đánh giá tác dụng của cao chiết tô mộc (caesalpinia sappan l.) đối với vi khuẩn escherichia coli gây bệnh trên gà lương phượng

  BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN TUẤN ĐẠT ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA CAO CHIẾT TÔ MỘC (CAESALPINIA SAPPAN L.) ĐỐI VỚI VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI GÂY BỆNH TRÊN GÀ LƯƠNG PHƯỢNG LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI, 2015     BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN TUẤN ĐẠT ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA CAO CHIẾT TÔ MỘC (CAESALPINIA SAPPAN L.) ĐỐI VỚI VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI GÂY BỆNH TRÊN GÀ LƯƠNG PHƯỢNG CHUYÊN NGÀNH: THÚ Y MÃ SỐ: 60640101 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN BÁ TIẾP HÀ NỘI, 2015     LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu kết nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Người cam đoan Nguyễn Tuấn Đạt Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp   Page i   LỜI CẢM ƠN Khi hồn thành luận văn này, tơi xin chân thành cảm ơn: Gia đình q thầy dành nhiều thời gian động viên giúp đỡ hồn thành ước mơ học hỏi tơi Thầy TS Nguyễn Bá Tiếp dành nhiều thời gian, tận tình hướng dẫn tơi suốt thời gian thực tập nghiên cứu để hồn thành luận văn Cơ PGS TS Lâm Thị Thu Hương truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm q báu tạo sở giúp tơi tiến hành phát triển nghiên cứu hoàn thiện luận văn Quý thầy cô giáo Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam, Khoa Thú Y, Phòng Đào tạo Sau đại học, ban giám hiệu học viện tận tình giảng dạy tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian học tập nghiên cứu Các thầy cô giáo Khoa Thú Y, Khoa Chăn Nuôi Nuôi Trồng Thủy Sản học viện, bạn sinh viên K54 tham gia chia giúp hoàn thành luận văn Các anh chị em Bác sĩ thú y Trần Thế Sơn, Bác sĩ thú y Nguyễn Hữu Phú công ty TNHH Thương Mại Sản Xuất Nu Pha giúp đỡ thực đề tài Các anh chị em lớp Cao học thú y khóa 21 đồn kết giúp đỡ, chia sẻ động viên suốt hai năm học cao học Cuối cùng, xin cảm ơn sâu sắc người thân gia đình: Mẹ bố mẹ vợ tôi, người vợ yêu quý chỗ dựa vững cho tơi tình cảm vật chất cần thiết giúp tơi có nghị lực học tập, công tác, phấn đấu sống Người viết luận văn Nguyễn Tuấn Đạt Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp   Page ii   MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh sách chữ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục ảnh vii Danh mục sơ đồ, hình viii LỜI MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu yêu vầu 2.1 Mục tiêu 2.2 Yêu cầu CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu Tô mộc 1.1.1 Mô tả 1.1.2 Phân bố, thu hái chế biến 1.1.3 Mô tả dược liệu 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Tác dụng dược lý 1.1.6 Công dụng 1.1.7 Một số nghiên cứu hoạt tính chất chiết Tơ mộc 1.2 Các phương pháp chiết xuất dược liệu 1.3 Một số phương pháp đánh giá kháng sinh thảo dược 1.3.1 Phương pháp thử vi sinh vật 1.3.2 Phương pháp thử động vật 12 1.4 Sơ lược vi khuẩn E coli 13 1.4.1 Đại cương 13 1.4.2 Đặc điểm sinh học 13 1.4.3 Cấu trúc kháng nguyên độc tố 15 1.4.4 Truyền nhiễm học 17 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp   Page iii   1.4.5 Cơ chế sinh bệnh 18 1.4.6 Triệu chứng bệnh tích 19 1.4.7 Chẩn đốn 20 1.4.8 Phịng trị bệnh 20 CHƯƠNG 2NỘI DUNG – VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Đối tượng nội dung nghiên cứu 21 2.1.1 Đối tượng 21 2.1.2 Nội dung 21 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 21 2.3 Nguyên vật liệu 22 2.4 Phương pháp tiến hành 24 2.4.1 Qui trình chiết suất bào chế chế phẩm Tơ mộc 10% 24 2.4.2 Kiểm tra tính kháng khuẩn cao chiết vi khuẩn E coli 26 2.4.3 Đánh giá hiệu phòng trị bệnh chế phẩm cao Tô mộc 10% gà 27 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Kết chiết xuất dược liệu Tơ mộc tới cao tồn phần 30 3.1.1 Kết chiết xuất dược liệu 30 3.1.2 Kết sản xuất chế phẩm cao Tô mộc 10% 31 3.2 Kết kháng sinh đồ cao chiết Tô mộc vi khuẩn E coli 32 3.2.1 Tính kháng khuẩn cao chiết vi khuẩn E coli chuẩn 32 3.2.2 Tính kháng khuẩn cao chiết vi khuẩn E coli phân lập 35 3.3 Tác dụng chế phẩm cao Tô mộc 10% gà gây nhiễm E coli 38 3.3.1 Tỷlệ gà bệnh sau ngày gây nhiễm 38 3.3.2 Tác dụng chế phẩm cao Tô mộc 