Họ c viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 1 MỞ ĐẦU 1.Tính cấp thiết của đề tài Các nhà khoa học đã xác định vi rút lây nhiễm trên sâu khoang là loài vi rút nhân đa diện (Nucleo Polyhedrosis Virus NPV) thuộc họ Baculoviridae và thuộc nhóm vi rút sinh thể vùi, mỗi thể vùi có chứa tới 200 thể vi rút (virion) hình que có vỏ ngoài là protein bao bọc phân tử ADN (nhân) dạng vòng xoắn kép. Thể vùi của NPV côn trùng có hình khối đa diện với kich thước từ 0,15 15µm. NPVSpl rất chuyên tính và có hiệu quả gây chết cao đối với sâu khoang, không lây nhiễm trên các loài không phải là ký chủ của nó. (Grzywacz, et al. (1996) 23. Theo kết quả nghiên cứu của Viện Bảo vệ thực vật (2001) 13, vi rút NPV có vai trò quan trọng góp phần điều tiết số lượng quần thể sâu khoang cũng như các loài côn trùng bộ Cánh phấn khác trên đồng ruộng. Kết quả theo dõi đã xác định khi sâu khoang phát sinh ở mật độ cao, thì tỷ lệ sâu bị chết do nhiễm NPV từ 0,2 1,5% trên rau bắp cải, từ 0,9 1,6% trên đậu tương và từ 0,3 1,9% trên lạc. Các chế phẩm sinh học sử dụng tác nhân vi rút NPV đều rất chuyên tính và có hiệu quả cao trong phòng trừ sâu hại cây trồng nông, lâm nghiệp. Tuy nhiên, các loại vi rút chỉ có thể tồn tại, phát triển được trong các tế bào sống và trong điều kiện môi trường thích hợp. Vì vậy, việc sản xuất chế phẩm vi rút đòi hỏi phải được thực hiện trên cơ thể sâu hoặc trên các mô, tế bào sâu còn sống. Nhưng lâu nay, việc sản xuất NPV vẫn tiến hành theo phương pháp thủ công với quy mô nhỏ hẹp. Bằng cách nuôi sâu sống số lượng lớn, sau đó nhiễm vi rút NPV của loài sâu tương ứng, rồi nghiền lọc và đem ra sử dụng. Theo cách này, sản xuất chế phẩm NPV để trừ sâu hại khó có thể thực hiện với quy mô công nghiệp, vì để nuôi được số lượng lớn một loài sâu hại phụcvụ sản xuất chế phẩm là một vấn đề khó khăn và phải có đủ nhà xưởng, trang thiết bị cần thiết.Họ c viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 1 MỞ ĐẦU 1.Tính cấp thiết của đề tài Các nhà khoa học đã xác định vi rút lây nhiễm trên sâu khoang là loài vi rút nhân đa diện (Nucleo Polyhedrosis Virus NPV) thuộc họ Baculoviridae và thuộc nhóm vi rút sinh thể vùi, mỗi thể vùi có chứa tới 200 thể vi rút (virion) hình que có vỏ ngoài là protein bao bọc phân tử ADN (nhân) dạng vòng xoắn kép. Thể vùi của NPV côn trùng có hình khối đa diện với kich thước từ 0,15 15µm. NPVSpl rất chuyên tính và có hiệu quả gây chết cao đối với sâu khoang, không lây nhiễm trên các loài không phải là ký chủ của nó. (Grzywacz, et al. (1996) 23. Theo kết quả nghiên cứu của Viện Bảo vệ thực vật (2001) 13, vi rút NPV có vai trò quan trọng góp phần điều tiết số lượng quần thể sâu khoang cũng như các loài côn trùng bộ Cánh phấn khác trên đồng ruộng. Kết quả theo dõi đã xác định khi sâu khoang phát sinh ở mật độ cao, thì tỷ lệ sâu bị chết do nhiễm NPV từ 0,2 1,5% trên rau bắp cải, từ 0,9 1,6% trên đậu tương và từ 0,3 1,9% trên lạc. Các chế phẩm sinh học sử dụng tác nhân vi rút NPV đều rất chuyên tính và có hiệu quả cao trong phòng trừ sâu hại cây trồng nông, lâm nghiệp. Tuy nhiên, các loại vi rút chỉ có thể tồn tại, phát triển được trong các tế bào sống và trong điều kiện môi trường thích hợp. Vì vậy, việc sản xuất chế phẩm vi rút đòi hỏi phải được thực hiện trên cơ thể sâu hoặc trên các mô, tế bào sâu còn sống. Nhưng lâu nay, việc sản xuất NPV vẫn tiến hành theo phương pháp thủ công với quy mô nhỏ hẹp. Bằng cách nuôi sâu sống số lượng lớn, sau đó nhiễm vi rút NPV của loài sâu tương ứng, rồi nghiền lọc và đem ra sử dụng. Theo cách này, sản xuất chế phẩm NPV để trừ sâu hại khó có thể thực hiện với quy mô công nghiệp, vì để nuôi được số lượng lớn một loài sâu hại phụcvụ sản xuất chế phẩm là một vấn đề khó khăn và phải có đủ nhà xưởng, trang thiết bị cần thiết.
BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM VIỆT NAM -----------------*----------------NGUYỄN THỊ NHƯ QUỲNH NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT CHẾ PHẨM NPV TRÊN TẾ BÀO SỐNG ĐỂ PHÒNG TRỪ SÂU KHOANG Chuyên ngành: Bảo vệ thực vật Mã số: 60.62.01.12 LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Người hướng dẫn khoa học PGS.TS Lê Văn Trịnh HÀ NỘI, 2014 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập hoàn thành luận văn này, nhận hướng dẫn nhiệt tình, giúp đỡ quý báu thầy cô, anh chị nơi công tác Ban lãnh đạo Viện Bảo vệ thực vật, Trung tâm Đấu tranh Sinh học Ban Đào tạo sau đại học . Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới PGS.TS. Lê Văn Trịnh – Giám đốc Trung tâm đấu tranh Sinh học, Viện Bảo vệ thực vật, người thầy đáng kính công việc sống, trực tiếp hướng dẫn định hướng chuyên môn. Đồng thời tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình công tác hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp này. Để thực nghiên cứu này, xin chân thành cảm ơn tài trợ từ đề tài cấp Nhà nước: “Nghiên cứu sản xuất chế phẩm NPV-spl (Nucleo Polyhedrosis Virus) từ tế bào gốc sâu khoang để phòng trừ sâu hại trồng nông nghiệp”. Tôi xin chân thành cảm ơn anh, chị nhóm đề tài nhiệt tình giúp đỡ để hoàn thành tốt luận văn này. Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô hội đồng chấm luận văn cho đóng góp quý báu để hoàn chỉnh luận văn này. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn cao học công trình nghiên cứu riêng cá nhân tôi. Các tài liệu, số liệu nêu luận văn trung thực. Các luận điểm kết nghiên cứu chưa công bố công trình khác. Tôi xin cam đoan thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc. Tác giả luận văn NGUYỄN THỊ NHƯ QUỲNH Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii MỤC LỤC Lời cảm ơn ------------------------------------------------------------------------------ I Lời cam đoan -------------------------------------------------------------------------- II Mục lục--- ---------------------------------------------------------------------------- III Danh mục bảng -------------------------------------------------------------------- VII Danh mục hình----------------------------------------------------------------------- IX MỞ ĐẦU ------------------------------------------------------------------------------- 1.Tính cấp thiết đề tài ---------------------------------------------------------- 2. Mục tiêu nghiên cứu đề tài ------------------------------------------------- 3. Yêu cầu cần đạt ------------------------------------------------------------------- 4. Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài -------------------------------------- 5. Đối tượng phạm vi nghiên cứu ---------------------------------------------- 5.1. Đối tượng nghiên cứu -------------------------------------------------------- 5.2. Phạm vi nghiên cứu ---------------------------------------------------------- CHƯƠNG I: CƠ SỞ KHOA HỌC VÀ TỔNG QUAN TÀI LIỆU --------- 1.1.Cơ sở khoa học đề tài nghiên cứu ---------------------------------------- 1.2. Kết nghiên cứu nước -------------------------------------------- 1.2.1. Vài nét sâu khoang (Spodoptera litura) hại trồng ------------- 1.2.2. Đặc điểm vi rút NPV ------------------------------------------------- 1.2.3. Cơ chế gây bệnh vi rút côn trùng ---------------------------------- 10 1.2.4. Tiềm sử dụng vi rút NPV phòng trừ sâu hại ------------- 12 1.2.5. Nghiên cứu phân lập, làm thực liệu vi rút NPV sâu khoang - 13 1.2.6. Kỹ thuật lây nhiễm vi rút NPV tế bào nuôi nhân ---------------- 14 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iii 1.2.7. Kỹ thuật tạo dạng chế phẩm NPV sâu khoang ------------------------ 15 1.2.8. Kỹ thuật sử dụng chế phẩm NPV sâu khoang ------------------------- 18 1.3. Kết nghiên cứu nước------------------------------------------- 19 1.3.1. Nghiên cứu NPV Việt Nam ----------------------------------------- 19 1.3.2. Nghiên cứu phân lập, chọn lọc vi rút NPV có hoạt lực cao phòng trừ sâu khoang ---------------------------------------------------- 21 1.3.3. Nghiên cứu tạo dạng sử dụng chế phẩm NPV để phòng trừ sâu hại trồng --------------------------------------------------------------- 21 1.3.4. Nghiên cứu sản xuất chế phẩm NPV để phòng trừ sâu hại ---------- 23 CHƯƠNG II: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ----------------------------------------------------------- 27 2.1. Vật liệu dụng cụ nghiên cứu --------------------------------------------- 27 2.1.1. Vật liệu nghiên cứu ------------------------------------------------------- 27 2.1.2. Dụng cụ, thiết bị nghiên cứu --------------------------------------------- 28 2.2. Thời gian địa điểm nghiên cứu ------------------------------------------ 28 2.3. Nội dung nghiên cứu --------------------------------------------------------- 28 2.3.1. Thu thập, phân lập chọn lọc nguồn vi rút NPV sâu khoang có hoạt lực cao gây chết sâu khoang ------------------------------- 28 2.3.2. Nghiên cứu tạo dạng chế phẩm vi rút NPV từ nguồn vi rút sản xuất tế bào sâu khoang nhân nuôi ---------------------------- 28 2.3.3. Đánh giá hiệu lực phòng trừ sâu