Kỹ thuật thụ phấn và nuôi cấy phôi invitro

Kỹ thuật thụ phấn và nuôi cấy phôi invitro

Kỹ thuật thụ phấn và nuôi cấy phôi invitro Giảng viên: Nguyễn Thị Lý Anh Sinh viên :Nguyễn Ngọc Hoà Hoàng Thị Lê Hoàng Khánh Hà Đinh Thị Phương Nguyễn Phương Thảo Phạm Thị Hân Nội dung  I. Các khái niệm  II. Kỹ thuật thụ phấn invitro  III. Nuôi cấy phôi invitro (cứu phôi)  IV. Ví dụ về thụ phấn invitro và cứu phôi I. Các khái niệm  Thụ phấn  Thụ tinh  Phôi  Thụ phấn invitro  Nuôi cấy phôi (cứu phôi)  Thụ phấn (pollination) là sự tiếp nhận các hạt phấn từ bao phấn tới núm nhụy để thực hiện thụ tinh ở hoa. Ở thực vật có hai phương thức thụ phấn là thụ phấn chéo và tự thụ phấn  Thụ tinh (fertilization): Ở thực vật thụ tinh là sự kết hợp của hai giao tử đực và cái (tinh trùng và noãn) thành hợp tử (phôi, bào tử hoặc hạt) là đặc trưng cơ bản của sinh sản hữu tính, sinh sản lưỡng tính. Ở thực vật hạt kín có phương thức thụ tinh kép.  Phôi là một nhóm tế bào có khả năng phát triển tạo thành cơ thể hoàn chỉnh là pha phát triển trung gian giữa hợp tử hay tế bào soma và bào tử thể.  Có hai loại phôi: phôi hữu tính & phôi vô tính ( phôi soma)  Phôi hữu tính : là phôi trong hạt được tạo ra do thụ tinh giữa tế bào trứng và giao tử đực (do lai hoặc tự thụ) còn gọi phôi hợp tử.  Phôi soma: là phôi được phát sinh từ tế bào sinh dưỡng 2n chỉ của bố hoặc mẹ và tế bào ấy có cấu trúc như một phôi gọi là phôi vô tính ( phôi soma).  Thụ phấn invitro là thực hiện quá trình thụ phấn trong ống nghiệm không phụ thuộc vào cơ thể mẹ.  Nuôi cấy phôi (cứu phôi) là sự tách rời và nuôi cấy invitro phôi hợp tử đã thành thục hoặc chưa thành thục thành cây hoàn chỉnh. II. Kỹ thuật thụ phấn invitro  Mục đích  Điều kiện có thể thụ phấn in vitro  Các bước tiến hành  Các phương pháp thụ phấn in vitro II.1. Mục đích phải tiến hành kỹ thuật này  Để khắc phục sự bất hợp trước khi thụ tinh.  Thụ phấn, thụ tinh ở điều kiện in vitro tạo ra cơ hội sản xuất các phôi lai giữa các loài thực vật không thể lai bằng các phương pháp gây giống cây trồng truyền thống. [...]... trường nuôi cấy 1 hay 2 vòi nhụy   Có thể nuôi cấy ngoài sáng hay trong tối Noãn nảy mầm sau 5-7 tuần thụ phấn và tiếp tục được thụ phấn Thụ phấn bên trong bầu (intraovarian pollionation): cả vòi nhụy hoặc 1 phần của nó có thể được tách ra và hạt phấn hoặc được đặt trên bề mặt vết cắt bầu quả hoặc chuyển qua lỗ trên thành vòi nhụy đến bầu quả III Kỹ thuật cứu phôi     Mục đích Nuôi cấy phôi hữu... lá noãn nuôi cấy invitro Lấy nụ hoa của cây bố vào ngày nở hoa, khử trùng, tách lấy bao phấn và để trong điều kiện vô trùng đến khi chúng tung phấn Lấy hạt phấn rắc trực tiếp lên mặt cắt của bầu quả hay lá noãn để thụ phấn in vitro Khi noãn thụ tinh, chúng hình thành hợp tử và tạo phôi Các phôi lai in vitro thường bỏ qua giai đoạn ngủ, nghỉ và mọc thành cây in vitro II.4 Các phương pháp thụ phấn in... chùm hoa  Trong quá trình thu nhận phôi cần hạn chế sự tổn thương của dây treo phôi Dây treo phôi có kích thước nhỏ và cấu trúc mỏng manh nên khó tách nó nguyên vẹn cùng với phôi để đưa vào nuôi cấy Không có dây treo phôi làm giảm đáng kể tỉ lệ hình thành cây con từ nuôi cấy phôi non III.2.2 Thành phần môi trường nuôi cấy     