BỆNH PHÙ ĐẦU Ở LỢN CON DO ESCHERICHIA COLI ĐÂY RA TẠI BÌNH ĐỊNH

BỆNH PHÙ ĐẦU Ở LỢN CON DO ESCHERICHIA COLI ĐÂY RA TẠI BÌNH ĐỊNH

Bộ giáo dục v đo tạo Bộ nông nghiệp v PTNT Viện thú y Phan trọng hổ Bệnh phù đầu lợn escherichia coli gây tỉnh bình định Biện pháp phòng trị Chuyên ngnh : Vi sinh vËt häc thó y M· sè : 4-03-03 tãm tắt luận án tiến sỹ nông nghiệp H Nội - 2007 Công trình đợc hon thnh viện thú y Ng−êi h−íng dÉn khoa häc: TS Ngun ngäc nhiªn PGS.TS Cù hữu phú Phản biện 1: GS TSKH Hồ Văn Nam Phản biện 2: GS TSKH Phan Thanh phợng Phản biện 3: PGS TS Nguyễn thị kim lan Luận án đợc bảo vệ trớc Hội đồng chấm luận án cấp Nhà nớc tại: Viện Thú y Vào hồi 30' ngày 28 tháng năm 2007 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Th viện Quốc gia - Th viện Viện Thú y NHững công trình khoa học đ công bố liên quan đến luận án Nguyễn Ngọc Nhiên, Cù Hữu Phú, Phan Trọng Hổ CTV (2001), Đặc tính sinh vật hoá học yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli bệnh phù đầu lợn tỉnh Bình Định (2001), tạp chí Nông nghiệp & phát triển nông thôn, số 11, tr 804-805 Phan Trọng Hổ CTV (2003), Phân lập, xác định số đặc tính sinh vật hoá học yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli bệnh phù đầu lợn tỉnh Bình Định Biện pháp phòng trị, Báo cáo tham luận hội nghị khoa học công nghệ tỉnh Nam trung Tây nguyên, Bộ Khoa học Công nghệ, tr 250-256 Cù Hữu Phú, Phan Trọng Hổ, Văn Thị Hờng, Đỗ Ngọc Thúy (2006), So sánh hiệu giá kháng thể hình thành sau tiêm phòng vacxin phòng bệnh phù đầu cho lợn vacxin nhập ngoại vacxin sản xuất nớc, Tạp chí Nông nghiệp & Phát triển Nông thôn, số 10, tr.57, 58, 32 Phần mở đầu Bình Định thuộc vùng Duyên Hải Nam Trung bộ, có 10 huyện, thành phố với 256 xà Theo thống kê Chi cục Thú y Bình Định, năm 1999-2000, bệnh phù đầu lợn gây thiệt hại tới 10% tổng số lợn sau cai sữa Bệnh phù đầu bƯnh vi khn E coli g©y ra, chđ u giai đoạn sau cai sữa Lợn mắc bệnh đà xuất triệu chứng thần kinh, sng phù mí mắt làm vật chết nhanh, kết điều trị kháng sinh không đem lại hiệu quả, tỷ lệ chết cao Phòng bệnh chủ yếu dựa vào vacxin Hiện tại, đà có số vacxin thơng phẩm giới nhng giá vacxin cao, không phù hợp với đầu t chăn nuôi nông hộ tỉnh Bình Định Các vacxin nớc giai đoạn nghiên cứu phát triển cha có vacxin phòng bệnh phù đầu cho toàn quốc Theo kết công trình nghiên cứu khoa học nớc, chủng phân chủng E.coli có tính chất phân bố theo vùng địa lý Hiện cha có tài liệu công bố chủng E.coli gây bệnh Bình Định Để có sở khoa học cho việc đề biện pháp phòng trị bệnh thích hợp, hạn chế thiệt hại bệnh phù đầu lợn tỉnh Bình Định, đáp ứng yêu cầu xúc tình hình thực tế chăn nuôi tỉnh, tiến hành nghiên cứu đề tài: Bệnh phù đầu lợn Escherichia coli gây tỉnh Bình Định Biện pháp phòng trị Mục tiêu nghiên cứu Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ học, phân lập xác định số đặc tính sinh vật hoá học, yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli, chọn chủng chế tạo vacxin xây dung quy trình phòng, điều trị bệnh Đối tợng phạm vi nghiên cứu Lợn lứa tuổi từ 21 đến 90 ngày tuổi bị bệnh phù đầu, trang trại hộ chăn nuôi tỉnh Bình Định ý nghĩa đề tài Là nghiên cứu tơng đối hoàn chỉnh, có hệ thống ứng dụng kết thu đợc để sản xuất vacxin, đề quy trình tiêm phòng điều trị hợp lý bệnh phù đầu lợn vi khuẩn E coli gây tỉnh Bình Định Những đóng góp luận án - Xác định bệnh phù đầu lợn Bình Định c¸c chđng E coli O149, O139, O141, O138, O147, O9, O8 O157 gây - Xác định yếu tố gây bệnh phù đầu lợn Bình Định, có kháng nguyên bám dính F4 (K88), F18 độc tố Vero (VT2e) - Chế tạo vacxin phòng bệnh phù đầu lợn từ vi khuẩn phân lập từ Bình Định sử dụng phòng bệnh có hiệu - Xây dựng quy trình tiêm phòng vacxin E coli phòng bệnh phù đầu cho lợn Bình Định Bố cục luận án Luận án gồm 140 trang, đó: Mở đầu trang; Tổng quan tài liệu 46 trang; Nội dung phơng pháp nghiên cứu 21 trang; Kết nghiên cứu thảo luận 68 trang; Kết luận đề nghị trang Trong luận án có 32 bảng biểu; biểu đồ; đồ; công trình có liên quan, 173 tài liệu tham khảo (tài liệu tiếng Việt 26; tài liệu nớc 147) 17 ảnh minh họa Chơng Tỉng quan tμi liƯu Vi khn E coli cịng nh số loài vi khuẩn đờng ruột khác, trớc đợc coi vi khuẩn cộng sinh đờng ruột, nhng ngày thấy chúng tác nhân gây bệnh bệnh đờng ruột, nhiễm trùng huyết Vi khuẩn E coli gây bệnh bám dính, phá hủy tế bào niêm mạc ruột, tế bào nhung mao ruột non, sản sinh độc tố đờng ruột gây tiêu chảy gây nhiễm độc huyết Trong nớc, kết nghiên cứu Bùi Xuân Đồng (2002), bệnh phù đầu lỵn cã tû lƯ chÕt tõ 27- 45,6% Ngun Khả Ngự (2000), tỷ lệ lợn ốm (58,78%), tỷ lệ tư vong (53,54%) C¸c chđng E coli chđ u thc Serotyp: O26 O119 Trịnh Quang Tuyên (2006), nghiên cứu xác định yếu tố gây bệnh E coli