khoang chế phẩm NPV ------ 29 2.4. Phương pháp nghiên cứu ---------------------------------------------------- 29 2.4.1. Thu thập, phân lập chọn lọc nguồn vi rút NPV sâu khoang có hoạt lực cao gây chết sâu khoang ------------------------------- 29 2.4.2. Nghiên cứu tạo dạng chế phẩm vi rút NPV từ nguồn vi rút sản xuất tế bào sâu khoang nhân nuôi ---------------------------- 34 2.4.3. Đánh giá hiệu lực phòng trừ sâu khoang chế phẩm NPV ------ 35 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iv 2.5. Phương pháp xử lý số liệu --------------------------------------------------- 36 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN ------------- 37 3.1. Nghiên cứu phân lập tạo thực liệu virút NPV sâu khoang -------------- 37 3.1.1. Thu thập, phân lập sâu khoang nhiễm bệnh tự nhiên -------- 37 3.1.2. Phân lập chọn lọc nguồn thực liệu vi rút NPV có hoạt lực cao - 38 3.1.2.1. Hiệu lực nguồn thực liệu vi rút NPV thu đồng-- 38 3.1.2.2. Hiệu lực nguồn vi rút NPV qua lần tuyển chọn --- 39 3.2. Thăm dò tạo dạng bột thấm nước chế phẩm NPV sâu khoang --------- 56 3.2.1. Phân lập thể vùi tinh vi rút NPV sau lây nhiễm tế bào ---- 56 3.2.2. Sản xuất thử nghiệm chế phẩm NPV dạng bột thấm nước ----------- 60 3.3. Hiệu lực phòng trừ sâu khoang chế phẩm NPV sau tạo dạng ----- 64 3.3.1. Hiệu lực gây chết sâu khoang phòng thí nghiệm -------------- 64 3.3.2. Hiệu lực phòng trừ sâu khoang đồng ruộng ------------------- 67 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ -------------------------------------------------------- 71 1. Kết luận -------------------------------------------------------------------------- 71 2. Đề nghị --------------------------------------------------------------------------- 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO --------------------------------------------------------- 72 1. Tiếng Việt------------------------------------------------------------------------ 72 2. Tiếng Anh------------------------------------------------------------------------ 74 PHỤ LỤC 1: MỘT SỐ HÌNH ẢNH HOẠT ĐỘNG -------------------------- 78 PHỤ LỤC 2: XỬ LÝ SỐ LIỆU --------------------------------------------------- 79 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page v DANH MỤC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT BVTV Bảo vệ thực vật CS Cộng CT Công thức DMSO Dimethyl Sulfoxide FBS Fetal Bovine Serum GV Vi rút hạt (Granular virus) KTCN Kỹ thuật công nghệ NPV Vi rút nhân đa diện (Nucleo Polyhedrosis Virus) NPV-Spl Vi rút NPV sâu khoang NSP Ngày sau phun NSN Ngày sau nhiễm OB Thể vùi (Oclusion Body) PBS Phosphate Buffered Saline PIB Thể vùi (Polyhedra Inclusion Body) SDS Sodium Dodecyl Sulphate TL Thực liệu WP Bột thấm nước (Wetable powder) 2WP Bột thấm nước hàm lượng tỷ thể vùi/gam Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vi DANH MỤC BẢNG Bảng 3. 1. Tỷ lệ sâu khoang nhiễm NPV trồng qua kỳ điều tra (Hà Nội, 2013)------------------------------------------------------- 37 Bảng 3. 2. Hoạt lực gây chết sâu khoang khả sinh thể vùi nguồn thực liệu vi rút thu thập ------------------------------------- 39 Bảng 3. 3. Hoạt lực gây chết sâu khoang khả sinh thể vùi sau phân lập lần nguồn vi rút NPV thu -------------------- 40 Bảng 3. 4.Hoạt lực trừ sâu hàm lượng thể vùi hình thành từ nguồn M1 sau phân lập lần ------------------------------------------------------- 42 Bảng 3. 5.Hoạt lực trừ sâu hàm lượng thể vùi hình thành từ nguồn M2 sau phân lập lần ------------------------------------------------------- 43 Bảng 3. 6.Hoạt lực trừ sâu hàm lượng thể vùi hình thành từ nguồn M3 sau phân lập lần ------------------------------------------------------- 44 Bảng 3. 7.Hoạt lực trừ sâu hàm lượng thể vùi hình thành từ nguồn M1 sau phân lập lần ------------------------------------------------------- 45 Bảng 3. 8. Hoạt lực trừ sâu hàm lượng thể vùi hình thành từ nguồn M2 sau phân lập lần ------------------------------------------------------- 46 Bảng 3. 9. Hoạt lực trừ sâu hàm lượng thể vùi hình thành từ nguồn M3 sau phân lập lần ------------------------------------------------------- 47 Bảng 3. 10. Hoạt lực trừ sâu hàm lượng thể vùi hình thành từ nguồn M1 sau phân lập lần ------------------------------------------------------- 48 Bảng 3. 11. Hoạt lực trừ sâu hàm lượng thể vùi hình thành từ nguồn M2 sau phân lập lần ------------------------------------------------------- 49 Bảng 3.12. Hoạt lực trừ sâu hàm lượng thể vùi hình thành từ nguồn M3 sau phân lập lần ------------------------------------------------------- 50 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vii Bảng 3. 