http://www.ebook.edu.vn dụng nhiều citrae sắt vi chúng tan nhiều môi trường FeSO4 thay thể cho nguồn sắt môi trường Ngoài khí H2S củng phát kim loại khác chì, bismuth, … để hình thành nên hợp chất sulphur kim loại có màu đen Thử nghiệm khả sinh indol Nguyên tắc: Phát khả vi khuẩn tạo indol môi trường canh trypton Cơ sở sinmh hoá:Tryptophan aminoacid bò oxy hoá số vi sinh vật đònh tạo nên hợp chất indol hay dẫn xuất chúng như: indol, skatol (methyl indol) indolacetic Một số enzym nội bào gọi chung trytophanase tham gia trình tạo thành sản phẩm indol hoạt động thuỷ giải tryptophane Các hợp chất trung gian trình thuỷ giải tryptophan acid indolepyruvic, từ indol hình thành trình khử amin, hình thành skatol trình khử carboxyl acid indol acetic Quá trình thuỷ giải tryptophan mô tả qua trình sau: NH3 CH3 – C – COOH N H L-Tryptophane H ⎢⎢ CH3 – C – COOH N H Indolepyruvic Indole N H CH2CHO N H Indoleacetaldehyde N H CH2COOH Indoleacetic acid CH3 Skatole N H Enzym tryptophanase xúc tác phản ứng khử amin công vào phân tử tryptophan vò trí mạch nhánh tách nhân thơm khỏi phân tử tryptophan hình thành indol CH3 – CH - COOH + CH3 – C – COOH + NH3 NH2 N N Tryptophanase H H 30 http://www.ebook.edu.vn Sự tách amin từ tryptophane dạng phản ứng khử Qua trình nhóm amin tách chuyển thành NH3, trình khử giải phóng phấn lượng sử dụng cho hoạt động tăng trưởng vi sinh vật Đồng thời trình tạo thành acid pyruvic, chất tham gia vào chu trình Krebs’ để tiếp tục thu lượng Phát indol dẫn xuất chúng môi trường nuôi cấy thuốc thử Kovac’s hay Ehrlich’s Cơ chất tham gia phát indol môi trường nuôi cấy pdimethylaminobenzaldehyde (DMAB) Chấy phản ứng với indol tạo thành phức hợp màu đỏ Phản ứng nhân pyrrol indol phản ứng với nhóm aldehyde DMAB qua hai giai đoạn để tạo thành nhân quinone có màu đỏ, phản ứng sau: Phương pháp thử: Vi sinh vật thử nghiệm nuôi môi trường canh trypton khoản 24 - 48 Nhỏ vài giọt ether vào canh khuẩn nhằm kéo indol lên bề mặt trường, thêm vài giọt thuốc thử Kovac’s hay Erhlich Quan sát sau vài phút, phản ứng dương tính bề mặt môi trường có vòng màu xuất Ngược lại xuất màu đỏ hồng coi phản ứng âm tính Thuốc thử - Thuốc thử Erhlich: Hoà tan 4g p-dimethylaminobenzaldehyde hổn hợp gồm 80ml acid HCL đâäm đặc 380 ethanol tuyệt đối Dung dòch sau pha có màu vàng nâu - Thuốc thử Kovac’s hoà tan 5g p-dimethylaminobenzaldehyde hổn hợp gồm 75 ml amyl alcohol 25 ml H2SO4 đậm đặc 10 Thử nghiệm môi trường Kligler Iron Agar hay môi trường Triple Sugar Iron agar Nguyên tắc: Thử nghiện nhằm phát khả sử dụng nguồn carbonhydrate có mặt môi trường, khả sinh H2S sinh khí môi trường Cơ sở sinh hoá: Môi trường Kligler Iron agar (KIA) Triple Iron agar (TSI) môi trường rắn dùng thử nghiệm sinh hoá Môi trường phân phối vào ống nghiệm, gồm hai phần: phần đứng sâu khoảng 2,5cm phần nghiêng bên Thử nghiệm nhằm hai mục đích: phát khả lên men nguồn Carbonhydrate có môi trường phát khả sinh H2S Môi trường KIA chứa hai nguồn carbohydrate: 