Nghiên cứu thành phần hóa học của cây solanum surattense burn f họ cà ( solanaceae )

BÔ Y TÉ TRl/Ô NG DAI HOC DlTOC HÀ NÔI LÊ T H IK IM VÂN NGHIÊN CÜU THÀNH PHAN HOA HOC CÜA CÂY SOLANUM SURATTENSE BURN.F., HO CÀ cSOLANACEAE ) ( KHO LUÂN TOT NGHIÊP DU'OC SI KHO 1998-2003) - Nguôfi hirorng dân: TSK H . T rà n Vàn Thanh TS. Nguyên Bich Thu - Nai thuc hiên: Bô mon Dirofc Lieu Viên Diroc Lieu - Thôd gian thuc hiên: 03 - 05 HÀ N Ô I, 05- 2003 j\i z ê i M f y /// æùt fititj fd /t)ttt/ fcttf/t ftwttt/ tut /stéf rftt tri// Jttf' t/rît Ç/rtttt (TJàsi ^7/ttttt/t tut 0 g . ffît /t tt /é t t (/J /e // 0 /ttt ^7/tttt/ sftt ftttt fttt/t /ttttJttt/ t/tttt tut t/ttt/j ttrJ t'ttt /ttuttt f/tàtt/t fc/ttut /tttttt fri? ttij/ttép. t^ttt vt/tt /tit/ ft/ /f)ttt/ edttt tftt tTêtt eaœ ÇT/ttît/ @ t>tut @tttt /m eua 0$âtiitut OOtfû'f'^£têtt, r'ttt1 @ sttt ââ etin SK/ttut ^ 7ôrJttp/ttttt ft'f'/t /têtt f'/ttttttt fZ/iêsi fflu&e *& /êu? tut f'ttt* /tttt, t/ttt t/ttt/t tTtt ftttt /itt/t t/tttp tTs/f fttrJ ctzettteu /u’êtt /S/ t'/tû t'ttt /t'tutt/ f/tà’t t/ttttt //tttt? /ttitt /e/ttut /tttttt. 0 , • cr 7 ôà QUi, 2 8 -0 5 - 2 0 0 3 Siuh tuêu Jlè Ç 7 hi 3 Citn ^Oâtt MUC LUC Trang DAT VAN D E ..................................................................................................1 PHÀNI- T Ô N G Q U A N ................................................................................. 2 1.1- TÀI NGUYÊN HO C À ............................................................................2 1.1.1- Dâc diëm thuc vât và phân bo................................................................. 2 1.1.2-Tài nguyên ho Cà...................................................................................... 3 1.2- CHI SO LAN U M ................................................................................. 3 1.2.1- Dâc diëm hinh thâi thuc vât và phân bd cûa chi Solanum.....................3 1.2.2-Thành phân hoâ hoc cüa câc cây thuôc chi Solanum.............................4 1.2.3-Tâc 1.3- dung sinh hoc và ûng dung trong y hoc...................................... 10 CÂY SOLANUM SURATTENSE BURN.F. HO SOLANACEAE..A 1 1.3.1-Dâc diëm thuc vât và phân bo................................................................. 11 1.3.2-Thành phân hoâ hoc................................................................................ 12 1.3.3-Üng dung trong y hoc............................................................................12 PHÀN II-T H l/C N G H IÊ M VÀ K Ê T Q U  ............................................13 II. 1- NGUYÊN LIEU VÀ PHUONG PHÂP NGHIÊN CÜU...................13 II. 1.1- Nguyên lieu ........................................................................................... 13 II. 1.2- Phuong phâp nghiên ctiu.....................................................................13 II.2-KÊT QU THITC NGHIÊM VÀ NHÂN X É T .................................. 14 11.2.1-Mô tà hînh thâi thuc vât.........................................................................14 11.2.2-Nghiên cuu vê dinh tînh câc nhôm chât tu nhiên chm h......................15 11.2.3-Nghiên ciru vê alcaloid cüa cây Solanum surattense Burn.F. Solanaceae............................................. 22 PHÀN III-K ET LU N VÀ D E X U A T ....................................................34 T À I L IE U T H A M K H  O .........................................................................35 PH U LU C DAT VAN DE Câc thuoc steroid là nhôm thuoc quan trong duoc su- dung nhiêu trong y hoc hiên dai. Nhiêu sân pham steroid duoc sû dung dë diêu tri rât hiêu quâ môt so bênh nhu: viêm khôp, di ürng, choâng, gan, mât, tim....và côn duoc sü dung làm thuoc trânh thai, câc hocmon nôi tiêt tô. Do cô tâm quan trong nhu vây, nên câc steroid con duoc goi là chia khoâ cüa su sông( Steroid - key of life). Vi vây, viêc tîm nguon nguyên liêu dë sân xuât steroid là viêc làm rât dâng duoc quan tâm. Câc steroid cô thë duoc tong hop tùr mot so hçfp chat cô nguon goc tùr dông vât, nhu sterin, acid mât... hoâc tù mot sô chât cô nguon gôc tir thuc vât, nhu câc alcaloid steroid, vi du nhu: solasonin, solamargin , solasodin ... và câc saponin steroid nhu diosgenin, hecogenin... câc cây thuôc chi Solanum thuàng chtra câ alcaloid steroid và saponin steroid , nhung alcaloid steroid cô hàm luong cao. Vôi mue dfch tâng nguôn nguyên liêu sân xuât steroid, Viên Duoc Liêu dâ di thuc cây Solanum aviculare. Forst và Solanum laciniaîum. L...chung tôi tien hành nghiên crïu cây Solanum surattense Bum.F. (Cà dai quâ dô), ho Cà(Solanaceae) nhàm gôp phân nhô trong viêc mô rông nguôn nguyên liêu sân xuât steroid. Ngoài ra, cây S. surattense Burn. F. duoc nhân dân sûr dung theo kinh nghiêm dân gian chûa mot sô bênh: tri t6n thuong, viêm phé quân mân tmh, mun nhot dôc...rât hiêu quâ. Nhiêu bênh dâ duoc chûa khôi befi câc cây cô tu nhiên, nhung nhüng kinh nghiêm dô cân phâi duoc nghiên cuu tao co sô khoa hoc vüng châc và nâng cao giâ tri khoa hoc, tâng hiêu quâ phuc vu y hoc. Trong công trinh tôt nghiêp này, vî thôi gian ngân nên chüng tôi chi tiê'n hành nghiên cuu hïnh thâi thuc vât và thành phân hoâ hoc cüa cây S. surattense Burn. F. vôi hy vong dông gôp môt phân nhô vào thuc té khoa hoc. 1 TÔNG QUAN PHÂN I 1.1- TÀI NGUYÊN HO CÀ. 1.1.1- Dâc diêm thuc vât và phân ho cüa ho Cà (Solanaceae). *1* Dàc diêm thuc vât. [8] Ho Cà (Solanaceae ) thuôc bô Cà (Solanales), ldp Ngoc Lan (Magnoliopsida), ngành Ngoc Lan (Magnoliophyta). Ho Cà co dâc diëm thuc vât chung là: Cây thân cô, nùa bui, gô nhô, dôi khi là dây leo. La dcm nguyên hoâc co xè thùy, moc so le, co hiên tuçmg loi cuon. Cum hoa thudng là xim d kê la hoâc à dâu ngon. Hoa dêu luông tmh, co mot so it không dêu, mâu nâm. Nâm dài hoa ddi nhau hoâc dfnh mot it à phfa dudi. Câc cânh hoa dinh thành tràng, cânh hçfp dêu co hlnh bânh xe hoâc hînh ong. Co nâm nhi, dôi khi co 2-4 nhi nàm xen kë vdi cânh hoa. Chî nhi dinh vào ong tràng. Bao phân md bâng khe doc hoâc bàng ld d dînh. Dïa mât phât triën. Bâu gom hai noân dmh vào nhau. Nàm nghiêng so vdi mât phâng hoa. Bâu trên co 2-4 d vdi nhiêu noân trong mot ô. Giâ noân trung truc, thucmg ldn, dinh vào câc ô. Cô mot vdi nhuy, nüm nhuy chia dôi. Quà mong hav quâ nang, co nhiêu hat. Hat co nôi nhü nac. ❖ Phân bo Trên thê' gidi, ho Cà co khoâng 85 chi, khoâng 2300-2800 loài duoe phân bd chü yêu d vùng nhiêt ddi, cân nhiêt ddi và ôn ddi âm, nhu vùng Trung-Nam Mÿ, ^ / châu A và châu Uc... Ô Viêt Nam, ho Cà cd 15 chi vdi khoâng 50-60 loài. Duoc phân bd kbip câ nudc. Câc chi hay gsp là: Capsicum, Solanum, Cestrum, Datura, Lypersicum... 