J Sci & Devel 2014, Vol 12, No 5: 656-664 Tạp chí Khoa học Phát triển 2014, tập 12, số 5: 656-664 www.vnua.edu.vn PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN CÁC CHỦNG XẠ KHUẨN (Streptomyces spp.) ĐỐI KHÁNG NẤM BỆNH CÂY Lê Thị Hiền, Đinh Văn Lợi, Vũ Thị Vân, Nguyễn Văn Giang* Khoa Công nghệ Sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Email*: vangianghua@gmail.com Ngày gửi bài: 12.06.2014 Ngày chấp nhận: 10.08.2014 TÓM TẮT Mục đích nghiên cứu xác định chủng xạ khuẩn có tính đối kháng cao với nấm hại thực vật Từ mẫu đất khác nhau, phân lập làm 43 chủng xạ khuẩn, phân thành nhóm màu với tỷ lệ khác nhau: trắng 37,2%; xám - 22,9%; nâu - 14,0%; vàng - 11,6%; hồng - 2,3%; tím - 2,3%; xanh - 4,7% Trong số có 16 chủng đối kháng nấm Fusarium oxysporum, 11 chủng đối kháng nấm Botryosphaeria dothidea; chủng đối kháng nấm Phytophthora capsici chủng đối kháng nấm Sclerotium hydrophylum Đã tuyển chọn chủng xạ khuẩn HN6 NA1 có hoạt tính kháng nấm mạnh Khảo sát khả sinh trưởng môi trường Gause I cho thấy HN6 NA1 có khả sinh trưởng tốt nhiệt độ 30ºC, pH trung tính, đồng thời, chúng có khả chịu nhiệt độ, nồng độ muối tương đối cao Khảo sát khả sinh trưởng môi trường ISP cho thấy HN6 NA1 có khả sử dụng nguồn đường khác nhau: D - glucose, saccarose, D - xylose, rhamnose, raffinose Bước đầu xác định chủng HN6 thuộc loài Streptomyces roseosporus, chủng NA1 thuộc loài Streptomyces albofaciens Từ khóa: F oxysporum, Botryosphaeria dothidea, Phytophthora capsici, Streptomyces roseosporus, Streptomyces albofaciens Isolation and Screening Streptomyces spp against Plant Pathogenic Fungi ABSTRACT The aim of the present study was to identify Streptomyces spp antagonistic to plant pathogenic fungi From eight of different soil samples, a total of 43 isolates of Streptomyces were isolated and they were divided into groups with different proportion: white 37.2 %; grey 22.9 %; brown 14.0 %; yellow 11.6 %; pink 2.3 %; purple 2.3 %; and blue 4.7 % Of 43 isolates, 16 were antagonistic to Fusarium oxysporum, 11 were antagonistic to Botryosphaeria dothidea, were antagonistic to Phytophthora capsici, and were antagonistic to Sclerotium hydrophylum Two streptomyces isolates, HN6 and NA1 were selected due to their high fungal antagonism HN6 and NA1 grew well on Gause I medium at 30ºC, neutral pH and fairly high salt concentration On ISP culture medium HN6 and NA1 were able to utilize various sugar sources: D - glucose; saccarose, D - xylose, rhamnose and raffinose The isolate HN6 was preliminarily identified as Streptomyces roseosporus, while NA1 as Streptomyces albofaciens Keywords: F.oxysporum, Botryosphaeria dothidea, Phytophthora capsici, Streptomyces roseosporus, Streptomyces albofaciens ĐẶT VẤN ĐỀ Hội nghị tư vấn khu vực châu Á Thái Bình Dương (FAO,1992) khẳng định đấu tranh sinh học tảng chương trình quản