1% lactose 0,1% glucose, môi trường TSI tương tự môi trường KIA có thêm 1% Sucrose Cơ chế sinh hoá hai môi trường tương tự Trên môi trường KIA, vi sinh vật sử dụng hai nguồn carbohydrate hay sử dụng glucose Quá trình lên men tạo khí môi trường hay không tùy thuộc vào loài vi sinh vật Sự sử dụng nguồn carbonhydrate khác hai điều kiện hiếu khí phần nghiêng kỵ khí phần đứng Trên phần nghiêng, glucose trao đổi theo đường oxy hoá chu trình Krebs để tạo sản phẩm H2O CO2 đồng thời thu lượng Lactose đường đôi, để vi sinh vật sử dụng chúng phải phân giải thành galactose glucose, đường đơn vào tế bào tham gia vào trình chuyển hoá nội bào Có ba trường hợp xãy nuôi cấy vi sinh vật môi trường KIA: lên men glucose, lên men hai nguồn carbonhydrate môi trường, không lên men hai nguồn 31 http://www.ebook.edu.vn Nếu vi sinh vật lên men glucose sau 18-24 nuôi cấy, phần nghiêng môi trường có pH kiềm phần sâu ống có pH acid Hiện tượng quan sát có chất thò pH môi trường nuôi cấy, thông thường môi trường thường sử dụng chất thò pH phenol red Trên phần nghiêng, sau 24 nuôi cấy, lượng nhỏ glucose môi trường vi sinh vật dụng hết hoàn toàn Sau vi sinh vật sử dụng pepton môi trường, trình trao đổi pepton làm giải phóng NH3, sản phẩm sẻ làm kiềm phần nghiêng ống môi trường phần sâu môi trường có pH acid lên men kỵ khí glucose, sản phẩm thu acid hưu cơ, acid làm cho pH giảm Nếu môi trường có chất thò pH phenol red phần nghiên có mầu phần sâu sẻ có màu vàng Nếu vi sinh vật sử dụng hai nguồn carbohydrate: hai phần sâu phần nghiên có tính acid sau 18-24 nuôi cấy lượng đường lactose đủ để vi sinh vật sử dụng thời gian này, sản phẩm tạo thành acid hữu Nếu kéo dài thời gian nuôi cấy đến sau 24 giờ, phần nghiên thu màu đỏ môi trường chuyển sang kiềm Trong trường hợp hai nguồn carbon không vi sinh vật sử dụng, nguồn pepton môi trtường trở thành nguồn cung cấp lượng vật liệu cho trình tăng trưởng phát triển vi sinh vật Nhưng thường pepton chuyển hoá điều kiện hiếu khí tượng làm kiềm môi trường diễn phần nghiên môi trường chuyển thành màu đỏ Trong khí phần sau môi trường tượng chuyển mầu Trong trường hợp trình chuyển hoá vi sinh vật tạo thành sản phẩm khí, chúng sẻ tích tụ môi trường làm thạch hay tạo thành bọt khí bên môi trường Trong thử nghiệm phát khả sinh H2S từ việc chuyển hoá thành phần môi trường Sodium thiosulphate môi trường sử dụng nguồn cung cấp lưu huỳnh Sản phẩm chuyển hoá hợp chất lưu huỳnh H2S, chất khí không màu, để nhận chúng, chất thò khác Fe2+ cung cấp vào dạng ferric ammonium citrate H2S phản ứng với Fe2+ tạo thành FeS kết tủa màu đen môi trường Như với thử nghiệm nhận biệt khả sử dụng nguổn carbon khác nhau, khả tạo khí tạo H2S vi sinh vật cần thử nghiệm Trong trường hợp sử dụng môi trường TSI, tượng củng xảy tương tự Tuy nhiên trường hợp hai phần nghiên phần sâu có tượng acid có hai hay hai nguồn lactose sucrose vi sinh vật sử dụng Trong trường hợp cần phải có thử nghiệm nguồn lactose hay sucrose cách