10% đến tỉ lệ gà chết vi khuẩn E coli 42 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 47 Kết luận 47 Đề nghị 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO   48   Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp   Page iv   DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT E coli : Escherichia coli IB : Infectious Bronchitis MHA : Mueller – Hinton Agar EMB : Eosin Methylen Blue MCK : MacConkey KIA : Kligler Iron Agar BGA : Brilliant green agar BHI : Bran Heart Infusion Broth NB : Nutrient Broth NA : Nutrient Aga ATCC : American Type Culture Collection MIC : Minimum Inhibitory Concentration MeOH : Methanol EtOH : Ethanol     Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp   Page v   DANH MỤC BẢNG STT TÊN BẢNG TRANG 1.1 Thành phần hoá học dịch chiết với dung mơi C2H5OH 2.1 Quy trình chủng ngừa phịng bệnh gà 23 2.2 Bảng tính lượng dung môi cao thành phẩm thu 25 2.3 Công thức bào chế chế phẩm cao Tô mộc 10% 25 2.4 Sơ đồ thử kháng sinh đồ 27 2.5 Đường kính vịng vơ khuẩn chuẩn loại kháng sinh 27 2.6 Bố trí phịng trị bệnh chế phẩm Tô mộc 10% gà 28 3.1 Kết qua chiết dược liệu Tơ mộc tới cao tồn phần 30 3.2 Đường kính vịng vơ khuẩn hai hàm lượng cao chiết với đường kính vịng vơ khuẩn kháng sinh vi khuẩn E colichuẩn (ATCC 25922) 3.3 34 Đường kính vịng vơ khuẩn cao chiết tơ mộc với đường kính vịng vơ khuẩn kháng sinh vi khuẩn E coliphân lập từ gà bệnh 3.4 36 Đường kính trung bình vịng vơ khuẩn cao chiết tơ mộc với đường kính trung bình vịng vơ khuẩn kháng sinh loại vi khuẩn E coli 37 3.5 Tỷ lệ gà bệnh sau ngày gây nhiễm 39 3.6 Tỷ lệ gà mắc bệnh E coli sau ngày gây bệnh 41 3.7 Tỷ lệ gà chết sau ngày gây bệnh 43 3.8 Tỷ lệ gà chết E coli sau ngày gây bệnh 45    Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp   Page vi   DANH MỤC ẢNH STT TÊN ẢNH TRANG 1.1 Quả Tô mộc 1.2 Dược liệu Tô Mộc 1.3 Cấu trúc Brasilin 1.4 Trực khuẩn E.coli bắt màu Gram (-) với độ phóng đại 1000 lần 14 3.1 Mẫu cao tô mộc 31 3.2 Mẫu chai bảo quản sản phẩm 32 3.3 Đường kính vịng vơ khuẩn cao chiết Tô mộc vi khuẩn E coli chuẩn (ATCC 25922) 35 3.4 Màng bao tim dày đục gà bệnh lơ đối chứng dương 40 3.5 Xoang bao tim tích dịch vàng viêm màng bao tim (lô gây bệnh thực nghiệm sau sử dụng chế phẩm) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp   44 Page vii   DANH MỤC SƠ ĐỒ, HÌNH Sơ đồ 2.1 Qui trình phân lập vi khuẩn E coli 23 Sơ đồ 2.2 Mơ hình chiết xuất dược liệu phương pháp ngấm kiệt 24 Hình 3.1 Tỷ lệ gà bệnh 40 Hình 3.2 Tỷ lệ gà bệnh vi khuẩn E coli 42 Hình 3.3 Tỷ lệ gà chết 44 Hình 3.4 Tỷ lệ gà chết vi khuẩn E coli 46   Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp   Page viii   Lô đối ch hứng âm khơ có gà n có triệu trứng bệnh ơng h Có thể nh xét rằn cho uống chế phẩ cao Tô mộc 10% trước gây hận ng, ẩm ô % nhiễm E coli sau gây nhiễm E coli có tác dụng v vi khuẩn Tác d m y ó với n dụng phịng bệnh chế phẩm cao Tơ mộ 10% với liều 1ml/10kg/ngày (cho uống tr g ộc rước gâ nhiễm giờ) tương đương tác dụng trị b ây g bệnh (cho u uống sau gây nhiễ k ễm giờ) Tỉ lệ 80 70 60 50 Đợt I Đợt II Đợt III 40 30 20 10 Lơ thí nghiệm I Lơ thí nghiệ ệm II Lơ Đ ĐC (+) Lơ ĐC (‐) Lơ thí ng ghiệm Hìn nh3.1: Tỷ lệ gà bệnh ệ 3.4: bao ày ối ương Ảnh Màng b tim dà đục gà bệnh lô đố chứng dư Học việ Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp ện p L c N Pag 40 ge   Bảng 3.6: Tỷ lệ gà mắc bệnh E coli sau ngày gây bệnh I Số gà Đợt thí thí nghiệm nghiệm (con) Đối chứng Số gà Tỷ lệ Số Số gà bệnh bệnh gà bệnh bệnh bệnh do bện do E coli E coli h E coli âm Số gà Số gà Tỷ lệ Số gà bệnh bệnh Số gà bệnh bệnh do bệnh E coli E coli Tỷ lệ Số gà Đối chứng dương II E coli E coli Tỷ lệ bệnh doE coli I 10 4 40,00 30,00 60,00 0 00,00 II 10 2 20,00 1 10,00 7 70,00 0 00,00 III 10 1 10,00 2 20,00 7 70,00 0 00,00 Tổng hợp 30 7 23,33 20,00 22 20 66,66 0 00,00 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp   Page 41   Sau ngà gây nhiễ chúng t tiến hàn mổ khám lấy m phân lậ vi ày ễm nh m mẫu ập khuẩn E coli K luận gà mắc bệnh E coli gà mắc bệnh có triệu chứng lâm n Kết c t sàng, bệnh tích đ hình kết ph lập E c dương t điển hân coli tính từ bệnh phẩm b Tỷ lệ gà bệnh E coli chun cho đợt thí n E ng nghiệm thấp lơ thí p ô nghiệ II: (20% cao nh lô đối chứng dươ ệm %) hất i ơng: (66,66 6%) Sự biệt có ý ác nghĩa mặt thố kê (P