm bệnh để sản xuất bào tử cho lây nhiễm Trong nuôi cấy nguồn nấm sản xuất bào tử dùng để lây nhiễm bệnh nhân tạo phải quan tâm đến dinh dỡng môi trờng đợc sử dụng Nhiều loại môi trờng đợc dùng nghiên cứu để kích thích trình sản sinh bào tử nấm đạo ôn nh Rice Polish Agar, môi trờng đợc sử dụng nhiều Mỹ Đài Loan Nhật Bản, sử dụng hạt lúa mạch để tạo môi trờng nuôi cấy Nấm Pyricularia oryzae Cav phát triển tốt nhiều loại môi trờng dinh dỡng có chứa mô thực vật dịch chiết trồng Khi nuôi cấy, cho thêm vào môi trờng nuôi cấy dịch chiết rơm rạ kích thích sinh trởng sản sinh bào tử nấm [12] 2.1.6 Các chủng sinh lý nấm gây bệnh đạo ôn Trong tự nhiên, khả gây bệnh nấm Pyricularia oryzae Cav biến đổi đột biến nấm, tác động yếu tố sinh thái giống lúa Từ hình thành nên chủng sinh lý nấm Pyricularia oryzae Cav khác Những chủng không khác hình thái mà khác đặc tính gây bệnh nhóm giống lúa riêng biệt [8] Năm 1922, Nhật Bản tác giả Sasaki lần nghiên cứu phát nòi sinh học nấm Pyricularia oryzae Cav gây bệnh đạo ôn Nhng sau sử dụng giống Futaba có gen Pi-a vốn giống kháng nòi nấm A trở thành giống nhiễm nặng việc nghiên cứu nòi nấm Pyricularia oryzae Cav thực đợc bắt đầu Nhật, Mỹ số nớc khác Tuy nhiên, cha có đồng việc sử dụng giống lúa dùng để xác định loài giống gây bệnh đạo ôn nớc Vì vậy, loài nấm nớc so sánh với loài 10 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 dinh dỡng đến phát triển chủng sinh lý nấm Pyricularia oryzae Cav Kết đợc trình bày bảng 4.13 Bảng 4.13 : ảnh hởng số môi trờng nhân tạo đến phát triển tản nấm Môi trờng Cám Agar Bột gạo Agar Bột ngô Agar OMA PSA Cám Agar Bột gạo Agar Bột ngô Agar OMA PSA Cám Agar Bột gạo Agar Bột ngô Agar OMA PSA Cám Agar Bột gạo Agar Bột ngô Agar OMA PSA Cám Agar Bột gạo Agar Bột ngô Agar OMA PSA Chủng nấm 100.0 647.4 101.7 701.6 704.7 Đờng kính tản nấm sau ngày nuôi cấy (mm) ngày ngày 10 ngày 12,67 27,17 40,25 51,33 63,83 11,25 25,67 30,00 52,29 64,67 12,83 27,33 41,17 56,29 63,08 12,83 27,17 39,58 57,83 63,67 12,00 27,58 41,58 61,92 70,67 11,08 24,33 35,25 52,42 64,17 8,83 24,33 36,67 53,92 63,58 10,00 25,75 37,42 53,17 62,17 10,67 25,42 37,50 52,25 64,67 11,75 26,17 39,33 53,33 65,25 10,92 24,17 36,92 51,50 60,42 8,67 23,33 33,57 46,83 58,08 10,00 24,40 33,50 46,58 51,550 9,67 21,92 33,08 48,17 54,83 10,25 27,33 38,67 52,75 64,62 10 22,58 37,08 54,75 68,00 9,08 25,67 38,58 54,83 68,50 9,92 25,42 38,92 53,92 70,42 9,92 25,42 36,00 49,42 67,33 11,50 25,50 39,75 50,08 67,75 11,17 25,50 32,67 49,58 64,08 8,67 23,58 38,25 51,42 65,42 9,83 23,42 36,67 50,92 71,17 9,58 22,83 35,83 50,67 62,75 10,42 26,67 41,42 52,92 70,00 Qua bảng 4.14 cho thấy: Các chủng sinh lý nấm Pyricularia oryzae Cav phát triển tất loại môi