1.1.2- Tài nguyên ho Cà. Ho Cà là ho thuc vât ldn, phân bd rông râi. Câc cây thuôc ho Cà dâ gop phân dâng kë trong câc ngành nhu: công nghiêp, thuc phâm và y-duoc hoc... Câc cây công nghiêp nhir: Nicotiana tabacum.L. (cây thuoc lâ), Nicotiana rustica.L. (cây thuoc lào). Cây sir dung làm thuc phâm nhu: cà dâi dê {Solanum melongena. L .), cà phâo {Solanum undatum. Poir.), khoai tây {Solanum tuberosum. L.)... câc loài dt (Capsicum frutescens. L.), cà chua {Lycopersicum esculentum. Mill)... và mot so chi khâc. Mot so duoc su dung làm cânh nhu: cà vu {Solanum mammosum. L.), da huong {Cestrum noturnum. L.), ôt cânh {C. frutescens.L. var cerasifome Bail.) Trong y hoc, câc cây ho Cà duoc su dung nhiêu theo kinh nghiêm dân gian tù lâu nhu: Datura metel.L. (cà dôc duoc), cà gai leo {S. hainanense Hance)... mot sô dâ duoc nghiên cüu và dùng làm nguyên liêu dê chiê't môt sô chât nhu: hyoscynamin, scopolamine, solasodin ... làm thuoc hoâc nguyên liêu bân tông hçfp câc thuoc quÿ dùng trong y hoc và môt sô chât quan trong nhu: atropine, câc steroid... 1.2- CHI SOLANUM 1.2.1- Dde diém hinh thâi thuc vât và phân bô cüa chi Solanum [8], [6], [13], [22] ❖ Dâc diém hinh thâi thuc vât. Ngoài câc dâc diém chung cüa ho Cà, chi Solanum cô câc dâc diém riêng sau: Cây thân cô, bui, hiém khi là cây gô, dôi khi là dây leo. Lâ don (trit S. tuberosum.L), moc so le, mép lâ nguyên hoâc cô xè thuÿ. Cô hiên tuong loi cuô'n. Thuông cô long '■ i che cho. Trên gân lâ và thân thucmg cô gai (trùr S. tuberosum.h). Cum hoa xim chùm, moc à dâu ngon hoâc kê lâ. Dài cô tai cao, thuông cô nâm dài, cô long à mât ngoài, tràng hoa cô dang ong ngân xè tliành nâm hoâc mucfi cânh, chi nhi ngân dmh ô trên tràng. Bao phâ'n cô thé dmh thành ong bao quanh nhuy. Bao phân mô ô dînh hoâc gân dînh theo duông nut doc. Vôi nhuy ngân nhô, bâu trên thuông cô hai ô. Quâ mong, nhiêu hat, det. 3 ❖ P hânbo[ 1], [2] Chi Solanum là môt chi lôn cüa ho Cà. Trên thé giôi cô khoâng 1500 loài và dirçfc phân bô chü yéu ô câc nuôc cân nhiêt dôi, nhiêt dôi, ôn dôi âm nhu: vùng Trung-Nam Mÿ, châu Phi, châu A nhiêt dôi và châu Üc... Ô Viêt Nam chi Solanum cô khoâng 20-25 loài duçfc phân bô khâp irong câ nuôc nhu: Nghê An, Bâc Giang, Hoà Binh... 1.2.2- Thành phân hoâ hoc cüa câc cây thuôc chi Solanum Thành phân hoâ hoc chü yéu cüa chi Solanum là glycoalcaloid và saponin steroid. Vê câ'u tao cüa glycoalcaloid và saponin steroid dêu gôm hai phân là aglycon (genin) và phân duông. Chüng duac nô'i vôi nhau bôi câc liên kêt osid. Khung câu truc cüa phân aglycon cüa glycoalcaloid và saponin steroid dêu là khung steroid (27 cacbon) [20]; ❖ Glycoalcaloid [4], [13], [20] ; Nhôm chât này mang dây dü tmh chât cüa saponin nhu: cho câc phân üng tao bot, nhâ huyét, tao phü’c vôi cholesterol. Do câu tao phân tù cô chüa di tô nitro nên cüng mang dây du tînh chât eu a aicaioid nhu- cho phân üng tao tüa vôi câc thuôc thü cüa alcaloid ( Mayer, Bouchardat,Dragendorff ). Nhôm chât này diroc chia thành nhiêu nhôm nhô sau: - Nhôm spirosolan: phân aglycon mang nitro trong vông F và cô câc aglycon sau: 4 Tên châ't Công thuc câu tao Dô chày Nguôn goc (°Q -Solanum 200-202 Solasodin ’.ndicum câc Solanum khâc Solanum 202-206 Tomatidin SLulcamara Solanum Soladuicidin dulcamarn Solanum dulcamarn Tomatidenol - Nhôm solanidan: khung steroid, mach nhânh bien dôi dë vong E, F cô chung mot nitro và mot cacbon, co câc aglycon sau: 5 -Nhôm 3-aminofurostan: trong nhôm này thî goc hydroxyl (OH) ô vi tri so 3 cüa câc nhôm trên diroc thay bàng mot nhôm amino (NH2). Vong E và F cô me cô hoâc không cô nitrü. Gôm câc aglycon: 6 -Nhôm 26,28- epiminochoïestan: aJcaloid này cô vông E nôi vôi vông D bai môt cacbon, không cô vông F. Câc aglycon à bâng sau: 7 ❖ Saponin steroid [4], [13], [24'], [20]: câc saponin steroid cüng cô khung câu truc steroid gôm hai nhôm spirostan và furostan. - Nhom spirostan cô câc aglycon sau: 8 STT Tên châ't Công thtrc câ'u tao Dô chày Nguôn gôc (°Q Solanum aviculare 204-207 Diosgenin Solanum laciniatum. Solanum xanthocarpum Solanum Paniculogenin 214-216 paniculaîum Solanum Hydroxyl-23213-214 neochlorogenin paniculaîum Solanum 215.5-218.5 Isonuatigenin 9 sisymbriflolium STT Tên chât Dô chày Công thirc câu tao Nguôn gô'c (°C) \ 1 c h 2o Solanum 2 10-214 Nuatigenin sisymbriiflolium OH ❖ Câc thành phân hoâ hoc khâc: Ngoài glycoalcaloid và saponin steroid, câc cây cüa chi Solanum côn cô môt sô thành phân hoâ hoc khâc nhu: flavonoid, dàu béo, tanin, duông... 1.2.3- Tâc dung sinh hoc và üng dung trong y hoc ♦> Tâc dung sinh hoc [20]. Nhiêu cây cüa chi Solanum cô nhiêu tâc dung sinh hoc nhu mot sô' tâc dung sau: + Tâc dung chông viêm: do cô chü’a thành phân là glycoalcaloid và saponin steroid nên câc duoc liêu cüa mot sô' cây thuôc chi Solanum và cà câc thành phân hoâ hoc cüa chung cô tâc dung chô'ng viêm rât tôt nhu: cà gai leo ( S. hainanense Hance ), cà vu ( S. mammosum.L. ), solasodin, solamargin, solasonin ... + Tâc dung khâng khuân và khâng nâm: môt sô cây cô tâc dung khâng khuân tôt nhu: dich chiê't cüa cây lulu duc ( S. nigrum.L.), môt sô cây cô tâc dung khâng nâm nhu cà trâi vàng (S. xanthocarpum.L.). solamargin và solasodin cüng cô tâc dung khâng nâm tôt. 10 +Môt so tâc giâ dâ chûng minh solasodin glycozid ûc ché duoc su phât triën saccom 180 trên chuôt và cô hiêu quâ tôt trong diéu tri lam sàng câc tén thuông da ngutên phât do u âc tmh. + Môt sô câc tâc dung khâc nhu: ûc ché tién triên xo gan, ûc ché té bào gen gây ung thu cüa virus, chông oxy hoâ... ♦> Ûng dung trong y hoc [16], [17], [20]: - Dôi vôi y hoc thï hâu hêt câc cây thuôc chi Solanum dâ duoc su dung theo kinh nghiêm dân gian dë chûa môt sô bênh nhu: cà gai leo (S. hainanense Hance ), cà dai quâ dô (S. surattense Bum.F ) cô thë dùng chûa phong thâp và cà hôi( S. verbasciflorum) dùng chûa bênh trï. - Vôi y hoc hiên dai thï môt sô cây duoc nghiên cûu dë su dung là nguôn chiét Solasodin nhu: cà ûc ( S. laciniatum.L.). Ngoài ra Viên Duoc Liêu dâ nghiên cûu sân xuât thuôc Haina tù cà gai leo(S. hainanense Hance) dùng dë diêu tri bo tro viêm gan virus. 