13. Hoạt lực trừ sâu hàm lượng thể vùi hình thành từ nguồn M1 sau phân lập lần ------------------------------------------------------- 51 Bảng 3. 14. Hoạt lực trừ sâu hàm lượng thể vùi hình thành từ nguồn M2 sau phân lập lần 5------------------------------------------------------ 52 Bảng 3. 15. Hoạt lực trừ sâu hàm lượng thể vùi hình thành từ nguồn M3 sau phân lập lần 5------------------------------------------------------ 53 Bảng 3. 16. Các nguồn vi rút NPV sâu khoang tiềm chọn lọc sau lần phân lập------------------------------------------------------ 54 Bảng 3. 17. Hiệu lực gây chết sâu khoang khả sinh thể vùi nguồn vi rút NPV sau tuyển chọn ----------------------------------- 55 Bảng 3. 18. Các chủng NPVSpl sử dụng phân tích phả hệ-------------- 59 Bảng 3. 19. Hàm lượng thể vùi sản phẩm sau tạo dạng --------------- 60 Bảng 3. 20. Hiệu lực gây chết sâu khoang dạng sản phẩm ----------- 60 Bảng 3. 21. Hiệu lực gây chết sâu khoang tuổi 1; chế phẩm phòng thí nghiệm ------------------------------------------------------ 65 Bảng 3. 22. Hiệu lực gây chết non sâu khoang tuổi chế phẩm phòng thí nghiệm ----------------------------------------------- 66 Bảng 3. 23. Hiệu lực phòng trừ sâu khoang bắp cải chế phẩm ------ 68 Bảng 3. 24. Hiệu lực chế phẩm liều lượng phun khác sâu khoang đậu tương (Từ Liêm, 2014) ------------------ 69 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page viii DANH MỤC HÌNH Hình 1. 1. Nhộng (A) Ngài vũ hóa khỏe (B) Nhộng (C) Ngài vũ hóa bị biến dạng nhiễm NPV (D) -------------------------------------- 11 Hình 1. 2. Sâu khoang khỏe (A) sâu khoang chết nhiễm NPV (B) ---- 12 Hình 2. 1. Các bước để phân lập vi rút NPV sâu hại ---------------------------- 30 Hình 3. 1. Thể vùi NPV phân lập từ sâu khoang bị bệnh đồng -------- 39 Hình 3. 2. Thể vùi tinh lưu giữ ---------------------------------------------- 53 Hình 3. 3. Tế bào sâu khoang nhiễm NPV (A); Thể vùi tinh (B) ------------- 57 Hình 3. 4. Kết phân tích PCR mẫu NPV sâu khoang ----------------- 58 Hình 3. 5. Cây phả hệ xây dựng theo phương pháp Neighbor-joining.------- 59 Hình 3. 6. Sản phẩm dạng bột thấm nước đóng gói khối lượng 10gam/gói - 63 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ix CT Mean Homogeneous Groups CT2 87.500 A CT3 85.000 A CT1 70.000 B Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 1.1785 Critical T Value 2,776 Critical Value for Comparison 3.2721 Error term used: LN*CT, DF There are groups (A and B) in which the means are not significantly different from one another. Statistix 8.2 11/07/2014, 10:18:53 SA Randomized Complete Block AOV Table for HL truockhivaonhong Source DF SS MS 15.296 F P LN 7.648 CT 565.352 282.676 10.79 0.0245 Error 104.811 26.203 Total 685.458 Grand Mean 85.470 CV 5.99 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS Nonadditivity 35.3090 35.3090 Remainder F P 1.52 0.3049 69.5015 23.1672 Relative Efficiency, RCB 0,76 Means of HL for CT CT Mean CT1 74.360 CT2 92.310 CT3 89.740 Observations per Mean Standard Error of a Mean 2.9554 Std Error (Diff of Means) 4.1795 Statistix 8.2 11/07/2014, 10:19:00 SA LSD All-Pairwise Comparisons Test of HL for CT Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 90 CT Mean Homogeneous Groups CT2 92.310 A CT3 89.740 A CT1 74.360 B Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 4.1795 Critical T Value 2,776 Critical Value for Comparison 11.604 Error term used: LN*CT, DF There are groups (A and B) in which the means are not significantly different from one another. Sâu tuổi Statistix 8.2 23/06/2014, 10:04:07 SA Randomized Complete Block AOV Table for HL sau ngayphun Source DF SS MS F P LN 44.065 22.032 CT 292.907 146.454 80.21 0.0006 Error Total 344.276 7.304 1.826 Grand Mean 73.190 CV 1.85 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS Nonadditivity 3.71812 3.71812 Remainder F P 3.11 0.1760 3.58548 1.19516 Relative Efficiency, RCB 3,46 Means of HL for CT CT Mean CT1 65.220 CT2 78.260 CT3 76.090 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.7801 Std Error (Diff of Means) 1.1033 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 91 Statistix 8.2 23/06/2014, 10:04:25 SA LSD All-Pairwise Comparisons Test of HL for CT CT Mean Homogeneous Groups CT2 78.260 A CT3 76.090 A CT1 65.220 B Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 1.1033 