lý dịch hại tổng hợp với chiến lược sử dụng tác nhân sinh học để hạn chế phát triển quần thể vi sinh vật gây bệnh Trong số tác 656 nhân sinh học thường sử dụng để ức chế vi sinh vật gây bệnh, xạ khuẩn nhóm có nhiều tiềm có khả sinh chất kháng sinh cao, có nhiều chất kháng sinh kháng nấm mạnh Xạ khuẩn, đặc biệt loài thuộc chi Streptomyces xem nguồn sản xuất chất kháng sinh nhiều (Qin et al., 1994) Cho tới nay, khoảng 8.000 chất Lê Thị Hiền, Đinh Văn Lợi, Vũ Thị Vân, Nguyễn Văn Giang kháng sinh biết giới, 80% xạ khuẩn sinh (Dhanasekaran et al., 2012) Vì vậy, việc tìm kiếm chủng xạ khuẩn có khả sinh chất kháng sinh kháng nấm bệnh (Fusarium spp., Phytophthora spp., Botryosphaeria spp., Sclerotium hydrophylum) góp phần vào công tác bảo vệ trồng xây dựng nông nghiệp an toàn bền vững VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Phân lập xạ khuẩn chuẩn bị mẫu nấm bệnh Mẫu đất lấy độ sâu từ 5-20cm địa điểm Hà Nội, Hưng Yên, Đà Nẵng, Vĩnh Phúc, Bắc Giang, Thái Bình, Nghệ An Gia Lai Xạ khuẩn phân lập theo phương pháp Vinogradkii (1952) (trích theo Nguyễn Thành Đạt, 2000) Các loài nấm bệnh bao gồm: Fusarium oxysporum, Phytophthora capsici, Botryosphaeria dothidea Sclerotium hydrophylum cung cấp Trung tâm Bệnh Nhiệt đới - Học viện Nông nghiệp Việt Nam 2.2 Khảo sát chủng xạ khuẩn có khả đối kháng nấm Để khảo sát khả đối kháng chủng xạ khuẩn với mẫu nấm bệnh cây, nghiên cứu sử dụng phương pháp sau: Phương pháp đồng nuôi cấy (Dhanasekaran et al., 2012): Khả đối kháng chủng xạ khuẩn với chủng nấm gây bệnh điều kiện in vitro đánh giá phương pháp đồng nuôi cấy môi trường Potato Dextrose Agar (PDA - g/l: Khoai tây miếng 200, đường 20, NaCl 20, Agar 20, pH = 7,4) Nấm bệnh cấy trung tâm đĩa petri, chủng xạ khuẩn cấy góc bao quanh nấm bệnh cách tâm đĩa 3cm Đường kính vòng ức chế sinh trưởng xác định sau - ngày nuôi cấy 30oC - Phương pháp khuếch tán đĩa thạch (Dhanasekaran et al., 2012): Xạ khuẩn nuôi môi trường Gause I lỏng (g/l: Tinh bột tan 20g; K2HPO4 0,5g; MgSO4.7H2O 0,5g; NaCl 0,5g; KNO3 0,5g; FeSO4 0,01g; pH =7,4), lắc 200 vòng/ phút 30oC Dịch xạ khuẩn thu sau ngày nuôi cấy Nấm hoạt hóa làm môi trường PDA, dùng que cấy lấy sợi nấm cho vào ống eppendorf chứa 500µl nước cất vô trùng, voltex để bào tử nấm phát tán nước Giếng thạch tạo đĩa thạch PDA cấy trải 50µl dung dịch nấm 100µl dịch xạ khuẩn ly tâm với tốc độ 8.000 vòng/ phút 30 phút, 4oC dịch xạ khuẩn không ly tâm bổ sung vào giếng thạch, ủ 30oC Dịch xạ khuẩn có khả ức chế sinh trưởng nấm thể thông qua vòng sáng xuất quanh giếng thạch - Phương pháp thỏi thạch (Nguyễn Lân Dũng Phạm Thị Trân Châu, 1978): Xạ khuẩn cấy đĩa petri chứa môi trường Gause I 30oC Sau ngày nuôi cấy, thỏi thạch xạ khuẩn cấy vào đĩa petri chứa môi trường PDA cấy trải nấm, ủ 4oC - để hoạt chất từ thỏi thạch khuếch tán vào môi trường, sau cho vào tủ nuôi, quan sát kết sau ngày 