trờng, nhiên mức độ sinh trởng phát triển môi trờng khác khác 54 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 Chủng 100.0 sau ngày nuôi cấy tản nấm phát triển mạnh môi trờng bột ngô agar OMA (đờng kính 12,83 mm), môi trờng bột gạo agar (11,25 mm) Sau 10 ngày nuôi cấy nấm phát triển môi trờng PSA (70,76 mm), môi trờng bột ngô agar Chủng 647.4 sau ngày nuôi cấy tản nấm phát triển mạnh môi trờng PSA (1,75mm), phát triển môi trờng bột gạo agar (8,33mm) Sau 10 ngày nuôi cấy nấm phát triển mạnh môi trờng PSA (65,25mm), môi trờng bột ngô agar (62,17 mm) Chủng 101.7 sau ngày nuôi cấy, tản nấm phát triển mạnh môi trờng cám agar (10,92mm), môi trờng bột gạo agar (8,67 mm) Sau 10 ngày nuôi cấy, tản nấm phát triển mạnh môi trờng PSA (64,42 mm) môi trờng bột ngô agar (51,50 mm) Chủng 701.6 sau ngày nuôi cấy phát triển mạnh môi trờng PSA, môi trờng bột gạo agar (9,08 mm) Sau 10 ngày nuôi cấy phát triển mạnh môi trờng bột ngô agar, môi trờng OMA (67,33mm) Chủng704.7, sau ngày nuôi cấy phát triển mạnh môi trờng cám agar (11,17 mm), môi trờng bột gạo agar (8,67 mm) Sau 10 ngày nuôi cấy, nấm phát triển mạnh môi trờng bột ngô agar (71,17 mm), sau đến môi trờng PSA (70,00 mm) môi trờng OMA (62,75 mm) Qua thí nghiệm tìm hiểu ảnh hởng số môi trờng nhân tạo đến phát triển chủng sinh lý nấm nấm Pyricularia oryzae Cav thấy sau ngày nuôi cấy, chủng sinh lý nấm nấm Pyricularia oryzae Cav cha có khác nhiều đờng kính Tản nấm thờng phát triển mạnh môi trờng PSA Sau 10 ngày nuôi cấy chủng nấm phát triển mạnh môi trờng 55 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 PSA Vì môi trờng PSA thờng đợc chọn môi trờng để cấy nấm Pyricularia oryzae Cav thí nghiệm để giữ nguồn dùng cho nghiên cứu thời gian khoảng năm[1] 56 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 ảnh 8: ảnh hởng số môi trờng đến phát triển chủng nấm 100.0 ảnh 9: ảnh hởng môi trờng PSA số chủng nấm Pyricularia Oryzae Cav 57 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 4.4 ảnh hởng thuốc Rabcide 30WP đến phát triển nấm Pyricularia Oryzae Cav môi trờng nhân tạo PSA Để đánh giá khả ức chế thuốc Rabcide 30WP đến phát triển chủng nấm Pyricularia oryzae Cav môi trờng nhân tạo (PSA), tiến hành thí nghiệm với công thức nồng độ: 0.05%, 0.1%, 0.15%, 0.2%, đối chứng (không có thuốc) với chủng sinh lý 647.4, 701.6 704.7 Kết đợc trình bày bảng 4.14 Bảng 4.14: Hiệu lực thuốc Rabcide 30WP phát triển nấm Pyricularia Oryzae Cav môi trờng nhân tạo PSA CTTN 0,05 0,1 0,15 Chủng nấm 647.4 Đờng kính tản nấm sau ngày nuôi cấy (mm) 10 ngày ngày HL (%) ngày 11,25 22,83 35,75 48,42 62,33 17,26 11,08 22,42 34,33 46,58 59,75 20,68 10,25 21,08 32,75 44,33 58,67 22,12 0,2 10,08 20,67 30,17 41,25 52,33 30,53 Đ/C 14,50 