Nghiên cứu gây động dục đồng pha cho lợn nhận phôi

ðẶT VẤN ðỀ Công nghệ cấy truyền phôi giới lần ñầu tiên ñược thực thí nghiệm Walter Heap ñối tượng thỏ, thí nghiệm ñã chứng minh ñược phôi cá thể phát triển tử cung cá thể khác mà giữ nguyên ñược tính di truyền Sau thành công Heape, công nghệ phôi ñã ñược nghiên cứu phát triển nhiều loài ñộng vật khác ñược coi biện pháp tạo giống hoàn chỉnh nhất, tổng hợp lúc thành tựu sinh học sinh sản di truyền ñại (Hoàng Kim Giao cs, 1997.[5]) Cấy truyền phôi ngành khoa học ñại, ñã ñược áp dụng chăn nuôi nước phát triển cách rộng rãi Ở nước ta, công nghệ cấy truyền phôi ñã ñược ñưa vào áp dụng cách ñây không lâu ñã ñang thu ñược kết khả quan Công nghệ cấy truyền phôi ñược xem biện pháp ñặc biệt, áp dụng công nghệ cao việc sớm tạo giống tốt, giúp nâng cao khả chống bệnh phòng tránh số bệnh lây nhiễm cho ñàn lợn, nhân nhanh giống tốt, quý thực tế sản suất sở khai thác triệt ñể tiềm di truyền cá thể cao sản, nâng cao khả sinh sản, rút ngắn khoảng cách hệ; tăng suất, chất lượng thịt, tạo nên ñàn gia súc có phẩm chất di truyền hoàn toàn mới; tiết kiệm kinh phí ñầu tư chuồng trại, nhân công thức ăn Công nghệ cấy truyền phôi giúp người dễ dàng việc vận chuyển, xuất nhập, trao ñổi giống vùng, ñịa phương thông qua vận chuyển phôi (Quản Xuân Hữu cs, 2005 [22]) Bên cạnh ñó, cấy truyền phôi làm tăng khả thích nghi cho vật môi trường Có thể nhận thấy, công nghệ phôi ñã tạo ñường ñi cho công tác giống chăn nuôi Việc thúc ñẩy nghiên cứu cấy truyền phôi lợn bắt ñầu bùng nổ vào năm 1951, nhà nghiên cứu Liên Xô cũ lần ñầu tiên báo cáo thành công cấy truyền phôi Cho tới nay, công nghệ phôi lợn ñã ñang ñược nghiên cứu nhiều quốc gia giới Việt Nam Công nghệ cấy truyền phôi bao gồm nhiều công ñoạn ðể thực cấy truyền phôi thành công, ñiều kiện thiếu ñó ñồng pha ñộng dục lợn cho phôi lợn nhận phôi, hay nói sâu ñồng pha sinh lý phôi quan sinh sản mẹ nhận phôi Có nhiều phương pháp khác ñể gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi, phổ biến phương pháp sử dụng hormone hướng sinh sản ñể chủ ñộng gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi Ngày nay, với phát triển công nghệ cấy truyền phôi, gây rụng trứng nhiều, kỹ thuật gây ñộng dục ñồng pha ñã có bước phát triển, qua ñó chủ ñộng số lượng nhận phôi, thúc ñẩy công tác lai tạo, nhân giống, bảo tồn giống lợn quý, giống lợn cao sản Xuất phát từ thực tế trên, nhằm hoàn thiện quy trình gây ñộng dục ñồng pha, mang lại hiệu cao cho công tác cấy truyền phôi lợn, qua ñó ứng dụng vào thực tế sản xuất chăn nuôi, ñã tiến hành thực ñề tài: “Nghiên cứu gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi” Mục ñích yêu cầu: - Chủ ñộng gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi, qua ñó nâng cao hiệu công nghệ phôi lợn - Nắm ñược phương pháp gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi, phương pháp theo dõi biểu ñộng dục lợn Ý nghĩa khoa học thực tiễn: Luận văn công trình nghiên cứu gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi Kết nghiên cứu góp phần hoàn thiện kỹ thuật gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi nói riêng công nghệ phôi lợn nói chung Việt Nam Chương I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu công nghệ phôi lợn giới Công nghệ cấy truyền phôi lợn bắt ñầu bùng nổ sau nhà khoa học Liên Xô lần ñầu tiên báo cáo thành công việc cấy truyền phôi lợn ðầu năm 1960, việc thu cấy phôi chủ yếu dựa vào phương pháp phẫu thuật ổ bụng ðến năm 1968, cấy truyền phôi lợn ñược thực thành công phương pháp không phẫu thuật, ñến năm 1970, phôi lợn ñã ñược vận chuyển quốc gia, ñiều mà trước ñó ñã ñược thực thành công ñối với bò Tại Nhật Bản, ca cấy truyền phôi lợn thành công lần ñầu tiên ñược báo cáo vào năm 1973 Kể từ ñó cho ñến nay, công nghệ phôi lợn giới ñã ñạt ñược bước nhảy vọt kỹ thuật sản xuất phôi, ñông lạnh bảo quản phôi, cấy truyền phôi Theo tổng hợp hiệp hội khoa học công nghệ Nhật Bản [15], thành công ứng dụng công nghệ phôi lợn ñược báo cáo như: Sử dụng cấy truyền phôi lợn ñể tạo ñàn bệnh (Curnock cộng sự, 1976); sử dụng công nghệ phôi ñể tạo ñàn bệnh có liên quan tới bệnh Aujeszky (James cộng sự, 1983); tạo lợn chuyển gene (Hammer cs, 1985); tạo lợn từ phôi cắt ñôi ( Rorie cộng sự, 1985); tạo lợn từ phôi thụ tinh ống nghiệm (Cheng cộng sự, 1986); Tạo lợn từ cấy chuyển phôi ñông lạnh bảo