bệnh tiêu chảy phù đầu lợn chăn nuôi tập trung, có tỷ lệ mắc bệnh cao từ 22- 60 ngày tuổi (77,1%) Các serotyp gây bƯnh chđ u lµ O139, O138, O149 ë MiỊn trung, cha có công trình nghiên cứu đầy đủ, toàn diện bệnh phù đầu lợn Trên giới, Kyriakis cs (1997) cho rằng, bệnh phù đầu xảy từ 1- tuần sau cai sữa Tỷ lệ chết từ 80% Triệu chứng lâm sàng bệnh lợn vòng tròn triệu chứng thần kinh Tiêu chảy xảy nhng triệu chứng điển hình Bosworth (1998) cho rằng, vi khuẩn E coli gây dung huyết nguyên nhân gây tiêu chảy lợn sơ sinh bệnh phù đầu lợn sau cai sữa Sử dụng vacxin phòng bệnh tạo kháng thể ngăn cản bám dính vi khuẩn đờng tiêu hoá Đan Mạch serotyp gây bệnh O139, O149, O138, O139, O141 vµ O8 (Aarestrup vµ cs 1997); Na Uy, Thụy Điển Thụy Sỹ O139 (Frydendahl, 2002) Sarrazin cs (1997), xác định vai trò F18 việc tạo miễn dịch để chống lại bệnh E coli Verdonck cs (2003), nghiên cứu lu hành trì yếu tố bám dính F18 vi khuẩn E coli trại lợn giống ë BØ, cho r»ng F18 + enterotoxin vµ verotocin cđa vi khuẩn E coli phân bố rộng yếu tố gây bệnh tiêu chảy bệnh phù đầu cho lợn trại Rosocha J cs (1999), nghiên cứu kháng thể đơn dòng để xác định yếu tố bám dÝnh F18 cđa vi khn E coli g©y bƯnh phù đầu Tác giả đà sử dụng kháng thể tạo để xác định yếu tố bám dính F18 vi khuẩn E coli phân lập từ lợn gây bệnh phù đầu thực nghiệm Để phòng bệnh phù đầu có hiệu quả, cần thực hệ thống biện pháp tổng hợp với phơng châm tăng cờng tốt khả miễn dịch lợn giảm đến mức thấp khả tiếp xúc với vi khuẩn Chơng nội dung v phơng pháp nghiên cứu 2.1 Nội dung nghiên cứu 2.1.1 Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ học bệnh phù đầu lợn 2.1.2 Phân lập xác định số đặc tính sinh vật hóa học 2.1.3 Xác định yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli phân lập 2.1.4 Nghiên cứu chế tạo vacxin, phòng bệnh phù đầu lợn 2.1.5 Đánh giá hiệu thực nghiệm vacxin Bình Định 2.1.6 Xác định hiệu giá kháng thể hình thành lợn sau tiêm vacxin 2.1.7 Thử nghiệm số phác đồ điều trị 2.1.8 Xây dựng quy trình tiêm phòng lợn vacxin E coli 2.1.9 áp dụng kết nghiên cứu phòng trị bệnh 2.2 Địa điểm nghiên cứu - Các hộ trang trại chăn nuôi địa bàn tỉnh Bình Định - Chi cục thú y Bình Định Bộ môn vi trùng Viện Thú y Quốc gia 2.3 Phơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Phơng pháp nghiên cứu dịch tễ học - Phiếu ®iỊu tra - Trong ®iỊu tra dÞch tƠ học, sử dụng phơng pháp nghiên cứu nh: tập, mô tả, phân tích tổng hợp 2.3.2 Phơng pháp phân lập vi khuẩn E coli: Nuôi cấy phân lập vi khuẩn theo quy trình thờng quy sử dụng phòng thí nghiệm môn Vi trùng- Viện Thú y 2.3.3 Phơng pháp giám định đặc tính sinh hãa cđa vi khn E coli: Ph¶n øng V.P (Voges Proskauer), phản ứng Indol, phản ứng lên men đờng, phản ứng Urea, phản ứng sinh H2S 2.3.4 Phơng pháp xác định yếu tố gây bệnh vi khuẩn phân lập: Phản ứng ngng kết nhanh phiến kính, phản ứng ngăn trở ngng kết hồng cầu gà chuột lang, phản ứng gây dung huyết môi trờng thạch máu, phơng pháp Carter, phơng pháp PCR, quy trình sản xuất vacxin vi khuẩn vô hoạt có bổ trợ keo phèn phơng pháp phân lô, phân đàn 2.3.8 Phơng pháp đếm vi khuẩn 2.3.9 Phơng pháp xử lý số liệu: Số liệu thu đợc xử lý theo phơng pháp Toán học thông thờng thống kê sinh vật học Nguyễn Văn Thiện Sử dụng phần mềm Excel để xử lý số liệu máy vi tính Chơng Kết v thảo luận 3.1 Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ học 3.1.1 Tình hình bệnh phù đầu lợn năm 2000- 2001 2004- 2005 Bảng 3.1: Tình hình bệnh phù đầu lợn E coli năm 2000- 2001 2004- 2005 Bình Định Năm 2000-2001 Năm 2004-2005 Các tiêu Số hộ Sè Tû lÖ bÖnh/ Tû lÖ Sè Sè Tû lÖ bÖnh/ Tû lÖ chÕt/ Sè bÖnh Sè chết Số bệnh Số chết Địa điều tra theo dõi tỉng sè chÕt/ ®iỊu tra theo dâi tỉng sè bƯnh (con) (con) (con) (con) ph−¬ng (hé) (con) (%) bƯnh (%) (hé) (con) (%) (%) Quy Nh¬n Tuy Ph−íc An Nh¬n Phù Cát Phù Mỹ Hoài Nhơn Hoài Ân An LÃo Tây Sơn Vĩnh Thạch Vân Canh 140 274 383 535 474 230 35 50 575 336 119 659 1475 2152 2178 3209 1566 138 227 2635 1594 581 474 990 1256 1371 1949 856 97 158 1678 1065 379 71,93 67,12 58,36 62,95 60,73 54,66 70,29 69,60 63,68 66,81 65,23 336 698 910 996 1369 553 68 115 1484 761 242 70,89 70,50 72,45 72,65 70,24 64,60 70,10 72,78 88,44 71,45 63,85 96 650 712 468 510 604 320 62 570 42 58 672 2534 2420 1496 1682 2416 1216 162 3590 110 146 44 236 178 118 144 168 84 18 320 18 104 6,55 9,31 7,35 7,89 8,56 6,95 6,91 11,11 8,91 16,36 71,23 18 98 74 70 66 78 34 10 136 14 70 40,91 41,52 41,57 59,32 45,83 46,43 40,48 55,55 42,50 77,78 67,30 Céng 3151 16414 10273 64,66 ± 5,28 7532 71,63 ± 6,33 4092 16444 1432 14,64 ± 8,97 668 50,84 ± 12,58 Qua bảng 3.1 cho thấy, bệnh phù đầu lợn xảy hầu hết huyện, thành phố tỉnh Điều tra năm 2000-2001, tỷ lệ bệnh/tổng số lợn