riêng lẻ Phương pháp thử nghiệm Môi trường KIA hay TSI chuẩn bò ống nghiệm với phần nghiêng cách nắp ống nghiệm khoảng 2,5cm phân sâu có chiều cao khoảng 2,5cm Dùng que cấy nhọn đưa vi sinh vật vào phần sau ống không đụng đáy ống, sau cấy ria phần nghiêng ống cấy 37oC 18-24 Ghi nhận biểu phần sau, phần nghiêng, tích tụ khí tạo thành H2S 11 Thử nghiệm malonate Nguyên tắc: Thử nghiệm nhằm xác đònh khả vi sinh vật sử dụng malonate nguồn carbon môi trường Cơ sở hoá học: Malonate tác nhân ức chế enzym phát lần nhận thấy acid malonic ức chế chuyển hoá succinic thành fumaric công vào tâm hoạt động enzym succinic dehydrogenase Acid malonic ức chế trình chuyển hoá 32 http://www.ebook.edu.vn succinic phương thức ức chế cạnh tranh cấu trúc phân tử malonic succinic tương tự COOH COOH CH2 (CH2)2 COOH COOH Acid malonic Acid succinic Khi bò malonate ức chế đường thu hồi lượng chu trình Krebs, vi sinh vật chuyển sang số đường chuyển hoá khác để thu hồi lượng trình chuyển từ chu trình Krebs sang chu trình Glyoxylic acid Tuy để đảm bảo cho phát phát triển bình thường môi trường có malonate vi sinh vật sử dụng chất nguồn cung cấp lượng hay nguồn carbon Nếu vi sinh vật không sử dụng malonate chất sẻ trở thành chất diệt khuẩn Leifson cho vi sinh vật sử dụng malonate chế lên men để thu năng lượng Khi vi sinh vật sử dụng malonate để chuyển hoá nguồn carbon đồng thời chúng sử dụng ammonium sulphate nguồn cung cấp nitơ Kết cuối làm môi trường nuôi cấy chuyển thành kiềm có tạo thành NaOH Phương pháp tiến hành: Cấy vi sinh vật vào môi trường malonate broth có chứa chất thò màu pH bromothylmol blue nuôi ủ qua đêm nhiệt độ 37oC Phản ứng dương tính môi trường có dấu hiệu chuyển sang màu xanh dương Phản ưng âm tính vi sinh vật không làm thay đổi màu môi trường 12 Thử nghiệm làm tan gelatin Nguyên tắc: Thử nghiệm khả vi sinh vật tổng hợp enzym ngoại bào làm thuỷ giải gelatin Cơ sở sinh hoá: Gelatin dạng protein có kích thước phân tử lớn, vi sinh vật muốn sử dụng protein nguồn cung cấp lượng hay vật liệu xây tổng hợp thành phần khác tế bào, chúng phải có khả sản xuất loại enzym ngoại bào làm phân giải phân tử gelatin thành thành phần nhỏ hay thành monomer Các enzym thuộc nhóm gelatinase tiết bên tế bào Quá trình thuỷ phân gelatin qua hai giai đoạn sau: gelatinase Protein + H2O polipeptide gelatinase Polipeptide + H2O aminoacidu1 Phương pháp thực hiện: Để nhận biết khả làm tan gelatin vi sinh vật, chất thêm vào môi trường nuôi cấy, chưa cấy vi sinh vật, môi trường chứa gelatin dạng đông đặc Sau nuôi cấy, vi sinh vật có khả tiết gelatinase làm môi trường tan chảy thành dạng lỏng Phương pháp tiến hành sau: cấy đâm sâu vi sinh vật vào môi trường dinh dưỡng chứa gelatin, ủ ống sau cấy nhiệt độ phòng với ống nghiệm chứa môi trường ï không cấy vi sinh vật vào khoảng 14 ngày Cả hai ống sau ủ cho vào tủ lạnh qua đêm Phản ứng dương tính ống đối chứng trạng 33 http://www.ebook.edu.vn thái đông đặc ống có vi sinh vật bò tan chảy Phản