quản 196oC (Orugi cộng sự, 1990); bảo quản thành công phôi ñông lạnh phương pháp ñông lạnh cực nhanh (Kobayashi cộng sự, 1996) Tình hình nghiên cứu nước Công nghệ phôi ñộng vật ñã ñược bắt ñầu nghiên cứu Việt Nam từ năm 1978 ñối tượng thỏ, tiếp ñó nghiên cứu công nghệ phôi loài ñộng vật khác dê, trâu, công nghệ phôi Việt Nam ñang ñược cải tiến ứng dụng mạnh mẽ ñối tượng bò sữa bò thịt Công nghệ phôi lợn ñã bước ñầu ñược nhà khoa học công nghệ sinh học sinh sản ñộng vật nghiên cứu Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Viện chăn nuôi Quốc gia Các báo cáo nuôi chín trứng lợn ống nghiệm, tạo phôi lợn in vitro phương pháp thụ tinh ống nghiệm, vi tiêm tinh, tạo phôi lợn in vivo, gây ñộng dục ñồng pha cấy truyền phôi lợn ñã ñược công bố năm gần ñây Việc tạo phôi lợn in vitro phương pháp nuôi trứng chín in vitro, thụ tinh in vitro vi tiêm tinh Việt Nam ñã lần ñầu tiên ñược công bố ðặng Nguyễn Quang Thành cộng sự, 2008 [4] Theo tác giả này, tỷ lệ trứng thành thục in vitro ñạt 60,7% tỷ lệ phôi thụ tinh ống nghiệm phát triển ñến giai ñoạn phôi dâu ñạt 27,11%, ñó tỷ lệ phôi dâu trường hợp tạo phôi phương pháp vi tiêm tinh ñạt 17,6% Nghiên cứu tạo phôi lợn phương pháp thụ tinh ống nghiệm sử dụng môi trường NCSU có bổ xung thêm 10% dịch nang trứng, Nguyễn Thị Thoa cộng 2008 [18] ñã tiến hành nuôi trứng ñược phân loại chất lượng loại A, loại B, loại C ñạt tỷ lệ thành thục sau nuôi 44 ñạt 65,73%; 63,49% 11,42% Sử dụng trứng thành thục ñể thụ tinh ống nghiệm cho tỷ lệ phôi dâu ñạt 23,75%, tỷ lệ phôi nang ñạt 13,59% Việc tạo phôi lợn nhân từ tế bào soma ñã ñược tiến hành nghiên cứu Nguyễn Hữu ðức cộng (2006), [17] ñã tạo phôi lợn in vitro phương pháp cấy chuyển nhân tế bào vào trứng lợn ñã loại nhân với hỗ trợ thiết bị Piezo, kết tỷ lệ phôi 4-8 tế bào ñạt 33,33%, tỷ lệ phôi dâu ñạt 21,43% Việc ñiều khiển ñộng dục rụng trứng lợn ñã bước ñầu ñược nghiên cứu báo cáo Quản Xuân Hữu cộng (2008), [21] Theo ñó, việc ñiều khiển ñộng dục rụng trứng cho lợn Móng Cái lợn Bản sử dụng PMSG, hCG, PGF2α ñạt kết tương ñối khả quan: tỷ lệ lợn ñộng dục ñạt 86,67% lợn Móng Cái, 62,5% lợn Bản Báo cáo cho thấy hiệu việc sử dụng hormone việc gây siêu noãn lợn Bản Theo kết công bố ðào ðức Thà cộng 2008 ([3]), gây ñộng dục cho lợn nhận phôi phương pháp kết hợp eCG hCG ñối tượng lợn hậu bị cho kết tỷ lệ phản ứng lợn ñạt trung bình 88,9%, nhiên kết dao ñộng từ 33,33 – 100% số lợn có phản ứng, tuỳ lô thí nghiệm Sử dụng phương pháp thu phôi sau giết mổ lợn thí nghiệm, nhóm tác giả ñạt kết số phôi thu ñược lợn Móng trung bình ñạt 8,71 phôi loại A, B; 3,14 phôi loại C lần thu phôi Tỷ lệ tương ứng lợn ðại Bạch 8,91 loại A-B 2.45 phôi loại C cho lần thu phôi phương pháp gây rụng trứng nhiều Cấy chuyển phôi cho lợn ñộng dục ñồng pha, tỷ lệ lợn ñộng dục ñồng pha ñạt 65,24%, tỷ lệ ñẻ so với tổng số ca cấy phôi ñạt 22,22% Những kết nghiên cứu công nghệ phôi lợn thời gian qua nhà khoa học nước sở tốt ñể tiếp tục tiến hành nghiên cứu công nghệ phôi lợn Việt Nam 1.3 Các hormone thường sử dụng ñiều khiển ñộng dục ñồng pha cho lợn Có thể sử dụng lợn ñộng dục tự nhiên, phương pháp chủ yếu ñược sử dụng giới chủ ñộng dùng hormone hướng sinh dục ñể chủ ñộng ñiều khiển ñộng dục cho lợn tạo phôi in vivo, làm nhận phôi Chủ ñộng gây ñộng dục ñồng pha giúp cho nhà nghiên cứu nhà sản xuất giảm thiểu ñược chi phí thông qua việc giảm số lượng nhận phôi so với sử dụng lợn ñộng dục tự nhiên, từ ñó kéo theo việc giảm chi phí chăm sóc, nuôi dưỡng, chuồng trại Sử dụng hormone chủ ñộng ñiều khiển ñộng dục cho lợn ñặc biệt có ý nghĩa ñối với lợn giai ñoạn trước sinh sản Có thể sử dụng ñơn lẻ loại hormone kết hợp nhiều loại hormone khác ñể ñiều khiển chu kỳ ñộng dục lợn nái Liều lượng hormone sử dụng phụ thuộc vào giống, tuổi ñường cung cấp thuốc Các chế phẩm hormone hướng sinh dục hầu hết ñã ñược tách chiết tổng hợp ñược lưu hành rộng rãi thị trường nhằm làm tăng suất sinh sản gia súc nói chung, lợn nói riêng Sau ñây số loại hormone hướng sinh dục ñược sử dụng phổ biến ñể ñiều khiển sinh sản lợn 1.3.1 Huyết ngựa chửa: Viết tắt PMSG (Pregnant mare’s serum gonadotropin) eCG (equine Chorionic Gonadotropin) Loại hormone ñược tách triết từ huyết ngựa có chửa Hàm lượng PMSG huyết cao khoảng 50-100 ngày kể từ ngựa mang thai Hoạt tính PMSG tương tự FSH LH, tác ñộng giống với FSH PMSG thường