1.3- CÂY SOLANUM SURATTENSE BURN.F.HO SOLANACEAE . Cô tên Viêt Nam là cây cà dai quâ dô [7] 1.3.1- Bac diém thuc vât và phân bô[T\ ♦♦♦ Dâc diém thuc vât : Cây thâo cao tù 30-60 cm, toàn cây cô long và cô nhiêu gai. Lâ moc so le, phién lâ dài 5-12 cm cô chia 5-7 tfyuÿ. Cum hoa xim ngoài nâch lâ, mang 1-4 hoa màu tràng, hoa mâu nâm, vôi nâm nhi và bao phân màu vàng. Quâ mong khi chrn cô màu dô, duông kinh 2-2.5cm, cô nhiêu hat. ❖ Phân bô: +Trên thé giôi, cây cà dai quâ dô phân bô chü yêu ô câc vùng cô khi hâu nhiêt dôi, cân nhiêt dôi, ôn doi âm nhu: vùng Nam-Trung Mÿ, châu  nhiêt dôi, châu Ûc, châu Phi... + Ô Viêt Nam, chüng duoc phân bô rông râi nhu Bâc Giang,Thanh Hoâ, Nghê An... 1.3.2- Thành phàn hoâ hoc [7]: Quâ chüa solasonin, solamargin và solasurin... Solasodin Solasonin Solamargin I.3.3-Ung dung trong y hoc [7] Cây Cà dai quâ dô (S. Bum.F.ho Solanaceae ) dâ duoc su dung nhiêu trong y hoc dân gian voti bô phân dùng là rê và toàn cây. Vi thuoc co dâc diëm sau: + Tïnh vi: vi dàng, cay, trnh ôn, cô dôc + Tâc dung: hoat huyét, tân ü:, tiêu thüng chong dau và gây tê. + Công dung: sir dung tri phong thâp, tê thâp, don ngâ tân thuang, viêm phé quân man, dau lung., mun nhot dôc. dau da dàv... 12 THlTC NGHIÊM VÀ KÊT QU PHÀN II IL1- NGUYÊN LIÊU VÀ PHlTONG PHÀP NGHIÊN CÜtJ 11.1.1- Nguyên liêu Quà cây S. surattense Burn.F. Solanaceae (cà dai quâ dô) duoc thu hâi à Bâc Giang à câc giai doan khâc nhau: quâ xanh, quâ uong và quâ chfn. Câc mâu duoc liêu duoc xü lÿ nhu sau: + Tâch riêng vô và hat cüa câc mâu. +Dem sây khô ô nhiêt dô 50°C-60°C và nghiên bot. Vây ta cô câc mâu duoc liêu sau: vô quâ uong, vô quâ chîn, vô quâ xanh, hat quâ uong, hat quâ chîn và hat quâ xanh. 77.2.2- Phuùng phâp nghiên cüu ❖ Mô tâ dâc diëm hïnh thâi thuc vât theo phuong phâp cüa tài liêu:[15]. ❖ Nghiên cüu thành phân hoâ hoc: - Dinh tmh nhôm chât tu nhiên theo tài liêu: [4], [5], [10]. - Nghiên cüu alcaloid trong cây + Dinh tînh alcaloid bàng sâc kÿ lôp mông theo tài liêu: [4], [10]. + Dinh luong alcaloid toàn phân và aglycon theo tài liêu: [4], [10]. + Tâch phân lâp aglycon cüa glycoalcaloid theo tài liêu: [10]. + Do nhiêt dô nông chây cüa aglycon tinh khiê't trên mây KALLEN KAMP. + Xâc dinh aglycon phân lâp duoc bàng sâc kÿ lôp mông, pho IR bàng FT-IR NEXUTE 470, pho UV-VIS VARIAN 1-CARY, ph6 khôi-MS và: [10]. 13 II.2- KÊT QU THÜC NGHIÊM VÀ NHÂN XÉT. 11.2.1- Mo ta hinh thâi thitc vât Quan sât tai noi thu hâi à Bâc Giang, chüng tôi thay cây S. surattense Burn.F. Solanaceae (cà dai quâ dô) cô dâc diëm sau: Cây thân cô, cao tùr 30-70cm, ducmg krnh thân tùr 1,5-2 cm, cô nhiêu gai nhô. La moc so le cô xê thuÿ, phién la dài 7-10 cm, rông 3-5 cm. Gân la và cuong la cô nhiêu gai nhon. Mât trên la cô màu xanh bông, cum hoa xim à ngoài nâch la mang 1-4 hoa, thucmg mang 1 hoa. Cuông hoa và dài hoa cô nhiêu gai nhô. Hoa dêu luông trnh mâu nâm. Nâm cânh hoa màu trâng. Nhi cô chî nhi ngân, bao phân hïnh thuôn cô màu vàng. Hoa cô môt nhuy vôi cuông nhuy ngân, bàu trên. Quâ mong nhiêu hat. Khi xanh quâ cô nhûng vêt màu xanh dâm. Khi uong quâ chuyën dân màu sang vàng dén vàng cam. Khi chrn quâ cô màu dô. Hat nhiêu, mông, cô kich thuôc 1.52.5 mm. Quâ cô ducmg krnh tùr 1.5-2 cm. Ânh 1: Cây cà dai quâ dô 14 II.2.2- Nghiên cûu vê dinh tmh câc nhôm chât tu nhiên chinh. ♦> Dinh tmh alcaloid - Chuàn bi dung dich thü: cân khoâng 10g bôt quâ chîn, thâm âm bàng dung dich acid chlohydric 2% trong 15 phüt. Sau do cho vào bïnh non 200ml, chiét bàng phuong phâp ngâm lanh trong 24 già. Gan và loc dich qua giây loc. Dich loc dem kiêm hoâ bàng dung dich amoniac dàc dê'n pH=9-10 xuât hiên tüa. Ly tâm thu tüa, loc và rira tüa bâng nuôc cho dê'n trung tmh vôi giây quÿ. Hoà tan tüa trong 5ml dung dich acid chlohydric 2%. Thu duoc dich thü A. - Lây 3 ong nghiêm, cho vào môi ong nghiêm 1ml dich A: A/ + Ong 1: thêm vài giot thuoc thü Mayer thây cô xuât hiên tüa trang( phân ûng duong tmh) A/ + Ong 2: thêm vài giot thuôc thü Bouchardat thây cô xuât hiên tüa nâu (phân ûng duong tmh) A/ + Ong 3: thêm vài giot thuôc thü Dragendorff thây xuât hiên tüa màu vàng cam (phân ûng duong tînh) So bô kê't luân: trong vô quâ chm cô alcaloid - Làm tuong tu vôi câc mâu duoc liêu khâc: vô quâ xanh, hat quâ xanh, vô qüa uong, hat quâ uong và hat quâ chïn ta thây ràng câc phân ûng dêu duong tmh. Vây so bô két luân trong vô quâ và hat cüa cây cà dai quâ dô dêu chûa alcaloid ♦♦♦Dinh tînh saponin - Chuân bi dung dich thü: lây khoâng 5g bôt vô quâ chîn cho vào bïnh non 100ml. Thêm vào dô 50ml nuôc cât. Dun sôi trong 10 phût. Loc lâ'y dich loc dë tien hành phân ûng (dich B). - Tien hành câc phân ûng dinh tînh: + Phân ûng tao bot: lây 1ml dich B cho vào ong nghiêm, thêm 5ml nuôc cât. Lâc manh theo chiêu doc cüa ong nghiêm thây xuât hiên côt bot cao trong ô'ng nghiêm ben vûng trong 10 phüt (phân ûng duong tînh). 15 + Phân ûng phâ huyét trên lam kfnh: • Chuân bi dich mâu 0.2% dâ loai fibrin: trôn 1 thé tfch natri citrat 4% vôi 9 thé tfch mâu thô tuoi trong binh non cô nüt mài. Bâo quàn à 2°C-4°C ta duoc mâu thô loai fibrin. Lây 40ml dung dich natri chlorua 0.9% cho vào bînh dinh mrïc 100ml. Thêm chfnh xâc 2ml mâu dà loai fibrin, lâc nhe. Thêm dung dich natri chlorua 0.9% dén vùa dü 100ml, làc kÿ. • Tien hành phân ûng: lây 2ml dung dich B cho vào ông nghiêm cô thành cân, hoà tan cân trong 1ml dung dich natri chlorua 0.9% ( dich B’)- Nhô 1 giot dich mâu 0.2% lên phién kînh. Dây lâ kînh. Soi duôi kmh hiën vi vât kînh 10 dë quan sât hông câu à trang thâi bînh thuông. Nhô 1 giot dich B’ vào mép lâ kînh. Mép dôi diên dùng giây loc hüt nuôc duôi lâ kînh. Quan sât duôi krnh hiën vi ta thây hông càu bi vô dân (phân lîng duang tmh) + Phân ûng phân biêt saponin steroid và saponin triterpenoid : lây hai ông nghiêm giông nhau và dânh dâ'u phân biêt ông 1 và ông 2. Cho vào : Ong 1: 5ml dung dich natri hydroxyd 0.1N (pH=13) Ong 2: 5ml dung dich acid chlohydric 0.1N ( pH=l) Thêm vào môi ông 1ml dung dich B. Lâc manh hai ông theo chiêu doc ông nghiêm trong 1 phüt sao cho sô lân lâc cüa hai ông dêu nhu nhau. Dë yên sau 15 phüt ta thây côt bot à ông 1 cao han à ông 2. Sa bô kê't luân: trong vô quâ chrn cüa cây cà dai quâ dô cô saponin steroid. Làm nhu trên vôi câc mâu duoc liêu: vô quâ xanh, hat quâ xanh, vô qûa uong, hat quâ uong và hat quâ chîn ta thây ràng câc phân ting dêu duang tînh. Sa bô két luân: trong vô và hat cüa cây cà dai quâ dô cô chü’a saponin steroid ♦♦♦Dinh tînh flavonoid - Chuân bi dung dich thü: Lây 5g bôt vô quâ chm cho vào bînh non 100ml. Thêm vào dô 50ml côn 90°. Dun sôi câch thuÿ trong 5phüt. Loc lây dich dem tien hành phân üng dinh tmh (dich C). 