ứng âm tính hai ống trạng thái đông đặc Có thể cấy vi sinh vật lên môi trường chứa gelatine đóa để tách khuẩn lạc riêng biệt sau ủ ngày nhiệt độ phòng Nhỏ lên bề mặt đóa 5-10ml dung dòch acid trichloacetic, vi sinh vật cho khuẩn lạc có quần rỏ môi trường vi sinh vật làm tan chảy gelatin 13 Thử nghiệm methyl red (MR) Nguyên tắc: Thử nghiệm methyl red nhằm xác đònh khả vi sinh vật sản xuất trì sản phẩm acid bền môi trường từ trình lên men glucose Cơ sở sinh hoá: Thử nghiệm methyl red sở sử dụng chất thò pH methyl red để nhận biết lượng ion H+ có môi trường sau vi sinh vật lên men glucose Hàm lượng ion H+ có môi trường thụ thuộc vào tỉ lệ CO2 H2, hàm lượng chất lại tuỳ thuộc vào đường chuyển hoá loài vi sinh vật Đối với vi sinh vật đường ruột, thời gian nuôi cấy để thử nghiệm phản ứng MR thường xác đònh khoảng 18-24 Tuy nhiên vi sinh vật tạo acid môi trường từ chúng bắt phát triển Khi kéo dài thời gian nuôi cấy vi sinh vật có phản ứng MR dương tính tích luỹ acid môi trường ngày nhiều hơn, độ pH môi trường ngày giảm Đối với vi sinh vật cho phản ứng MR âm tính, ban đầu lượng acid hình thành môi trường, kéo dài thời gian muôi cấy vi sinh vật tiếp tục chuyển hoá sản phẩm acid phản ứng decarboxyl tạo nên sản phẩm trung tính acetoin (acetyl methylcarbinol) kết làm cho pH môi trường chuyển dần phía trung tính Trong số trường hợp khác vi sinh vật sản sinh acid môi trường acid cho hàm lượng ion H+ thấp acid lactic, acid acetic, acid formic … acid acid có xu hướng chuyển trung tính tượng tạo thành carbonate tạo thành sản phẩm CO2 hợp chất amonium môi trường sản phẩm làm tăng pH môi trường Thử nghiệm MR phụ thuộc lớn vào thời gian nuôi cấy để xác đònh khác đường chuyển hoá glucose Thử nghiệm thường tiến hành thời gian khoảng 2-5 ngày 37oC Phương pháp tiến hành: Nuôi cấy vi sinh vật môi trường glucose phosphate (MR-VP broth) ủ khoảng 2-5 ngày Thêm vào vài giọt thuốc thử methyl red pha theo tỉ lệ 0,1g 300ml ml cồn cho nước vào để đạt thể tích 500ml Phản ứng dương tính môi trường chguyển sang màu đỏ Phản ứng âm tính môi trường giữ nguyên màu vàng 14 Thử nghiệm tính di động môi trường thạch mềm Nguyên tắc: Nhằm xác đònh vi sinh vật có di động hay di động Vi sinh vật di động thường vi sinh vật có tiên mao Tiên mao thường tìm thấy vi sinh vật hình que Tuy nhiên có số vi sinh vật hình cầu có khả di động Vi sinh vật di động có hay nhiều tiên mao phân bố vi trí khác tế bào vi sinh vật Một số vi sinh vật chuyển từ trạng thái di động sang trạng thái không di động đa số khả chuyển từ trạng thái không di động sang trạng thái di động Thông thường vi sinh vật từ di động thành không di động tiên mao Thử nghiệm tính di động 34 http://www.ebook.edu.vn Cấy đâm sau vi sinh vật vào môi trường thạch mềm chứa 0,5 % agar qua đêm nhiệt độ thích hợp với tính di động vi sinh vật Quan sát tượng sau nuôi cấy Nếu vi sinh vật di động làm đục môi trường, vi sinh phát triển lan khỏi vết cấy Ngược lại vi sinh vật không di động phát triển