ñược sử dụng lĩnh vực ñiều khiển sinh sản gia súc với mục ñích kích thích phát triển nang trứng, kết hợp với LH ñể gây nên rụng trứng Liều PMSG tiêu chuẩn ñể sử dụng cho lợn ñược khuyến cáo 1000 UI/con, tiêm bắp Tuy nhiên phản ứng lợn ñối với PMSG có giao ñộng tương ñối lớn phụ thuộc vào nhiều yếu tố như: Mùa vụ, lô sản xuất thuốc, phản ứng giống lợn khác khác nhau, ñồng thời cá thể lợn khác phản ứng khác với PMSG Khi sử dụng ñiều chỉnh liều lượng PMSG cho phù hợp với tình hình thực tế, thấy lợn phản ứng mức, giảm liều ngược lại, lợn phản ứng phản ứng cần tăng liều PMSG PMSG ñược sử dụng rộng rãi ñể ñiều khiển ñộng dục ñồng pha gây siêu noãn cho lợn, ñặc biệt sử dụng cho lợn giai ñoạn trước lợn thành thục giới tính Cơ sở việc làm lợn hậu bị mẫn cảm với hormone ngoại lai ñó lại mẫn cảm với gonadotropin nội Tuy nhiên việc sử dụng liều cao PMSG hCG (human Chorionic Gonadotropin: Kích tố thai phụ nữ có chửa) có nhiều vấn ñề phức tạp khác ñi kèm Việc tăng liều PMSG làm tăng số lượng phôi thu ñược, ñôi làm gia tăng tỷ lệ viêm nội mạc tử cung tạo phôi không bình thường ([14]) 1.3.2 hCG (Human Chorionic Gonadotropin): hCG ñược phát có nước tiểu phụ nữ có thai hCG có hoạt tính tương tự LH, có tác dụng thúc ñẩy thành thục tế bào trứng gia súc dẫn tới rụng trứng, kích thích phát triển thể vàng sau trứng rụng Liều hCG ñược khuyến cáo cho lợn nái ngoại 1000UI, nhiên thực tế ñiều chỉnh liều lượng cho phù hợp với ñối giống lợn khác Hiện PMSG hCG ñã ñược sản xuất sử dụng rộng rãi giới lĩnh vực ñiều khiển sinh sản gia súc Sản phẩm ñược sử dụng rộng rãi hãng sản xuất thuốc thú y tiếng giới Intervet Hà Lan sản xuất phân phối Tại Việt Nam, PMSG hCG ñã ñược nghiên cứu sản xuất ứng dụng 1.3.3 PG600: PG600 sản phẩm hỗn hợp bao gồm 400 UI PMSG 200 UI hCG, nhờ kết hợp lúc hai hormone mà sản phẩm vừa có khả kích thích phát triển nang trứng, vừa có tính chất thúc ñẩy thành thục rụng trứng Hiện sản phẩm ñang ñược sử dụng mạnh mẽ ñể ñiều khiển ñộng dục nâng cao khả sinh sản lợn Việc sử dụng PG600 ñiều khiển chu kỳ ñộng dục nâng cao sức sinh sản lợn ñã ñược nhiều nhà khoa học công bố Chúng ñược sử dụng ñể kích thích thành thục giới tính lợn cái, có tới 50 – 80% lợn giai ñoạn trước thành thục giới tính xuất ñộng dục vòng 2-7 ngày sau tiêm liều PG600 ([14], [15]) PG600 ñược số nhà sản xuất thuốc thú y giới Việt Nam sản xuất ñưa thị trường, ñược sử dụng phổ biến sản phẩm PG600 hãng sản xuất thuốc thú y tiếng Intervet Hà Lan 1.3.4.Prostaglandin nhóm F2α: Hormone lần ñầu tiên ñược Eiber phát có tinh dịch người, ñó người ta cho xuất phát từ tuyến tiền liệt ñực, ñó ñược ñặt tên Prosstaglandin Tuy nhiên sau người ta phát nhiều loại Prosstaglandin khác Prosstaglandin nhóm F2α (PGF2α) chất có hoạt tính hướng sinh dục mạnh ðồng thời kết nghiên cho thấy PGF2α không ñược tiết từ tuyến tiền liệt mà ñược tiết từ tử cung nên thuật ngữ Prostaglandin không tính xác, nhiên thói quen người ta gọi Prostaglandin Prostaglandin có chất Lipoid, hoạt tính sinh học chủ yếu là: phá vỡ màng noãn bào gây tượng thải trứng, làm tiêu hủy thể vàng thông qua việc phong tỏa mạch máu tới nuôi thể vàng, tăng cường co bóp trơn ñường sinh dục.Từ năm 1966 người ta ñã tổng hợp ñược PGF2α, kể từ ñó tới kích tố ñược sử dụng rộng rãi lĩnh vực sinh sản gia súc ñiều trị bệnh sinh sản, kết hợp với hormone khác ñể gây ñộng dục thụ tinh ñồng loạt cho gia súc Hiện thị trường Việt Nam có có nhiều sản phẩm PGF2α với tên thương phẩm khác như: Hanprost (Hanvet – Việt Nam), Lutalyse (Pharmacia, N.V/S.A.Puurs-Belgium), Suiprost (Virbac), Prosolvin, Proloban, Irillen (Intervet)… Liều lượng, thời ñiểm sử dụng chu kỳ ñộng dục vị trí tiêm PGF2α khác ảnh hưởng khác tới kết ñiều khiển chu kỳ ñộng dục lợn Trong vòng 12 ngày ñầu tiên chu kỳ ñộng dục, tiêm liều PGF2α không làm rút ngắn chu kỳ ñộng dục lợn ([24], [28]) KUGE vcs (2006) [29] sử dụng Cloprostenol, dẫn xuất PGF2α ( Prostaglandine F2α) ñể tiêm cho lợn vào ngày thứ chu kỳ ñộng dục Kết quả: Với liều 1mg tiêm bắp hay tiêm vào tiền ñình âm ñạo ñều tác dụng rút ngắn chu kỳ ñộng dục lợn Nhưng sử dụng phương pháp tiêm hai lần cách 12 giờ, lần 1,5mg vào ngày thứ chu kỳ ñộng dục hiệu rút ngắn chu kỳ lợn mini ñã ñạt kết tốt, rút ngắn chu kỳ từ 18 ngày xuống 16 ngày lô cấp thuốc theo ñường tiêm bắp, ñặc biệt lô ñược cấp thuốc theo ñường tiêm vào tiền ñình âm ñạo, chu