16 - Tien hành phân üng: + Phân üng cyanidin: Cho vào ong nghiêm 1ml dich C, cho vào may hat magiê kim loai. Sau dô thêm vài giot dung dich acid chlohydric dàc.Thâ'y xuâ't hiên màu hông (phân üng duotng trnh). +Phân üng vôi sât (III) chlorua cho vào ong nghiêm 1ml dich C. Thêm vài giot dung dich sât (III) chlorua 5%. Thây xuât hiên tüa xanh den (phân üng duong tînh). +Phân üng vôi kiêm: Nhô môt giot dich C lên giày loc, hô khô. Dem ho vêt lên miêng lo amoniac dâc. Ta nhân thây màu vàng dâm lên rô rêt (phân üng duong tînh) So bô két luân: Trong vô quâ chîn cüa cây S. surattense Burn.F. cô chûa flavonoid. - Làm nhu trên vôi câc mâu duoc lieu khâc: vô quâ xanh, hat quâ xanh vô qüa uong, hat quâ uong và hat quâ chïn ta thây ràng câc phân uïig dêu duong tînh. So bô két luân: trong vô và hat cüa cây S. surattense Burn.F. cô chûa flavonoid. ♦♦♦ Dinh tînh coumarin: - Chuân bi dung dich thir: Lây khoâng 5g bot vô qüa chîn cho vào binh non 100ml. Thêm vào 50ml côn 90°. Dun soi câch thuÿ trong 10 phüt. Loc lâ'y dich loc dem làm phân üng (dich D). - Tien hành phân üng: +Phân üng mô dông vông lacton: Lây 2 ong nghiêm giô'ng nhau. Cho vào môi ô'ng 1ml dich D: A/ Ong 1: Thêm 5ml dung dich natri hydroxyd 10%. Dun soi câch thuÿ trong 5 phüt, de nguôi. Cho vào môi ong 4ml nuôc cât. Lâc dêu câ hai ong. Ta thây câ 2 ô'ng dêu trong nhu nhau (phân üng âm tînh). 17 + Phân ûng tao huÿnh quang: Nhô lgiot dich D lên giây loc, sây khô ô 50°C-60°C. Nhô lên vêt môt giot dung dich natri hydroxyd 5%, sây khô. Che nüa vêt bàng môt tâm bïa km. Quan sât duôi dèn tu ngoai, dë duôi dèn tü ngoai trong 5phüt. Bô tâm bîa che nüa vét, tiê'p tue chiê'u tü ngoai vào và so sânh màu sàc và dô sâng cüa hai nüa vét. Phân bi chiéu sâng và không duoc chiê'u sâng màu sàc nhu nhau (phân ûng âm tmh) + Vi thâng hoa: Cho bôt duoc liêu vào nâp kim loai, phîa trên cô dây bàng môt tâm kmh, trên tâm kmh cô dë bông tâm uôt. Ho nâp kmh nên trên ngon lüa dèn côn trong vài phüt. Lây tâm kmh, dë nguôi. Nhô vài giot dung dich kali iodid 10% vào chô cô hoi nuôc bôc lên. Dem soi duôi kmh hiën vi. Không thây cô nhûng tinh thë màu tîm hoâc màu nâu sâm (phân ûng âm tînh). So bô két luân: trong vô quâ chrn không cô coumarin - Làm nhu trên vôi câc mâu duoc liêu khâc: vô quâ xanh, hat quâ xanh vô qüa uong, hat quâ uong và hat quâ chîn ta thây ràng câc phân ûng dêu âm tmh. So bô két luân: Trong vô quâ và hat cây S. surattense Burn.F. không chûa coumarin. *1* Dinh tinh anthranoid - Phân ûng Borntraeger: + Chuân bi dung dich thü: Cân khoâng 5g bôt vô quâ chin, cho và bïnh non 100ml. Thêm vào 50ml dung dich acid sunfuriclO%. Dun sôi câch thuÿ trong 10 phüt. Loc dich qua giây loc. Cho dich vào binh gan, lâc vôi 5ml ether, trong 5phüt. Dë yên phân lôp. Gan lây lôp ether dë tiê'n hành phân ûng + Tiê'n hành phân ûng: Lây môt 1ml dich chiê't ether cho vào ô'ng nghiêm. Thêm vào 5ml dung dich natri hydroxyd 10%, lâc nhe. Quan sât không thây lôp nuôc cô màu dô xim (phân ûng âm tmh) - Vi thâng hoa: Cho bôt duoc liêu vào nâp kim loai, phfa trên cô dây bàng môt tâm kmh, trên tâm kmh cô dë bông tâm uôt. Ho nâp kmh nên trên ngon lüa dèn côn trong vài phüt. Lâ'y tâm kmh, dë nguôi. Dem soi duôi kmh hiën vi. Không thây cô nhûng tinh thë hinh kim màu vàng (phân ûng âm tînh) 18 \ So bô két luân: không cô anthranoid trong vô quâ chîn Làm nhu trên vôi câc duoc liêu khâc: vô quâ xanh, hat quâ xanh vô qüa uong, hat quâ uong và hat quâ chm ta thây ràng câc phân ûng dêu âm tînh. So bô két luân: Trong vô quâ và hat cây cà dai quâ dô không chüa anthranoid *** Dinh tînh glycozid tim: - Chuân bi dung dich thü: Lây khoâng 10g bot vô quâ chîn cho vào bînh non dung tfch 100ml. Thêm vào dô 100ml côn 30°, lâc dêu, dë qua dêm. Loc lây dich. Loai tap bàng dung dich chî acetat 10%. Loc loai tüa. Loai chi trong dich loc bàng dung dich natri sulfat bâo hoà cho dê'n khi không côn tûa tao thành, loc loai tüa. Dich loc thu duoc cho vào bînh gan. Thêm vào bînh gan cùng môt luong chloroform, lâc kÿ. Dë yên phân lôp, gan lây phân chloroform, loai nuôc bàng natrisulfat khan. Loc lây dich bôc hoi tôi khô. Cân thu duoc hoà tan trong 5ml côn 90° dë làm phân ûng (dich E). - Tién hành phân ûng: + Phân ûng Liberman-Burchart: Cho 1ml dich E vào ông nghiêm khô sach. Dun câch thuÿ dê'n khi côn cân. Hoà tan cân trong 1ml anhydrid acetic, thêm tù tù dung dich acid sulfuric dâc theo thành ông nghiêm. Thây xuâ't hiên vông màu tim hông à mât phân câch (phân ûng duong tînh). -i-Phân ûng Légal: Cho 1ml dung dich E vào ông nghiêm. Thêm 5 giot Natri prussiat 1%, lâc dêu. Thêm tiêp vài giot dung dich natri hydroxyd 10%. Không thây xuâ't hiên màu dô ( phân ûng âm tmh ). + Phân ûng Baljet: Lây 1ml dich E, cho vào ông nghiêm. Thêm 0.5 ml dung dich natri hydroxyd 10% và 9.5 ml dung dich acid picric bâo hoà trong nuôc. Không thây xuât hiên màu dô (phân ûng âm tînh). So bô két luân: không cô glycozid tim trong vô quâ chm - Làm nhu trên vôi câc duoc liêu khâc: vô quâ xanh, hat quâ xanh vô qüa uong, hat quâ uong và hat quâ chm ta thây ràng câc phân ûng dêu âm tînh. So bô kê't luân: trong vô quâ và hat cây S. surattense Burn.F. không chûa glycozid tim Phân ûng Liberman-Burchart duong tînh do trong cây cô chüa saponin steroid. 19 ♦> Dinh tmh tanin: - Chuân bi dich dinh tînh: Lây khoâng 5 g vô quâ chm cho vào bïnh non 100ml. Thêm vào 50ml nuôc cât. Dun soi trong 10 phut, gan loc lây dich làm dinh tmh (dich F). - Tien hành dinh tînh: + Phân üng vôi sât (III) chlorua: Cho vào ong nghiêm 1ml dich F. Thêm vào dô vài giot dung dich sât (III) chlorua. Thây xuât hiên tua xanh den (phân üng dirong tmh). + Phân üng vôi gelatin 2%. Cho vào ong nghiêm 1 ml dich F. Thêm vào 5-10 giot gelatin 2%. Không thây xuât hiên tüa trâng (phân üng âm tmh). So bô két luân: Không cô tanin trong vô quâ chîn S. surattense Burn.F. Cüng làm nhu trên vôi câc bot duoc lieu khâc vô quâ xanh, hat quâ xanh vô qüa uong, hat quâ uong và hat quâ chîn ta thây rang két quâ câc phân üng dêu tuong tu nhu vôi bôt vô quâ chm. So bô két luân không cô tanin trong vô quâ và hat cüa cây S. surattense Burn.F. Phân üng vôi sât (III) chlorua duong tmh do trong duoc liêu cô chüa flavonoid. ♦♦♦Dinh tînh diïdng khü tu do: - Chuân bi dich dinh tmh: Lây khoâng 5g bôt vô quâ chîn cho vào ong nghiêm. Thêm 10ml nuôc cât, dun soi trong 5 phüt. Loc lây dich dë làm phân üng. - Tiê'n hành phân üng vôi thuôc thü Fehling: Lây 2ml dich chiét