29,00 43,75 57,58 75,33 - 11,42 25,67 36,00 47,50 61,42 14,99 0,1 11,17 22,33 32,92 47,75 61,00 17,64 0,15 10,92 21,83 32,75 43,50 57,77 20,88 0,2 Đ/C 0,05 10,17 14,00 12,33 21,42 28,75 24,00 31,83 43,17 37,00 44,17 58,50 48,92 53,33 72,25 62,83 26,18 16,96 0,1 10,50 21,25 34,25 45,25 61,50 18,72 0,15 10,75 20,75 33,42 43,92 56,83 24,89 0,2 Đ/C 10,25 14,75 20,08 29,83 32,17 43,452 43,25 58,67 52,92 75,67 30,07 - 0,05 701.6 704.7 58 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 Qua bảng 4.15 cho thấy: công thức thí nghiệm có hiệu lực ức chế phát triển chủng nấm Pyricularia Oryzae Cav nồng độ khác hiệu lực thuốc khác Sau 10 ngày nuôi cấy cho thấy thuốc Rabcide 30WP có hiệu lực cao nồng độ 0,2% thấp nồng độ 0,05% tất chủng Thuốc Rabcide 30WP nồng độ 0,2%, chủng 647.4, sau 10 ngày nuôi cấy hiệu lực thuốc là: 30,53% Chủng 701.6 sau 10 ngày nuôi cấy hiệu lực thuốc 26,18% Với chủng 704.7 sau 10 ngày hiệu lực thuốc 30,07% Thuốc Rabcide 30WP nồng độ 0,05 hiệu lực thuốc thấp Với chủng 647.7, sau 10 ngày hiệu lực thuốc 17,26%, chủng 701.6 hiệu lực thuốc 14,99% Với chủng704.7 hiệu lực thuốc 16,96% 4.5 Khảo sát hiệu lực thuốc Rabcide 30WP phòng trừ bệnh đạo ôn hại lúa điều kiện nhà lới vụ mùa 2006 Từ kết thí nghiệm đánh giá phản ứng kháng bệnh giống lúa Việt Nam điều kiện nhà lới nhận thấy giống lúa Nếp 532 có phản ứng nhiễm nặng với chủng 701,6 Vì vậy, sử dụng giống lúa chủng nấm để tiến hành khảo sát hiệu lực thuốc Rabcide30WP bệnh đạo ôn hại lúa điều kiện nhà lới thông qua lây nhiễm bệnh nhân tạo 4.5.1 Thí nghiệm phun phòng bệnh (phun thuốc trớc - lây bệnh sau) Chúng tiến hành phun thuốc lên lúa trớc 3-4 ngày, sau tiến hành phun dung dịch bào tử nấm Pyricularia oryzae Cav chủng 701.6 lây bệnh giống Nếp 532, kết đợc trình bày bảng 4.15 59 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 Bảng 4.15: Hiệu lực thuốc Rabcide 30WP trừ bệnh đạo ôn điều kiện nhà lới vụ mùa 2006 ( phun thuốc trớc - lây bệnh sau) Công STT Mức độ nhiễm bệnh sau phun qua thức thí ngày theo dõi nghiệm ngày TLB (%) CSB (%) 12 ngày TLB (%) 17 ngày CSB (%) TLB (%) CSB (%) ngày 12 17 0.05 13.58 10.16 18.08 12.24 22.97 18.08 30.92c 32.42d 31.79c 0.1 14.12 8.69 14.75 9.48 18.37 14.01 36.41c 45.11c 44.59b 0.15 10 5.83 9.58 5.59 12.37 7.48 54.76b 63.83b 63.00a 0.2 5.48 3.02 6.38 3.99 5.41 74.96a 75.89a 72.08a ĐC 21.11 14.44 26.92 19.89 33.34 25.52 Ghi : TLB (%): Tỉ lệ bệnh CSB (%): Chỉ số bệnh 60 9.29 - - - LSD0.05 10.18 4.75 6.08 CV(%) 10.03 4.4 5.8 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 Đồ thị : Hiệu lực thuốc Rabcide 30WP phòng bệnh đạo ôn hại lúa điều kiện nhà lới vụ mùa 2006 ( phun thuốc trớc - lây bệnh sau) Qua đồ thị bảng 4.15 cho thấy: Thuốc Rabcide 30WP 0.05% có