2.3 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học chủng xạ khuẩn có khả kháng nấm bệnh Đặc điểm hình thái chủng xạ khuẩn xác định dựa đặc điểm nuôi cấy bao gồm: màu sắc khuẩn ty khí sinh; màu sắc khuẩn ty chất; khả sinh sắc tố tan (Tresner and Backus, 1963) hình thành sắc tố melanin môi trường GauseI, GauseII (g/lNước chiết thịt 30ml, Pepton 5, NaCl 5, Glucose 10, Agar 20) hệ thống môi trường ISP (ISP1 (g/l- Tryptone 5, cao nấm men 3, Agar 20, pH = 7.0); ISP2 (g/l- Cao nấm men 4, dịch chiết Malt 10, glucose 4, Agar 20, pH = 7,3); ISP3 (g/l- Bột yến mạch 20, Agar 20, dung dịch muối vi lượng 1,0 ml, pH = 7.0); ISP4 (g/l- Tinh bột 10, K2HPO4 1, MgSO4.7H2O 1, NaCl 1, (NH4)2SO4 2, CaCO3 2, dung dịch muối vi lượng 1.0 ml, Agar 20, pH = 7,0); ISP5 (g/l- L - asparagin 1; glyxerin 10; K2HPO4 1; dung dịch muối vi lượng 1,0 ml; agar 20, pH = 7,0); ISP6 (g/l- Peptone 10, cao nấm men 1, xitrat sắt 0,5, agar 20, pH = 7.0); ISP7 (g/l- Glycerin 15; L - tyrosin 0,5; L - asparagin 1; 657 Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn (Streptomyces spp.) đối kháng nấm bệnh K2HPO4 0,5; MgSO4.7H2O 0,5; NaCl 0,5; FeSO4.7H2O 0,01; dung dịch muối vi lượng 1,0 ml, agar 20, pH = 7,0) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn Xạ khuẩn nuôi cấy môi trường ISP9 (g/l- (NH4)2SO4 2.64; KH2PO4 2.38; K2HPO4.3H2O 5,65; MgSO4.7H2O 1; dung dịch B 1,0 ml; agar 20; pH = 7,0) có bổ sung 1% nguồn đường khác như: D-glucose; Larabinose; saccarose; D-xylose; I-inositol; mannitol; rhamnose; raffinose; cellulose; lactose để xác định khả đồng hóa cacbon chủng thu Dung dịch muối B (%): CuSO4.5H2O 0,64; FeSO4.7H2O 0,11; MnCl2.4H2O 0,79; ZnSO4.7H2O 0,15; nước cất 100ml Trong tự nhiên, xạ khuẩn phân bố rộng rãi đất, nước, rác, bùn, phân chuồng Trong đất, xạ khuẩn chiếm khoảng 20 - 40% tổng số vi sinh vật đất, tập trung nhiều lớp đất bề mặt (Mitra et al., 2008; Proudyogiki, 2012) Từ mẫu đất khác nhau, 43 chủng xạ khuẩn phân lập môi trường Gause I với đặc điểm hình thái màu sắc khuẩn lạc khác Màu sắc hệ sợi khí sinh xác định dựa vào bảng màu Tresner Buckus Căn vào màu sắc khuẩn ty khí sinh, chủng xạ khuẩn chia thành nhóm màu khác (Lê Gia Hy, 1994; Trerner and Buckus, 1963) Trong số 43 chủng xạ khuẩn phân lập có nhóm màu xuất với số lượng tỷ lệ khác (Bảng 1) Khả sinh enzyme ngoại bào xác định cách cấy xạ khuẩn môi trường có bổ sung chất (Gulve and Deshmukh, 2011) Xạ khuẩn cấy chấm điểm môi trường đĩa thạch Mineral salt agar (g/l- (NH4)2SO4 4; NaCl 6; K2HPO4 1; MgSO4 0,1; CaCl2 0,1; chất (CMC, tinh bột, xylan) 10 gelatin 0.1, Agar 20, pH = 7,0), sau ngày nuôi, đĩa petri mọc khuẩn lạc đem nhuộm thuốc nhuộm lugol 1% để kiểm tra hoạt tính amylase, cellulose, xylanase nhuộm amido đen 10B 0,1% để kiểm tra hoạt tính protease Hoạt tính enzyme ngoại bào thể qua vòng sáng quanh khuẩn lạc xạ khuẩn 3.2 Khảo sát khả đối kháng