Critical T Value 2,776 Critical Value for Comparison 3.0632 Error term used: LN*CT, DF There are groups (A and B) in which the means are not significantly different from one another. Statistix 8.2 23/06/2014, 10:07:06 SA Randomized Complete Block AOV Table for HL sau 10 ngayphun Source DF SS MS F P LN 71.139 35.570 CT 207.393 103.696 51.45 0.0014 Error Total 286.594 8.062 2.015 Grand Mean 75.557 CV 1.88 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS Nonadditivity 1.19209 1.19209 Remainder F P 0.52 0.5227 6.86964 2.28988 Relative Efficiency, RCB 4,74 Means of HL for CT CT Mean CT1 68.890 CT2 80.000 CT3 77.780 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.8196 Std Error (Diff of Means) 1.1591 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 92 Statistix 8.2 23/06/2014, 10:07:16 SA LSD All-Pairwise Comparisons Test of HL for CT CT Mean Homogeneous Groups CT2 80.000 A CT3 77.780 A CT1 68.890 B Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 1.1591 Critical T Value 2,776 Critical Value for Comparison 3.2183 Error term used: LN*CT, DF There are groups (A and B) in which the means are not significantly different from one another. Statistix 8.2 11/07/2014, 10:10:15 SA Randomized Complete Block AOV Table for HL truockhivaonhong Source DF SS 4.932 MS F P LN 2.466 CT 320.479 160.240 4.43 0.0966 Error 144.554 36.138 Total 469.965 Grand Mean 78.787 CV 7.63 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS Nonadditivity 84.3732 84.3732 Remainder F P 4.21 0.1327 60.1806 20.0602 Relative Efficiency, RCB 0,70 Means of HL for CT CT Mean CT1 70.450 CT2 84.090 CT3 81.820 Observations per Mean Standard Error of a Mean 3.4708 Std Error (Diff of Means) 4.9084 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 93 Statistix 8.2 11/07/2014, 10:10:27 SA LSD All-Pairwise Comparisons Test of HL for CT CT Mean Homogeneous Groups CT2 84.090 A CT3 81.820 AB CT1 70.450 B Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 4.9084 Critical T Value 2,776 Critical Value for Comparison 13.628 Error term used: LN*CT, DF There are groups (A and B) in which the means are not significantly different from one another. Sâu tuổi Statistix 8.2 23/06/2014, 10:12:06 SA Randomized Complete Block AOV Table for HLacsau ngayphun Source DF SS 1.127 MS F P LN 0.5633 CT 117.661 58.8307 4.09 0.1078 Error Total 176.311 57.523 14.3806 Grand Mean 45.393 CV 8.35 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS Nonadditivity 24.8022 24.8022 Remainder F P 2.27 0.2287 32.7204 10.9068 Relative Efficiency, RCB 0,70 Means of HL for CT CT Mean CT1 40.430 CT2 46.810 CT3 48.940 Observations per Mean Standard Error of a Mean 2.1894 Std Error (Diff of Means) 3.0963 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 94 Statistix 8.2 23/06/2014, 10:12:17 SA LSD All-Pairwise Comparisons Test of HL for CT CT Mean Homogeneous Groups CT3 48.940 A CT2 46.810 A CT1 40.430 A Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 3.0963 Critical T Value 2,776 Critical Value for Comparison 8.5967 Error term used: LN*CT, DF There are no significant pairwise differences among the means. Statistix 8.2 23/06/2014, 10:14:17 SA Randomized Complete Block AOV Table for HL sau ngayphun Source DF SS 3.619 MS F P LN 1.810 CT 207.659 103.830 7.28 0.0464 Error Total 268.292 57.013 14.253 Grand Mean 51.110 CV 7.39 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS F P Nonadditivity 52.2620 52.2620 33.00 0.0105 Remainder 4.7509 1.5836 Relative Efficiency, RCB 0,72 Means of HL for CT CT Mean CT1 44.440 CT2 53.330 CT3 55.560 Observations per Mean Standard Error of a Mean 2.1797 Std Error (Diff of Means) 3.0826 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 95 Statistix 8.2 23/06/2014, 10:14:26 SA LSD All-Pairwise Comparisons Test of HL for CT CT Mean Homogeneous Groups CT3 55.560 A CT2 53.330 A CT1 44.440 B Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 3.0826 Critical T Value 2,776 Critical Value for Comparison 8.5586 Error term used: LN*CT, DF There are groups (A and B) in which the means are not significantly different from one another. Statistix 8.2 23/06/2014, 10:16:12 SA Randomized Complete Block AOV Table for HL truoc vao nhong Source DF SS MS F P LN 21.889 10.944 CT 216.831 108.415 13.04 0.0177 Error Total 271.986 33.267 8.317 Grand Mean 56.817 CV 5.08 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF Nonadditivity Remainder SS MS 8.3115 8.31147 F P 1.00 0.3912 24.9553 8.31844 Relative