cho vào ông nghiêm, thêm 0.5ml thuôc thü Fehling A, 0.5ml thuôc thü Fehling B. Dun soi câch thuÿ trong vài phüt. Thây xuât hiên két tüa màu dô gach (phân üng duong tmh). Cüng làm nhu trên vôi câc mâu duoc lieu khâc vô quâ xanh, hat quâ xanh vô qüa uong, hat quâ uong và hat quâ chîn. Ta nhân thây phân üng âm tînh. Vây trong vô quâ chm cüa cây S. surattense Burn.F. chüa duông khü tu do. Côn trong vô quâ xanh, hat quâ xanh, hat quâ uong, vô quâ uong và hat quâ chm không chüa duông khü tu do. 20 Bângl- Tôm tât két quâ dinh tînh câc nhôm chât tu nhiên chînh trong quâ và hat cây cà dai quâ dô. Dô dâm STT Nhôm chât Phân ürng Hat Vô Hat Vô Hat chm chm uong uong xanh xanh -TT Mayer +++ +++ +++ +++ +++ +++ Cô alcaloid -TT Bouchardat +++ +++ +++ +++ +++ +++ trong vô quâ -TT Dragendorff +++ +++ +++ +++ +++ +++ và hat -Tao bot +++ +++ +++ +++ +++ +++ -Phâ huyét +++ +++ +++ +++ +++ +++ \ 1 2 Alcaloid Saponin Sa bô két Vô -Phân biet saponin luân Cô saponin steroid trong vô quâ và steroid và saponin hat triterpenoid -Mô dông vông - - - - - Không cô lacton 3 Coumarin -Phân ung huÿnh - - - - - - trong quâ quang -Vi thâng hoa \ -Cyanidin 4 Flavonoid -FeCl3 -Vôi kiêm coumarin - - - - - - ++ ++ ++ ++ ++ ++ Cô flavonoid +++ +++ +++ +++ +++ +++ trong vô quâ ++ ++ ++ +++ +++ +++ và hat Không cô anthrag- -Bortraeger 5 Anthranoid -Vi thâng hoa - - - - - - lycozid trong quâ +++ +++ +++ +++ +++ +++ Không cô -Légal - - - - - - glycozid -Bajet - - - - - +++ +++ +++ +++ -Liberman-Buchart 6 Glycozid tim +++ 7 Tanin -Vôi FeCl3 trong quâ +++ Không cô ta­ nin trong -Dich gelatin quâ Cô diràng Ducmg khir 8 tu do TT Fehling A,B + - - - - - khir trong vô quâ chm 21 II.2.3- Nghiên cûu vê alcaloid cüa cây Solanum surattense Burn.F. Solanaceae. ♦> Dinh tînh glycoalcaloid bàng sac kÿ lôp mông: - Dung dich châm sâc kÿ: Cân khoâng 10g bôt vô quâ chm cho vào binh non 200ml. Thâm âm bàng dung dich acid chlohydric 2% trong 15 phüt. Sau dô cho thêm 100ml dung dich acid chlohydric 2%, lâc kÿ. Ngâm lanh trong 24 giô, thïnh thoâng lâc. Loc lây dich loc. Kiêm hoâ dich loc bàng dung dich amoniac dâc dê'n pH: 9-10 thây xuât hiên két tüa. Thu lây tüa. Hoà tan tüa trong methanol làm dich châ'm sâc kÿ cüa bôt vô quâ chm. Làm nhu vây vôi câc mâu bôt vô quâ uong, vô quâ xanh, hat quâ xanh, hat quâ uong, hat quâ chm. Ta thu duoc câc dich châm sâc kÿ cüa câc mâu trên. - Chuân bi bân mông: 1 bân mông 8*10 cm. dâ trâng sàn silica gel cüa hâng Merck. Sây à 110°C trong 1 giô. Sau khi hoat hoâ duoc bâo quân à bînh hüt âm. Bân mông cô kê san vach chî cüa chiêu khai trién -Châm riêng rê câc dich chiét cüa câc mâu duoc liêu: Vô quâ chîn, vô quâ uong, vô quâ xanh, hat quâ chîn, hat quâ uong và hat quâ xanh. Câc vét châm câch mép duôi lcm, câc vét châm câch mép bên 1cm. Câc vét này dâ duoc ghi chü thîch dë phân biêt. -Khâo sât câc hê dung môi khai triën: Hê I: n - butanol: nuôc: acid acetic (4:5:1) Hê II: chloroform: methanol: amoniac (4:1:0,1) Hê III: chlorform: ethanol: amoniac 1% (2:2:1) Hê IV: chloroform: methanol:amoniac (5:1:0,1) Hê V: n - butanol bâo hoà nuôc Hê VI: chloroform: methanol: (7:3) Hê VI: chloroform: methanol: (9:1) Khai triën sâc kÿ theo chiêu tù duôi lên. Khi dung môi chay câch mép trên bàn mông lcm thï lây ra, dë khô dung môi và phun hiên màu bàng thuôc thü Dragendorff. Két quâ cho thây trong câc hê dung môi thî hê dung môi IV (chloroform: methanol: amoniac (5:1:0,1) ) là hê tâch tôt nhât. 22 \ Bâng II:Ket quâ sac kÿ mâu doi voi hê IV. Rf vét Hat Vô Hat uong uong 0,854 0,854 0,854 0,854 0,854 0,777 0,777 0,777 0,777 0,777 0,777 3 0,631 0,408 0,631 0,408 4 0,563 0,165 0,563 0,165 5 0,243 0,029 0,243 0,029 6 0,155 0,155 7 0,177 0,177 8 0,078 0,078 9 0,029 0,029 Vô chm Hat chîn 1 0,854 2 Vô xanh xanh Ânh 2: Sac kÿ so sânh glycoalcaloid cua câc mâu duoc lieu Al:vô quâ chm A2: hat quâ chîn Bl: vô quâ uong B2: hat quâ uong Cl: vô quâ xanh C2: hat qüa xanh A2 Bi if B2 Ci C2 ❖ Dinh luçfng alcaloid toàn phân trong câc màu duçfc liêu: - Dinh luotng bàng: Phuong phâp cân - Mâu dinh luçmg: Câc bôt vô quâ chîn, hat quà chîn, vô quâ ucmg, hat quâ uong, vô quâ xanh, hat quâ xanh. - Tien hành: Cân chfnh xâc khoâng 50g bôt vô quâ chîn, cho vào bïnh gan (cô lot bông). Thâm âm duoc liêu bàng dung dich acid chlohydric 2% trong côn 70° . Cho thêm 200ml acid 2% trong côn 70°, lâc kÿ. Ngâm trong 24giô. Chiê't bàng phuong phâp ngâm kiêt. Rut dich chiét tù tù và tiép dung môi phîa trên sao cho tô'c dô rut dich chiét bàng toc dô tiép dung môi. Cu rut dich chiét nhu vây cho dê'n khi hê't alcaloid trong duoc liêu thï dùrng lai (phân ùng âm tînh vôi TT Dragendorff). Gôp dich chiét. Thu hoi côn duôi âp suât giâm. Thu duoc cân. Dem hoà tan cân trong 50ml dung dich acid chlohydric 2%. Kiêm hoâ bàng dung dich amoniac dâc dê'n pH 9-10, trên nôi câch thuÿ, xuât hiên tüa. Loc thu lây tüa. Dem hoà tan lai tüa trong acid chlohydric 2%, két tüa lai bàng amoniac ô pH 9-10. Ly tâm thu lây tüa. Sây khô tinh thë dê'n khô'i luçfng không dôi ô (50°C-60°C). Cân chînh xâc luçmg alcaloid thu duoc. Cüng tiê'n hành tuong tu vôi câc mâu duoc liêu: vô quâ uong, vô quâ xanh, hat quâ chm, hat quâ uong, hat quâ xanh. Tiê'n hành dinh luçmg môi mâu duoc liêu 5 lân. Kê't quâ dinh luçmg duoc xü lÿ theo toân hoc thô'ng kê. Hàm luçmg trong môi lân dinh luçmg duoc tînh theo công thûc: m H%=----------------*104 M(100-X ) m: khô'i luçmg alcaloid toàn phân M: khô'i luçmg duoc liêu dem dinh luong X: dô âm cüa duoc liêu dem dinh luçmg 24 Bàng III:Két quâ dinh liroug alcaloid toàn phân ( Hj%) Lân Vô chm Hat chm Vô uong Hat uong Vô xanh Hat xanh 1 5 2.1 4.95 2 3.34 1.27 2 5.01 2.2 5 1.95 3.4 1.25 3 4.95 1.92 4.8 1.98 3.5 1.33 4 5.2 2 5.1 2.01 3.44 1.38 5 5.1 1.95 4.85 1.92 3.32 1.2 5.052 2.034 4.94 1.972 3.4 1.286 Kê't quâ H% ♦♦♦ Dinh liiçfng phân aglycon: - Phuong phâp dinh luçmg: acid- kiêm sau khi dâ thuÿ phân glycoalcaloid. - Duoc lieu: bôt vô quâ chîn, hat quâ chm,vô quâ uong, hat quâ uong, vô quâ xanh, hat quâ xanh. - Tien hành: -i-Cân chînh xâc khoâng lg duoc liêu vô quâ chîn. Thâm âm bàng acid acetic 2% trong 30 phut roi cho vào binh chiê't. Chiét kiêt hoat chât ( glycoalcaloid) bâng dung dich acid acetic 2% cho duoc dû 25ml. Lây 5ml dich chiê't trên cho vào binh câu dung tîch 50ml. Thêm vào 5ml dung dich acid chlohydric 5%. Lâp ông sinh hàn nguoc và thuÿ phân câch thuÿ trong 2 giô. dë nguôi, kiêm hoâ dich thuÿ phân bàng dung dich Na2C 0 3 25% tôi pH=10-l 1 roi dàt lên nôi câch thuÿ trong 10 phüt. Lây ra dë nguôi và cho vào tu lanh trong 1 giô, loc lây tüa dem sâ'y khô à 50°C-60°C. Gâp giâ'y loc cô tüa vào soxhlet roi chiêt bàng chloroform tinh khiê't trong 1 giô. + Dë nguôi dich chiê't, thêm 2 giot chî thi diethyl vào rôi dinh luong bàng dung dich acid paratoluen sulfonic 0.005N cho tôi khi cô màu hông nhat. 1ml dung dich acid paratoluen sulfonic 0.005N üng vôi 2.069 mg solasodin. 