xác định virus hại đậu đỗ tại miền bắc việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM -----------------o0o----------------- HỒ NGỌC LINH CHI XÁC ĐỊNH VIRUS HẠI ĐẬU ĐỖ TẠI MIỀN BẮC VIỆT NAM CHUYÊN NGÀNH: BẢO VỆ THỰC VẬT MÃ SỐ: 60.62.01.12 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. HÀ VIẾT CƯỜNG HÀ NỘI, 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa công bố công trình khoa học khác. Các thông tin trích dẫn sử dụng luận văn ghi rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày 25 tháng 05 năm 2015 Tác giả Hồ Ngọc Linh Chi Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành tốt đề tài tốt nghiệp, suốt thời gian thực tập, nghiên cứu, nhận hướng dẫn, bảo tận tình Giáo viên hướng dẫn, tập thể, cá nhân, động viên gia đình bạn bè. Trước tiên xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn tới TS. Hà Viết Cường – Giám đốc Trung tâm Bệnh nhiệt đới - Học viện Nông Nghiệp Việt Nam dành cho dẫn giúp đỡ tận tình suốt thời gian thực tập nghiên cứu hoàn thành luận văn này. Tôi xin cảm ơn giúp đỡ tập thể thầy, cô giáo môn Bệnh – Khoa Nông học – Học viện Nông Nghiệp Việt Nam tạo điều kiện giúp đỡ trình thực đề tài. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn đến giúp đỡ nhiệt tình lãnh đạo tập thể cán Chi cục Kiểm dịch thực vật vùng – Hà Nội, Trung tâm Nghiên Cứu Bệnh Cây Nhiệt Đới – Học viện Nông Nghiệp Việt Nam động viên tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành khóa học thực đề tài nghiên cứu. Cuối xin bày tỏ lòng biết ơn đến tất bạn bè, người thân gia đình động viên tạo điều kiện giúp đỡ tôt trình học tập thực luận văn này. Hà Nội, Ngày 25 tháng năm 2015 Tác giả luận văn Hồ Ngọc Linh Chi Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục bảng vi Danh mục hình viii Danh mục chữ viết tắt x MỞ ĐẦU 1. Đặt vấn đề 2. Mục đích 3. Yêu cầu CHƯƠNG . TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Giới thiêu họ đậu 3 1.1.1. Cây đậu tương 1.1.2. Cây đậu xanh 1.1.3. Cây đậu đen 1.1.4. Cây đậu cove 1.2. Một số virus quan trọng họ đậu 1.2.1. Bean common mosaic virus (BCMV) 5 1.2.2. Soybean mosaic virus 11 1.2.3. Mungbean yellow mosaic virus 14 1.2.4. Kudzu mosaic virus 17 1.3. Kỹ thuật ELISA chẩn đoán virus thực vật 18 1.3.1. Nguyên lý 18 1.3.2. Các kỹ thuật ELISA 19 1.4. Kỹ thuật thuật PCR chẩn đoán virus thực vật 1.4.1. Nguyên lý Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 19 19 Page iii 1.4.2. Phạm vi áp dụng 1.5. Kỹ thuật thuật LAMP chẩn đoán virus thực vật 1.5.1. Phạm vi áp dụng CHƯƠNG 2. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Đối tượng phạm vi nghiên cứu 19 19 24 26 26 2.1.1. Đối tượng nghiên cứu 26 2.1.2. Phạm vi nghiên cứu 26 2.2. Nội dung nghiên cứu 26 2.3. Vật liệu nghiên cứu 26 2.3.1. Mẫu bệnh 26 2.3.2. Dụng cụ nghiên cứu 26 2.3.3. Hoá chất 27 2.4. Phương pháp nghiên cứu 27 2.4.1. Phương pháp điều tra đồng 27 2.4.2. Phương pháp thu thập bảo quản mẫu bệnh 27 2.4.3. Phương pháp kiểm tra virus ELISA 27 2.4.4. Phương pháp kiểm tra virus PCR 29 2.4.5. Phương pháp kiểm tra virus phản ứng LAMP 33 CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1. Điều tra bệnh virus đậu đỗ Hà Nội năm 2014 35 35 3.1.1. Tình hình sản xuất đậu đỗ Hà Nội 35 3.1.2. Điều tra bệnh virus đậu tương Hà Nội năm 2014 35 3.1.3. Điều tra đậu xanh 39 3.1.4. Điều tra bệnh virus đậu đen Hà Nội năm 2014 44 3.1.5. Điều tra đậu cove 46 3.2. Phát virus đậu đỗ ELISA 50 3.2.1. Kiểm tra phát Potyvirus đậu đỗ thu