hiệu lực phòng bệnh thấp nhất, hiệu lực thuốc so với đối chứng sau phun ngày 30.92%, sau phun 12 ngày 32.42%, sau phun 17 ngày 31.79% Thuốc Rabcide 30WP 0.2% có hiệu lực phòng bệnh đạo ôn cao nhất, hiệu lực thuốc so với đối chứng sau phun ngày 74.96%sau 12 ngày 75.89%, sau 17 ngày 72.08% Kết phân tích thống kê cho thấy hiệu lực thuốc: Sau ngày, nồng độ thuốc 0.2% 0.15% có sai khác, nồng độ 0.1% 0.05% sai khác Sau 12 ngày nồng độ thuốc khác có sai khác 61 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 Sau 17 ngày nồng độ thuốc 0.2% 0.15% sai khác, nồng độ 0.1% 0.05% có sai khác 4.5.2 Thí nghiệm phun trừ bệnh (lây bệnh trớc - phun thuốc sau) Giống lúa Nếp 532, sau lây nhiễm đợc ngày (khi lúa bắt đầu biểu triệu chứng đầu tiên), tiến hành phản ứng phun thuốc Kết đợc trình bày bảng 4.16 Bảng 4.16 Hiệu lực thuốc Rabcide 30WP trừ bệnh đạo ôn điều kiện nhà lới vụ mùa 2006 (lây bệnh trớc - phun thuốc sau) STT CTTN Mức độ nhiễm bệnh Sau lây Mức độ nhiễm bệnh sau phun nhiễm ngày 12 ngày 17 ngày TLB CSB TLB CSB TLB CSB TLB CSB (%) 0.05 (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) Hiệu lực phòng trừ sau phun (%) 12 17 33.36 10.12 3.64 21.32 12.36 31.86 20.33 37.20 24.99 25.28c ngày 27.00d d 39.79 0.1 10 3.60 19.82 9.61 26.88 13.98 31.59 17.89 48.07c 46.76c b 63.00 0.15 11.20 3.64 17.96 7.02 20.64 10.03 25.50 13.30 52.14a 0.2 b 10.46 3.49 16.30 6.36 17.97 7.57 21.55 10.23 58.72a 73.75a 68.93a ĐC Ghi : 8.86 3.26 25.02 15.21 38.91 27.63 41.03 30.78 LSD0.0 TLB (%): Tỉ lệ bệnh (%) 61.11b - - - 8.27 5.87 11.47 9.4 5.4 11.3 CV(% CSB (%): Chỉ số bệnh (%) ) 62 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 Đồ thị : Hiệu lực thuốc Rabcide 30WP phòng bệnh đạo ôn hại lúa điều kiện nhà lới vụ mùa 2006 ( lây bệnh trớc phun thuốc sau) Qua bảng 4.17 cho thấy thuốc Rabcide 30WP có hiệu lực trừ bệnh đạo ôn rõ rệt so với đối chứng Nồng độ thuốc Rabcide 30WP 0.05% có hiệu lực trừ bệnh đạo ôn thấp nhất, hiệu lực thuốc qua ngày phun so với đối chứng 25.28%, sau 12 ngày phun 33.36%, sau 17 ngày phun 27.00% Nồng độ thuốc Rabcide 30WP 0.2% có hiệu lực trừ bệnh đạo ôn cao nhất, hiệu lực thuốc qua ngày phun so với đối chứng 58.72%, sau 12 ngày phun 73.75%, sau 17 ngày phun 68.93% Kết phân tích thống kê cho thấy hiệu lực thuốc: Sau ngày nồng độ thuốc 0.2% có 0.15% sai khác, nồng độ 0.1% 0.05% có sai khác Sau 12 ngày nồng độ thuốc khác có sai khác 63 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 Sau 17 ngày nồng độ thuốc khác có sai khác Nh vậy, qua hai thí nghiệm khảo sát hiệu lực thuốc Rabcide 30WP phơng pháp phun phòng bệnh phun trừ bệnh cho thấy : Trong công thức thí nghiệm nồng độ thuốc cao hiệu lực thuốc cao Hiệu lực thuốc phun phòng bệnh cao phun trừ bệnh Hiệu lực thuốc tăng dần từ đến 12 ngày sau giảm dần theo dõi thời điểm 17 ngày sau phun ảnh 10: ảnh hởng thuốc Rabcide 30WP đến phát triển chủng sinh lý 704.4 môi trờng PSA 64 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 ảnh 11: Triệu chứng bệnh đạo ôn hại lúa giống Nếp 532 lây nhiễm chủng 701.6 (Phun thuốc trớc - lây bênh sau) ảnh 12: Triệu chứng bệnh đạo ôn hại lúa giống Nếp 532 lây nhiễm chủng 701.6 (Lây bệnh trớc phun thuốc sau) 65 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 Phần Kết luận đề nghị 5.1 Kết luận Trong trình thực đề tài rút kết luận sau: Chúng xác định đợc chủng sinh lý nấm Pyricularia oryzae Cav chủng: Chủng 100.0 giống lúa nếp HP Bình Xuyên - Vụ Bản - Nam Định, chủng 647.4 giống lúa nhị u 63 Bảo Xuyên - Vụ Bản - Nam Định, chủng 304.7 giống lúa Bắc Thơm số Bảo Xuyên - Vụ Bản - Nam Định, chủng 101.7 giống lúa Hơng cốm Trờng ĐH NNI, chủng 701.6 giống lúa Khang Dân Nam Mỹ - Nam Trực - Nam Định, chủng 000.7 giống lúa Q5 Nam Mỹ - Nam Trực Nam Định, chủng 704.7 giống lúa VHC Bảo Xuyên - Vụ Bản- Nam Định Thông qua thí nghiệm đánh giá mức độ kháng bệnh đạo ôn nhóm giống lúa: Nhóm giống lúa khảo nghiệm trờng Đại học Nông nghiệp I Hà Nội, nhóm giống lúa Việt Nam, Trung Quốc trồng sản xuất, nhóm giống lúa Công ty Giống trồng Nam Định cho thấy: Các nhóm giống lúa khác giống lúa khác có mức độ nhiễm bệnh khác chủng sinh lý nấm Pyricularia oryzae Cav khác Trong nhóm giống lúa trồng nghiên cứu khảo nghiệm Trờng Đại học Nông nghiệp I - Hà Nội có dòng, giống lúa có phản ứng kháng hoàn toàn với chủng sinh lý nấm Pyricularia oryzae Cav là: TBL06-3, TBL06-4, TBL06-5, TBL06-6, TBL06-8, TBL06-10, TBL06-12 Trong nhóm giống lúa Việt Nam, giống nhiễm nặng chủng 701.6, nhiễm đến nhiễm nặng chủng 000.7 Trong nhóm giống lúa Trung Quốc, giống lúa nhiễm nhiễm nặng chủng 701.6 66 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 Trong nhóm giống lúa Công ty giống trồng Nam Định, giống lúa có phản ứng từ nhiễm đến nhiễm nặng chủng 304.7 701.4 Các giống lúa có phản ứng kháng đến kháng cao chủng 100.0 Không có giống lúa nhiễm hoàn toàn hay kháng hoàn toàn với chủng nấm 3.Trên môi trờng nhân tạo khác nhau, chủng sinh lý nấm Pyricularia oryzae Cav khác hình thái khả phát triển tản nấm khác Các chủng sinh lý hầu hết phát triển mạnh môi trờng PSA, phát triển môi trờng bột gạo agar,OMA 4.Trên môi trờng nhân tạo PSA, thuốc Rabcide 30WP nồng độ 0.05%, 0.1%, 0.15%, 0.2% có khả ức chế phát triển chủng sinh lý nấm Pyricularia oryzae Cav nồng độ 0.2% hiệu lực thuốc cao Trong điều kiện nhà lới thuốc Rabcide 30WP có hiệu trừ bệnh cao Hiệu thuốc thí nghiệm phun phòng cao thí nghiệm phun trừ 5.2 Đề nghị Việc nghiên cứu xác định quần thể chủng sinh lý nấm