nấm bệnh chủng xạ khuẩn phân lập Xạ khuẩn chi có khả sinh nhiều chất kháng sinh (CKS) ức chế phát triển loại nấm gây hại thực vật người (Qin et al., 1994) Chúng sử dụng trình lên men sản xuất hợp chất có tính kháng nấm, kháng virus, chống ung thư, thuốc trừ sâu, thuốc diệt cỏ Sau phân lập làm 43 chủng xạ khuẩn, để tuyển chọn chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng nấm cao, tiến hành kiểm tra sơ hoạt tính kháng nấm chủng xạ khuẩn phương pháp đồng nuôi cấy, phương pháp khuếch tán đĩa thạch phương pháp thỏi thạch Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến khả sinh trưởng xạ khuẩn bao gồm yếu tố: nhiệt độ (25, 30, 35, 40, 45, 500C), pH ban đầu (3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13) Để xác định khả chịu muối (Tresner et al., 1968), xạ khuẩn cấy môi trường thạch nghiêng GauseI có bổ sung NaCl với nồng độ 0; 0,5; 3; 5; 7; 9; 11 (%) Sau - 10 ngày lấy quan sát sinh trưởng Bảng Sự phân bố theo nhóm màu chủng xạ khuẩn 658 Nhóm màu Số chủng Tỷ lệ (%) Trắng 16 37,2 Xám 12 27,9 Nâu 14,0 Vàng 11,6 Xanh 4,7 Hồng 2,3 Tím 2,3 Lê Thị Hiền, Đinh Văn Lợi, Vũ Thị Vân, Nguyễn Văn Giang Bảng Hoạt tính kháng nấm bệnh chủng xạ khuẩn phân lập (D - d, mm) Nấm Xạ khuẩn BG1 BG2 BG5 BG7 BG8 DN1 DN5 F oxysporum 5,00 ± 0,20 - 7,23± 0,07 4,60 ± 0,10 7,50 ± 0,20 6,20 ± 0,10 6,90 ± 0,20 B dothidea 10,02 ± 0,10 6,70 ± 0,15 7,30 ± 0,10 - - - - - - - - - - - - 11,45 ± 0,2 - - - - - DN7 DN8 DN9 DN11 GL2 HN5 HN6 10,10 ± 0,10 - 10,50± 0,10 - - 9,70 ± 0,17 13,50± 0,30 P capsici S hydrophylum Nấm Xạ khuẩn F oxysporum B dothidea - - 8,15 ± 0,20 4,50 ± 0,10 5,50 ± 0,15 3,15 ± 0,10 11,45± 0,14 P capsici - 6,30 ± 0,15 - - - - 9,00 ± 0,15 S hydrophylum - - - - - - 9,50 ± 0,10 HN7 HY7 HY8 NA1 NA3 TB5 TB6 F oxysporum - 6,40 ± 0,15 6,00 ± 0,20 16,30± 0,15 11,00 ± 0,20 6,20 ± 0,10 9,50 ± 0,10 B dothidea - - - 14,15± 0,15 5,50 ± 0,10 4,67 ± 0,16 - P capsici - - - 10,10 ± 0,20 - - - 7,45 ± 0,16 - - 17,80 ± 0,10 - - - Nấm Xạ khuẩn S hydrophylum Ghi chú: D: Đường kính vòng ức chế sinh trưởng, d: Đường kính khuẩn lạc xạ khuẩn, (-): Không có hoạt tính Trong 43 chủng xạ khuẩn phân lập được, 16 chủng có khả đối kháng nấm Fusarium oxysporum (chiếm 37,2%), 12 chủng có khả đối kháng nấm Botryosphaeria dothidea (chiếm 25,6%) Phần lớn chủng đối kháng yếu với nấm Phytophthora capsici Sclerotium hydrophylum Trong số chủng xạ khuẩn có khả đối kháng, chọn hai chủng xạ khuẩn NA1 HN6 có khả đối kháng với loại nấm gây hại Chúng tiến hành đồng nuôi cấy hai chủng xạ khuẩn NA1 HN6 với nấm bệnh môi trường Gause I theo dõi sau A B bào tử nấm bệnh phát triển vùng đối kháng để so sánh mức độ trì đối kháng hai chủng xạ khuẩn Chủng NA1 trì đối kháng với loại nấm bệnh lâu so với chủng HN6 Chủng NA1 trì đối kháng với F oxysporum, B dothidea S hydrophylum từ 19 đến 22 ngày, chủng HN6 trì đối kháng nấm bệnh từ đến 17 ngày Khi khảo sát khả đối kháng với P capsisi thấy chủng NA1 trì đối kháng đến ngày, chủng HN6 trì đến ngày Sau thời gian vùng đối kháng thấy xuất khuẩn lạc nấm bệnh C D Hình Khả đối kháng chủng xạ khuẩn NA1 với mẫu nấm A: F oxysporum; B: B dothidea; C: P capsici; D: S hydrophylum 659 Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn (Streptomyces spp.) đối kháng nấm bệnh ngày 25 20 15 NA1 10 HN6 F.oxysporum B.dothidea P.capsici S.hydrophylum Nấm bệnh Hình Khả trì đối kháng nấm bệnh NA1 HN6 3.3 Một số đặc điểm sinh học hai chủng xạ khuẩn tuyển chọn 3.3.1 Đặc điểm hình thái Màu sắc khuẩn lạc chủng xạ khuẩn nuôi môi trường từ ISP1 đến ISP7 thường khác nhau, yếu tố để phân loại xạ khuẩn theo khóa định tên loài xạ khuẩn ISP (1974) khóa phân loại Bergey (Stanley et al., 1989) Khuẩn ty khí sinh khuẩn ty chất hai chủng xạ khuẩn nghiên cứu so với bảng màu Tresner Backus (Tresner, 1963) Cùng với màu sắc khuẩn lạc khả sinh sắc tố tan hình thành melanin tiêu chuẩn để phân biệt chủng xạ khuẩn Bảng Đặc điểm nuôi cấy chủng xạ khuẩn HN6 NA1 môi trường Gause ISP Sau ngày Môi trường Màu KTKS Sau 14 ngày Màu KTCC Màu KTKS Sau 21 ngày Màu KTCC Màu KTKS Màu KTCC HN6 NA1 HN6 NA1 HN6 NA1 HN6 NA1 HN6 NA1 HN6 NA1 GauseI hồng trắng vàng trắng hồng trắng hồng trắng hồng trắng hồng, xám trắng GauseII trắng, hồng nt vàng vàng trắng, hồng nt vàng, hồng vàng nt trắng hồng Vàng ISP1 Nt nt vàng, trắng trắng nt nt hồng trắng nt trắng hồng trắng ISP2 Nt nt nt vàng nt nt vàng, hồng vàng nt Xám nt Vàng ISP3 nt nt nt nt nt trắng, xám nt nt nt trắng, xám nt Nt ISP4 hồng nt nt nt hồng nt nt nt nt trắng nt Nt ISP5 trắng, hồng trắng ,xám nt nt hồng nt nt nt nt Xám nt Nt ISP6 nt trắng, xám vàng nt trắng, hồng nt nt nt nt trắng,x ám vàng, hồng Nt ISP7 nt nt vàng, trắng vàng sáng nt nt nt vàng nt Nt vàng, hồng vàng Ghi chú: KTKS: Khuẩn ty khí sinh,KTCC: Khuẩn ty chất; nt: 660 Lê Thị Hiền, Đinh Văn Lợi, Vũ Thị Vân, Nguyễn Văn Giang A B C D Hình Đặc điểm khuẩn lạc sợi khí sinh chủng NA1 (A, B) HN6 (C, D) môi trường GauseI sau ngày nuôi cấy Chủng HN6 sau ngày nuôi cấy KTKS có màu trắng, hồng môi trường Gause II, ISP1, ISP2, ISP3, ISP5, ISP6 ISP7; có màu trắng môi trường Gause I ISP4 Sau 21 ngày nuôi cấy, màu sắc KTKS có màu hồng tất môi trường KTCC sau 21 ngày có màu hồng vàng, hồng môi trường Chủng NA1 nuôi cấy ngày KTKS có màu trắng môi trường Gause I, GauseII, ISP1, ISP2, ISP3, ISP4; màu trắng xám môi trường ISP5, ISP6, ISP7 Sau 21 ngày nuôi cấy, KTKS có màu xám ISP2 ISP5, môi trường khác KTKS không thay đổi Trên môi trường GauseII, từ ISP2 đến ISP7, KTCC có màu vàng không thay đổi sau 21 ngày; Gause I ISP1 KTCC có màu trắng Khi nuôi cấy môi trường Gause hệ thống môi trường ISP, chủng xạ khuẩn HN6 NA1 không làm thay đổi màu sắc môi trường, chứng tỏ chúng khả sinh sắc tố tan không hình thành sắc tố melanin 3.3.