bình quân 64,665,28%, cao Thành phố Qui Nhơn (71,93%), thấp huyện Hoài Nhơn (54,66%) Tỷ lệ chết/số lợn mắc bệnh bình quân 71,636,33%, cao huyện Tây sơn (88,44%), thấp huyện Vân Canh (63,85%) Điều tra tình hình bệnh năm 2004-2005 (sau đà tiêm phòng vacxin), tỷ lệ lợn bị bƯnh/tỉng sè lỵn chiÕm 14,64 ±8,97%, tû lƯ lỵn bị chết/số mắc bệnh 50,8412,58% Qua đợt điều tra (2000-2001), nhận thấy, tỷ lệ lợn mắc bệnh phù đầu tỷ lệ chết/lợn mắc bệnh lợn xảy Bình Định cao (64,66% 71,63%), sử dụng loại kháng sinh điều trị hiệu thấp Sử dụng thuật toán so sánh tỷ lệ bệnh tỷ lệ chết đợt điều tra có mức độ sai khác ®é tin cËy 99% §iỊu ®ã chøng tá r»ng cã sai khác tỷ lệ bệnh phù đầu lợn giai đoạn điều tra hiệu tiêm phòng vacxin đà thể rõ Đào Trọng Đạt cs (1986)[4] cho bệnh phù đầu lợn không gây vụ dịch lây lan rộng, tỷ lệ mắc bệnh đàn khoảng 64- 100% tû lƯ chÕt tõ 16- 35% Ngun Kh¶ Ngù (2000)[16] cho biÕt, tû lƯ bƯnh cao nhÊt lµ 55,55%, thấp 30,61%, tỷ lệ gây chết cao 33,33%, thấp 16,32% so với tổng đàn Shanks (1938) cho r»ng, tû lÖ bÖnh tõ 10- 40% (cá biệt lên đến 80%) lợn từ 1- tuần sau cai sữa, tỷ lệ chết so với lợn bệnh lên đến 100% Kyriakis cs (1997) cho biÕt, tû lƯ bƯnh ë lỵn cïng cá thể 80% nhng trung bình từ 30- 40%, tỷ lệ chết từ 50- 90% Qua nghiên cứu tác giả trên, nhận thấy tỷ lệ mắc bệnh, tỷ lệ chết có khác tùy theo nớc, vùng nớc điều kiện chăn nuôi So sánh tỷ lệ mắc bệnh phù đầu tỷ lệ chết/số bệnh đợt điều tra có cao so với tác giả nớc, có lẽ bệnh phù đầu tỉnh Bình Định nghiêm trọng cha có biện pháp phòng điều trị thích hợp thời gian dài 3.1.2 Lứa tuổi lợn bị bệnh phù đầu từ năm 2000-2001 2004-2005 Bệnh phù đầu vi khuẩn E coli gây ra, phụ thuộc nhiều vào giai đoạn lợn bị nhiều tác động stress, đặc biệt thời điểm cai sữa Bảng 3.2: Lứa tuổi bị bệnh phù đầu lợn E coli từ năm 20002001 2004-2005 Bình Định Các tiêu Năm 2000 2001 21-50 51-70 71-90 Tổng cộng (con) Sè Tû lÖ (%) Sè Tû lÖ (%) Sè Quy Nh¬n Tuy Ph−íc An Nh¬n Phï Cát Phù Mỹ Hoài Nhơn Hoài Ân An LÃo Tây Sơn Vĩnh Thạch Vân Canh 515 1047 1357 840 1571 938 108 150 1448 976 762 347 558 793 521 715 574 36 80 959 569 409 67,38 53,29 58,43 62,02 45,51 61,19 33,33 53,33 66,23 78,69 53,67 95 400 421 228 715 269 56 51 342 691 316 18,45 38,20 31,02 27,14 45,51 28,68 51,85 34,00 23,62 70,80 41,47 73 89 143 91 141 95 16 19 147 58 37 Tổng số 9712 5561 Địa phơng 57,55 37,34 3242 909 11,98 14,80 Năm 2004- 2005 21-50 51-70 71-90 Tû lƯ (%) Tỉng céng (con) Sè Tû lÖ (%) Sè Tû lÖ (%) Sè Tû lÖ (%) 14,17 8,50 10,54 10,83 8,97 10,13 14,81 12,67 10,15 5,94 4,85 41 225 168 104 137 165 72 18 285 16 94 26 153 96 72 68 89 45 179 62 64,25 68,36 57,41 69,52 49,64 53,84 63,82 49,61 62,79 58,54 65,71 12 57 40 25 52 64 18 80 23 30,19 24,94 24,06 24,07 37,92 38,85 24,57 36,11 28,13 31,10 24,75 15 32 17 12 26 5,56 6,70 18,53 6,41 12,44 7,31 11,61 14,28 9,08 10,36 9,54 10,14 1325 ± 3,08 808 60,31 ± 7,03 383 29,51 ± 5,78 134 10,17 ± 3,89 Qua b¶ng 3.2 cho thấy, kết đợt điều tra lợn bị bệnh phù đầu năm (2000- 2001) năm (2004- 2005) có tỷ lệ mắc bệnh từ 21- 50 ngày ti lµ 57,55±11,98% vµ 60,31±7,03%, tõ 51- 70 ngµy ti lµ 37,34± 14,80% vµ 29,51±5,78% vµ tõ 71- 90 ngµy tuổi 10,14 3,08% 10,17 3,89% Tỷ lệ lợn bị bệnh phù đầu cao lứa tuổi tõ 21- 50 ngµy ti vµ thÊp nhÊt tõ 71- 90 ngày tuổi Sử dụng thuật toán thống kê so sánh giai đoạn lứa tuổi đợt điều tra cho thấy, lợn từ 21- 50 ngày tuổi có tỷ lệ bệnh cao sai khác độ tin cậy 99% Lứa tuổi 21- 50 ngày thời điểm cai sữa sau cai sữa, đà tạo nhiều stress thay đổi vị trí, nuôi dỡng, biến đổi môi trờng, trộn lẫn lứa lợn với v v nên tỷ lệ bị mắc bệnh cao Kết có khác so với Nguyễn Thị Kim Lan (2003)[11], cho rằng, lợn lứa tuổi từ 45- 60 ngày mắc bệnh nhiều (27,83%) thấp lợn dới 21 ngày tuổi (3,42%), nhng lại tơng đối phù hợp với Đào Trọng Đạt cs (1986)[4] cho biết, lợn thờng mắc bệnh sau cai sữa tuần tuổi, nhng có gặp lợn sau sinh lợn tháng tuổi Shanks (1938)[137] cho rằng, lứa tuổi mắc bƯnh phỉ biÕn tõ 4- 12 tn ti, cã tr−êng hợp ngoại lệ lợn ngày tuổi lợn nái (chúng cha phát Bình Định) Kyriakis cs (1997)[92] cho rằng, bệnh xảy nhiều từ 4- tuần tuổi Kết phù hợp với Guimaraes cs (2000)[70] cho biết lứa tuổi mắc bệnh phù đầu cao lợn tuần tuổi, chiếm 92% So sánh với kết nghiên cứu số tác giả trên, nhận thấy lứa tuổi bị bệnh có khác vùng địa lý điều kiện chăn nuôi, khí hậu thời tiết tuổi cai sữa 3.1.4 Các triệu chứng bệnh tích đặc trng: 3.1.4.1 Các triệu chứng đặc trng bệnh: Quan sát triệu chứng 128 lợn bị bệnh phù đầu Bình Định, thống kê triệu chứng lâm sàng đặc trng lợn bị mắc bệnh đợc trình bày bảng 3.4: Bảng 3.4: Các triệu chứng đặc trng bệnh phù đầu E coli TT Thể bệnh Đặc điểm Bệnh xảy đột ngột đến vài sau toàn đàn bị nhiễm mà biểu bệnh