Miền Bắc Việt Nam Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 51 Page iv 3.2.2. Kiểm tra ELISA phát Comovirus đậu đỗ thu Miền Bắc Việt Nam 54 3.2.3. Kiểm tra ELISA phát Luteovirus mẫu đậu đỗ thu Miền Bắc Việt Nam 56 3.2.4. Kiểm tra ELISA phát Carlavirus mẫu đậu đỗ thu Miền Bắc Việt Nam 58 3.2.5. Kiểm tra ELISA phát CPMoV SBMV mẫu đậu đỗ thu tại Miền Bắc Việt Nam 3.3. Phát virus đậu đỗ PCR 60 62 3.3.1. Phát legumovirus đậu đỗ PCR dung cặp mồi chung 62 3.3.2. Phát MYMV PCR 63 3.3.3. Phát KuMV PCR 66 3.4. Phát KuMV MYMV LAM-PCR KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 70 72 1. Kết luận 72 2. Kiến Nghị 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 74 Page v DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 1.1. Một số isolate BCMV Việt Nam giải trình tự gen CP 10 2.1. Các kít ELISA phát virus đậu đỗ (Viện DSMZ) 27 2.2. Các mồi sử dụng nghiên cứu 32 2.3. Thành phần phản ứng LAMP bao gồm: 33 2.4. Hai mồi phát virus MYMV KuMV 33 3.1. Triệu chứng bệnh virus đậu tương Hà Nội năm 2014 35 3.2 Mức độ nhiễm bệnh virus đậu tương Hà Nội năm 2014. 38 3.3. Triệu chứng bệnh virus đậu xanh Hà Nội năm 2014 39 3.4. Mức độ nhiễm bệnh virus đậu xanh Hà Nội năm 2014 42 3.5. Triệu chứng bệnh virus đậu đen Hà Nội năm 2014 44 3.6. Mức độ nhiễm bệnh virus đậu đen Hà Nội năm 2014 46 3.7. Triệu chứng bệnh virus đậu cove Hà Nội năm 2014 – 2015 47 3.8. Mức độ nhiễm bệnh virus đậu cove leo khu vực Hà Nội năm 2014 – 2015. 49 3.9. Kiểm tra phát Potyvirus đậu đỗ thu Miền Bắc Việt Nam năm 2014 phương pháp ELISA 53 3.10. Kiểm tra ELISA phát Comovirus đậu đỗ thu Miền Bắc Việt Nam năm 2014 ELISA 55 3.11. Kiểm tra ELISA phát Luteovirus mẫu đậu đỗ thu Miền Bắc Việt Nam năm 2014 ELISA 57 3.12. Kiểm tra ELISA phát Carlavirus mẫu đậu đỗ thu Miền Bắc năm 2014 ELISA 59 3.13. Kiểm tra ELISA phát CPMoV SBMV mẫu đậu đỗ thu Miền Bắc Việt Nam năm 2014 ELISA Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 61 Page vi 3.14. Kết PCR kiểm tra legumovirus dùng cặp mồi chung Leg-cpF/R 62 3.15. Kết PCR kiểm tra MYMY đậu đỗ mồi đặc hiệu 64 3.16. PCR phát KuMV họ đậu khu vực Hà Nội năm 2014. 67 3.17. Đánh giá khả phát KuMV MYMV LAMP-PCR 71 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 1.1. Bệnh khảm BCMV họ đậu (CABI, 2012). 1.2. Bệnh khảm Soybean mosaic virus họ đậu (CABI, 2012). 12 1.3. Triệu chứng khảm vàng đậu xanh giai đoạn cuối bệnh. 15 1.4. Vị trí mồi vùng thiết kế mồi cho phản ứng LAMP 20 1.5. Primer FIP bắt cặp với sợi DNA đơn 21 1.6. Tổng hợp mạch bổ sung 21 1.7. Gắn primer F3 vào 21 1.8. Tổng hợp sợi DNA từ primer F3 22 1.9. Đoạn DNA đơn tạo primer FIP 22 1.10. Vị trí gắn primer BIP B3 22 1.11. Tổng hợp mạch bổ sung nhờ primer B3 23 1.12. Sự tạo thành đầu vòng đoạn DNA đơn 23 1.13. Tiến trình bước đến bước 11 24 1.14. Các bước tiến hành phương pháp LAMP 24 3.1. Khảm nhăn đậu tương Hà Nội năm 2014 36 3.2. Khảm vàng đậu tương Hà Nội năm 2014 37 3.3. Khảm lùn đậu tương Hà Nội năm 2014 37 3.4. Khảm vàng gân đậu xanh Hà Nội năm 2014 40 3.5. Khảm vàng đậu xanh Hà Nội năm 2014 40 3.6. Khảm nhăn đậu xanh Hà Nội năm 2014 40 3.7. Khảm vàng đỗ đen Hà Nội năm 2014 44 3.8. Khảm gân xanh đỗ đen Hà Nội năm 2014 45 3.9 Khảm nhăn đỗ đen Hà Nội năm 2014 45 3.10. Khảm vàng đỗ cove Hà Nội năm 2014 47 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page viii 3.11. Khảm gân xanh đỗ cove Hà Nội năm 2014 48 3.12. Khảm nhăn đỗ cove Hà Nội năm 2014 48 3.13. Kiểm tra ELISA phát virus hại đậu đỗ thu Miền Bắc 2014. 