25 V*k*2.069*250*104 % Solasodin =— ........................................ M(100-X)*5 V: so ml dung dich acid paratoluen sulfonic 0.005N k: hê so hiêu chînh cüa dung dich acid M: khôl luong duoc lieu càn dinh luong X: dô âm duoc lieu Tien hành nhu trên vôi câc mâu duoc lieu khâc. Môi mâu làm 5 lân. Két quâ hàm luong duoc xü lÿ theo toân hoc thông kê. Bâng IV: Két quâ dinh luong aglycon ( Hi%) Lân Vô chm Hat chîn Vô uong Hat uong Vô xanh Hat xanh 1 2 0.65 1.8 0.6 1 0.5 2 1.95 0.67 1.75 0.62 1.12 0.52 3 1.92 0.58 1.77 0.58 1.02 0.58 4 2.1 0.55 1.72 0.61 1.1 0.49 5 2.15 0.6 1.81 0.56 0.95 0.55 2.024 0.61 1.77 0.594 1.038 0.528 Két quâ H% ♦♦♦Nghiên cüu aglycon cüa glycoalcaloid -Gôp câc mâu duoc liêu trên lai dë nghiên cüu vê aglycon cüa glycoalcaloid. Duoc lieu là bôt quâ cây S. surattense Burn.F. - Chiét glycoalcaloid bàng phuong phâp ngâm kiêt vôi dung môi là acid chlohydric 2% trong côn 70° : 26 + Chuân bi bïnh ngâm kiêt: bïnh ngâm kiêt bàng kim loai duoc rùa sach, dë trên giâ dô. Cho lot vào trong bïnh môt ldp bông mông và mot lôp giâ'y loc. Thàm uôt bông và giày loc bàng acid 2% trong côn70°. + Chuan bi duoc liêu: duoc liêu duoc thàm âm bàng acid 2% trong côn70° trong 30 phüt. + Tien hành: cho khoâng 300g duoc liêu dâ thàm âm vào bïnh ngâm kiêt. Do dung môi chiét là acid 2% trong côn70° vào binh sao cho ngâp duoc liêu khoâng 4-5 cm. Ngâm lanh trong 24 giô, thînh thoâng cô khuây trôn. Rut dich chiét tùr tù và tiép tue cho dung dich côn-acid vào binh chiét. Làm nhu vây cho dén khi chiét hét alcaloid trong duoc liêu (phân üng âm tmh vôi TT Dragendorff). Thu hôi côn. Kiêm hoa bàng dung dich amoniac dàc dén pH: 9-10 thây xuât hiên tüa. Rüa tüa bàng nuôc dén trung tînh vôi giây quÿ. Sây khô tüa ô 80°C ta duoc khoâng 8g tüa glycoalcaloid thô. -Thuÿ phân glycoalcaloid và chiét aglycon: tüa glycoalcaloid thô dem hoà tan trong dung dich acid chlohydric 10% trong côn 90°,dung trong binh câu dung tîch 250ml. Thuÿ phân trên nôi câch thuÿ cô sinh hàn hôi luu. Dun thuÿ phân trong 8 giô. Sau dô dë nguôi, thu hôi côn. Dë qua dêm thây cô tüa. Ly tâm thu hôi tüa. Rüa tüa bàng nuôc dén trung tînh vôi giây quÿ ta thu duoc khoâng 3g tüa aglycon thô. Hoà tan tüa aglycon thô trong côn 90°. Kiêm hoâ bàng dung dich amoniac dén pH=9-10. Thêm nuôc nông 80°c dén khi xuât hiên tüa duc, dë qua dêm. Loc thu lây tüa và rüa tüa bàng nuôc dén phân üng trung tmh vôi giây quÿ thu duofe aglycon thô. Tinh ché: hoà tan aglycon thô trong côn 90° cho vào bïnh non dung tich 250ml. Cho vào dô khoâng 2-3g than hoat. Lâc kÿ. Dun sôi câch thuÿ khoâng 15 phüt. Dem loc nông qua giâyloc. Rüa than hoat bàng côn 90° nông, dén hét alcaloid à trên than (phân üng âm tmh vôi TT Dragendorff). Dich loc thu duoc dun sôi câch thuÿ, thêm nuôc nông 80°C dén khi xuât hiên tüa duc, dë qua dêm, loc thu lây tüa. Ta duoc tüa aglycon. 27 ❖ Dinh tinh aglycon toàn phân bàng sâc kÿ lâp mông. - Chuân bi dich châm sâc kÿ: hoà tan khoâng lg tûa aglycon trong 2ml methanol (dich châm sâc kÿ). - Tien hành: châm sâc kÿ bàng dung dich aglycon vào giao cüa hai vach chi dâ kê sân trên bân mông. Khai triën sâc kÿ hai chiêu vcfi: Chiêu 1: hê dung môi chloroform: methanol: amoniac (5:1:0.1). Khi dung môi câch mép bân mông 0.5cm thï lây ra sây khô dung môi. Tiê'n hành khai triën chiêu 2. Chiêu 2: khai triën vôi hê dung môi chloroform: aceton: methanol: amoniac(20:20:3:l). Khi dung môi câch mép bân mông 0.5cm thï lây ra. Sây khô dung môi. Phun hiên màu bàng thuôc thü Dragendorff. Ta thây aglycon toàn phân cô hai vêt trên sâc kÿ hai chiêu. Ânh 3: Sâc kÿ hai chiëu dinh tînh aglycon toàn phân 1 2 ❖ Phân lâp aglycon bâng sâc kÿ côt -Chuân bi côt: côt cô duông krnh 1.5cm duoc rira sach, sây khô. Trâng côn tuyêt dôi và dem sây khô. Cho môt lôp bông mông b dây côt. Cô dinh côt trên giâ + Cân silica gel dung vào côc sach, dem hoat hoâ ô nhiêt dô 110°C trong 2 giô. Bâo quân trong bînh hüt âm. + Nhôi côt: trôn silica gel dâ hoat hoâ vôi chloroform tao thành hôn dich. Khuây kÿ dë không cô bot khi lân trong hôn dich. Dé tîr tùr hôn dich trên vào côt theo düa thuÿ tinh sao cho không cô bot khi xuât hiên trong côt. Trâng sach côc dung silica gel bàng chloroform cho vào côt. Mô khoâ côt cho chloroform chây qua, dông thôi gô nhe vào côt theo chiêu doc tù duôi lên dë du6i bot khi côn sot lai trong côt và 6n dinh côt. Sau dô dë côt én dinh trong 12 giô. Yêu càu côt cao khoâng 20- 25 cm - Chuân bi chât thù: cân 150mg aglycon toàn phân trôn vôi mot ft silica gel khô. - Chuân bi ông nghiêm: chuân bi khoâng 50 ông nghiêm nhô duoc rua sach sây khô, trâng côn tuyêt dôi và sây khô lai. Dë nguôi, dânh dâu câc ông nghiêm theo thu: tu và sâp xép chüng trên giâ. - Dua chât thù lên côt: mô khoâ côt cho chloroform chây dê'n khi mât dung môi câch mât silica gel khoâng 3mm thî dua hôn hop aglycon- silica gel vào côt sao cho hôn hop không duoc bâm vào thành côt. Sau dô phü lên trên lôp chât thù môt lôp mông silica gel dày khoâng 3-5 mm. - Tien hành phân lâp: cho tù tù hê dung môi (chloroform: methanol (5:1)) lên trên côt. Mô khoâ côt cho chây vôi tô'c dô khoâng 30 giot/phüt. Sau 10 phüt bât dâu hüng ra câc ông nghiêm, môi ô'ng khoâng 3-4ml dich. Sü dung sâc kÿ lôp mông dë xâc dinh câc phân doan vôi dung môi khai triën chînh là hê dung môi chay côt. Ta duoc két quâ là dich trong câc ô'ng 1-5 cô 2 vét, tù ô'ng 6-10 là câc ông cô mot vêt cô cùng Rf trên sâckÿ bân mông. Gôp câc ô'ng tù 6-10 (ô'ng I). - Kiëm tra dô tinh khiê't cüa dich trong ô'ng I vôi sâc kÿ bân mông hai chiêu: 29 Chiêu 1: khai triën hê dung môi chloroform: methanol: amoniac (5:1:0.1). Chiêu hai: khai triën vôi hê dung môi chloroform: aceton: methanol: amoniac (20:20:3:1). Két quâ là cô mot vét trên sâc kÿ bân mông hai chiêu. Ânh4: Sac kÿ kiêm tra dô tinh khiét cüa ong I IH M « Dë ong I cho bay hoi tu nhiên ta thây xuât hiên k. ‘\ih bâm vào thành ong nghiêm. Hüt bô dich côn lai trong ông. Hoà tan két tinh trong methanol. Dë két tinh lai trong methanol. Két tinh lai nhiêu lân