Pyricularia oryzae Cav gây bệnh đạo ôn vùng sinh thái khác việc đánh giá tính kháng bệnh đạo ôn giống lúa việc làm có ý nghĩa khoa học thực tiễn Trên sở giúp cho công tác xây dựng cấu giống lúa hợp lý vùng sinh thái nhằm hạn chế tác hại bệnh Cần nghiên cứu sử dụng thuốc hoá học hợp lý, bổ xung loại thuốc mới, ảnh hởng tới môi trờng, sức khoẻ ngời nh hạn chế tối đa tợng chống thuốc Cần kết hợp với biện pháp khác nh chọn giống kháng bệnh, công nghệ sinh học, biện pháp canh tác để làm giảm việc sử dụng thuốc hoá học, bảo vệ môi trờng, cân sinh thái đồng ruộng, giảm chi phí cho sản xuất nông nghiệp 67 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 Mục lục 68 [...]... pháp chọn lọc dòng thuần đã tạo ra giống Kameli và Aikoku Từ 1910 đã sử dụng phơng pháp lai hữu tính để chọn tạo giống kháng từ đó nhiều giống kháng đạo ôn đã đợc sử dụng nh giống Norin6 kháng đạo ôn cổ bông, Norin8 kháng đạo ôn lá, Norin22 kháng cả đạo ôn lá và đạo ôn cổ bôngVới mục tiêu tạo giống mới năng suất cao, kháng bệnh đạo ôn cần phảI phát hiện, khai thác và sử dụng triệt để nguồn gen kháng đạo. .. định số lợng gen kháng đạo ôn và vị trí cửu nó trên NST cửu lúa, nghiên cứu môI trờng phân lập, cách phân lập, lây nhiễm ,và đánh giá sự đa dạng di truỳên về tính kháng đạo ôn cửu các giống lúa phục vụ cho công tác chon tạo giống kháng bệnh hiệu quả Tuy nhiên việc nghiên cú và chọn giống kháng bệnh đạo ôn vẫn còn nhiều khó khăn do: -Số lợng gen kháng đạo ôn rất nhiều và tồn tại dới các alen khác nhauvì... kháng đạo ôn của tập đoàn giống lúa thế giới Cho đến nay các gen kháng ổn định của các giống lúa địa phơng ở các vùng trên thế giới là rất đa dạng và phong phú cần đợc khai thác và sử dụng( Bệnh đạo ôn hại lúa_ Lê lơng Tề_NXBNN 1988) 2.1.8 ứng dụng marker phân rử trong nghiên cứu bệnh đạo ôn hại lúa DNA marker có thể đợc dùng để lập bản đồ genom, chọn lọc gián tiếp trong lai tạo giống lúa Phân tích quần... chẽ với gen kháng bệnh đạo ôn DNA marker có thể đơc sử dụng để: -phân tích di truyền tính kháng của các giống lúa có tính kháng ổn định -phát triển các dòng đẳng gen (NIL) trong đó các gen đơn kháng bệnh đạo ôn đã đợc xác định bản chất tổng quát về di truyền Vì một gen kháng nào đó phải đối đầu với 1 quần thể ký sinh trên ruộng lúa cho nên điều quan trọng là phải hiểu đợc đặc tính của mỗi gen kháng trong... thống các gen kháng quy định Tuỳ theo loại gen kháng lớn hay nhỏ, loại đơn gen hay đa gen của từng giống láu mà ta thấy có giống kháng dọc đơn gen hay kháng ngang đa gen giống kháng dọc có một gen kháng tơng ứng với một gen độc của nòi nấm đạo ôn nhất định nào đó đó là các giống có tính chống chịu rất cao đối với một số ít nòi đặc hiệu thể hiện bằng các phản ứng siêu nhạy tạo