trớc Lợn lờ đờ, hoạt động phối hợp, đứng siêu vẹo, suy sụp nằm ngà nghiêng, co giật, liệt, hôn mê chết từ đến 10 ngày sau xuất Biểu triệu chứng lâm sàng Lợn bệnh có thân nhiệt từ 390C chung đến 400C, giảm ăn sau bỏ ăn hoàn toàn, sng thủy thũng trán, lỡi, mí mắt, âm hộ, hầu, họng, thay đổi tiếng kêu, táo bón tiêu chảy, giảm hô hấp,xung huyết niêm mạc, tím da vùng đầu (chóp đuôi, chân, khớp mắt cá ) Lợn chết nhanh vòng 48 Lợn bỏ ăn, có triệu Thể chứng thần kinh, lại siêu sẹo, nằm chỗ, co giật, tiếng kêu khản giọng, nhiệt độ không tăng tăng đến cấp 390C, thể trạng trọng lợng suy sụp trớc chết Lợn chết chậm từ đến 10 ngày có triệu Thể cấp chứng bệnh đầu tiên, lợn có triệu chứng điển hình, táo bón sau có tiêu chảy, phân tiêu chảy có màu tính vàng xám, thể trạng gầy, suy sụp, co giật chết Lợn không chết sau có bệnh từ 10 đến 15 ngày kéo dài tháng, ăn ít, ăn không, lợn gầy, Thể mn đứng siêu vẹo, tiếng kêu khàn nhng giảm hơn, thân nhiệt bình thờng, táo bón tiêu chảy tính có không Lợn không tăng trọng tăng trọng không đáng kể 10 Qua bảng thấy rằng, tỷ lệ phân lập vi khuẩn E coli cao nhÊt ë dÞch ruét non 79,69%, tiÕp đến chất chứa ruột non 77,34%, hạch ruột 71,88% thấp gan, lách 66,41% Tỷ lệ bình quân loại bệnh phẩm phân lập 73,835,93% Sử dụng thuật toán thống kê so sánh tỷ lệ phân lập vi khuẩn E coli loại bệnh phẩm có sai khác độ tin cậy 99% Dịch ruột có tỷ lệ phân lập vi khuẩn E coli cao Theo hoàn toàn phù hợp với chế gây bệnh E coli vi khuẩn bám dính vào tế bào niêm mạc ruột Xâm nhập vào lớp tế bào này, phát triển nhân lên sản sinh độc tố ruột, trớc xâm nhập vào máu Ngợc với bệnh tiêu chảy, vi khuÈn E coli tËp trung nhiÒu ë chÊt chøa ruột non, tạo loạn khuẩn Kết nghiên cứu có cao so với Nguyễn Ngọc Hải cs (2000), tỷ lệ bình quân 67,4% thấp so với Nguyễn Khả Ngự (2000), có tỷ lệ phân lập vi khuẩn E coli lợn bị phù đầu hạch ruột, gan, lách, máu tim, phổi, dịch ruột non, chất chứa ruột bình quân 94,76% Đặc điểm bật mẫu E coli phân lập khuẩn lạc phát triển, tạp khuẩn môi trờng nuôi cấy chuyên biệt Theo Kurtz cs (1976), trình gây bệnh phù đầu lợn con, vi khuẩn E coli chiếm bề mặt niêm mạc ruột non, đặc biệt khoảng không tràng hồi tràng, vào niêm mạc ruột, hệ thống lâm ba, vào máu gây bệnh tích xung huyết, xuất huyết sng phù Vì vậy, tû lƯ ph©n lËp vi khn E coli cao tõ mẫu bệnh phẩm 3.2.3 Xác định số đặc tính sinh vật hóa học chủng vi khuẩn E coli phân lập đợc: Các chủng vi khuẩn E coli phân lập có đặc điểm hình thái, bắt màu, tính chất khuẩn lạc mọc giống nh Bertschinger vµ cs (1990), Ngun Nh− Thanh vµ cs (1997) đà mô tả 11 Bảng 3.9: Kiểm tra số đặc tính sinh hóa khả lên men đờng chủng E coli phân lập đợc Số Đặc tính sinh hóa TT lên men đờng 10 11 12 13 Lactose Glucose Galactose Maltose Fructose Saccharose Dulcitol Manitol Dextrose Phản ứng sinh Indol Tính di động Phản ứng VP Ph¶n øng Urea Tỉng sè chđng 77 77 77 77 77 77 77 77 77 77 77 77 77 Kết giám định Số Số chủng Tỷ lệ chủng d−¬ng (%) sinh tÝnh h¬i 77 100 77 75 97,40 75 77 100 74 75 97,40 75 77 100 77 10 12,99 0 0 77 100 73 77 100 77 77 100 77 100 77 100 77 100 Tû lÖ (%) 100 97,40 96,10 97,40 100 0 94,81 100 Qua bảng 3.9 cho thấy, chủng E coli phân lập từ mẫu bệnh phẩm đợc chọn, lên men 100% loại đờng lactose, galactose, fructose, manitol, dextrose; 97,40% glucose, maltose; 12,99% saccharose vi khuẩn E coli lên men đờng dulcitol Số chủng sinh 100% loại đờng lactose, fructose, dextrose; 97,40% loại đờng glucose, maltose; 96,10% đờng galactose; 94,81% đờng manitol không sinh đờng saccharose, dulcitol Các chủng vi khuẩn E coli có khả di động100%, phản ứng sinh Indol, phản ứng VP phản ứng Urea có tỷ lệ dơng tính 100% Kết nghiên cứu tơng tự với tác giả Nguyễn Khả Ngự (2000), Nguyễn Ngọc Hải cs (2000), vi khuẩn E.coli không lên men đờng Dulcitol, có tính di động cao đặc tính sinh học khác Kết phù hợp với giám định đặc tính sinh hóa vi khuẩn E coli Bergey cs (1994), vi khuẩn E coli có khả di động Nh chủng E coli phân lập đợc có đặc tính sinh hóa thông thờng vi khuẩn E coli Các chủng E coli gây bệnh phù đầu lợn sau cai sữa phân lập Bình Định có đặc tính sinh hóa phù hợp với đặc tính sinh hóa chung Điều khẳng định vai trò E coli bệnh phù đầu lợn Bình Định Tuy có đặc điểm dịch tễ học bệnh có khác với địa phơng, vùng địa lý, tiĨu khÝ hËu kh¸c nhau, nh−ng vi khn E coli cha có biến đổi 12 3.2.4 Xác định Serotyp kháng nguyên O số chủng E coli phân lập đợc Bảng 3.10: Kết xác định Serotyp kháng nguyên 36 chủng E coli phân lập đợc Kháng nguyên O157 O Số chủng (+) Tỷ lệ (%) O149 O147 O141 O139 O138 O9 O8 8,33 22,22 11,11 16,67 19,44 13,89 2,78 5,56 Kết xác định đợc serotyp kháng nguyên: O157, O149, O147, O141, O139, O138, O9 O8 Trong typ kháng nguyên O149 