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa Khả đồng hóa nguồn cacbon tiêu quan trọng để phân loại xạ khuẩn sử dụng môi trường ISP Vì vậy, tiến hành nuôi chủng xạ khuẩn HN6 NA1 môi trường ISP9 có bổ sung nguồn cacbon khác Kết cho thấy, chủng xạ khuẩn nghiên cứu có khả đồng hóa tốt nguồn cacbon khác Chủng HN6 đồng hóa tốt nhất: D - glucose; saccarose; D - xylose; rhamnose; raffinose, sinh trưởng yếu môi trường: L - arabinose; I inositol; mannitol; cellulose; lactose Chủng NA1 có khả đồng hóa tốt: D - glucose; saccarose; I - inositol; mannitol; raffinose; lactose, sinh trưởng yếu môi trường có chứa L - arabinose; D - xylose khả đồng hóa nguồn đường rhamnose cellulose Nguồn cacbon cụ thể sử dụng có hiệu chủng không hiệu chủng khác cho thấy nguồn cacbon cụ thể nguồn cacbon thích hợp hay có chứa thêm lượng nhỏ (traces) thành phần khác Oskay et al (2004) công bố Quá trình sống trao đổi chất vi sinh vật chịu tác động mạnh mẽ yếu tố môi trường Vì vậy, chủng HN6 NA1 nuôi cấy môi trường GauseI điều kiện 661 Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn (Streptomyces spp.) đối kháng nấm bệnh Hình Khả sinh enzyme ngoại bào hai chủng HN6 NA1 nhiệt độ, pH nồng độ muối khác Cả hai chủng sinh trưởng tốt 30oC, thích hợp với môi trường trung tính kiềm có khả chịu mặn, phát triển tốt pH = 7-8, nồng độ muối từ 5-7% Theo Larsen (1986) vi sinh vật chịu ưa muối nhóm thành nhóm theo nhu cầu muối chúng, sinh vật chịu nồng độ muối thấp sinh trưởng môi trường nước biển với nồng độ muối từ 2-3% Các sinh vật thuộc nhóm chịu muối trung bình sinh trưởng nồng độ NaCl từ 5-20% (w/v) Nhóm sinh vật chịu nồng độ muối cao sinh trưởng nồng độ muối bão hòa, không sinh trưởng nồng độ NaCl thấp 12% Các chủng xạ khuẩn thuộc nghiên cứu chịu nồng độ muối tới 7% nên xếp vào nhóm chịu muối trung bình Kết nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu công bố Nguyễn Thị Minh Hằng Đỗ Văn Bút (2013) Đặc biệt, chủng HN6 có khả chịu nhiệt 45oC, chủng NA1 có khả chịu nhiệt 40oC Không phải tất vi sinh vật có khả sinh enzyme chủng loài hoạt tính Vì vậy, tuyển giống phải tiến hành phân lập, kiểm tra lựa chọn chủng có hoạt tính enzyme mạnh, sinh nhiều enzyme mong muốn theo mục đích Chúng tiến hành kiểm tra khả chủng xạ khuẩn nghiên cứu Kết cho thấy, chủng HN6 có khả sinh loại enzyme ngoại bào mạnh protease Chủng NA1 sinh amylase cellulase với hoạt tính cao không sinh protease ngoại bào Trong trình sống, xạ khuẩn có khả tiết vào môi trường enzyme ngoại bào để phân giải hợp chất hữu phức tạp thành chất hữu đơn giản hấp thụ Từ kết so sánh đặc điểm hình thái, sinh lý, hóa sinh, tạm thời đặt tên chủng HN6 S roseosporus HN6 đặt tên chủng NA1 S albofaciens NA1 662 3.4 Kết phân loại chủng HN6 NA1 So sánh đặc điểm phân loại chủng HN6 NA1 với khóa phân loại xạ khuẩn theo Gause (1983) nhận thấy, chủng HN6 có nhiều đặc điểm giống với loài xạ khuẩn chuẩn S