Sau khi tách từ hạt phôi được nuôi cấy trong môi trường chứa: Muối khoáng... nguyên phân liên tiếp tạo thành phôi  Nuôi cấy phôi hữu tính gồm -Tách phôi -Nuôi cấy phôi để tạo cây  III.2.1 Tách phôi  Phôi hữu tính được hình thành trong môi trường vô trùng của noãn và mô bầu hoa -Ở một số loài phôi có kích thước lớn, thuận tiện cho quá trình tách phôi (cây họ đậu), nhưng một số loài hoa khó tách phôi (hoa lan_hạt có kích thước nhỏ, vỏ hạt tiêu giảm và thiếu nội nhũ) -Ở thực vật...II.2 Điều kiện có thể thụ phấn in vitro    Điều kiện cơ bản là phải nuôi cấy thành công bầu quả hay noãn phân lập (noãn trần) của cây mẹ Chủ động điều khiển quá trình nảy mầm của hạt phấn cây bố trong môi trường nuôi cấy vô trùng Tiến hành thụ phấn để sự thụ tinh diễn ra và nuôi cấy hợp tử phát triển thành phôi lai trên môi trường dinh dưỡng vô trùng II.3 Các bước... bằng phương pháp ghép vòi nhụy   Hạt phấn cần thụ được “gửi” trên 1 núm nhụy thích hợp và nảy mầm, 1 ngày sau vòi nhụy và 1/3 bầu của hoa chứa hạt phấn được cắt và ghép lên 3/4 bầu nhụy của hoa cây mẹ cần thụ phấn Theo Vantuyl và cộng sự(1991) thì một ngày sau khi “gửi” hạt phấn vòi nhụy được cắt ngắn cách trên bầu 1-2mm và được gắn lên bầu nhụy của hoa cây mẹ Bầu và vòi nhụy ngoài đồng ruộng được kết... phục sự bất hợp sau thụ tinh Khắc phục sự bất hợp giữa nội nhũ và phôi khi lai xa Tạo cây đơn bội (lúa mì x ngô, lúa mỳ x yến mạch dẫn đến sự loại bỏ một bộ nhiễm sắc thể) Ngăn ngừa sự thui chột phôi ở những loại quả hạch chín (đào, mận, mơ…) Phá ngủ nghỉ, rút ngắn chu kỳ tạo giống… III.2 Nuôi cấy phôi hữu tính Sự phát sinh phôi hữu tính: -Xảy ra quá trình thụ tinh giữa hạt phấn và noãn hình thành hợp... còn trong invitro chỉ cần sử dụng agar để cố định là đủ II.4.3 Thụ phấn cho giá noãn  Bầu được cắt theo chiều dọc thành nhiều miếng vào ngày núm nhụy tiết ra dịch nhầy hoặc 1-2 ngày sau đó Mỗi 1 miếng sẽ chứa 1 giá noãn và 1 hàng noãn, có thể để lại hoặc không để lại vách bầu Một lượng lớn hạt phấn cần thụ được đặt theo giá noãn Để kích thích hạt phấn nảy mầm và đâm xuyên vào noãn có thể đặt vào môi... II.4.1 Thụ phấn bằng phương pháp cắt ngắn vòi nhụy   Là phương pháp dễ và hiệu quả Núm nhụy và 1 phần hoặc toàn bộ vòi nhụy của hoa được cắt ngắn, sau đó hạt phấn của cây bố được thụ trực tiếp lên vòi nhụy đã cắt ngắn và kết quả là có rất nhiều ống phấn đã kéo dài được tới bầu nhụy Nhược điểm: số lượng hạt trong 1 quả ít Có thể do ống phấn gặp khó khăn trong khi đâm xuyên qua vách bầu II.4.2 Thụ phấn. .. là a.a hiệu quả nhất đối với nuôi cấy phôi nhiều loài thực vật Cazein thuỷ phân(CH) (Ziebur & Brink, 1951) là hỗn hợp các a.a được sử dụng rộng rãi trong nuôi cấy phôi Làm tăng kích thước và tỷ lệ phân hoá phôi  Ngoài ra một số chất tự nhiên như nước dừa (Overbeek, 1942), nước chiết malt (Blackeslee & Satina, 1944), là những chất mà khi được bổ sung vào môi trường nuôi cấy sẽ đem lại hiệu quả cao . II. Kỹ thuật thụ phấn invitro  III. Nuôi cấy phôi invitro (cứu phôi)  IV. Ví dụ về thụ phấn invitro và cứu phôi I. Các khái niệm  Thụ phấn  Thụ.  Nuôi cấy phôi (cứu phôi) là sự tách rời và nuôi cấy invitro phôi hợp tử đã thành thục hoặc chưa thành thục thành cây hoàn chỉnh. II. Kỹ thuật