51 3.14. Kết PCR kiểm tra legumovirus dùng cặp mồi chung LegcpF/R. 3.15. PCR kiểm tra MYMY đậu đỗ mồi đặc hiệu 63 65 3.16. Đậu tương đậu xanh nhiễm virus MYMV khu vực Hà Nội năm 2014. 65 3.17. PCR phát KuMV họ đậu cặp mồi KuAFor KuARev. 69 3.18. PCR phát KuMV họ đậu cặp mồi KuBFor KuBRev. 69 3.19. PCR phát KuMV đậu tương khu vực Hà Nội năm 2014. 3.20. LAMP-PRC phát MYMV KuMV Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 70 71 Page ix 25 VNP240 Lạc cổ Phúc Yen Bai I - - - 26 VNP241 Lạc Cổ Phúc Yen Bai I - - - 27 VNP242 Lạc Cổ Phúc Yen Bai I - - - 28 VNP420 TP hCM I - - - I - - - 29 VnP571 Đốm Kham, xoăn Đậu đen Kham vang dep Hoa - Quả Phan Me - Phu Thai Luong Nguyen Phan Me - Phu Thai Luong Nguyen I - - - 30 VNP572 Đậu đen Kham vang dep 31 VNP605 lạc necrotic ringspot Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - - 32 VNP606 lạc đốm héo Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - - 33 VNP607 lạc đốm héo, Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - - 34 VNP608 lạc biến vàng (di truyền) Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - - 35 VNP1000 Sắn dây Khảm Cong Vien NCRQ Ha Noi I - - 0.453 36 VNP1061 Đỗ xanh vàng gân , khảm giai đoạn hoa Đặng Xá - Gia Lâm I - - - 37 VNP605 lạc Đốm Giai đoạn hoa Đặng Xá - Gia Lâm I - - - 38 VNP606 lạc đốm héo Giai đoạn hoa Đặng Xá - Gia Lâm I - - - 39 VNP607 lạc đốm héo, Giai đoạn hoa Đặng Xá - Gia Lâm I - - - 40 VNP608 lạc biến vàng (di truyền) Giai đoạn hoa An Lạc - Gia Lâm I - - - 41 VNP1000 Sắn dây Giai đoạn hoa An Lạc - Gia Lâm I - - - 42 VNP1061 Đỗ xanh Giai đoạn hoa An Lạc - Gia Lâm II - - - II - - - Khảm Hoa - Quả Hát Môn - Ba 43 VNP1068 Đỗ đen đốm vàng Giai đoạn Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp HN Page 85 Hát Môn - Ba 44 VNP1069 Đỗ đen đốm vàng Giai đoạn Đỗ 45 VNP1070 tương 47 VNP1071 VNP1072 II - - - II - - - II - - 0.41 II - - 0.373 Hát Môn - Ba đốm vàng nhăn Giai đoạn Đỗ 46 HN HN Hát Môn - Ba - tương đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa HN Đỗ đốm vàng nhăn, vàng Giai đoạn sinh Hát Môn - Ba - tương gân trưởng HN Đỗ Hát Môn - Ba - 48 VNP1073 tương khảm nhăn Giai đoạn HN II - - - 49 VNP1074 Đỗ đen khảm nhăn Bắt đầu hoa, Phường An lạc II - - - 50 VNP1075 Đô xanh khảm nhăn Bắt đầu hoa Gia Lâm II - - - đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa Gia Lâm II - - - Đỗ 51 VNP1076 tương Đỗ 52 VNP1077 tương đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa Gia Lâm II - - - 53 VNP1078 Đỗ đen khảm nhăn Giai đoạn hoa Gia Lâm II - - - 54 VNP1079 đỗ xanh đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa Gia Lâm II - - - Gia Lâm II - - - Giai đoạn hoa, 55 VNP1080 đỗ tương đốm vàng nhăn Số mẫu dương tính với virus Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 86 Ghi chú: I mẫu thu tập trước trung tâm Bệnh nhiệt đới, II: mẫu thu tập trình điều tra Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 87 Phụ lục 3. Kiểm tra ELISA phát luteovirus mẫu đậu đỗ thu Miền Bắc Việt Nam năm 2014 phương pháp ELISA STT Mã Mẫu Cây Triệu chứng Giai đoạn Vị trí Tỉnh Nguồn gốc BLRV PEMV VNP7 Đỗ xanh Khảm,biến dạng Ra hoa FAVRI Hà Nội I - - VNP19 Đỗ xanh Khảm,biến dạng Ra hoa Hậu Lộc Thanh Hoa I - 0.102 VNP50 Sắn dây Khảm vàng Ra hoa Lục Yên Yên Bái I - - VNP66 Sắn dây Lục Yên Yên Bái I - 0.104 VNP67 Sắn dây Lục Yên Bắc Giang I - - VNP111.2 Đỗ xanh Khảm, biến dạng Ra hoa Nghi Kim-Nghi Lộc Nghệ An I - 0.111 VNP129 Đỗ xanh Khảm, biến dạng Ra hoa Đan Phượng-Hà Nội Hà Nội I - 0.106 VNP144 Đỗ xanh Khảm, biến dạng Ra hoa Gia Lâm-Hà Nội Hà Nội I - - VNP145 Đỗ xanh Ra hoa Gia Lâm-Hà Nội Hà Nội I - - 10 VNP147 Đỗ tương Khảm, biến dạng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 11 VNP148 Đỗ tương Khảm, biến dạng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 12 VNP149 Đỗ tương Khảm, biến dạng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 13 VNP150 Đỗ tương Khảm, biến dạng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - 0.215 14 VNP151 Đỗ tương Khảm vàng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 15 VNP152 Đỗ tương Khảm vàng, biến dạng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 88 16 VNP153 Đỗ tương Khảm vàng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 17 VNP154 Đỗ tương Khảm vàng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 18 VNP155 Đỗ tương Khảm vàng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 19 VNP156 Đỗ tương Khảm xoăn Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 20 VNP157 Đỗ tương Khảm Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 21 VNP158 Đỗ tương Khảm vàng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 22 VNP159 Đỗ tương Khảm Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 23 VNP160 Đỗ tương Khảm Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - Mai Sơn-Sơn La Sơn La I - 0.1 25 VNP240 Lạc Cổ Phúc Yên Bái I - - 26 VNP241 Lạc Cổ Phúc Yên Bái I - - Cổ Phúc Yên Bái I - - TP HCM I - - 24 VNP204 Đỗ đỏ Khảm vàng 27 VNP242 Lạc Đốm 28 VNP420 Kham, xoăn 29 VNP571 Đậu đen Khảm vàng đẹp Hoa - Quả Phan Me - Phu Luong Thái Nguyên I - 0.102 30 VNP572 Đậu đen Khảm vàng đẹp Hoa - Quả Phan Me - Phu Luong Thái Nguyên I - - 31 VNP605 Lạc Đốm Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - 0.114 32 VNP606 Lạc Đốm héo Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - 0.131 33 VNP607 Lạc Đốm héo, Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - 0.111 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 89 34 VNP608 Lạc Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - Cong Vien NCRQ Hà Nội I - - Giai đoạn hoa Đặng Xá - Gia Lâm Hà Nội I - 0.102 Biến vàng (di truyền) 35 VNP1000 Sắn dây Khảm 36 VNP1061 Đỗ xanh Vàng gân , khảm 37 VNP605 Lạc Đốm Giai đoạn hoa Đặng Xá - Gia Lâm Hà Nội I - - 38 VNP606 Lạc Đốm héo Giai đoạn hoa Đặng Xá - Gia Lâm Hà Nội I - 0.11 39 VNP607 Lạc Đốm héo, Giai đoạn hoa Đặng Xá - Gia Lâm Hà Nội I - - 40 VNP608 Lạc Biến vàng (di truyền) Giai đoạn hoa An Lạc - Gia Lâm Hà Nội I - 0.109 41 VNP1000 Sắn dây Giai đoạn hoa An Lạc - Gia Lâm Hà Nội I - 42 VNP1061 Đỗ xanh Khảm Giai đoạn hoa An Lạc - Gia Lâm Hà Nội II - 0.103 43 VNP1068 Đỗ đen Lá đốm vàng Giai đoạn Hát Môn - Ba - HN Hà Nội II - 44 VNP1069 Đỗ đen Lá đốm vàng Giai đoạn Hát Môn - Ba - HN Hà Nội II - 0.115 45 VNP1070 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn Hát Môn - Ba - HN Hà Nội II - - 46 VNP1071 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa Hát Môn - Ba - HN Hà Nội II - - 47 VNP1072 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn, vàng gân Giai đoạn sinh trưởng Hát Môn - Ba - HN Hà Nội II - - 48 VNP1073 Đỗ tương Khảm nhăn Giai đoạn Hát Môn - Ba - HN Hà Nội II - - 49 VNP1074 Đỗ đen Bắt đầu hoa, Phường An Lạc Hà Nội II - - 50 VNP1075 Đô xanh Khảm nhăn Bắt đầu hoa Gia Lâm Hà Nội II - 0.106 51 VNP1076 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa Gia Lâm Hà Nội II - Khảm nhăn Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp - 0.1 Page 90 52 VNP1077 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa Gia Lâm Hà Nội II - - 53 VNP1078 Đỗ đen Giai đoạn hoa Gia Lâm Hà Nội II - - 54 VNP1079 Đỗ xanh Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa Gia Lâm Hà Nội II - 0.1 55 VNP1080 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa, Gia Lâm Hà Nội II - - Khảm nhăn Đ\C 0.095 0.095 Đ\C 0.127 0.095 Đ\C 0.156 0.097 X 0.126 0.096 SD 0.031 0.001 Ngưỡng 0.187 0.098 Số mẫu dương tính với virus 18 (+) Ghi chú: I mẫu thu tập trước trung tâm Bệnh nhiệt đới, II: mẫu thu tập trình điều tra Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 91 Phụ lục 4: Kiểm tra ELISA phát carlavirus mẫu đậu đỗ thu Miền Bắc Miền Nam năm 2014 phương pháp ELISA Mã Mẫu Cây Triệu chứng Giai đoạn Vị trí Tỉnh Nguồn gốc VNP7 Đỗ xanh Khảm,biến dạng Ra hoa FAVRI Hà Nội I - - VNP19 Đỗ xanh Khảm,biến dạng Ra hoa Hậu Lộc Thanh Hoa I - - VNP50 Sắn dây Khảm vàng Ra hoa Lục Yên Yên Bái I - - VNP66 Sắn dây Lục Yên Yên Bái I - - VNP67 Sắn dây Lục Yên Bắc Giang I - - VNP111.2 Đỗ xanh Khảm, biến dạng Ra hoa Nghi Kim-Nghi Lộc Nghệ An I - - VNP129 Đỗ xanh Khảm, biến dạng Ra hoa Đan Phượng-Hà Nội Hà Nội I - - VNP144 Đỗ xanh Khảm, biến dạng Ra hoa Gia Lâm-Hà Nội Hà Nội I - - VNP145 Đỗ xanh Ra hoa Gia Lâm-Hà Nội Hà Nội I - - 10 VNP147 Đỗ tương Khảm, biến dạng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 11 VNP148 Đỗ tương Khảm, biến dạng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 12 VNP149 Đỗ tương Khảm, biến dạng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 13 VNP150 Đỗ tương Khảm, biến dạng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 14 VNP151 Đỗ tương Khảm vàng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 15 VNP152 Đỗ tương Khảm vàng, biến dạng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 16 VNP153 Đỗ tương Khảm vàng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 17 VNP154 Đỗ tương Khảm vàng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 18 VNP155 Đỗ tương Khảm vàng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - STT Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp CABMV CPMMV Page 92 19 VNP156 Đỗ tương Khảm xoăn Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 20 VNP157 Đỗ tương Khảm Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 21 VNP158 Đỗ tương Khảm vàng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 22 VNP159 Đỗ tương Khảm Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 23 VNP160 Đỗ tương Khảm Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 24 VNP204 Đỗ đỏ Khảm vàng Mai Sơn-Sơn La Sơn La I - - 25 VNP240 Lạc Cổ Phúc Yên Bái I - - 26 VNP241 Lạc Cổ Phúc Yên Bái I - - 27 VNP242 Lạc Cổ Phúc Yên Bái I - - 28 VNP420 TP HCM I - - 29 VNP571 Đậu đen Khảm vàng đẹp Hoa - Quả Phan Me - Phu Luong Thái Nguyên I - - 30 VNP572 Đậu đen Khảm vàng đẹp Hoa - Quả Phan Me - Phu Luong Thái Nguyên I - - 31 VNP605 Lạc Đốm Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - 32 VNP606 Lạc Đốm héo Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - 33 VNP607 Lạc Đốm héo, Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - 34 VNP608 Lạc Biến vàng (di truyền) Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - 35 VNP1000 Sắn dây Khảm Cong Vien NCRQ Hà Nội I 0.281 - 36 VNP1061 Đỗ xanh Vàng gân , khảm I - - 31 VNP605 Lạc Đốm Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - 32 