trong methanol ta duoc tinh thë aglycon tinh khiét( tinh thë AG). ❖ Xâc dinh aglycon-AG: -AG là tinh thë không màu.Tan tôt trong chlroform, methanol, aceton. Ành 5: Tinh thé -Xâc dinh sa bô bàng sâc kÿ bân mông. + Chuân bi dich châm sâc kÿ: hoà tan tinh thë AG, aglycon toànphân, Solasodin chuân vào 3 ong nghiêm riêng biêt bàng methanol. Ta duoc câc dich châm sâc kÿ: dich AG, dich aglycon toàn phân, dich solasodin chuân. + Châm 3 vét riêng biêt, môi vét 10/ul dung dich trên lên bânmông vôi câc dich trên. + Khai triën vôi 3 hê dung môi khâc nhau: Hê 1: chloroform: methanol: amoniac( 5:1:0.1). Hê 2: chloroform: aceton: methanol: amoniac (20:20:3:1). Hê 3: n - butanol: nuôc: acid acetic (4:5:1). Phun hiên màu bàng thuôc thü Dragendorff. Két quâ cho thây AG cho môt vét cô cùng Rf và màu sâc vôi vét cüa solasodin chuân. Chüng tôi du kiën AG là solasodin. Ânh 6: Sâc kÿ xâc dinh AG AG: vét dich tinh thë AG AGT : aglycon toàn phân SC: solasodin chuân 31 - Do nhiêt dô nông chây cüa AG: Nhiêt dô nông chây cüa tinh thé AG ta do duoc là: 199°C-201°C. Nhiêt dô nông chây cüa solasodin (200°C-2002°C). Vây nhiêt dô nông chây cüa AG trùng vôi solasodin. -Xâc dinh AG bàng pho tü ngoai( UV-VIS ), so sânh phé tü ngoai cüa AG vôi solasodin chuân: phé tü ngoai cüa AG trùng vôi phé tü ngoai cüa solasodin chuân và cô eue dai hàp phu tai buôc sông 204nm. ( trong methanol). - Xâc dinh bàng phé hông ngoai-IR: Dâc diëm phé hông ngoai cüa AG do duôi dang viên nén KBr cho câc dînh hàp thu duoc ghi à bâng V cho thây AG cô dinh dâc trung cüa solasodin chuân [10], [20]. BângV: Câc dînh dâc timg cüa pho hông ngoai cüa solasodin chuan và AG. solasodin AG (cm'1) (cm 1) 3400 3354.42 -OH 2925 2946.33 -c h 3j -c h 2- 1650 1650.00 -C=C- 1460 1451.21 -CH3 không dôi xüng 1380 1380.00 -CH3 dôi xüng 1180 1180.00 -C-O-C- 1030 1030.00 -OH steroid Dâc trung nhôm chüc -Xâc dinh AG bàng phé khôi-MS : Câc pic co sô cüa AG cô sô khôi (m/z) là: 113, 114, 138 là nhûng pic dâc trung cho khung solanidan cüa aglycon cüa glycoalcaloid. Pic 413 (m/z) là khôi luong phân tü cüa AG. Dua vào ngân hàng phé khôi tai phông câu truc - Viên Hoâ Hoc cho biêt AG chmh là solasodin. Két luân: Cân cü vào câc két quâ trên chüng tôi két luân AG là solasodin. 32 Thâm âm duoc liêu, chiét ngâm kiêt bàng côn70° acid 2%. Thu hôi bôt côn. Kiêm hoa bàng dung dich amoniac dâc dén pH=9-10. Thu lây tüa, phoi và sây ô 80°C Hoà tan glycoalcaloid thô trong côn90°-acid 10%. Dun trên nôi câch thuÿ hôi luu trong 8 giô. Thu hôi côn, dë qua dêm cô tüa. Loc và rüa tüa bàng nuôc dén trung tmh vôi quÿ Hoà tan tüa trong côn 90°, dun câch thuÿ, kiêm hoâ bàng amoniac dén pH=9-10. thêm nuôc nông 80°C dén xuât hiên tüa duc. Dë qua dêm thu lây tüa Hoà tan aglycon thôtrong côn 90°. tây màu bàng than hoat trên nôi câch thuÿ. Loc loai than, rüa than bàng côn 90°. dich côn dun sôi câch thuÿ, thêm nuôc 80°C dén xuât hiên tüa duc. Dë qua dêm thu lây tüa aglycon tinh thë Phân lâp trên sâc kÿ côt vôi chât hâp phu là silica gel, hê dung môi chloroform: methanol (5:1) Xâc dinh bàng sâc kÿ lôp mông(cô chât chuân) Do nhiêt dô nông chây X âc dinh bàng phô UV-VIS, IR,phô khoi-MS Tôm tat quy trinh thuÿ phân và phân lâp aglycon cüa glycoalcaloid 33 PHAN III KÉT LUÂN VÀ DÊ XUAT II.1- KET LUAN Sau môt thôi gian nghiên cuti cây S. surattense Burn.F. Solanaceae (cà dai quâ dô) moc à Bâc Giang, chung tôi dâ thu duoc môt sô két quâ sau: III. 1.1- Vê thuc vât: Mô tâ duoc dâc diém hinh thâi thuc vât cüa cây S. surattense Burn.F.,ho (Solanaceae ) moc ô Bâc Giang. III.1.2- Vê hoâ hoc: -Xâc dinh so bô bàng phân ûng hoâ hoc trong quâ và hat cüa cây cà dai quâ dô cô chûa môt sô nhôm chât sau: alcaloid, saponin steroid, flavonoid.Và không chûa glycozid tim, tanin,coumarin, anthranoid, duông khü tu do ( trù vô quâ chîn) - Dinh tmh so bô vê sô glycoalcaloid trong quâ và hat cüa cây cà dai quâ dô. Tiê'n hành phân lâp và xâc dinh duoc môt aglycon cüa glycoalcaloid: aglycon-AG là solasodin. - Tiê'n hành dinh luofng duoc alcaloid toàn phân và dinh luçfng aglycon cüa glycoalcaloid theo hàm luçfng solasodin trong câc mâu: vô quâ chin, vô quâ xanh, vô quâ uong, hat quâ chîn, hat quâ xanh và hat quâ uong. Tù kê't quâ ta thây hàm luofng alcaloid toàn phân và aglycon trong vô quâ chm là cao nhâ't (Htp(%)=5.052, Hag(%)=2.004), trong hat quâ xanh là thâp nhâ't (Htp (%)= 1.286, Hag(%)=0.528). III.2 DÊ XUAT Trên dây là nhûng kê't quâ nghiên cûu buôc dâu va thành phân hoâ hoc cüa vô quâ và hat cüa cây S. surattense Burn.F. Solanaceae. Công trinh này cân phâi duçfc tiê'p tue nghiên cûu sâu hon, rông hon dë cô thë dua cây cà dai quâ dô vào sü dung trong y hoc và nâng cao hiêu quâ sü dung cüa no. 34 Cân chü y bâo vê loài cây này( Solanum surattense Burn.F Solanaceae). TÀI LIÊU THAM KHÀO TÀI LIÊU TIÊNG VIÊT 1.Nguyên Tien Bân (1990), Cam nang tra cüu và nhân biêt câc ho thuc vât hat km ô Viêt Nam, Nxb Nông Nghiêp Hà Nôi, tr 59,43,413. 2.Bô Y Té (1978), Duoc liêu Viêt Nam, Nxb Y hoc, tr 74,404. 3.Bô Y Té (2002), Duoc âiên Viêt Nam III, Nxb Y hoc 4.Bô mon Duoc Liêu (1998), Bài giâng duoc liêu tâp 1,2 truông Dai hoc Duoc Hà Nôi. 5.Bô môn Duoc Liêu (1999), Thuc tâp duoc liêu, phân hoâ hoc, truông Dai hoc Duoc Hà Nôi. 6.Bô môn Thuc Vât (1998), Thuc vât hoc, phân loai thuc vât, truông Dai hoc Duoc Hà Nôi. 7.V5 Vân Chi (1997), Tùdiên cây thuoc Viêt Nam, Nxb Y hoc, tr 146-15 8.Vü Vân Chuyên (1990), Thuc vât hoc, Nxb Y hoc 9.Vü Vân Chuyên, Tôm tât dâc diêm câc ho cây thuoc, Nxb Y hoc, tr 175-177. 10.Nguyên Vân Dàn, Nguyên Viêt Tim (1985), Phuong phâp nghiên cüu hoâ hoc cây thuoc, Nxb Y hoc. 11.Pham Hoàng Hô (2000), Cây cô Viêt Nam,quyèn 2,Nxb Trê,tr 755-770. 12.Lê Khâ Ké và Cs (1974), Cây cô thuàng thây ô Viêt Nam, tâp 4, Nxb Khoa hoc K îthuât,tr 111-132. 13.Lê Thi Khanh (1998), Gôp phân ngiên cüu duoc liêu cây ât cânh (Capsicum frutescens.h. var ceraciforme (Mill). Bail. Solanaceae), Truông Dai hoc Duoc Hà Nôi. 35 14.Nguyên Minh Khai, Pham Kim Mân, Nguyën Bich Thu, Nguyën Kim Thu, Lâ Kim Oanh, Nguyën Vân Mùi, Trinh Thi Xuân Hoà, Nguyën Anh Tuân, Nguyën Dinh Mâo (2001), “Nghiên cûu dieu ché thuôc Haina dieu tri viêm gan B man hoat dông tù cà gai leo”, Tap chi Duçfc liêu tâp 6 so 2+3, tr 68,71. 15.Tràn Công Khânh(1981), Thuc tâp hinh thâi và giai phâu thuc vât, Nxb Dai hoc và trung hoc chuyên nghiêp. 16.D6 Tât Loi (2001), Nhîtng cây thuôc và vi thuôc Viêt Nam, Nxb Khoa hoc và Kî thuât. 