vết bệnh không hoàn chỉnh... khả năng kháng một số chủng sinh lý nấm Pyricularia oryzae Cav của một số dòng giống lúa - Khả năng kháng một số chủng sinh lý nấm Pyricularia oryzae Cav của một số dòng, giống lúa khảo nghiệm - Khả năng kháng một số chủng sinh lý nấm Pyricularia oryzae Cav của một số giống lúa Việt Nam đang sử dụng trong sản xuất - Khả năng kháng một số chủng sinh lý nấm Pyricularia oryzae Cav của một số giống lúa Trung... phổ kháng bệnh đạo ôn với những quần thể phụ của nấm ký sinh đã có nhiều nghiên cứu xác định gen kháng bệnh đạo ôn và vị trí của nó trên nhiễm sắc thể 13 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Vũ Quốc Huân CNSH-K48 đã đợc công bố Theo Zheng & ctv thì hiện nay trên thế giới đã tìm thấy 30 locus gen kháng bệnh đạo ôn, trong đó có 38 gen kháng chủ lực và một số gen đợc xác định vị trí trên bản đồ genom của cây lúa. .. nhiễm cao Theo các nhà chọn giống, để chọn tạo giống kháng bệnh đạo ôn ở Việt Nam thành công thì cần phải tổ hợp các gen kháng bệnh gồm Pi-1, Pi-z5, Pi-ta, Pi-ta2, Pi-k8 và Pi-b Theo PGS.Ts Phan Hữu Tôn(2004), muốn tạo giống kháng bệnh đạo ôn ở miền Bắc Việt Nam thành công thì cần phải sử dụng các gen kháng lại hầu hết các chủng gây bệnh nh gen Pi-k5, Pi-k, Pi-ta, Pi-ta2, Pi-z5, Pi-3 và Pi-5(t) 16... hoàn chỉnh sau 24h xâm nhiễm các sợi nấm trong mô bệnh chết dần Các giống kháng tạo ra các phytoalexin, các hợp chất phenon để chóng lại sự phát triển của nấm ở các giống kháng ngang đa gen thờng có phổ kháng rộng nhng mức độ kháng trung bình Các giống kháng đạo ôn sau khi bị nhiễm tạo ra lợng phytoalexin ít hơn các giống nhiễm lịch sử chọn tạo và sử dụng giống kháng bệnh đạo ôn bắt đầu từ những năm 1904... RFLP và thấy tính đa hình giữa các giống lúa là rất cao Nguyễn Thị Ninh Thuận và ctv(1996) đã nghiên cứu sự tơng tác giữa các nòi nấm bệnh đạo ôn đại diện ở miền Bắc và miền Trung Việt Nam với các dòng lúa chỉ thị và giống lúa địa phơng Kết quả là có nhiều giống địa phơng biểu hiện tính kháng rất cao nh Tám Thơm, Tẻ Tép ngợc lại, một số giống lúa đợc chọn tạo tại Việt Nam nh DT12, DT10, DT13 và CR203 ... RFLPthì việc phát gen kháng đạo ôn giống trở lên đơn giản Chính chúng tôI tiến hành đề tài :Sử dụng thị phân tử xác định chọn lọc gen kháng bệnh đạo ôn giống lúa đị phơng số dòng thị 1.2 Mục đích... khả kháng bệnh đạo ôn giống lúa địa phơng -sử dụng thị phân tử tìm gen kháng bệnh đạo ôn hữu hiệu Pi-ta giống 1.2.2 Yêu cầu -Nghiên cứu đặc điểm nông sinh học liên quan tới tính kháng đạo ôn giống. .. Norin6 kháng đạo ôn cổ bông, Norin8 kháng đạo ôn lá, Norin22 kháng đạo ôn đạo ôn cổ bôngVới mục tiêu tạo giống suất cao, kháng bệnh đạo ôn cần phảI phát hiện, khai thác sử dụng triệt để nguồn gen kháng