VNP606 Lạc Đốm héo Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - 33 VNP607 Lạc Đốm héo, Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - Đốm Kham, xoăn Giai đoạn hoa Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Đặng Xá - Gia Lâm Page 93 Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - Cong Vien NCRQ Hà Nội I - - Đặng Xá - Gia Lâm II - - Giai đoạn Hát Môn - Ba - HN II - - Lá đốm vàng Giai đoạn Hát Môn - Ba - HN II - - Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn Hát Môn - Ba - HN II - - VNP1071 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa Hát Môn - Ba - HN II - - 47 VNP1072 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn, vàng gân Giai đoạn sinh trưởng Hát Môn - Ba - HN II 0.265 - 48 VNP1073 Đỗ tương Khảm nhăn Giai đoạn Hát Môn - Ba - HN II - - 49 VNP1074 Đỗ đen Khảm nhăn Bắt đầu hoa, Phường An Lạc II - - 50 VNP1075 Đô xanh Khảm nhăn Bắt đầu hoa Gia Lâm II - - 51 VNP1076 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa Gia Lâm II - - 52 VNP1077 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa Gia Lâm II - - 53 VNP1078 Đỗ đen Khảm nhăn Giai đoạn hoa Gia Lâm II - - 54 VNP1079 Đỗ xanh Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa Gia Lâm II - - 55 VNP1080 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa, Gia Lâm II - - Đ\C 0.204 0.092 Đ\C 0.189 0.092 Đ\C 0.166 0.099 X 0.186 0.094 SD 0.019 0.004 34 VNP608 Lạc Biến vàng (di truyền) 35 VNP1000 Sắn dây 36 VNP1061 Đỗ xanh Khảm Giai đoạn hoa 43 VNP1068 Đỗ đen Lá đốm vàng 44 VNP1069 Đỗ đen 45 VNP1070 46 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 94 Ngưỡng Số mẫu dương tính với virus 0.225 0.102 (+) (+) Ghi chú: I mẫu thu tập trước trung tâm Bệnh nhiệt đới, II: mẫu thu tập trình điều tra Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 95 Phụ lục Kiểm tra ELISA phát CPMoV SBMV mẫu đậu đỗ thu Miền Bắc Việt Nam năm 2014 phương pháp ELISA ST T Cây Triệu chứng Giai đoạn Vị trí Tỉnh Nguồn gốc VNP7 Đỗ xanh Khảm,biến dạng Ra hoa FAVRI Hà Nội I - - VNP19 Đỗ xanh Khảm,biến dạng Ra hoa Hậu Lộc Thanh Hoa I - - VNP50 Sắn dây Khảm vàng Ra hoa Lục Yên Yên Bái I - - VNP66 Sắn dây Lục Yên Yên Bái I - - VNP67 Sắn dây Lục Yên Bắc Giang I - - VNP111. Đỗ xanh Khảm, biến dạng Ra hoa Nghi Kim-Nghi Lộc Nghệ An I - - VNP129 Đỗ xanh Khảm, biến dạng Ra hoa Đan Phượng-Hà Nội Hà Nội I - - VNP144 Đỗ xanh Khảm, biến dạng Ra hoa Gia Lâm-Hà Nội Hà Nội I - - VNP145 Đỗ xanh Ra hoa Gia Lâm-Hà Nội Hà Nội I - - Mã Mẫu CPMo V SBM V 10 VNP147 Đỗ tương Khảm, biến dạng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 11 VNP148 Đỗ tương Khảm, biến dạng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 12 VNP149 Đỗ tương Khảm, biến dạng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 13 VNP150 Đỗ tương Khảm, biến dạng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 96 14 VNP151 Đỗ tương Khảm vàng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 15 VNP152 Đỗ tương Khảm vàng, biến dạng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 16 VNP153 Đỗ tương Khảm vàng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 17 VNP154 Đỗ tương Khảm vàng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 18 VNP155 Đỗ tương Khảm vàng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 19 VNP156 Đỗ tương Khảm xoăn Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 20 VNP157 Đỗ tương Khảm Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 21 VNP158 Đỗ tương