kỳ lợn ñược rút ngắn xuống 12 ngày 1.3.5 Oestrogen: Oestrogen kích tố chủ yếu tế bào nang trứng tiết trình nang trứng phát triển Oestrogen gồm hormome khác là: Oestradiol, Oestrol Oestriol, ñó Oestradiol có hoạt tính sinh học mạnh Tác dụng sinh lý Oestrogen trì ñặc ñiểm sinh dục thứ cấp cái, tác ñộng lên thần kinh trung ương gây nên hành vi ñộng dục ðồng thời tác ñộng tới vùng ñồi tuyến yên làm tăng tiết LH, góp phần vào rụng trứng Dưới tác dụng Oestrogen, tế bào ống sinh dục tăng sinh, xung huyết, tiết dịch gây biến ñổi ñặc trưng quan sinh dục ñộng dục ðây biểu bên chuẩn 10 Kết cho thấy: 100% lợn có phản ứng ñộng dục với biểu ñộng dục rõ ràng, sau tiêm PMSG vào ngày thứ 17 chu kỳ ñộng dục tự nhiên, lợn xuất ñộng dục vòng 24-36 giờ, trung bình 33,6 ± 10,03 Kết ñạt ñược tương ñương với tiêu tương ứng phương pháp Trung bình thời gian ñộng dục lợn ñược gây ñộng dục ñồng pha 79,20 ± 20,07 với thời gian chịu ñực 31,20 ± 6,57 So sánh với thời gian ñộng dục thời gian chịu ñực lợn ñộng dục tự nhiên không nhận thấy có khác Tuy nhiên so sánh với thời gian ñộng dục thời gian chịu ñực lợn ñược gây ñộng dục ñồng pha phương pháp 1, nhận thấy thời gian ñộng dục thời gian chịu ñực lợn ngắn hơn, ñiều cho phép ñánh giá khả quan rụng trứng tập trung lợn Phẫu thuật bộc lộ buồng trứng vào ngày thứ sau lợn kết thúc ñộng dục, kiểm tra số lượng thể vàng nang trứng tồn lưu có kết ñược thể bảng Bảng 6: Kết rụng trứng lợn gây ñộng dục ñồng pha cho lợn phương pháp Chỉ tiêu theo dõi Số lợn thí nghiệm X ± Mx Tổng số nang trứng phát triển (thể vàng + nang tồn lưu) 77 Trung bình số nang trứng phát triển 15,40 ± 3,58 Tổng số thể vàng: n (%) 72 (93,51%) Tổng số nang trứng tồn lưu 5 (6,49%) Trung bình số thể vàng/lợn 12,60 ± 3,65 Trung bình số nang tồn lưu/1 lợn 1,25 ± 0,50 32 Trong thí nhiệm này, lần tiêm PMSG trung bình huy ñộng ñược 15,40 ± 3,58 Tỷ lệ trứng rụng so với tổng số nang ñược huy ñộng phát triển ñạt 93,51%, cao so với tỷ lệ rụng trứng lợn gây ñộng dục ñồng pha phương pháp ñạt 81,18% So sánh kết gây ñộng dục ñồng pha cho lợn Móng Cái phương pháp phương pháp tiêu: Thời gian ñộng dục, thời gian chịu ñực, tỷ lệ trứng rụng cho thấy phương pháp có hiệu việc gây ñộng dục ñồng pha cho lợn Móng Cái, việc sử dụng liều lượng hormone hợp lý (1000 UI PMSG, 1000UI hCG) 3.4 Kết gây ñộng dục ñồng pha cho lợn phương pháp Phương pháp sử dụng ñể gây ñộng dục ñồng pha cho lợn ñang mang thai khoảng 12 – 40 ngày, lịch trình tiêm sau: Tiêm bắp 2ml Lutalyse, 48 sau tiêm 1000 UI PMSG, theo dõi lợn xảy thai ñộng dục Với phương pháp tiêm trên, tiến hành gây ñộng dục ñồng pha cho lợn thí nghiệm thu ñược kết trình bảy bảng Kết thu ñược cho thấy: trung bình 38,4 ± 10,04 sau tiêm PGF2α lợn xảy thai Tỷ lệ lợn bị sót xảy thai 20%, lợn bị sót có biểu ñộng dục không ñủ tiêu chuẩn làm nhận phôi Thời gian xuất ñộng dục lợn sau tiêm PGF2α 76,8 ± 13,68 Thời gian ñộng dục 79,20 ± 16,09 với thời gian chịu ñực 33,60 ± 10,04 Trung bình số lượng thể vàng 13,20 ± 1,64 thể vàng/con, chiếm tỷ lệ 81,17% so với tổng số nang trứng phát triển Như vậy, tỷ lệ lợn ñộng dục cao, ñạt 100% tổng số lợn ñược gây ñộng dục phương pháp có lợn bị sót dẫn tới tiêm 33 nhiễm, lợn không ñủ tiêu chuẩn ñể làm nhận phôi Tỷ lệ nang tồn lưu buồng trứng cao, chiếm 19,83% so với tổng số nang phát triển, ñây khiếm khuyết cần nghiên cứu khắc phục Bảng Kết gây ñộng dục cho lợn phương pháp Chỉ tiêu theo dõi X ± Mx Thời gian xảy thai sau tiêm PGF2α (giờ) Số lợn sót (n, %) 38,4 ± 10,04 (20%) Thời gian xuất ñộng dục sau tiêm PGF2α 76,8 ± 13,68 (giờ) Thời gian ñộng dục 79,20 ± 16,09 Thời gian chịu ñực 33,60 ± 10,04 Tổng số nang phát triển 16,40 ± 1,95 Số lượng thể vàng 13,20 ± 1,64 Tỷ lệ thể vàng/tổng số nang phát triển (%) Số nang tồn lưu 81,18 3,2 ± 1,09 Tỷ lệ nang tồn lưu/tổng số nang phát triển (%) 18,82 3.5 Kết gây ñộng dục ñồng pha cho lợn phương pháp ðể khắc phục tượng sót nang trứng tồn lưu gây ñộng dục ñồng pha cho lợn ñang có chửa, bổ xung thêm liều tiêm PGF2α vào 48 sau mũi tiêm PGF2α thứ nhất, lúc ñó tiêm 1000 UI PMSG Khi lợn bắt ñầu có dấu hiệu ñộng dục tiêm tiếp 1000 UI hCG Kết nghiên cứu ñược trình bày bảng 34 Bảng Kết gây ñộng dục cho lợn phương pháp X ± Mx Chỉ tiêu theo dõi 36 ± 8,48 Thời gian xảy thai sau tiêm PGF2α (giờ) Số lợn sót (n, %) Thời gian xuất ñộng dục sau tiêm PGF2α (giờ) Thời gian ñộng dục 81,60 ± 10,04 Thời gian chịu ñực 38,4 ± 10,03 Tổng số nang phát triển 13,60 ± 2,45 Số lượng thể vàng 13,00 ± 2,45 72 ± 14,69 Tỷ lệ thể vàng/tổng số nang phát triển (%) Số nang tồn lưu/ Tổng số nang phát triển Tỷ lệ nang tồn lưu/Tổng số nang phát triển (%) 95,59% 0,60 ± 0,55 4,41% Mục ñích mũi tiêm PGF2α thứ hai ñể kích thích tử cung co bóp tống hết thai thai ngoài, ñồng thời kích thích lợn ñộng dục Mũi tiêm hCG ñược tiến hành vào lúc lợn có biểu ñộng dục nhằm mục ñích thúc ñẩy thành thục trứng rụng trứng Kết thu ñược cho thấy hiệu phương pháp gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi: lợn bị viêm sót nhau, số nang tồn lưu trung bình 0,60 ± 0,55 nang, chiếm tỷ lệ 4,41% so với tổng số nang trứng phát triển Các kết nghiên cứu ñây tốt Tỷ lệ lợn ñộng dục ñạt 100% tất lô thí nghiệm Theo công bố Quản Xuân Hữu cộng (2008), [19], tỷ lệ ñộng dục ñồng pha lợn Móng Cái ñạt 86,67% Còn theo công bố ðào ðức Thà cộng (2008) [3], gây ñộng dục ñồng pha cho lợn hậu bị giống Landrace, Yorshire lai hai giống ñạt tỷ lệ thành công 88,9%, nhiên kết 35 dao ñộng từ 33,33 – 100% số lợn có phản ứng, tuỳ lô thí nghiệm Kết ñạt ñược cao tác giả ñã công bố trước ñây phụ thuộc vào chủng loại hormone sử dụng (lô sản xuất, hãng sản xuất), phụ thuộc vào phương pháp theo dõi lợn trước gây ñộng dục ñồng pha, phụ thuộc vào liều lượng phương pháp phối hợp sử dụng hormone, phụ thuộc vào giống lợn thí nghiệm Theo tổng kết hiệp hội cấy truyền phôi Nhật Bản, thu phôi lợn phương pháp giết mổ ñộng vật thí nghiệm, tỷ lệ thu phôi ñạt 90% so với tổng số thể vàng ñếm ñược buồng trứng ñược coi thành công Thu phôi phương pháp giết mổ gia súc thí nghiệm vào ngày thứ sau lợn kết thúc ñộng dục Theo ðào ðức Thà cộng sự, (2008) [3], công bố ñã thu ñược 11,85 phôi/lợn Móng Cái, 12,36 phôi/lợn ðại Bạch Trong nghiên cứu chúng tôi, số trứng rụng (ñánh giá thông qua thể vàng) trung bình lô thí nghiệm ñạt 13-14 thể vàng/con/lần, kết tương ñương với kết mà ðào ðức Thà cộng ñã công bố 36 Chương IV KẾT LUẬN, TỒN TẠI VÀ ðỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Các phương pháp phối hợp sử dụng hormone khác có ảnh hưởng khác tới kết gây ñộng dục ñồng pha cho lợn Móng Cái nhận phôi Gây ñộng dục ñồng pha cho lợn không mang thai phương pháp sử dụng PMSG, kết hợp PMSG với hCG cho kết 100% số lợn có phản ứng ñộng dục Sử dụng kết hợp PMSG với hCG gây ñộng dục ñồng pha cho lợn hiệu phương pháp sử dụng ñơn lẻ PMSG Sử dụng kết hợp hai liều tiêm PGF2α với PMSG hCG cho hiệu gây ñộng dục ñồng pha lợn mang thai 12- 40 ngày so với phương pháp sử dụng PGF2α 4.2 Tồn Thí nghiệm ñược tiến hành với phương pháp gây ñộng dục ñồng pha khác sử dụng cho lợn Móng Cái giai ñoạn không mang thai lợn mang thai khoảng 12-40 ngày ðã xác ñịnh ñược số tiêu quan trọng ñể từ ñó tham khảo việc gây ñộng dục ñồng pha cho lợn Móng Cái làm nhận phôi Tuy nhiên, nhiều phương pháp phối hợp sử dụng hormone khác ñể gây ñộng dục ñồng pha cho lợn cần tiếp tục nghiên cứu ñể hoàn thiện kỹ thuật gây ñộng dục ñồng pha cho lợn Chúng tiến hành nghiên cứu giống lợn Móng Cái mà chưa co ñiều kiện nghiên cứu giống lợn khác 4.3 ðề nghị Tiếp tục tiến hành nghiên cứu phương pháp khác ñể gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi Tiến hành nghiên cứu gây ñộng dục ñồng pha cho giống lợn khác 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT: Trần Tiến Dũng, Dương ðình Long, Nguyễn Văn Thanh(2002), Sinh sản gia súc, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội Phan Vũ Hải (2006), Sinh sản gia súc, trường ðại học Nông Lâm Huế ðào ðức Thà, Nguyễn Thị Thoa (2008), Kết cấy truyền phôi invitro cho lợn phương pháp phẫu thuật, Báo cáo khoa học Việc Chăn Nuôi 2008 ðặng Nguyễn Quang Thành cộng (2008), Nghiên cứu tạo phôi lợn phương pháp invitro, Báo cáo khoa học Viện Chăn Nuôi 2008 Hoàng Kim Giao cs (1997), Công nghệ cấy truyền phôi gia súc NXB Khoa học Kỹ thuật Nguyễn Xuân Tịnh, Tiết hồng Ngân, Nguyễn Bá Mùi, Lê Mộng Loan, Cù Xuân Dần (1996), sinh lý học gia súc, NXB nông nghiệp, Hà Nội TÀI LIỆU TIẾNG ANH: A.I.Turner, P.H.Hemsworth, B.J.Canny, andA.J.Tilbrook (1999), Sustained but Not Repeated Acute Elevation of Cortisol Impairedthe Luteinizing Hormone Surge, Estrus and OvulationinGilts, Biology Of Reproduction (61), 614–620 Baker, L N., L C Ulber, R H Grummer and L E Casida (1954), Inhibition of heat by