roseosporus, chủng NA1 giống với loài S albofaciens (Bảng 4) Lê Thị Hiền, Đinh Văn Lợi, Vũ Thị Vân, Nguyễn Văn Giang Bảng So sánh đặc điểm phân loại chủng HN6 NA1 với loài chuẩn S roseosporus S albofaciens Nhóm đỏ Các đặc điểm phân loại Streptomyces HN6 Nhóm trắng S roseosporus Streptomyces NA1 S albofaciens Màu sắc KTKS Hồng, trắng hồng Hồng, trắng hồng Trắng, trắng xám Trắng, trắng xám Màu sắc KTCC Hồng,hồng trắng, hồng xám Trắng, hồng xám Trắng, vàng Trắng, vàng Hình dạng cuống sinh bào tử Chuỗi bào tử có móc câu Chuỗi bào tử có móc Chuỗi bào tử có xoắn ốc Chuỗi bào tử có xoắn ốc Sắc tố tan Không có Không có Không có Không có Sự tạo thành melanin - - - - D - Glucose + + + + L - Arabinose + + + + I - Inositol ± - + + Mannitol ± - + + Raffinose + - + + Rhamnose + + - - D - Xylose ± + ± ± Khả sử dụng đường: Ghi chú: (+): có khả năng; (-): khả năng; (±): không; KTKS: Khuẩn ty khí sinh; KTCC: Khuẩn ty chất KẾT LUẬN LỜI CẢM ƠN Đã phân lập làm 43 chủng xạ khuẩn, phân thành nhóm màu với tỷ lệ khác Hai chủng xạ khuẩn HN6 NA1 có hoạt tính kháng nấm mạnh nhất, sinh trưởng tốt nhiệt độ 30oC pH trung tính Chúng xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo bạn sinh viên học tập làm việc Phòng thí nghiệm Bộ môn Công nghệ vi sinh Chủng HN6 trì ức chế nấm F osyxporum, B dothidea, P capsici S hydrophylum tương ứng 17, 7, 4, ngày; có khả sống sót nhiệt độ 45ºC, chịu muối đến 5% Chủng NA1 ức chế phát triển nấm F osyxporum, B dothidea, P capsici, S hydrophylum tương ứng 20, 21, 7, 23 ngày; có khả sống sót nhiệt độ 40ºC, chịu muối đến 7% Dựa sở so sánh đặc điểm hình thái khuẩn lạc, sinh lý sinh hóa, chủng xạ khuẩn HN6 định danh Streptomyces roseosporus HN6, chủng NA1 định danh Streptomyces albofaciens NA1 Đồng thời, gửi lời cảm ơn tới TS Hà Viết Cường cung cấp chủng giống nấm gây bệnh thực vật Xin trân trọng gửi lời cảm ơn tới PGS.TS Vũ Đình Hòa, TS Nguyễn Xuân Cảnh đóng góp ý kiến giúp đỡ trình thực nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO Dhanasekaran D., Thajuddin N., Panneerselvam A (2012) Applications of Actinobacterial Fungicides in Agriculture and Medicine Fungicides for Plant and Animal Diseases, pp 1-27 Nguyễn Lân Dũng, Phạm Thị Trân Châu (1978) Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học - Tập III Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Thành Đạt (2000) Sinh học vi sinh vật, Nhà xuất Giáo dục 663 Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn (Streptomyces spp.) đối kháng nấm bệnh Gause G F., Preobrazenskaya TP (1983) Opredelitels actinomycetov M.: Nauka, p 34 - 48 (Tiếng Nga) Gulve and Deshmukh (2011) Enzymatic activity of Actinomycetes isolated from marine sediments Recent Research in Science and Technology, 3(5): 80-83 Nguyễn Thị Minh Hằng, Đỗ Văn Bút (2013) Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn Actinomycetes phân giải