Khảm vàng Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 22 VNP159 Đỗ tương Khảm Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 23 VNP160 Đỗ tương Khảm Ra hoa Gia Lâm Hà Nội I - - 24 VNP204 Đỗ đỏ Khảm vàng Mai Sơn-Sơn La Sơn La I - - 25 VNP240 Lạc Cổ Phúc Yên Bái I - - 26 VNP241 Lạc Cổ Phúc Yên Bái I - - Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 97 27 VNP242 Lạc 28 VNP420 29 VNP571 Đốm Cổ Phúc Yên Bái I - - TP HCM I - - Hoa - Quả Phan Me - Phu Luong Thái Nguyên I - - Hoa - Quả Phan Me - Phu Luong Thái Nguyên I - - Kham, xoăn Đậu đen Khảm vàng đẹp 30 VNP572 Đậu đen Khảm vàng đẹp 31 VNP605 Lạc Đốm Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - 32 VNP606 Lạc Đốm héo Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - 33 VNP607 Lạc Đốm héo, Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - 34 VNP608 Lạc Biến vàng (di truyền) Mỹ Tân- Mỹ Lộc Nam Định I - - 35 VNP1000 Sắn dây Khảm Cong Vien NCRQ Hà Nội I - - 36 VNP1061 Đỗ xanh Vàng gân , khảm Giai đoạn hoa Đặng Xá - Gia Lâm II - - 37 VNP605 Lạc Đốm Giai đoạn hoa Đặng Xá - Gia Lâm II - - 38 VNP606 Lạc Đốm héo Giai đoạn hoa Đặng Xá - Gia Lâm II - - 39 VNP607 Lạc Đốm héo, Giai đoạn hoa Đặng Xá - Gia Lâm II - - 40 VNP608 Lạc Biến vàng (di truyền) Giai đoạn hoa An Lạc - Gia Lâm II - - 41 VNP1000 Sắn dây Giai đoạn hoa An Lạc - Gia Lâm II - - 42 VNP1061 Đỗ xanh Giai đoạn hoa An Lạc - Gia Lâm II - - Giai đoạn Hát Môn - Ba HN II - 0.147 II - - II - - 43 VNP1068 Đỗ đen Khảm Lá đốm vàng 44 VNP1069 Đỗ đen Lá đốm vàng Giai đoạn Hát Môn - Ba HN 45 VNP1070 Đỗ Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn Hát Môn - Ba - Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 98 tương HN 46 VNP1071 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa Hát Môn - Ba HN II - - 47 VNP1072 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn, vàng gân Giai đoạn sinh trưởng Hát Môn - Ba HN II - 0.146 48 VNP1073 Đỗ tương Khảm nhăn Giai đoạn Hát Môn - Ba HN II - - 49 VNP1074 Đỗ đen Khảm nhăn Bắt đầu hoa, Phường An Lạc II - - 50 VNP1075 Đô xanh Khảm nhăn Bắt đầu hoa Gia Lâm II - - 51 VNP1076 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa Gia Lâm II - - 52 VNP1077 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa Gia Lâm II - - 53 VNP1078 Đỗ đen Khảm nhăn Giai đoạn hoa Gia Lâm II - - 54 VNP1079 Đỗ xanh Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa Gia Lâm II - - 55 VNP1080 Đỗ tương Lá đốm vàng nhăn Giai đoạn hoa, Gia Lâm II - - Đ\C 0.219 0.123 Đ\C 0.183 0.103 Đ\C 0.209 0.101 X 0.204 0.109 SD 0.019 0.012 Ngưỡng 0.241 0.133 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 99 Số mẫu dương tính với virus (+) (+) Ghi chú: I mẫu thu tập trước trung tâm Bệnh nhiệt đới, II: mẫu thu tập trình điều tra Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 100 [...]... nghiệp Việt Nam dưới sự hướng dẫn của TS Hà Viết Cường, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: Xác định virus hại đậu đỗ tại miền Bắc Việt Nam 2 Mục đích Xác định được thành phần loài virus hại trên cây đậu đỗ ở miền Bắc Việt Nam 3 Yêu cầu 1 Điều tra bệnh virus tại một số điểm trồng đậu đỗ thuộc Hà Nội 2 Xác định một số virus trên đậu đỗ bằng ELISA 3 Xác định KuMV bằng PCR, và LAMP-PCR 4 Xác định MYMV... trắng (CABI, 2012) 1.2.3.8 MYMV tại Việt Nam Tỷ lệ mắc cao của các triệu chứng khảm vàng đã được quan sát trên đậu tương và cây đậu đỗ ở Indonesia trong năm 2009 và trong cây đậu xanh tại Việt Nam trong năm 