progesterone and its effect on subsequent fertility in gilts J Anim Sci 13:648 D A Coleman, R A Dailey, R E Leffel and R D Baker (1986), Estrous Synchronization and Establishment of Pregnancy in Bovine, J Dairy Sci 70:858—866 38 10 Embryo Transfer Recipients, Journal of Dairy Science Vol 70, No.4, 1987 11 Jeffrey S Stevenson and Duane L Davis (1982), Estrous synchronization and fertility in Gilts after 14- or 18 – day feeding of altrenogest beginning at estrus or diestrus, J Anim Sci., Vol: 55, No.1, 1982 12 H D Guthrie and D J Bolt (1985),Pituitary and Ovarian Hormone Secretion and Ovulation in Gifts Injected with Gonadotropins during and after Oral Administration of Progesterone Agonist (Altrenogest), Biology Of Reproduction 33, 679-689 13 L C Ulberg, R E Christian, and L E Casida (1951), Ovarian Response in Heifers to Progesterone Injections, J Anim Sci, 752-759 14 Manipulation of the estrous cycle in swine Animal Science Electronic file created in 1998 15 Manual on pig embryo transfer procedures Japan Technology Association March 1998 16 Neilor, J E., J E Ahrenhold, N L First and J A Hoefer (1961), Estrus, ovulation and fertility in gilts subsequent to the oral administration of 6-methyl-acetoxyprogesterone J Anim Sci 20:22 17 Nguyen Huu DUC, Nguyen Thi UOC, Nguyen Van HANH, Dang Nguyen Quang THANH, Nguyen Viet LINH, Quan Xuan HUU, Bui Xuan NGUYEN (2006), Using pierodrill for in vitro production of cloned porcine embryo of Ban native minipig in Viet Nam 18 Nguyen Thi THOA, Do Van HUONG, Luu Ngoc ANH, Vu Thi Thu HUONG, Tran Son HA and Nguyen Thi HUONG (2008), ‘’ Porcine embryo production by in vitro fertilization of oocyte matured in vitro using NCSU-37 supplemented with 10% porcine follicular 39 fluid (PFF) the 5th Asian Reproductive Biotechnology Conference, Kunming, China, 26-30 November 2008 pp 148-152 19 Nguyen Thi UOC, Nguyen Huu DUC, Takashi Nagai, Nguyen Viet Linh, Quan Xuan HUU, Bui Linh CHI, Nguyen Trung THANH and Bui Xuan NGUYEN (2005), “ Production of somatic cell nuclear transfer” the 2nd minipig embryo by Asian Reproductive Biotechnology Conference, Bangkok, Thailand 2-7 November 2005 20 P J Dziuk and R A Bellows (1983), Management of Reproduction of Beef Cattle, Sheep and Pigs, J Anim Sci, Vol 57, Suppl 2, 1983 21 Quan Xuan HUU, Nguyen Thi UOC, Duong Dinh LONG, Nguyen Khac TICH, Phan Ngoc MINH, Nguyen Van HANH, Bui Xuan NGUYEN, Kazuhiro Kikuchi and Takashi Nagai (2008), Control of estrus synchronization and ovulation in locan Ban minipig and Mong Cai pig The 5th Asian Reproductive Biotechnology Conference, Kunming, China, 26-30 November 2008, pp115 22 Quan Xuan HUU, Nguyen Thi UOC, R.L.MONSON, M.L.Leibfried-RUTLEDGE, Nguyen Huu DUC, Bui Linh CHI, Nguyen Van HANH, Nguyen Trung THANH, Nguyen Viet LINH, J.J RUTLEDGE, and Bui Xuan NGUYEN (2005), “Model of production tropical dairy cow (Holstein X Gir) using intercontinental in-vitro produces embryo shipping system and local repicent cattle LaiSind an Ha-An breed”, the 2nd Asian Reproductive Biotechnology Conference, Bangkok, Thailand 2-7 November 2005 23 Reproduction in Domestic Animal Volum 40 issus 2, pages 141 24 Roy N Kirkwood (1999), Pharmacological intervention in swine reproduction Swine Health Prob, pages 29 – 35 25 Robert R Kraeling, Phillip J Dziuk, Vernon G Pursel, George B Rampacek and Stephen K Webel (1981), Synchronization of 40 Estrus in Swine with Allyl Trenbolone, J Anim Sci 1981 52: 831 – 835 26 R K Christenson and H S Teagu (1975), after Lactation Synchronization of Ovulation and Artificial Insemination of Sows, J Anim Sci 1975 41:560-563 27 S K Webel, J B Peters L L Anderson (1970), Synchronous and Asunchronous Transfer of Embryos in The Pig, Iowa State University, Ames 28 Srinoy Chukam, Chanvit Vajrabukla, krit Mongkonpunya and You –ming Su The use of PMS/hCG following Altrenogest in estrus synchronized gilt Kasetstart j (Nat.Sci.) volum 28 number, pp 298301 29 Takeshi KUGE, Hisataka IWATA, Takehito KUWAYAMA, Ikuo DOMEKY, Yasuo SHIOYA and Yasunory MONJI (2006), Induction of estrus by Prostaglandine F2α Administration in Vestibules of miniature pigs Journal of the vaginal Reproduction and Development, Vol.52, No.3 pp 391-396 30 Using Artifcial Insemination in Swine Production: Detecting and Synchronizing Estrus and Using Proper Insemination