sinh khối xung quanh đường cấy, môi trường không vò đục sinh khối vi khuẩn 15 Thử nghiệm khử nitrate Nguyên tắc: Nhằm thử nghiệm khả vi sinh vật khử nitrat thành nitrite hay thành nitơ tự Tất trình diển tế bào vi sinh vật xúc tác enzym nitratase Cơ sở sinh hoá: Sự khử nitrate thành nitrite hay nito tự thường diển điều kiện kỵ khí Oxy từ nitrate coi nhân tố nhận diện tử proton cuối Hầu hết vi sinh vật hiếu khí khử nitrate vi sinh vật hiểu khí tuỳ nghi, chúng thực trình khử nitrate sống điều kiện kỵ khí, diện oxy phân tử Trong chuỗi chuyển điện tử, nitrate đóng vai trò chầt oxy hoá Sự khử nitrate thành nitrite: trình diển phản ứng sau đây: NO2- + H2O NO3- + 2e- + 2H+ Nitrate Nitrite Sự khử sản phẩm nitrate thành oxy phân tử theo phản ứng sau: NO3- + 10e- + 12H+ Nitrate N2 + 6H2O Nitơ Sản phản cuối khử chất sau: nitrite (NO2-); ammonia (NH3); nitơ phân tử (N2), hydroxylamine hay nitric oxyde (NO) Sự hình thành sản phẩm cuối phụ thuộc vào loài vi sinh vật Thông thường sản phẩm cuối khí N2 khử tiếp tục sản phẩm nitrite tạo thành Sự hình thành sản phẩm cuối phụ thuộc vào điều kiện môi trường Phương pháp thực hiện: Có thể phát có mặt nitratase môi trường cách sau: Cách 1: Cấy vi sinh vật vào môi trường nitrate broth ủ qua đêm Cách 2: Khuếch tán dày đặc vi sinh vật thử nghiệm vào dung dòch sodium nitrate 0,01mol/l dung dòch đệm phosphate pH 7,0, ủ 37oC 24 Cách 3: Nhỏ vài giọt dung dòch sodium nitrat 1% vào môi trường canh khuẩn dày nuôi cấy trước nhiệt độ 37oC Acid hoá dung dòch thử nghiệm vài giọt HCl 1N, thêm vào thử nghiệm 0,5ml dung dòch sulphanilamide 0,2% 0,5ml N-napthylethylenediamine hydrochloride, tất thuốc thử phải bảo quản tủ lạnh Nếu có xuất màu hồng dấu hiệu nitratase dương tính Nếu màu hồng xuất có hai trường hợp sau: Không có nitatase môi trường, nitrate diện diện Thêm vào lượng nhỏ bụi kẽm vào thử nghiệm để chuyển nitrate thành nitite, màu hồng xuất Nitrate không môi trường: thêm bụi kẽm vào môi trường không xuất màu hồng 16 Thử nghiệm urea Nguyên tắc: Xác đònh vi sinh vật có khả phân huỷ urea thành ammonia CO2 xúc tác enzym urease vi sinh vật tiết 35 http://www.ebook.edu.vn Cơ sở sinh hoá: Urea hợp chất carbamide dễ bò thuỷ giải Sự thuỷ giải urea xúc tác urease giải phóng hai phân tử ammonia Trong dung dòch thành phẩn sau phản ứng chuyển hoá thuận nghòch, sản phẩm thu sau phản ứng biễu diễn cân sau: H2 N C =O + H2O CO2 + H2O + NH3 (NH4)2CO3 H2N Amonia carbonat Amonia Urea Enzym urease enzym quan trọng tế bào vi sinh vật, số vi sinh vật enzym cấu trúc, số loài khác enzym cảm ứng Khi có chất urea diện môi trường, enzym tổng hợp phóng thích bên tế bào, xúc tác phản ứng thuỷ giải urea Các sản phẩm sau phản ứng làm cho môi trường hoá kiềm làm chuyển màu chất thò pH Phương pháp tiến hành: Cấy vi sinh vật vào môi trường canh urea có chứa chất thò phenol red, ủ nhiệt độ 37oC khoảng 12-18 Phản ứng dương tính môi trường chuyển sang màu đỏ hồng, phản ứng âm tính môi trường không chuyển màu 17 