Phương pháp xác định vi sinh vật trong đất

Phương pháp xác định vi sinh vật trong đất

PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH VI SINH VẬT

TRONG ĐẤT

Khu hệ vi sinh vật đất có mối quan hệ mật thiết với cây trồng, vì thế việc xác

định vi sinh vật trong đất có vai trò rất quan trọng, giúp ta biết được số lượng cũng

như thành phần vi sinh vật trong đất Trên cơ sở đó

mà có những biện pháp tích cực

tạo điều kiện cho những vi sinh vật có ích phát triển

và hạn chế sự có mặt của

những vi sinh vật có hại Để xác định vi sinh vật

trong đất người ta có thể dùng

nhiều phương pháp khác nhau, trong đó có 2 phương pháp dưới đây được dùng

nhiều hơn cả:

- Phương pháp xác định trực tiếp số lượng tế bào bằng cách đếm dưới kính

hiển vi nhờ phòng đếm hồng cầu

- Phương pháp xác định gián tiếp số lượng tế bào

bằng cách đếm số khuẩn

lạc tạo thành khi nuôi cấy trên môi trường đặc

Để xác định số lượng vi sinh vật trong đất phải tiến hành qua các bước sau:

I Lấy mẫu đất:

Việc lấy mẫu đất phải đảm bảo các yêu cầu sau:

- Lấy mẫu có tính chất dại diện

- Lượng mẫu lấy vừa phải, đủ để phân tích các đặc tính lý, hoá, sinh học của

đất

- Dụng cụ lấy mẫu, chứa mẫu phải vô trùng

- Lấy mẫu xong phải phân tích ngay không được để quá 24 giờ

- Mẫu lấy phải có nhãn ghi ký hiệu mẫu, thời gian lấy mẫu, địa điểm lấy

mẫu, thời điểm lấy mẫu, đặc điểm của vùng lấy mẫu (đất đai, cây trồng, thời tiết khí

hậu, địa hình )

Mẫu đất lấy về cần phân tích ngay, nếu để quá 24 giờ một số vi khuẩn sẽ

chết, hoặc một số bào tử nấm và vi khuẩn có thể nảy

nở thêm hoặc vi sinh vật ở

không khí xâm nhập vào làm cho thành phần và số lượng vi sinh vật trong đất thay

đổi đi Nếu trường hợp chưa phân tích được ngay thì phải bảo quản trong tủ lạnh có

nhiệt độ khoảng 4 – 5oC

Pha loãng mẫu:

- Chuẩn bị 2 bình tam giác dung tích 250 ml, bình thứ nhất chứa 99 ml nước

cất vô trùng, bình thứ hai để không và một số ống nghiệm có chứa 9 ml nước cất vô

trùng

110

- Khử trùng cối, chày sứ bằng cách cho vào một ít cồn và đốt lên, sau đó để

nguội

- Cân 1 gam đất cho vào cối sứ đã vô trùng

- Lấy 0,5 – 1 ml nước cất vô trùng ở bình tam giác thứ nhất cho vào cối sứ có

đất để làm nhão đất Dùng chày sứ đã vô trùng

nghiền nát trong vòng 5 phút

- Dùng toàn bộ nước ở bình thứ nhất để chuyển hỗn hợp đất đã nghiền nát

vào bình tam giác không

- Lắc bình có chứa dung dịch đất trong 5 phút, để yên

30 phút để làm lắng

các hạt lớn Dung dịch đất trong bình tam giác này có

độ pha loãng 100 lần (10-2)

- Lấy 1 ml dung dịch đất có độ pha loãng 100 lần cho vào ống nghiệm thứ

nhất có chứa 9 ml nước cất vô trùng, trộn đều dung dịch bằng cách hút lên rồi thổi

xuống 3 – 5 lần ta được độ pha loãng 10-3

- Tiếp tục hút 1 ml ở ống nghiệm thứ nhất cho vào ống nghiệm có chứa 9 ml

nước cất vô trùng thứ hai, trộn đều dung dịch như trên ta có độ pha loãng 10-4

- Cứ tiếp tục hút như vậy từ ống nghiệm thứ hai sang ống nghiệm thứ 3, từ

ống 3 sang ống 4 ta sẽ có các độ pha loãng 10-5, 10-6