Technique, Virginia Cooperative Extension, Publication 414-038, 2009 31 William Hansel and Edward M Convey (1983), Phisiology of The Estrous Cycle, J Anim Sci, Vol 57, Suppl 2, 1983 32 W.E Trout, C.T Herr, B.T Richert, W.L Singleton, and M.A.diekman (2002) Usefulness of Zeranol in synchronizing Breeding in gilts Purdue University 2002 Swine research report Pp 48-49 33 Webel, S K 1978 Ovulation control in the pig P.421-34 In D B Crighton, N B Haynes, G R Foxcroft and G E Lamming (Ed.) Control of Ovulation Proc Easter School Agr Sci., Univ of Nottingham Butterworths, London 41 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới: Ths Quản Xuân Hữu- Phòng thí nghiệm trọng ñiểm Tế bào ñộng vật – Viện chăn nuôi Người ñã tận tình trực tiếp hướng dẫn giúp ñỡ thực khóa luận ðồng thời xin tỏ lòng kính trọng biết sâu sắc tới: Ths Nguyễn Thị Thoa – Phó Giám ñốc Phòng thí nghiệm trọng ñiểm Tế bào ñộng vật – Viện chăn nuôi, anh chị Vũ Thị Hương, Trần Sơn Hà, ðỗ Văn Hương, Nguyễn Thị Hương toàn thể cán công tác Phòng thí nghiệm trọng ñiểm Tế bào ñộng vật – Viện chăn nuôi ñã tạo ñiều kiện, nhiệt tình giúp ñỡ thời gian thực tập ñể hoàn thành luận văn tốt nghiệp Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn tới toàn thể thầy cô giáo Khoa Công nghệ sinh học – Viện ðại học Mở Hà Nội ñã tận tình dạy dỗ, trang bị cho kiến thức quý báu ñể hoàn thành Khóa luận Tôi xin cảm ơn bạn bè, người thân, người ñã luân quan tâm ñộng viên giúp ñỡ năm học qua Hà Nội, ngày tháng năm 2010 Nguyễn Hạnh Minh 42 CÁC CHỮ VIẾT TẮT PGF2α : Prosstaglandin nhóm F2α PMSG : Pregnant mare’s serum gonadotropin eCG : equine Chorionic Gonadotropin hCG : Human Chorionic Gonadotropin FSH : follicle stimulating hormone LH : luteinizing hormone GnRH : Gonadotropin-releasing Hormone 43 MỤC LỤC ðẶT VẤN ðỀ 01 Chương I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 04 1.1 Tình hình nghiên cứu công nghệ phôi lợn giới 04 1.2 Tình hình nghiên cứu nước 04 1.3 Các hormone thường sử dụng ñiều khiển ñộng dục ñồng pha cho lợn 06 1.3.1 Huyết ngựa chửa 07 1.3.2 hCG (Human Chorionic Gonadotropin) 08 1.3.3 PG600 08 1.3.4.Prostaglandin nhóm F2α 09 1.3.5 Oestrogen 10 1.3.6.Progesterone 11 1.4 Cơ sở khoa học vấn ñề nghiên cứu 12 1.4.1 Sơ lược cấu tạo giải phẫu phận sinh dục lợn 12 1.4.1.1 Buồng trứng 12 1.4.1.2 Ống dẫn trứng 13 1.4.1.3 Tử cung 14 1.4.1.4 Âm ñạo 14 1.4.1.5 Cơ quan sinh dục 14 1.4.2 Sinh lý sinh sản lợn 16 1.4.2.1 Sự thành thục giới tính lợn 16 1.4.2.2 ðộng dục chu kỳ ñộng dục lợn 17 44 1.4.2.3 Rụng trứng 18 1.5 Ảnh hưởng số nhân tố tới trình gây ñộng dục ñồng pha 19 Chương II ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, ðỊA ðIỂM, THỜI GIAN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 ðịa ñiểm thời gian nghiên cứu 20 2.2 ðối tượng nghiên cứu 20 2.3 Vật liệu nghiên cứu 23 2.3.1 Các loại hormone hướng sinh dục 23 2.3.2 Các loại dụng cụ hóa chất khác 23 2.4 Nội dung nghiên cứu 23 2.5 Phương pháp nghiên cứu 24 2.5.1 Phương pháp chọn lợn thí nghiệm 24 2.5.2 Phương pháp gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi 24 2.5.2.1 Phương pháp 24 2.5.2.2 Phương pháp 24 2.5.2.3 Phương pháp 24 2.5.2.4 Phương pháp 25 2.5.3 Phương pháp tiêm hormone cho lợn thí nghiệm 25 2.5.4 Phương pháp theo dõi ñộng dục 25 3.5.5 Phương pháp kiểm tra số trứng rụng số nang tồn lưu 26 2.5.6 Phương pháp xử lý số liệu 26 Chương III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Kết theo dõi chu kỳ ñộng dục tự nhiên lợn Móng Cái 27 45 3.2 Gây ñộng dục ñồng pha cho lợn Móng Cái phương pháp 28 3.3 Kết gây ñộng dục ñồng pha cho lợn phương pháp 31 3.4 Kết gây ñộng dục ñồng pha cho lợn phương pháp 33 3.5 Kết gây ñộng dục ñồng pha cho lợn phương pháp 34 Chương IV KẾT LUẬN, TỒN TẠI VÀ ðỀ NGHỊ 37 4.1 Kết luận 37 4.2 Tồn 37 4.3 ðề nghị 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO………………………………………… 38 34 46 [...]