Thử nghiệm Voges – Proskauer (VP) Nguyên tắc: Phát khả vi sinh vật tạo thành số sản phẩm trung tính acetylmethylcarbimol (acetoin) trình lên men glucose Cơ sở sinh hoá: Thử nghiệm VP nhằm mục đích phát acetoin, sản phẩm trung tính trình trao đổi glucose tế bào vi sinh vật Quá trình phân huỷ glucose tế bào vi sinh vật tạo sản phẩm trung gian acid pyruvic, từ chia vi sinh vật thành hai nhóm theo hai cong đường chuyển hoá pyruvic khác sau: Nhóm trao đổi không tạo thành 2,3-butanediol, ví dụ E.coli gọi nhóm VP âm tính (VP-); nhóm thứ hai trình trao đổi tạo thành sản phẩm trung gian 2,3-butanediol, ví dụ Klebsiella, gọi nhóm VP dương (VP+) Tuy nhiên thử nghiệm VP nhằm mục đích phát acetoin (acetylmethylcarbimol, AMC) tiền chất 2,3-butanediol Phân tử acetoin tạo thành trình khử nhóm carboxyl acid pyruvic, phản ứng sau: Pyruvate acetoin + 2CO2 Vì acetoin sản phẩm trung gian bước tạo thành 2,3-butanediol nên môi trường nuôi cấy tích lũy lượng tiền chất Để acetoin tích lũy nhiều, dễ dàng cho việc phát hiện, vi sinh vật phải nuôi điều kiện hiếu khí Quá trình chuyển hoá acetoin 2,3-butanediol trình thuận nghòch, biểu diển trình sau: Oxyhoá 2,3-butanediol 2,3-butanediol dehydrogenase acetoin Khử Acetoin diacetyl (acetoin) reductase 2,3-butanediol 36 http://www.ebook.edu.vn Để phát acetion môi trường nuôi cấy 1-napthol sữ dụng thuốc thử phát môi trường kiềm mạnh tạo KOH 40% hay NaOH 40% cho vào môi trường thử nghiệm Cơ chế phản ứng nhận biết acetoin biểu diễn sau: CH3 C=O C6H12O6 CHOH CH3 Glucose Acetoin Acethylmethylcarbinol, AMC OH CH3 + C=O CHOH KOH 40% O2 CH3 α - Napthol Acetoin CH3 C=O + CH3 C = O + H2O C=O CH3 Diacetyl NH2 C = NH NH - R Diacetyl Guanidine pepton 37 http://www.ebook.edu.vn C=O CH3 Phức hợp màu đỏ hồng Trong thành phần tham gia phản ứng để tạo phức chất có màu đỏ hồng có hợp chất guanidine, ví dụ arginine NH:C(NH2)-NH-(CH2)3-CH(NH2)-COOH, chất diện pepton sử dụng môi trường nuôi cấy Phương pháp tiến hành: Cấy vi sinh vật vào môi trường canh glucose phosphate (MR-VP broth), ủ nhiệt độ 37oC khoảng 2-5 ngày Thêm vào canh khuẩn sau nuôi cấy 3ml dung dòch 1-napthol 5% cồn, bổ sung thêm 3ml dung dòch KOH hay NaOH 40%, lắc mạnh Quan sát phản ứng khoảng phút Phản ứng VP dương tính môi trường chuyển sang màu đỏ hay hồng sáng, phản ứng VP âm tính chuyển màu 18 Thử nghiệm lên men – oxy hoá ( Thử nghiệm Hugh&Leifson) Nguyên tắc: Xác đònh vi sinh vật trao đổi carbonhydrate trình oxyhoá hay trình lên men Cơ sở sinh hoá: Vi sinh vật sữ dụng carbonhydrate trình trao đổi chất thông qua hai trình: oxy hoá lên men Một số vi sinh vật sữ dụng carbonhydrate điểu kiện hiếu khí, số vi sinh vật khác trao đổi chất hai điều kiện hiếu khí kỵ khí Đây gọi vi sinh vật kỵ khí tuỳ nghi Lên men trình kỵ khí, vi khuẩn lên men vi khuẩn kỵ khí tuỳ nghi Quá trình lên men glucose chia phân tử thành hai đường triose (đường 3C) Sản phẩn cuối đường lên men phụ thuộc vào loài vi sinh vật phụ thuộc vào điều kiện môi trường