chiếm tỷ lệ cao (22,22%) Tiếp theo serotyp kháng nguyên O139 (19,44%), O141 (16,67%), O138 (13,87%), O147 (11,11%) serotyp kháng nguyên có tỷ lệ thấp O157 (8,33%), O8 (5,56%) O9 (2,78%) Nguyễn Khả Ngự (2000) cho biÕt, Serotyp chiÕm tû lƯ cao nhÊt lµ O26 (27,8%) O139 (13,9%), O111, O127, O124, O125, O126, O141, O86 cã tû lƯ 8,3% vµ thấp O55 chiếm tỷ lệ 2,8% Tô Minh Châu cs (1999) cho rằng, chủ yếu O139 (23,25%) có tới 46,59% không định đợc typ Sự khác biệt này, theo vùng địa lý khác đặc tính gây bệnh chđng E coli cịng kh¸c Smith H.W (1963b); Nagy cs (1990); Harel cs (1991) cho rằng, lợn bị bệnh phù đầu sau cai sữa chủ yếu Serotyp O138, O139 O141 Johansen cs (1997) xác định, chủ yếu kháng nguyên O8, O101, O138, O149 O15 Nh vậy, chủng E coli gây bệnh phù đầu lợn tỉnh Bình Định chủ yếu thuéc Serotyp : O149, O139, O141 vµ O138 KÕt tơng đồng với kết nghiên cứu Bertschinger cs (1990), tiến hành Thụy Điển thấy chủ yếu (25/32) chủng phân lập thuộc O139, O141, O149, O138 3.3 Xác định yếu tè g©y bƯnh cđa vi khn E coli ph©n lËp 3.3.1 Xác định khả gây dung huyết 13 Bảng 3.11: Kết xác định khả gây dung huyết chủng E coli phân lập Khả dung huyÕt Sè Dung huyÕt kiÓu β Dung huyÕt kiÓu α Không dung huyết Số Địa điểm chủng Số Số Số TT ph©n lËp E coli chđng Tû lƯ (%) chđng Tû lƯ (%) chđng Tû lƯ (%) (+) (+) (+) Quy Nh¬n 21 19,05 38,10 42,86 Tuy Ph−íc 17 29,41 35,29 35,29 An Nh¬n 20 30,00 35,00 35,00 Phï C¸t 15 26,67 46,67 26,67 Phï Mü 14 14,29 21,43 64,29 Hoài Nhơn 11 27,27 36,36 36,36 HoàI Ân 12 33,33 41,67 25,00 Tây Sơn 18 16,67 33,33 50,00 Tỉng hỵp 128 31 24,59± 6,97 46 35,98± 7,28 51 39,43 ± 12,87 Qua b¶ng 3.11 cho thÊy, sè 128 chủng đợc kiểm tra khả dung huyết, có 31 chđng (24,59±6,97%) dung hut kiĨu β, 46 chđng (35,98±7,28%) dung huyết kiểu 51 chủng (39,4312,87%) không dung huyết Tổng hợp hai mức dung huyết 77 chđng, chiÕm tû lƯ 60,57% sè chđng kiĨm tra Nh− vËy, tû lƯ dung hut cđa vi khn E coli gây bệnh phù đầu Bình Định cao chiếm tới 60,57% kiểu 35,98% Điều chứng tỏ độc lực vi khuẩn E.coli gây bệnh ảnh hởng đến tỷ lệ chết cao lợn mắc bệnh Bình Định 3.3.5 Xác định tổ hợp kháng nguyên bám dính F4 (K88) F18 số chủng E coli phân lập 14 Bảng 3.15: Kết xác định tổ hợp bám dính F4 (K88) F18 số chủng E coli phân lập Kết xác định kháng nguyên bám dính TT Địa ®iĨm ph©n lËp Sè chđng thư F4 (K88) F18 F4+ F18 Sè chđng (+) Tû lƯ (%) Sè chđng (+) Tû lƯ (%) Sè chđng (+) Tû lƯ (%) Quy Nh¬n 83,33 83,33 33,33 Tuy Ph−íc 80,00 80,00 40,00 An Nh¬n 75,00 50,00 25,00 Phï C¸t 75,00 75,00 25,00 Phï Mü 66,67 66,67 33,33 Hoài Nhơn 3 100,00 33,33 33,33 Hoài Ân 2 100,00 100,00 50,00 Tây Sơn 87,50 75,00 25,00 Tổng hỵp 35 29 82,86± 11,96 25 70,41± 20,64 11 33,12± 8,70 Qua bảng 3.15 cho thấy, tỷ lệ kháng nguyên F4 (82,8611,96%), F18 (70,4120,64%) F4+ F18 (33,128,70%) Kết xác định F4 PCR (82,86%) hoàn toàn phù hợp với kết xác định F4 phản ứng ngng kết Nguyễn Khả Ngự (2000), đà xác định kháng nguyên bám dính có 19 chủng (90,48%) sản sinh mang kháng nguyên F4 (K88) mức độ ngng kết khác nhau, có chủng (9,52%) cho kết âm tính Không thấy tác giả đề cập tới kháng nguyên bám dính F18 Nguyễn Ngọc Hải cs (2001), xác định kháng nguyên bám dính F18, chiếm tỷ lệ 45,16% Kết xác định kháng nguyên bám dính F4 thấp so kết nghiên cứu Nguyễn Khả Ngự Sự sai khác yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli nằm ADN cđa plasmid di trun chđ u b»ng tiÕp hỵp, nên lu hành chúng phụ thuộc vào yếu tố nh trình bày trên, dẫn đến kết khác tiến hành nghiên cứu địa phơng khác 15 Các nghiên cứu gần nớc cho thấy, với chủng vi khuẩn E coli gây bệnh phù đầu lợn, thờng mang yếu tố bám dính F18 so với chủng mang yếu tố bám dính F4 Wittig cs (1995) cho rằng, F18 kháng nguyên bám dính chủng phân lập đợc từ lợn sau cai sữa bị bệnh phù đầu Salajka cs (1992), đà tìm thấy F18 Tiệp Khắc Fairbrother cs (1986), nghiên cứu Canada, 11% chủng E coli gây bệnh có F18, 9% có F4 3.3.6 Xác ®Þnh ®éc lùc cđa 10 chđng vi khn E coli chuột bạch Bảng 3.16: Xác định độc lực 10 chủng vi khuẩn E coli chuột bạch TT Ký hiƯu chđng Sè cht tiªm LiỊu tiªm (1 con) Sè chuét chÕt Thêi gian Tû lÖ chÕt chÕt (giê) (%) B§ 97 0,2ml 17-24 100 B§ 27 0,2ml 17 100 B§ 24 0,2ml 24 50 B§ 10 0,2ml 17-18 100 B§ 48 0,2ml 17-18 50 B§ 28 0,2ml 17-18 50 B§ 55 0,2ml 17-18 100 B§ 12 0,2ml 24 50 B§ 40 0,2ml 21 100 10 B§ 72 0,2ml 21 50 KÕt qu¶ cho thÊy, cã chđng giÕt chÕt 2/2 chuột vòng 1724giờ (50,00%), chủng giÕt chÕt 1/2 cht vßng 17-24h (50,00%) BƯnh tÝch mổ khám chuột bị chết cho thấy: Bụng chớng to, đờng tiêu hóa chớng nặng có mùi chua thối, phổi viêm sng xuất huyết bề mặt, gan s−ng cøng tơ hut, rt xt hut TÊt c¶ cht chết mổ khám kiểm tra bệnh tích phân lập đợc vi khuẩn E coli từ máu tim So sánh kết nghiên cứu chúng tôi, có thấp so với kết Nguyễn Khả Ngự (2000)[16], thử độc lực E coli phân lập từ lợn phù đầu gây chết 100% số chuột gây bệnh vòng 24-96h Từ kết trên, chúng chọn chủng vi khuẩn có độc lực mạnh nhất, gây chết 100% số chuột thí nghiệm thêi gian tõ (17-24h) ®Ĩ chÕ vacxin 16 3.4 Nghiên cứu chế tạo vacxin phòng bệnh phù đầu lợn 3.4.1 Chọn chủng chế tạo vacxin Bảng 3.18: Đặc tính chủng vi khuẩn E coli phân lập chọn sản xuất vacxin Các yếu tố gây bệnh Số Ký hiƯu Ngn TT chđng gèc KN O Dung hut §éc tố Bám dính Kháng kháng sinh Độc lực Giết Giết chuột lợn (giờ) (giờ) BĐ 97 Phân lập 141 ++ LT+ST Vero F4+ F18 + 17-24 BĐ27 Phân lập 139 +++ LT+ST Vero F4+ F18 + 17 BĐ 10 Phân lập 139 +++ LT+ST Vero F4+ F18 + 17-18 BĐ 55 Phân lập 138 +++ LT+ST vµ Vero F4+ F18 + 17-18 BĐ 40 Phân lập 138 ++ LT+ST Vero F4+ F18 + 21 42-58 KÕt qu¶ cho thÊy, chđng sư dơng ®Ĩ chÕ vacxin thc serotyp chiÕm tû lệ cao chủng phân lập từ lợn bị bệnh phù đầu Bình Định chủng sản sinh độc tố LT+ST, Vero yếu tố bám dính F4+F18, có khả dung huyết mức độ từ 2+ đến 3+ có khả kháng kháng sinh ë møc ®é 1+, cã ®éc lùc giÕt chuét chÕt 100% thêi gian 17-24 giê, giÕt lỵn 100% từ 42-58 Các chủng E coli đảm bảo điều kiện để sản xuất vacxin vô hoạt phòng bệnh phù đầu vi khuẩn E coli gây 3.4.2 Nuôi cấy canh trùng để sản xuất vacxin Qua kết bảng 3.19 cho thấy, sau nuôi cấy lên men sục khí từ 8-10 giờ, độ đậm đặc vi khuẩn 1ml canh trùng ®¹t tõ 1,8 x1010 ®Õn 2,2 x1010 vi khuÈn/ml canh trùng (18 đến 22 tỷ vi khuẩn ml canh trùng) Nh vậy, tất 10 lô canh trùng nuôi cấy đạt tiêu chuẩn để chế vacxin so sánh với yêu cầu số lợng vi khuẩn cã 1ml canh trïng 17 B¶ng 3.19: KÕt kiểm tra lô canh trùng chế vacxin Độ đậm đặc vi Lô khuẩn (VK/ml canh vacxin trùng) 1,8x 1010 2,0 x 1010 1,9 x 1010 1,8 x 1010 2,1 x 1010 2,1 x 1010 1,8 x 1010 1,8 x 1010 2,1 x 1010 10 2,2 x 1010 KiÓm tra khiết Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Kiểm tra vô trùng (Sau xử lý formol) Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đánh giá chung Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Do sử dụng phơng pháp lên men sục khí nên số lợng vi khuẩn 1ml canh trùng cao so với Nguyễn Khả Ngự (2000)[16], kiểm tra lô canh trùng để chế vacxin phù đầu cho lợn Đồng sông Cửu Long, có độ đậm đặc vi khuẩn lô từ 8,0 x108 đến 9,5 x108 vi khuẩn/ml canh trùng Các lô canh khuẩn riêng chủng, sau kiểm tra đạt tiêu chuẩn đợc trén chung víi tû lƯ ngang nhau, bỉ sung keo phèn theo tỷ lệ 1/5 lắc đều, đóng chai lấy mẫu để kiểm tra an toàn hiệu lực vacxin động vật thí nghiệm lợn 3.4.3 Kiểm tra độ an toàn hiệu lực vacxin 3.4.3.1 Kiểm tra mức độ an toàn hiệu lực lô vacxin động vật thí nghiệm: Bảng 3.20: Kết kiểm tra an toàn hiệu lực vacxin chuột bạch Thử an ton Thử hiệu lực Lô Lô Liều Số Số tiêm Số sống LiỊu tiªm vacxin cht tiªm VX tiªm (con) (con) VX (ml) (ml) (con) I II TN §C TN §C 0,5 0,5 10 10 10 10 0,2 0,2 10 10 LiỊu CC§ (con) 100LD50 100LD50 Số sống/ thử thách Tỷ lệ bảo hộ (%) 9/10 0/10 9/10 0/10 90,00 0,00 90,00 0,00 18 Qua bảng cho thấy, lô vacxin sản xuất đà đợc thử nghiệm độ an toàn chuột thí nghiệm, 10 chuột sống (100%) khỏe mạnh, phản ứng sau tiêm Kết thử hiệu lực, có chuột sống trên/lô thí nghiệm chiếm tỷ lệ 90% số chuột đợc bảo hộ lô chuột đối chứng chết 100% thời gian 32- 42 phân lập đợc vi khn E coli tõ m¸u tim cđa cht chÕt 3.4.3.2 Kiểm tra an toàn vacxin lợn Qua theo dõi lợn đợc thử an toàn vacxin cho thấy, lợn bình thờng, khoẻ mạnh, không biểu khác sau tiêm vacxin Còn lô thí nghiệm tiêm gấp liều miễn dịch (3ml/con), có bị run lứa tuổi tuần, hô hấp tăng, lợn mệt Sau giờ, biểu mệt mỏi lợn giảm dần trở lại bình thờng sau Điều đợc giải thích lợn lứa tuổi tuần khả chống đỡ thể yếu lứa tuổi khác, nên tiêm vacxin với liều gấp liều miễn dịch đà biểu triệu chứng nh Bảng 3.21: Kết kiểm tra an toàn vacxin lợn Đợt thử Liều tiêm vacxin Lứa tuổi Số lợn tiêm (Tuần) vacxin Đờng tiêm vacxin Địa điểm thí Phản øng sau tiªm nghiƯm vacxin 2ml/con I II 6 Dới da Bình Định 3ml/con 6 Dới da Bình Định Tổng hợp Bình thờng Bình thờng Bình thờng run, sau bình thờng Bình thờng Bình thờng 36 Kết phù hợp với Nguyễn Khả Ngự (2000), kiểm tra an toàn vacxin lợn số tỉnh Đồng Sông Cửu Long với lứa tuổi lợn nh chúng tôi, lợn có bị run nhng sau trở lại bình thờng Từ kết nhận thấy, vacxin có độ an toàn cao đảm bảo để triển khai sản xuất phù hợp với điều kiện chăn nuôi Bình Định 19 3.4.3.3 Kiểm tra hiệu lực vacxin lợn Bảng 3.22: Kết xác định khả bảo hộ vacxin E coli gây bệnh phù đầu lợn Tiêm vacxin Số lợn Số thí Liều tiêm Đờng Lô nghiệm (4,5tỷ/ml) tiêm (con) §C 5 5 1 D−íi da D−íi da D−íi da LiỊu tiªm 2ml 2ml 3ml 2ml Thử thách công cờng độc Kết Số vi Đờng Số lợn Tỷ lệ khuẩn/ lợn tiêm sống con) (%) 