cellulose từ đất rừng Hội nghị khoa học toàn quốc Lê Gia Hy (1994) Nghiên cứu xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh đạo ôn thối cổ rễ phân lập Việt Nam Luận án Phó Tiến sĩ Khoa học Sinh học, chuyên ngành: Vi sinh vật học, Viện Công nghệ sinh học, Hà Nội Biền Văn Minh (2000) Nghiên cứu khả sinh chất kháng sinh số chủng xạ khuẩn phân lập từ đất Bình Trị Thiên Luận án Tiến sĩ Sinh học, chuyên ngành: Vi sinh vật học, Đại học Sư phạm Hà Nội Larsen, H (1986) Halophilic and halotolerant microorganism: an overview historical perspective FEMS Microbiol Biotechnol., 24: 2235-2241 Mitra A., Santra SC., Mukherjee J (2008) Distribution of Actinomycetes, their antagonistic behavior and physico- chemical characteristics of worlds largest tidal mangrove forest Appl Microbiol Biotechnol., 80: 685-695 Newman DJ, Cragg GM, Snader KM (2003) Natural products as ourees of new drugs over the period J Nat Prod, 66: 1022 - 1037 664 Oskay, M., U.A Tamer and C Azer (2004) Antibacterial activity of some actinomycetes isolated from farming soils of Turkey Afr.J Biotechniol., 3: 441-446 Proudyogiki, Roopali Gour, Rajiv Gandhi (2012) Isolation and Characterization of Actinomycetes against Macrophomina phaseolina and Rhizoctonia solani Advance Journal of Pharmaceutical Sciences, 1(2): 31-30 Qin Z., Peng V., Zhou X., Liang R., Zhou Q., Chen H., Hopwood DA., Keiser T., Deng Z (1994) Development of a gene cloning system for Streptomyces hygroscopicus varying chengensis, a producer of three useful antifungal compounds by elimination of three barriers to DNA transfer J Bacteriol., 176: 2090-2095 Stanley T Williams ME Sharpe, Holt JG (1989) Bergey’s Mannual of Systematic bacteriology, Williams & Wilkins, 4: 2452-2492 Đặng Văn Tiến, Nguyễn Đình Tuấn, Vi Thị Đoan Chính, Ngô Đình Bính (2009) Nghiên cứu xạ khuẩn sinh kháng sinh kháng vi khuẩn Xanthomonasoryzae gây bệnh bạc lúa Báo cáo khoa học hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc Trerner HD., Buckus EJ (1963) System of color wheels for Streptomyces taxonomy Appl Microbiol., 11: 335 - 338 Tresner, HD., J.A Hayes and E.J Backns (1968) Differential tolerance of Streptomyces to sodium chloride as a taxonomic aid Applied Microbiol., 16: 1134-1136 ... trừ sâu, thuốc diệt cỏ Sau phân lập làm 43 chủng xạ khuẩn, để tuyển chọn chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng nấm cao, tiến hành kiểm tra sơ hoạt tính kháng nấm chủng xạ khuẩn phương pháp đồng nuôi... hai chủng xạ khuẩn tuyển chọn 3.3.1 Đặc điểm hình thái Màu sắc khuẩn lạc chủng xạ khuẩn nuôi môi trường từ ISP1 đến ISP7 thường khác nhau, yếu tố để phân loại xạ khuẩn theo khóa định tên loài xạ. .. định dựa vào bảng màu Tresner Buckus Căn vào màu sắc khuẩn ty khí sinh, chủng xạ khuẩn chia thành nhóm màu khác (Lê Gia Hy, 1994; Trerner and Buckus, 1963) Trong số 43 chủng xạ khuẩn phân lập có