Tuy điểm cốt yếu đường lên men phân tử glucose bò phosphoryl hoá bước để thành glucose-6-phoshate Quá trình lên men cần chất nhận điện tử cuối hợp chất hữu Glucose tham giam trình lên men thường trao đổi theo đường Embden-Meyerhof, có trường hợp trao đổi theo đường EntnerDoudoroff đường theo hường trao đổi pentose Phosphoryl hoá mol glucose Glucose – - phosphate Cách Embden - Meyerhof Cách Embden - Meyerhof Fructose – - Phosphate Fructose 1, – di phosphate 6-phosphogluconic acid mol Glyceraldehyde - Phosphat mol acid pyruvic Cách Pentose Shunt Ribulose – - Phosphate +++ + CO2 Cách Entner-Doudoroff 2-keto-3-deoxy-6-phosphogluconic acid Glyceraldehyde - Phosphat 38 http://www.ebook.edu.vn Acid pyruvic Acid pyruvic Sơ đồ đường lên men Oxy hoá trình diển điều kiện có oxy Trong trình phân tử glucose không bò chia thành hai triose trên, thay vào chúng oxy hoá nhóm chức aldehyde (-CHO) để tạo thành acid gluconic Khác với trình lên men, trình oxy hoá không bò phosphoryl hoá giai đoạn đầu trình phân giải glucose Đồng thời trình oxy hoá chất nhận điện tử cuối phân tử hữu mà chất vô oxy phân tử nitrat hay sulphate Quá trình lên men thường tạo môi trường acid cao trình oxy hoá Glucose Gluconic acid 2-keto - Gluconic acid 2-keto-6-phospho-Gluconic acid 2-pyruvic acid Con đường oxyhoá glucose Phương pháp thực hiện: Cấy đâm sâu vi sinh vật thử nghiệm vào hai ống nghiệm môi trường Hugh &Leifson có chứa 2-5 g agar/ lít Một hai ống phủ lên bề mặt 1ml dầu khoáng hai parafine lỏng vô trùng để ngăn cản tiếp xúc với oxy không khí hai ống điều kiện khoảng 24-48 Phản ứng lên men hai ống bi acid hoá mặt phần sâu môi trường Phản ứng oxy hoá ống kỵ khí bò acid hoá, ống hiếu khí không bò acid hoá mặt mà có acid phần đáy ống 19 Thử nghiệm oxydase Nguyên tắc: thử nghiệm nhằm phát hệ enzym oxydase vi sinh vật Cơ sở sinh hoá: Thử nghiệm oxydase nhằm mục đích phát enzym oxydase, sản phẩm nội bào vi sinh vật Phản ứng oxydase xãy có mặt hệ thống cytochrom oxydase oxyhoá cytochrom dạng khử oxy phân tử Tất vi sinh vật nhận lượng từ nguồn vật vật chất chế hô hấp, trình oxy hoá Hệ thống hô hấp chuổi enzym chất chòu trách nhiệm cho vận chuyển điện tử từ chất đến oxy phân tử Oxy chất nhận proton hydro cuối chuổi hô hấp để tạo thành nước hay hydro peroxyde, sản phẩm cuối hình thành phụ thuộc vào loài vi sinh vật hệ thống enzym chúng 39 ... tìm thấy vi sinh vật hình que Tuy nhiên có số vi sinh vật hình cầu có khả di động Vi sinh vật di động có hay nhiều tiên mao phân bố vi trí khác tế bào vi sinh vật Một số vi sinh vật chuyển từ trạng... vàng 14 Thử nghiệm tính di động môi trường thạch mềm Nguyên tắc: Nhằm xác đònh vi sinh vật có di động hay di động Vi sinh vật di động thường vi sinh vật có tiên mao Tiên mao thường tìm thấy vi sinh. .. aminoacidu1 Phương pháp thực hiện: Để nhận biết khả làm tan gelatin vi sinh vật, chất thêm vào môi trường nuôi cấy, chưa cấy vi sinh vật, môi trường chứa gelatin dạng đông đặc Sau nuôi cấy, vi sinh vật