2011 Tất cả năm mẫu đậu tương và 20 mẫu đậu đỗ từ Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 16 Java, Indonesia, 15 mẫu đậu xanh từ Việt Nam với các triệu chứng dương... loại virus (CABI, 2012) 1.2.1.8 BCMV tại Việt Nam Ở Việt Nam, mặc dù các cây đậu đỗ thường biểu hiện triệu chứng giống Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 9 như bị nhiễm BCMV nhưng cho tới nay, chỉ có 2 công bố về virus quan trọng này Đầu tiên là một nghiên cứu dựa trên phân tích ELISA và giải trình tự từ các mẫu hạt giống đậu đỗ thu thập ở miền Bắc Việt Nam Dựa... thấy tỷ lệ hạt đậu nhiễm virus là từ 0.8 % tới 12.4 % (Hao et al., 2003) Nghiên cứu thứ hai là các phân tích trình tự gen từ 9 mẫu BCMV phân lập từ các cây họ đậu biểu hiện triệu chứng bệnh như đậu đen, đậu đỏ, đậu đũa, đậu tương và muồng 3 lá (một cây che phủ cà phê) thu thập tại nhiều tỉnh ở Việt Nam (Ha et al., 2008b) Tại Việt Nam, có 2 begomovirus mới được xác định gần đây trên cây họ đậu là KuMV... trên đậu đỗ (CABI, 2012) Ở Việt Nam, cho tới nay có rất ít các công bố về thành phần virus nhiễm trên cây họ đậu Đầu tiên là một nghiên cứu dựa trên phân tích miễn dịch liên kết men (Enzyme Liked Immunosorbent Assay - ELISA) và giải trình tự từ các mẫu hạt giống đậu đỗ thu thập ở miền Bắc Việt Nam Dựa trên nghiên cứu này, các tác giả đã xác nhận sự có mặt của Bean Common Mosaic Virus (BCMV) trên hạt đậu. .. virus SMV có gây hại tại Việt Nam 1.2.3 Mungbean yellow mosaic virus 1.2.3.1 Phân loại Virus có DNA sợi đơn dương (ssDNA), họ Geminiviridae, chi Begomovirus, loài Mungbean yellow mosaic virus, ngoài ra virus còn có một số tên khác như: Mung bean yellow mosaic bigeminivirus, Mung bean yellow mosaic geminivirus, Mungbean yellow mosaic geminivirus ( CABI, 2012) Tên thường dùng Mungbean yellow mosaic virus, ... giả đã xác nhận sự có mặt của BCMV trên hạt đậu (Vigna unguiculata) và cho thấy tỷ lệ hạt đậu nhiễm virus là từ 0.8% - 12.4% Nghiên cứu thứ 2 là các phân tích trình tự gen từ 9 mẫu virus phân lập từ các cây họ đậu biểu hiện triệu chứng bệnh như đậu đen, đậu đỏ, đậu đũa, đậu tương và muồng 3 lá (một cây che phủ cà phê) thu thập tại nhiều tỉnh ở Việt Nam Các nghiên cứu gần đây cho thấy vùng Đông Nam Á... phân lập tại Indonesia và Việt Nam cùng với begomoviruses cây họ đậu lây nhiễm khác tiết lộ rằng tất cả các chủng phân lập từ Mungbean Yellow Mosaic India Virus (MYMIV) strain-A, và tất cả mẫu từ Việt Nam nhiễm Mungbean Yellow Mosaic Virus (MYMV) strain-B Theo sự hiểu biết của chúng tôi, đây là việc xác định đầu tiên của MYMIV và MYMV liên quan đến khảm vàng của cây họ đậu ở Indonesia và Việt Nam (Tsai... begomovirus trên cây đậu đỗ dùng cặp mồi chung BegoAFor1/Rev1, 5 mẫu đậu tương bị bệnh khảm vàng tại khu thí nghiệm Gia Lâm - trường ĐH Nông nghiệp Hà Nội đã có phản ứng dương tính Việc phát hiện thấy begomovirus trên đậu tương có ý nghĩa lớn vì đây là lần đầu tiên một begomovirus được phát hiện thấy trên cây trồng họ đậu tại Việt Nam (Hà Viết Cường, 2010) Phát hiện KuMV bằng PCR trên các mẫu đậu đỗ Phản... Backward outer primer Bean common mosaic virus Bean common mosaic necrosis virus Bean Common Mosaic Virus Bean leaf roll virus Bean yellow mosaic virus Broad bean true mosaic virus Broad bean wilt virus 2 Công nghệ sinh học Cowpea aphid-born mosaic virus Cowpea mild mottle virus Cowpea mosaic virus Cowpea mottle virus Cowpea severe mosaic virus Cucumber mosaic virus Deutsche Sammlung von Mikroorganismen