Efficiency, RCB 0,99 Means of HL for CT CT Mean CT1 50.000 CT2 59.090 CT3 61.360 Observations per Mean Standard Error of a Mean 1.6650 Std Error (Diff of Means) 2.3547 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 96 Statistix 8.2 23/06/2014, 10:16:21 SA LSD All-Pairwise Comparisons Test of HL for CT CT Mean Homogeneous Groups CT3 61.360 A CT2 59.090 A CT1 50.000 B Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 2.3547 Critical T Value 2,776 Critical Value for Comparison 6.5376 Error term used: LN*CT, DF There are groups (A and B) in which the means are not significantly different from one another. Sâu tuổi Statistix 8.2 23/06/2014, 10:26:31 SA Randomized Complete Block AOV Table for HL sau ngayphun Source DF SS MS F P LN 81.254 40.6272 CT 117.661 58.8307 61.07 0.0010 Error Total 202.769 3.853 0.9633 Grand Mean 41.133 CV 2.39 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS Nonadditivity 0.15850 0.15850 Remainder F P 0.13 0.7435 3.69470 1.23157 Relative Efficiency, RCB 10,37 Means of HL for CT CT Mean CT1 36.170 CT2 42.550 CT3 44.680 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.5667 Std Error (Diff of Means) 0.8014 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 97 Statistix 8.2 23/06/2014, 10:26:41 SA LSD All-Pairwise Comparisons Test of HL for CT CT Mean Homogeneous Groups CT3 44.680 A CT2 42.550 A CT1 36.170 B Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 0.8014 Critical T Value 2,776 Critical Value for Comparison 2.2250 Error term used: LN*CT, DF There are groups (A and B) in which the means are not significantly different from one another. Statistix 8.2 23/06/2014, 10:29:30 SA Randomized Complete Block AOV Table for HL sau p hun Source DF SS MS 19.225 F P LN 9.612 CT 216.831 108.415 5.51 0.0709 Error Total 314.716 78.660 19.665 Grand Mean 45.457 CV 9.76 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF Nonadditivity Remainder SS 2.5130 MS F P 2.5130 0.10 0.7736 76.1474 25.3825 Relative Efficiency, RCB 0,80 Means of HL for CT CT Mean CT1 38.640 CT2 47.730 CT3 50.000 Observations per Mean Standard Error of a Mean 2.5603 Std Error (Diff of Means) 3.6208 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 98 Statistix 8.2 23/06/2014, 10:29:39 SA LSD All-Pairwise Comparisons Test of HL for CT CT Mean Homogeneous Groups CT3 50.000 A CT2 47.730 AB CT1 38.640 B Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 3.6208 Critical T Value 2,776 Critical Value for Comparison 10.053 Error term used: LN*CT, DF There are groups (A and B) in which the means are not significantly different from one another. Statistix 8.2 23/06/2014, 10:31:31 SA Randomized Complete Block AOV Table for HL truoc vao nhong Source DF SS MS 15.424 F P LN 7.712 CT 465.070 232.535 8.77 0.0345 Error 106.087 26.522 Total 586.580 Grand Mean 51.937 CV 9.92 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS F P Nonadditivity 90.3823 90.3823 17.27 0.0253 Remainder 15.7042 5.2347 Relative Efficiency, RCB 0,76 Means of HL for CT CT Mean CT1 41.860 CT2 55.810 CT3 58.140 Observations per Mean Standard Error of a Mean 2.9733 Std Error (Diff of Means) 4.2049 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 99 Statistix 8.2 23/06/2014, 10:31:40 SA LSD All-Pairwise Comparisons Test of HL for CT CT Mean Homogeneous Groups CT3 58.140 A CT2 55.810 A CT1 41.860 B Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 4.2049 Critical T Value 2,776 Critical Value for Comparison 11.675 Error term used: LN*CT, DF There are groups (A and B) in which the means are not significantly different from one another. 4. Hiệu lực phòng trừ sâu khoang đồng ruộng Xử lý số liệu đồng bắp cải Statistix 8.2 16/08/2014, 3:53:48 CH Randomized Complete Block AOV Table for HL sau ngayphun Source DF SS 42.99 MS F P LN 21.49 CT 4517.73 2258.87 75.51 0.0007 Error Total 4680.38 119.66 29.91 Grand Mean 56.603 CV 9.66 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF Nonadditivity Remainder SS MS 14.066 14.0664 F P 0.40 0.5722 105.591 35.1971 Relative Efficiency, RCB 0,85 Means of HL for CT CT Mean CT1 71.420 CT2 73.450 CT3 24.940 Observations per Mean Standard Error of a Mean 3.1578 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 100 Std Error (Diff of Means) 4.4658 Statistix 8.2 16/08/2014, 3:53:58 CH LSD All-Pairwise Comparisons Test of HL for CT CT Mean Homogeneous Groups CT2 73.450 A CT1 71.420 A CT3 24.940 B Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 4.4658 Critical