... ñộng dục của lợn trước khi làm thí nghiệm 2.5.2 Phương pháp gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi Có nhiều phương pháp khác nhau ñể gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng các phương pháp sau: 2.5.2.1 Phương pháp 1 Tiêm bắp cho lợn 1000 UI PMSG vào ngày thứ 17 của chu kỳ ñộng dục, theo dõi ñộng dục ñể lựa chọn con nhận phôi 2.5.2.2 Phương pháp 2 Tiêm bắp cho lợn. .. Science ghi nhận ([11], [14]) 3.2 Gây ñộng dục ñồng pha cho lợn Móng Cái bằng phương pháp 1 Tiêm bắp cho lợn 1000 UI PMSG vào ngày thứ 17 của chu kỳ ñộng dục tự nhiên, theo dõi ñộng dục ñể lựa chọn con ñộng dục ñồng pha Liều tiêm PMSG có tác dụng huy ñộng các nang trứng phát triển tới mức ñộ thành thục và rụng trứng Chúng tôi tiến hành gây ñộng dục ñồng pha cho 5 lợn Móng Cái, theo dõi ñộng dục của lợn sau... ñực của lợn ñược gây ñộng dục ñồng pha bằng phương pháp 1 dài hơn so với chỉ tiêu tương ứng của lợn ñộng dục tự nhiên Cụ thể, thời gian ñộng dục của lợn ñược gây ñộng dục ñồng pha là 88,80 ± 28,89 với thời gian chịu ñực là 43,20 ± 13,68 so với chỉ tiêu tương ứng ở lợn ñộng dục tự nhiên là 77,62 ± 14,54 và 37,14 ± 11,18 Chúng tôi cũng nhận thấy lợn ñược gây ñộng dục ñồng pha có biểu hiện ñộng dục rất... tiêm, chai ñựng dung dịch thu phôi, chai ñựng dung dịch rửa phôi - Các thiết bị sử dụng trong công nghệ phôi lợn hiện có tại Phòng thí nghiệm trọng ñiểm công nghệ tế bào ñộng vật – Viện chăn nuôi 2.4 Nội dung nghiên cứu -Nghiên cứu gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi Các chỉ tiêu cần theo dõi: - Thời gian xuất hiện ñộng dục sau khi sử lý hormone (giờ) - Thời gian ñộng dục (giờ) - Thời gian chịu ñực... pháp 2 ở các chỉ tiêu: Thời gian ñộng dục, thời gian chịu ñực, tỷ lệ trứng rụng cho thấy phương pháp 2 có hiệu quả hơn trong việc gây ñộng dục ñồng pha cho lợn Móng Cái, và việc sử dụng liều lượng hormone như trên là hợp lý (1000 UI PMSG, 1000UI hCG) 3.4 Kết quả gây ñộng dục ñồng pha cho lợn bằng phương pháp 3 Phương pháp này sử dụng ñể gây ñộng dục ñồng pha cho lợn ñang mang thai trong khoảng 12 –... lợn ñộng dục Mũi tiêm hCG ñược tiến hành vào lúc lợn có biểu hiện ñộng dục nhằm mục ñích thúc ñẩy sự thành thục của trứng và rụng trứng Kết quả thu ñược cho thấy hiệu quả của phương pháp 4 trong gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi: không có lợn nào bị viêm sót nhau, và số nang tồn lưu trung bình chỉ là 0,60 ± 0,55 nang, chiếm tỷ lệ 4,41% so với tổng số nang trứng phát triển Các kết quả nghiên cứu. .. với thời gian ñộng dục và thời gian chịu ñực của những lợn ñộng dục tự nhiên chúng tôi không nhận thấy có sự khác nhau Tuy nhiên khi so sánh với thời gian ñộng dục và thời gian chịu ñực của lợn ñược gây ñộng dục ñồng pha bằng phương pháp 1, chúng tôi nhận thấy thời gian ñộng dục và thời gian chịu ñực của lợn ngắn hơn, ñiều này cho phép ñánh giá khả quan về sự rụng trứng tập trung của lợn Phẫu thuật bộc... lợn vào góc chuồng, tránh cho lợn bị sợ và lợn cũng không chạy nhảy ñược trong quá trình tiêm thuốc ðối với những con lợn có tính dạn người, hoặc những con lợn ham ăn, có thể tiến hành tiêm hormone cho lợn một cách dễ dàng vào lúc cho ăn mà không cần lùa lợn vào cũi hay ép vào góc chuồng 2.5.4 Phương pháp theo dõi ñộng dục Trong suốt quá trình, theo dõi sự ñộng dục của lợn cái và ghi chép lại Khi lợn. .. PMSG, theo dõi lợn xảy thai và ñộng dục Với phương pháp tiêm như trên, tiến hành gây ñộng dục ñồng pha cho 5 lợn thí nghiệm chúng tôi thu ñược kết quả trình bảy trong các bảng 7 Kết quả thu ñược cho thấy: trung bình 38,4 ± 10,04 giờ sau khi tiêm PGF2α lợn sẽ xảy thai Tỷ lệ lợn bị sót nhau khi xảy thai là 20%, lợn bị sót nhau tuy vẫn có biểu hiện ñộng dục nhưng không ñủ tiêu chuẩn làm con nhận phôi Thời... ñộng dục tự nhiên của lợn Móng Cái Khi lợn cái ñã thành thục về tính, dưới sự ñiều tiết của hệ thần kinh và thể dịch, sự ñộng dục của lợn lặp ñi lặp lại một cách có chu kỳ gọi là chu kỳ tính Chu kỳ ñộng dục của lợn tính từ khi lợn xuất hiện ñộng dục lần thứ nhất cho tới khi lợn xuất hiện ñộng dục lần tiếp theo Với phương pháp theo dõi lợn như ñã mô tả ở phần trên, qua thời gian theo dõi ñộng dục trên ... văn công trình nghiên cứu gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi Kết nghiên cứu góp phần hoàn thiện kỹ thuật gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi nói riêng công nghệ phôi lợn nói chung Việt... thiếu ñó ñồng pha ñộng dục lợn cho phôi lợn nhận phôi, hay nói sâu ñồng pha sinh lý phôi quan sinh sản mẹ nhận phôi Có nhiều phương pháp khác ñể gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi, phổ biến... pháp gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi Có nhiều phương pháp khác ñể gây ñộng dục ñồng pha cho lợn nhận phôi Trong nghiên cứu này, sử dụng phương pháp sau: 2.5.2.1 Phương pháp Tiêm bắp cho lợn