2x2,0x1010 Bắp 2x2,0x1010 Phúc mạc 3x2,0x1010 Bắp 2x2,0x1010 Phóc m¹c 5/5 5/5 5/5 0/5 100 100 100 Kết bảng 3.22 cho thấy, lợn lô thí nghiệm thử khả bảo hộ sống (100%) lợn lô đối chứng chết (100%) Từ kết nhận thấy rằng, vacxin chế tạo từ vi khuẩn E coli phân lập gây bệnh phù đầu có mức độ bảo hộ cao mức cho phép, đảm bảo tiêm phòng phục vụ sản xuất 3.5 Đánh giá hiệu thực nghiệm vacxin phòng bệnh phù đầu lợn Bình Định 3.5.3 Kết theo dõi thực nghiệm vacxin hộ chăn nuôi Bảng 3.26: Kết tiêm phòng vacxin hộ chăn nuôi Năm Chỉ tiêu Lợn nái (con) Lợn 21 ngày tuổi Lợn bị bệnh (con) Lợn chết (con) Tỷ lệ lợn bƯnh/tỉng sè (%) Tû lƯ chÕt/bƯnh (%) Tû lƯ lỵn chÕt/tỉng sè (%) 2004 2005 Tỉng céng 2371 35.678 2.970 1.090 8,32 36,70 3,05 4.407 68.746 4.791 1.864 6,97 38,90 2,71 6.778 104.424 7.761 2.954 7,42 38,06 2,82 Kết cho thấy, tiêm phòng năm (2004-2005), tỷ lệ lợn bị bệnh/tổng số 7,42%; tỷ lệ lợn chết/ tổng số chiếm 2,82% So sánh kết triển khai tiêm phòng trại lợn giống cấp I, trại lợn giống cấp II hộ chăn nuôi tỉnh tiêm phòng vacxin năm (2004-2005), chóng t«i cã nhËn xÐt: 20 - Tû lƯ lợn bị bệnh/tổng số lợn theo dõi trại giống cấp I thấp (0,83%), trại lợn giống cấp II (1,68%), cao hộ chăn nuôi (7,42%) - Tỷ lệ lợn bị chết/lợn bệnh thấp trại lợn giống cấp II 27,27%, hộ chăn nuôi (38,06%) cao trại lợn giống cấp I (100%), - Tỷ lƯ lỵn chÕt/tỉng sè lỵn theo dâi thÊp trại lợn giống cấp II (0,45%), trại lợn giống cấp I (0,83%) cao hộ chăn nuôi (2,82%) Qua kết tiêm vacxin nội vacxin ngoại trang trại cấp I, II hộ chăn nuôi, nhận thấy hiệu phòng bệnh phù đầu vacxin nội tốt phù hợp với điều kiện chăn nuôi Bình Định 3.6 Xác định hiệu giá kháng thể hình thnh lợn sau tiêm phòng vacxin nội v vacxin ngoại nhập 3.6.1 Xác định hiệu giá kháng thể Bảng 3.27: Kết xác định kháng thể hình thành sau tiêm phòng vacxin TT Loại Địa ®iĨm lÊy vacxin mÉu Ngo¹i Tr¹i cÊp I Sè mÉu kháng thể kiểm tra Lợn (Tiêm Nái phòng) Có K Số mẫu huyết (+) Lợn (Tiêm Nái phßng) Cã K 20 22 22 20 19 Tû lệ huyết (%) Nái Lợn (Tiêm phòng) Có K 100 86,36 4,54 Néi Tr¹i cÊp II 20 22 22 20 18 100 81,18 4,54 Néi Hộ chăn nuôi 20 22 22 16 16 80 72,73 4,54 + Ghi chú: K Không có tiêm phòng Kết cho thấy, tỷ lệ mẫu dơng tính trại lợn giống cấp I 100% (lợn nái) 86,36% (lợn con), trại lợn giống cấp II 100% (lợn nái) 81,18% (lợn con) hộ chăn nuôi 80% (lợn nái) 72,73% (lợn con) So sánh kháng thể hình thành sau tiêm phòng lợn nái lợn trại lợn giống cấp I cao nhất, trại lợn giống cấp II thấp hộ chăn nuôi Tuy nhiên, mức độ kháng thể hình thành sở mức cho phép 70%, theo kết hoàn toàn đáp ứng đợc yêu cầu vacxin phòng bệnh cho gia súc 21 3.7 Xác định khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn E coli phân lập v Thử nghiệm số phác đồ điều trị bệnh E coli phù đầu Bình Định 3.7.2 Thử nghiệm số phác đồ điều trị bệnh phù đầu Bình Định Kết cho thấy, lợn bị bệnh đà có triệu chứng lâm sàng, kháng sinh điều trị có tỷ lệ khỏi bệnh cao neomycin (10,00%) polymicin (8,33%), colistin (2,94%), ciprofloxacin(2,63%), norfloxacin (0,00%) Tỷ lệ khỏi bệnh trung bình 4,78% lợn cha có triệu chứng lâm sàng sng phù đầu nhng có biểu nhiễm bệnh sống chung chuồng với lợn có triệu chứng sng phù đầu, kháng sinh cã tû lƯ khái bƯnh cao nhÊt lµ neomycine (73,33%), polymicin (62,50%), colistin (35,71%), ciprofloxacin (34,29%), vµ thÊp nhÊt lµ norfloxacin (12,50%) Tû lƯ khái bƯnh bình quân 43,67% Bảng 3.32 Kết thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh phù đầu Bình Định Chỉ tiêu Số TT Các giải đoạn bệnh Lợn đà có triệu chứng lâm sàng sng phù đầu, sng mắt, thần kinh Tổng hợp Lợn cha có triệu chứng bệnh phù đầu, nhng sống chung chuồng với lợn bị bệnh phù đầu Tổng hợp Số hộ (hộ) Số lợn theo dõi điều trị (con) Thuốc sử dụng 5 4 40 36 34 38 37 Neomycin Polymicin Colistin Ciprofloxacin Norfloxacin 22 185 4 5 30 32 42 35 32 22 171 KÕt điều trị Khỏi bệnh Tỷ lệ (%) (con) 10 8,33 2,94 2,63 Neomycin Polymycin Colistin Ciprofloxacin Norfloxacin 1 4,78±4,20 22 20 15 12 73,30 62,50 35,71 34,29 12,50 73 43,67±24,27 Qua kÕt trên, có nhận xét rằng, kháng sinh điều trị có hiệu tơng đối cao neomycin (lợn đà có triệu chứng lâm sàng 10% cha có triệu chứng lâm sàng 73,30%), polymicin (lợn đà có triệu chứng lâm sàng 8,33% cha có triệu chứng lâm sàng 62,50%), Từ kết theo dõi liệu trình sử dụng thuốc điều trị lợn bị bệnh phù đầu Bình Định, có kết luận: 22 - Đối với lợn đà có triệu chứng lâm sàng sng phù đầu không nên sử dụng thuốc kháng sinh để điều trị, phải tách lợn bệnh khỏi đàn hủy diệt để tránh nguồn lây lan Tiêu độc sát trùng chuồng trại môi trờng xung quanh nhằm tiêu diệt mầm bệnh tránh lây lan qua lợn khác lứa lứa khác - Đối với lợn bệnh lợn chung đàn với lợn bệnh nhng cha có triệu chứng