T Value 2,776 Critical Value for Comparison 12.399 Error term used: LN*CT, DF There are groups (A and B) in which the means are not significantly different from one another. Statistix 8.2 16/08/2014, 3:56:44 CH Randomized Complete Block AOV Table for HL sau 10 ngayphun Source DF SS MS 192.67 F P LN 96.33 CT 2625.63 1312.82 416.05 0.0000 Error Total 2830.92 12.62 3.16 Grand Mean 69.333 CV 2.56 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS Nonadditivity 2.67894 2.67894 Remainder F P 0.81 0.4349 9.94279 3.31426 Relative Efficiency, RCB 7,70 Means of HL for CT CT Mean CT1 80.510 CT2 82.290 CT3 45.200 Observations per Mean Standard Error of a Mean 1.0256 Std Error (Diff of Means) 1.4504 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 101 Statistix 8.2 16/08/2014, 3:56:54 CH LSD All-Pairwise Comparisons Test of HL for CT CT Mean Homogeneous Groups CT2 82.290 A CT1 80.510 A CT3 45.200 B Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 1.4504 Critical T Value 2,776 Critical Value for Comparison 4.0269 Error term used: LN*CT, DF There are groups (A and B) in which the means are not significantly different from one another. Xử lý số liệu đồng đậu tương Statistix 8.2 16/08/2014, 4:14:55 CH Randomized Complete Block AOV Table for HL sau ngayphun Source DF SS MS F P LN 207.88 103.938 CT 1246.31 415.435 170.48 0.0000 Error Total 11 1468.80 14.62 2.437 Grand Mean 83.848 CV 1.86 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF Nonadditivity Remainder SS MS 0.0192 0.01922 F P 0.01 0.9385 14.6017 2.92035 Relative Efficiency, RCB 8,15 Means of HL for CT CT Mean CT1 77.18 CT2 84.81 CT3 100.00 CT4 73.40 Observations per Mean Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 102 Standard Error of a Mean 0.9013 Std Error (Diff of Means) 1.2746 Statistix 8.2 16/08/2014, 4:15:03 CH LSD All-Pairwise Comparisons Test of HL for CT CT Mean Homogeneous Groups CT3 100.00 A CT2 84.81 B CT1 77.18 C CT4 73.40 D Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 1.2746 Critical T Value 2,447 Critical Value for Comparison 3.1188 Error term used: LN*CT, DF All means are significantly different from one another. Statistix 8.2 16/08/2014, 4:19:59 CH Randomized Complete Block AOV Table for HL sau ngayphun Source DF SS MS F P LN 46.080 23.040 CT 617.451 205.817 368.54 0.0000 Error Total 11 666.882 3.351 0.558 Grand Mean 93.860 CV 0.80 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS Nonadditivity 1.80701 1.80701 Remainder F P 5.85 0.0602 1.54379 0.30876 Relative Efficiency, RCB 7,91 Means of HL for CT CT Mean CT1 81.63 CT2 96.92 CT3 100.00 CT4 96.89 Observations per Mean Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 103 Standard Error of a Mean 0.4315 Std Error (Diff of Means) 0.6102 Statistix 8.2 16/08/2014, 4:20:08 CH LSD All-Pairwise Comparisons Test of HL for CT CT Mean Homogeneous Groups CT3 100.00 A CT2 96.92 B CT4 96.89 B CT1 81.63 C Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 0.6102 Critical T Value 2,447 Critical Value for Comparison 1.4930 Error term used: LN*CT, DF There are groups (A, B, etc.) in which the means are not significantly different from one another. Statistix 8.2 16/08/2014, 4:48:20 CH Randomized Complete Block AOV Table for HL sau 10 ngayphun Source DF SS 2.576 MS F P LN CT 135.045 45.0149 28.56 0.0006 Error Total 11 147.077 9.456 1.2882 1.5760 Grand Mean 96.142 CV 1.31 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS Nonadditivity 1.51882 1.51882 Remainder F P 0.96 0.3729 7.93693 1.58739 Relative Efficiency, RCB 0,92 Means of HL for CT CT Mean CT1 90.76 CT2 96.92 CT3 100.00 CT4 96.89 Observations per Mean Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 104 Standard Error of a Mean 0.7248 Std Error (Diff of Means) 1.0250 Statistix 8.2 16/08/2014, 4:48:28 CH LSD All-Pairwise Comparisons Test of HL for CT CT Mean Homogeneous Groups CT3 100.00 A CT2 96.92 B CT4 96.89 B CT1 90.76 C Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 1.0250 Critical T Value 2,447 Critical Value for Comparison 2.5081 Error term used: LN*CT, DF There are groups (A, B, etc.) in which the means are not significantly different from one another. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 105 [...]