17. Hy Lân Hoàng Vân Minh (2001), Cây thuôc và câc vi thuôc Viêt Nam, Nxb Hà Nôi, tr 226-238. 18. Nguyën Dire Minh (1975), Tinh khâng khuân cüa câc cây thuôc Viêt Nam, Nxb Y hoc, tr 180. 19.Tràn Vân Thanh, Phuong Thiên Thuong(2001), "Nghiên cûu thành phân hoâ hoc cüa cây cà vu ( Solanum mammosum.L.)”, Tap chi Duçfc Hoc so 8. 20. Nguyën Bfch Thu (2001), Nghiên cûu cây cà gai leo làm thuôc chô'ng viêm gan và ûc che xa gan (Solanum hainanense Hance, Solanaceae ), Luân ân tien si duoc hoc, Viên Duoc Lieu. 21. Ngô Vân Thu (1990), Hoâ hoc Saponin, Trucmg Dai hoc Y Duçfc thành pho Hô Chi Minh. 22.Luong Ngoc Toân,Vô Vân Chi(1978), Phân loqi thuc vât hoc, Nxb Giâo duc, tr 83-87. 23.Viên Duorc Liêu (1990), Cây thuôc Viêt Nam, Nxb Khoa hoc và Kl thuât, tr 116-137 24. Viên Duoc Liêu (1993), Tài nguyën cây thuôc Viêt Nam, Nxb Khoa hoc và Kl thuât, tr 371-374. 36 TÀI LIÊU TIÊNG ANH. 25.Alfredo, U., Ieman, A. & al.(1997), Steroid alkaloids front Solanum sycophanta, phytochemistry, vol.44,537-543. 26.Boll P.M., Andersen B. (1962), Alkaloid glycosides from Solanum dulcamara, Planta Medica, Helf 4, 421-432. 27. Kamyszek F., et al. (1974), Antifungal activity o f Solasonin and Solamargin, Zwiereta Lab., 11, 576-548. 28.Ripperger, H., et al., (1997), Steroidal alkaloids from S. sycophanta, Phytochemistry, Vol. 1, 537-543. 29.Ripperger, H., (1995), Steroidal alkaloids and sapogenins from roots o f some Solanum species, Planta Medica, 61,292 30.Salen A.A.,(1974): Steroid alkaloid and sapogenin constituents o f Solanum laciniatum.lj., Planta Medica, 20,40-44. 37 PHIJ LUC PHO HÔNG NGOAI CÛA AG PHO UV-VIS CÜA AG PHO KHÔI-MS CÜA AG Thu May 22 10:13:51 2003 1 0 5 1^ Ïm~T i[...]... acetic (4 :5: 1) Hờ II: chloroform: methanol: amoniac (4 :1:0, 1) Hờ III: chlorform: ethanol: amoniac 1% (2 :2: 1) Hờ IV: chloroform: methanol:amoniac (5 :1:0, 1) Hờ V: n - butanol bõo ho nuục Hờ VI: chloroform: methanol: (7 : 3) Hờ VI: chloroform: methanol: (9 : 1) Khai triởn sõc k theo chiờu tự duụi lờn Khi dung mụi chay cõch mộp trờn bn mụng lcm thù lõy ra, dở khụ dung mụi v phun hiờn mu bng thuục thỹ Dragendorff... y hoc thù hõu hờt cõc cõy thuục chi Solanum dõ duoc su dung theo kinh nghiờm dõn gian dở chỷa mụt sụ bờnh nhu: c gai leo (S hainanense Hance ), c dai quõ dụ (S surattense Bum .F ) cụ thở dựng chỷa phong thõp v c hụi( S verbasciflorum) dựng chỷa bờnh trù - Vụi y hoc hiờn dai thù mụt sụ cõy duoc nghiờn cỷu dở su dung l nguụn chiột Solasodin nhu: c ỷc ( S laciniatum.L .) Ngoi ra Viờn Duoc Liờu dõ nghiờn... trnh) +Phõn ỹng vụi sõt (III) chlorua cho vo ong nghiờm 1ml dich C Thờm vi giot dung dich sõt (III) chlorua 5% Thõy xuõt hiờn tỹa xanh den (phõn ỹng duong tợnh) +Phõn ỹng vụi kiờm: Nhụ mụt giot dich C lờn giy loc, hụ khụ Dem ho vờt lờn miờng lo amoniac dõc Ta nhõn thõy mu vng dõm lờn rụ rờt (phõn ỹng duong tợnh) So bụ kột luõn: Trong vụ quõ chợn cỹa cõy S surattense Burn. F cụ chỷa flavonoid - Lm nhu trờn... spirostan v furostan - Nhom spirostan cụ cõc aglycon sau: 8 STT Tờn chõ't Cụng thtrc cõ'u tao Dụ chy Nguụn gục (Q Solanum aviculare 204-207 Diosgenin Solanum laciniatum Solanum xanthocarpum Solanum Paniculogenin 214-216 paniculaợum Solanum Hydroxyl-23213-214 neochlorogenin paniculaợum Solanum 215.5-218.5 Isonuatigenin 9 sisymbriflolium STT Tờn chõt Dụ chy Cụng thirc cõu tao Nguụn gụ'c (C) \ 1 c h 2o Solanum. .. dich trờn lờn bõnmụng vụi cõc dich trờn + Khai triởn vụi 3 hờ dung mụi khõc nhau: Hờ 1: chloroform: methanol: amoniac( 5:1:0. 1) Hờ 2: chloroform: aceton: methanol: amoniac (2 0:20:3: 1) Hờ 3: n - butanol: nuục: acid acetic (4 :5: 1) Phun hiờn mu bng thuục thỹ Dragendorff Kột quõ cho thõy AG cho mụt vột cụ cựng Rf v mu sõc vụi vột cỹa solasodin chuõn Chỹng tụi du kiởn AG l solasodin nh 6: Sõc k xõc dinh... chlorua: Cho vo ong nghiờm 1ml dich F Thờm vo dụ vi giot dung dich sõt (III) chlorua Thõy xuõt hiờn tua xanh den (phõn ỹng dirong tmh) + Phõn ỹng vụi gelatin 2% Cho vo ong nghiờm 1 ml dich F Thờm vo 5-10 giot gelatin 2% Khụng thõy xuõt hiờn tỹa trõng (phõn ỹng õm tmh) So bụ kột luõn: Khụng cụ tanin trong vụ quõ chợn S surattense Burn. F Cỹng lm nhu trờn vụi cõc bot duoc lieu khõc vụ quõ xanh, hat quõ xanh... S surattense Burn. F Phõn ỹng vụi sõt (III) chlorua duong tmh do trong duoc liờu cụ chỹa flavonoid Dinh tợnh diùdng khỹ tu do: - Chuõn bi dich dinh tmh: Lõy khoõng 5g bụt vụ quõ chợn cho vo ong nghiờm Thờm 10ml nuục cõt, dun soi trong 5 phỹt Loc lõy dich dở lm phõn ỹng - Tiờ'n hnh phõn ỹng vụi thuục thỹ Fehling: Lõy 2ml dich chiột cho vo ụng nghiờm, thờm 0.5ml thuục thỹ Fehling A, 0.5ml thuục thỹ Fehling... v hat cõy S surattense Burn. F khụng chỷa glycozid tim Phõn ỷng Liberman-Burchart duong tợnh do trong cõy cụ chỹa saponin steroid 19 > Dinh tmh tanin: - Chuõn bi dich dinh tợnh: Lõy khoõng 5 g vụ quõ chm cho vo bùnh non 100ml Thờm vo 50ml nuục cõt Dun soi trong 10 phut, gan loc lõy dich lm dinh tmh (dich F) - Tien hnh dinh tợnh: + Phõn ỹng vụi sõt (III) chlorua: Cho vo ong nghiờm 1ml dich F Thờm vo dụ... methanol (dich chõm sõc k) - Tien hnh: chõm sõc k bng dung dich aglycon vo giao cỹa hai vach chi dõ kờ sõn trờn bõn mụng Khai triởn sõc k hai chiờu vcfi: Chiờu 1: hờ dung mụi chloroform: methanol: amoniac (5 :1:0. 1) Khi dung mụi cõch mộp bõn mụng 0.5cm thù lõy ra sõy khụ dung mụi Tiờ'n hnh khai triởn chiờu 2 Chiờu 2: khai triởn vụi hờ dung mụi chloroform: aceton: methanol: amoniac(20:20:3:l) Khi dung... mot sụ' cõy thuục chi Solanum v c cõc thnh phõn hoõ hoc cỹa chung cụ tõc dung chụ'ng viờm rõt tụt nhu: c gai leo ( S hainanense Hance ), c vu ( S mammosum.L ), solasodin, solamargin, solasonin + Tõc dung khõng khuõn v khõng nõm: mụt sụ cõy cụ tõc dung khõng khuõn tụt nhu: dich chiờ't cỹa cõy lulu duc ( S nigrum.L .), mụt sụ cõy cụ tõc dung khõng nõm nhu c trõi vng (S xanthocarpum.L .) solamargin v solasodin .. .f y /// ổựt fititj fd /t)ttt/ fcttf/t ftwttt/ tut /st f rftt tri// Jttf' t/rợt ầ/rtttt (TJsi ^7/ttttt/t tut g ffợt /t tt /ộ t t (/ J /e // /ttt ^7/tttt/ sftt ftttt fttt/t /ttttJttt/... Tự kờ't quõ ta thõy hm luofng alcaloid ton phõn v aglycon vụ quõ chm l cao nhõ't (Htp( %)= 5.052, Hag( %)= 2.00 4), hat quõ xanh l thõp nhõ't (Htp (% )= 1.286, Hag( %)= 0.52 8) III.2 Dấ XUAT Trờn dõy l... butanol: nuục: acid acetic (4 :5: 1) Hờ II: chloroform: methanol: amoniac (4 :1:0, 1) Hờ III: chlorform: ethanol: amoniac 1% (2 :2: 1) Hờ IV: chloroform: methanol:amoniac (5 :1:0, 1) Hờ V: n - butanol bõo