sng phù đầu nên điều trị theo phác đồ sau: + Neomycine polymicin + Acid-pak-4-way + Melperone + Vitamin K, Vitamin C + Sulfat magnesium + Oxit Zn LiỊu l−ỵng sư dơng thc theo h−íng dÉn nhà sản xuất ghi nhÃn Giảm phần thức ăn có hàm lợng đạm cao tăng lợng thức ăn thô, chăm sóc vệ sinh chuồng trại Tiêm phòng vacxin E coli phù đầu (dùng vacxin phân lập vi khuẩn địa phơng), tiêm phòng cho vùng, ô chuồng có dịch bệnh phù đầu vùng xung quanh 3.8 Xây dựng quy trình tiêm phòng lợn vacxin E.coli gây bệnh phù đầu Bình Định - Tiêm phòng cho lợn + Trại lợn giống cấp I (cai sữa cho lợn lúc 21 ngày tuổi): tiêm phòng cho lợn lúc ngày tuổi tiêm lặp lại lúc 14 ngày tuổi + Trại lợn giống cấp II hộ chăn nuôi (cai sữa lúc 30-35 ngày tuổi): tiêm phòng lúc 21 ngày tuổi tiêm lập lại lúc 28 ngày tuổi để kích thích khả tạo kháng thể Tiêm phòng lứa tuổi đủ thời gian hình thành kháng thể để chống lại bệnh phù đầu giai đoạn lợn sau cai sữa từ 1- tuần tuổi Không tiêm phòng cho lợn nái vào giai đoạn trớc sinh tuần Do khả truyền kháng thể lợn mẹ qua sữa đầu cho lợn hạn chế ý nghĩa phòng bệnh 23 3.9 áp dụng kết nghiên cứu để phòng trị bệnh phù đầu lợn Bình định - Phổ cập quy trình tiêm phòng vacxin, phổ cập quy tình kỹ thuật phòng trị bệnh cho mạng lới thú y sở toàn tØnh - HiƯu qu¶ kinh tÕ: Cã thĨ −íc tÝnh tổng cộng áp dụng kết luận án năm đà giảm chi phí cho ngời chăn nuôi khoảng 28,2 tỷ đồng - Đà đợc hội đồng khoa học tỉnh Bình Định đánh giá đạt giải nhì hội thi sáng tạo kỷ thuật tỉnh năm 2002-2003 Tổng liên đoàn lao động Việt Nam cấp lao động sáng tạo năm 2003 Kết luận v đề nghị Kết luận Từ kết nghiên cứu thu đợc, rút số kết luận sau: 1.1 Bệnh phù đầu lợn vi khuẩn E coli gây tất địa phơng tỉnh Bình Định Năm 2000- 2001, tỷ lệ lợn mắc bệnh 64,66%, tỷ lệ chết 71,63%; 2004- 2005 đà giảm xuống 14,64% 48,73% Bệnh xảy chủ yếu lợn từ 21- 50 ngày tuổi, có tỷ lệ mắc bệnh 57,55% 60,31%, tập trung vào tháng (75,73% 11,76%), tháng (83,43% 11,87%), tháng (11,89%), tháng (12,42%) tháng 10 (72,22%) 1.2 Tû lƯ ph©n lËp vi khn E coli bình quân cao (73,83%) Tập trung chủ yếu dịch ruột non (79,69%), chất chứa ruột non (77,34%), hạch ruột (71,88%), gan lách (66,41%) 1.3 Vi khuẩn E coli gây bệnh phù đầu lợn Bình Định có serotyp khác nhau, cao O149 (22,22%), tiÕp theo lµ O139 (19,44%), O141 (16,67%), O138 (13,87%), O147 (11,11%) ; thÊp nhÊt lµ O9 (2,78%), O8 (5,56%) vµ O157 (8,33%) 1.4 Các chủng E coli phân lập đợc từ lợn bị bệnh phù đầu Bình Định mang yếu tố gây bệnh nh: - Dung huyết chiếm tỷ lệ 60,57% - Sản sinh độc tố chịu nhiệt (ST) 59,38%, không chịu nhiệt (LT) 47,92%, hai độc tố chịu nhiệt không chịu nhiệt (ST+LT) 43,75% - Độc tố Vero: 100% 24 - Kháng nguyên bám dÝnh F4 (82,86%), F18 (70,41%) vµ F4+F18 lµ 33,12% - Các chủng E coli gây bệnh phù đầu lợn Bình Định kháng mạnh với kháng sinh: Penicillin, ampicillin từ 83,02- 86,76% MÉn c¶m cao víi neomycin (88,68%), polymicin B (86,79%) 1.5 Các chủng E coli phân lập có độc lùc giÕt chuét b¹ch tõ 50- 100%, thêi gian 17- 24 gây bệnh thực nghiệm lợn, sau quan sát mổ khám có triệu chứng, bệnh tích giống lợn mắc bệnh tự nhiên 1.6 Năm chủng vi khuẩn E coli đợc chọn để sản xuất vacxin có ký hiệu BĐ 97, BĐ27, BĐ10, BĐ55, BĐ40 1.7 Vacxin tạo đáp ứng miễn dịch từ 92,36%- 98,28%, víi hiƯu gi¸ kh¸ng thĨ tõ 1/40- 1/320 gần tơng đơng với vacxin Porcine Pili SieldTM Tiêm phòng đại trà, tỷ lệ lợn mắc bệnh 7,64% tỷ lệ chết 1,43% 1.8 Kháng sinh sử dụng điều trị bệnh phù đầu lợn tơng đối có hiệu neomycin polymicin, lợn đà có triệu chứng lâm sàng (10%) (8,33%) lợn cha có triệu chứng lâm sàng (73,30%) (62,50%) 1.9 Lịch tiêm phòng vacxin : - Không tiêm cho lợn nái kháng thể truyền từ lợn nái sang lợn sơ sinh thấp, khả miễn dịch bị động cho lợn - Tiêm cho lợn ngày tuổi tiêm lặp lại lúc 14 ngày tuổi (đối với lợn cai sữa 21 ngày tuổi) lúc 21 ngày tuổi tiêm lặp lại 28 ngày tuổi (đối với lợn cai sữa 30- 35 ngày tuổi) Đề nghị Tiếp tục áp dụng mô hình phòng bệnh phù đầu lợn tỉnh Bình Định, tiếp tục phân lập xác định chủng E.coli gây bệnh phù đầu địa phơng, tuyển bổ xung chủng đại diện, hoàn thiện nâng cao hiƯu lùc cđa vacxin ... hợp lý bệnh phù đầu lợn vi khuẩn E coli gây tỉnh Bình Định 2 Những đóng góp luận án - Xác định bệnh phù đầu lợn Bình Định chủng E coli O149, O139, O141, O138, O147, O9, O8 O157 gây - Xác định. .. Chi cơc Thó y Bình Định, năm 1999-2000, bệnh phù đầu lợn gây thiệt hại tới 10% tổng số lợn sau cai sữa Bệnh phù đầu bệnh vi khuẩn E coli gây ra, chủ yếu giai đoạn sau cai sữa Lợn mắc bệnh đà xuất... chung, lợn bị suy sụp chết trớc tiêu chảy 3.1.4.2 Các bệnh tích đặc trng bệnh: Mổ khám bệnh tích 128 lợn bị bệnh chết bệnh phù đầu Bình Định, kết đợc trình bày bảng 3.5 Bệnh tích thể rõ lợn mắc bệnh