... châu Âu, các sản phẩm thương mại khá phổ biến như: Spodopterin (SlNPV), Gemstar (HzNPV), Gypcheck (LdNPV), Mamestrin (MbNPV), Spodex (SeNPV) Còn tại Mỹ và Bắc Mỹ, có các sản phẩm: NPVPlu trừ sâu tơ, NPV- Spl trừ sâu khoang, NPV- Ha trừ sâu xanh, NPV- Se trừ sâu keo da láng, NPV- Mb trừ sâu bướm cải và chế phẩm NPV- Ns trừ sâu róm hại trên cây thông, v.v 1.2.8 Kỹ thuật sử dụng chế phẩm NPV sâu khoang Có... vụ sản xuất chế phẩm thử nghiệm sản xuất chế phẩm trên cơ sở lây nhiễm NPV trên tế bào đã được nuôi nhân sẵn Kết quả đánh giá hiệu quả trừ sâu khoang của chế phẩm NPV có ý nghĩa to lớn trong việc hướng tới xây dựng kỹ thuật sử dụng chế phẩm để phòng trừ sâu khoang Từ đó, hạn chế sử dụng thuốc trừ sâu hóa học độc hại, phục vụ sản xuất nông sản an toàn, góp phần cải thiện và nâng cao chất lượng nông sản. .. dịch lỏng trừ sâu tơ hại bắp cải, Keyun SeNPV dạng bột thấm nước và dạng dịch thể trừ sâu keo da láng, Keyun Spl -NPV dạng bột thấm nước trừ sâu khoang, v.v Để góp phần vào việc khai thác, phát triển và sử dụng các tác nhân sinh học phục vụ phòng trừ sâu hại cây trồng, tôi tiến hành nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu sản xuất chế phẩm NPV (Nucleo Polyhedrosis Virus) trên tế bào sống để phòng trừ sâu khoang. .. được rút ngắn hơn so với sử dụng NPV riêng rẽ 1.3.4 Nghiên cứu sản xuất chế phẩm NPV để phòng trừ sâu hại Việc nghiên cứu sản xuất chế phẩm NPV sâu hại ở nước ta tập trung nhiều từ năm 1985 đến năm 2002 do 2 cơ quan là Viện Bảo vệ thực vật và Trung tâm Bông Nha Hố (nay là Viện nghiên cứu cây bông) tiến hành Tại Viện Bảo vệ thực vật, việc nghiên cứu sản xuất chế phẩm NPV được khởi xướng với sự giúp đỡ... đem về phòng thí nghiệm lây nhiễm vi rút và nghiền lọc lấy dịch thể chứa vi rút để sử dụng Trung tâm đã sản xuất được từ 50- 100 lít/năm chế phẩm NPV dạng thô để phòng trừ loại sâu khoang và sâu xanh hại bông Việc sản xuất chế phẩm NPV theo phương pháp thu thập sâu non sâu khoang, sâu xanh bị nhiễm bệnh ngoài đồng ruộng Đem về nhà nghiền lọc, rồi đem nhiễm trên sâu nuôi trong phòng để tạo chế phẩm sử... litura)” 2 Mục tiêu nghiên cứu của đề tài Nghiên cứu thăm dò sản xuất chế phẩm NPV theo công nghệ nuôi nhân tế bào để phòng trừ sâu khoang hại cây trồng nông nghiệp 3 Yêu cầu cần đạt - Thu thập, phân lập và tuyển chọn được 1-2 nguồn thực liệu vi rút NPV từ đồng ruộng có hoạt lực cao trong gây chết sâu khoang và có khả năng sinh thể vùi lớn - Thử nghiệm sản xuất chế phẩm NPV dạng bột thấm nước trên cơ sở lây... bột thương phẩm với tên là VIRIN Ha, VIRIN Dp để trừ sâu xanh hại thuốc lá, cà chua, sâu róm thông, v.v Tại Trung Quốc đã nghiên cứu phát triển chế phẩm sinh học đa chức năng V-Bt để trừ sâu hại trên hàng vạn hecta bông, thuốc lá, cà chua, đậu đỗ, v.v và nhiều sản phẩm vi rút NPV được sản xuất trên cơ sở nuôi nhân tế bào côn trùng đã được thương mại hóa như Keyun HaNPV dạng dịch lỏng để trừ sâu xanh,... Nghiên cứu tạo dạng và sử dụng chế phẩm NPV để phòng trừ sâu hại cây trồng Nguyễn Văn Cảm và CS (1996) [2]đã nghiên cứu sản xuất thăm dò chế phẩm theo công nghệ nuôi sâu hàng loạt, rồi tiến hành nhiễm vi rút NPV trên sâu non Sau đó, thu hồi các cá thể sâu chết bệnh để tạo chế phẩm Việc tạo dạng sử dụng chế phẩm sau khi sản xuất bằng phương thức lây nhiễm trên sâu non được tiến hành bằng 2 cách: + Dạng... Từ kết quả nghiên cứu và sản xuất chế phẩm NPV sâu khoang và sâu xanh của 2 cơ quan nói trên Nhận thấy để có thể sản xuất chế phẩm qui mô lớn theo phương pháp nuôi sâu cần phải giải quyết một số vấn đề liên quan đến điều kiện trang thiết bị sản xuất và hệ thống kiểm định chất lượng, cũng như hệ thống đảm bảo vô trùng phòng nuôi nhân sâu nguyên liệu Mặt khác, thực tế sản xuất chế phẩm đã gặp phải 2... lượng sản phẩm thường không ổn định Ngoài ra, việc nhân nuôi sâu non để có số lượng lớn phục vụ sản xuất chế phẩm gặp rất nhiều khó khăn Tại Viện Bảo vệ thực vật, việc sản xuất chế phẩm NPV đề phòng trừ sâu đo xanh hại đay và sâu róm hại thông bằng 2 cách: Cách 1 là nuôi sâu non đến tuổi 3- 4 thì nhiễm NPV và thu hồi sâu chết, nghiền lọc lấy dịch đem sử dụng hoặc tạo dạng chế phẩm khô; Cách 2: thu sâu . NPV có hoạt lực cao trong phòng trừ sâu khoang 21 1.3.3. Nghiên cứu tạo dạng và sử dụng chế phẩm NPV để phòng trừ sâu hại cây trồng 21 1.3.4. Nghiên cứu sản xuất chế phẩm NPV để phòng trừ. sản xuất chế phẩm NPV (Nucleo Polyhedrosis Virus) trên tế bào sống để phòng trừ sâu khoang (Spodoptera litura)” 2. Mục tiêu nghiên cứu của đề tài Nghiên cứu thăm dò sản xuất chế phẩm NPV theo. liệu phục vụ sản xuất chế phẩm thử nghiệm sản xuất chế phẩm trên cơ sở lây nhiễm NPV trên tế bào đã được nuôi nhân sẵ n. Kết quả đánh giá hiệu quả trừ sâu khoang của chế phẩm NPV có ý nghĩa