Nghiên cứu sản xuất chế phẩm vi sinh phòng trừ nấm fusarium sp gây bệnh trên cây cà phê tại huyện kon rẫy, tỉnh kon tum

ĐẠI HỌC DÀ NẴNG L00000000000000000000000000000L TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH- MÔI TRƯỜNG -o0o - PHẠM THỊ TÚ UYÊN NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT CHẾ PHẨM VI SINH PHÒNG TRỪ NẤM FUSARIUM SP GÂY BỆNH TRÊN CÂY CÀ PHÊ TẠI HUYỆN KON RẪY, TỈNH KON TUM Ngành: Công nghệ sinh học Người hướng dẫn: TS Đoàn Thị Vân ĐÀ NẴNG - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu khóa luận trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác Giả: Phạm Thị Tú Un LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận văn này, tơi xin bày tỏ lòng cám ơn sâu sắc đến Đồn Thị Vân, người tận tình hướng dẫn, dạy giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn quý thầy cô giáo Trường đại học Sư Phạm Đà Nẵng, đặc biệt thầy cô khoa Sinh – Môi trường giúp đỡ tơi q trình học tập hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tơi xin trân trọng cảm ơn cô chủ vườn cà phê huyện Kon Rẫy, tỉnh Kon Tum tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ trình khảo sát lấy mẫu để thực đề tài Cuối xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, người thân bạn bè, người động viên, giúp đỡ, tạo điều kiện vật chất tinh thần cho suốt thời gian học tập làm luận văn EM XIN TRÂN TRỌNG CẢM ƠN ! Đà Nẵng, ngày 01 tháng 05 năm 2017 Sinh viên Phạm Thị Tú Uyên MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT .7 DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC HÌNH ẢNH ĐỒ THỊ .9 MỞ ĐẦU 1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI Ý NGHĨA KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 CÂY CÀ PHÊ 1.2 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU .4 1.2.1 Đặc điểm tự nhiên - Vị trí địa lý .4 1.2.2 Đặc điểm kinh tế - xã hội 1.2.3 Tiềm lợi 1.2.4 Thực trạng trồng cà phê Kon Rẫy .5 1.3 CHẾ PHẨM VI SINH 1.3.1 Khái niệm 1.3.2 Phân loại 1.4 CÁC CHỦNG VI SINH VẬT NGHIÊN CỨU .7 1.4.1 Vi khuẩn Bacillus sp 1.4.2 Nấm mốc Trichoderma sp .8 1.4.3 Nấm bệnh Fusarium sp 1.5 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU NẤM BỆNH VÀ CHẾ PHẨM PHÒNG TRỪ CHÚNG 11 1.5.1 Tình hình nghiên cứu nấm bệnh Fusarium sp 11 1.5.2 Tình hình nghiên cứu sản xuất chế phẩm phòng trừ nấm Fusarium sp 13 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 16 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 16 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.3.1 Phương pháp thu thập mẫu 17 2.3.2 Phương pháp phân lập vi sinh vật 17 2.3.3 Phương pháp bảo quản giống 19 2.4.4 Phương pháp xác định, đánh giá hiệu lực kháng nấm bệnh vi sinh vật 19 2.3.5 Phương pháp nhuộm Gram 21 2.3.6 Phương pháp nhuộm bào tử 21 2.3.7 Phương pháp tạo chế phẩm 22 2.3.8 Phương pháp lây bệnh nhân tạo 24 2.3.9 Phương pháp định lượng vi sinh vật chế phẩm 25 2.3.10 Phương pháp xử lý số liệu 25 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 26 3.1 PHÂN LẬP VI SINH VẬT 26 3.1.1 Phân lập nấm bệnh Fusarium sp 26 3.1.2 Phân lập vi khuẩn 27 3.1.3 Phân lập nấm mốc 28 3.2 ĐÁNH GIÁ HIỆU LỰC KHÁNG NẤM BỆNH CỦA VI SINH VẬT 30 3.2.1 Đánh giá hiệu lực kháng nấm bệnh vi khuẩn 30 3.2.2 Đánh giá hiệu lực kháng nấm bệnh nấm mốc 31 3.3 KẾT QUẢ QUAN SÁT, ĐỊNH DANH CÁC CHỦNG VI SINH VẬT 33 3.3.1.Kết quan sát, kiểm nghiệm định danh 6/31 chủng vi khuẩn 33 3.3.2 Kết quan sát, định danh 3/9 chủng nấm mốc 36 3.4 NGHIÊN CỨU TẠO CHẾ PHẨM VI SINH PHÒNG TRỪ NẤM FUSARIUM SP 38 3.4.1 Kết kiểm tra khả đối kháng chủng vi sinh vật tuyển chọn làm chế phẩm 38 3.4.2 Kết nghiên cứu tạo chế phẩm 39 3.5.ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA CHẾ PHẨM TRONG ƯƠM HẠT CÀ PHÊ 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT CP CPVS GTSX PBS PDA PTN VK VSV Cà phê Chế phẩm vi sinh Giá trị sản xuất Phosphate Buffered Saline Potato Dextro Agar Phịng thí nghiệm Vi khuẩn Vi sinh vật DANH MỤC BẢNG BIỂU Tên Bảng TT Bảng 1.1 Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Diện tích sản lượng trồng cà phê qua năm huyện Kon Rẫy phân bố vi khuẩn phân lập vườn cà phê khác huyện Kon Rẫy, tỉnh Kon Tum phân bố vi khuẩn phân lập theo mùa phân bố nấm mốc phân lập vườn cà phê khác huyện Kon Rẫy, tỉnh Kon Tum Trang 27 28 28 Bảng 3.4 phân bố nấm mốc phân lập theo mùa 29 Bảng 3.5 Kết hoạt tính kháng nấm bệnh vi khuẩn 30 Bảng 3.6 Kết kháng nấm Fusarium sp nấm mốc 31 Bảng 3.7 Kết quan sát vi khuẩn đối kháng nấm bệnh 34,35 Bảng 3.8 Bảng 3.9 Bảng 3.10 Bảng 3.11 Mơ tả phân loại hình dạng chủng vi khuẩn có khả đối kháng nấm bệnh Đặc điểm chủng nấm mốc N1.3, N1.2, N1.4 So sánh số lượng bào tử thu công thức lên men tạo chế phẩm Kết tỉ lệ nảy mầm 35 37 40 42 DANH MỤC HÌNH ẢNH ĐỒ THỊ Ký hiệu Tên hình Hình Trang Hình 2.1 Sơ đồ thí nghiệm 16 Hình 2.2 Ví trí lấy mẫu đồ 17 Hình 2.3 Sơ đồ tóm tắt quy trình sản xuất chế phẩm 24 Hình 3.1 Mẫu bệnh lấy vườn 26 Hình 3.2 Tản nấm Fusarium sp 26 Hình 3.3 Bào tử nấm Fusarium sp phân lập 27 Hình 3.4 Kết kháng nấm bệnh Fusarium chủng Bacillus CF1.10, CF1.11, CF4.9 30 Hình 3.5 Tản nấm Fusarium sp đối chứng sau ngày ni cấy 32 Hình 3.6 Hiệu ức chế nấm bệnh Fusarium sp nấm N1.1 32 Hinh 3.7 Hình 3.8 Hình 3.9 Hình 3.10 Hiệu ức chế nấm bệnh Fusarium sp chủng nấm N1.2, N1.3 N3.8 sau ngày nuôi cấy Tản nấm N1.3, N1.2, N1.1 phát triển môi trường PDA Kết quan sát chủng nấm mốc N1.3, N1.2, N1.1 kính hiển vi( 100x.) Sự phát triển chủng CF1.11 N1.1 sau ngày cấy đĩa thạch 32 36 37 38 Hình 3.11 Chế phẩm VSV sau sấy khơ đóng gói: 40 Hình 3.12 Hạt cà phê giống khơng nảy mầm 42 Hình 3.13 Cây cà phê nảy mầm 43 MỞ ĐẦU TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Cà phê công nghiệp lâu năm trồng nước ta 100 năm nay, mười mặt hàng xuất chủ yếu Việt Nam Được xác định công nghiệp xuất chủ lực, sau lúa, loại đóng vai trị quan trọng ngành nông nghiệp Việt Nam [2] Năm 2012 Việt Nam xuất 1,76 triệu cà phê, đạt kim ngạch 3,73 tỉ USD, tăng số lượng giá trị so với năm 2011 [29] Ngành cà phê tham gia có hiệu vào chương trình kinh tế xã hội định canh định cư, xóa đói giảm nghèo, tạo cơng ăn việc làm cho hàng triệu lao động có phần đơng bào dân tộc người miền núi, đặc biệt vùng đệm vườn quốc gia, khu bảo tồn thiên nhiên Nhờ sống ổn định cho người dân, hoạt động khai thác rừng, săn bắt thú giảm đáng kể Kon Tum năm tỉnh Tây Nguyên có tiềm đất đai điều kiện sinh thái thuận lợi để phát triển cà phê Diện tích cà phê tỉnh Kon Tum năm 2012 12,158 ha, diện tích thu hoạch 10,805 với sản lượng đạt mức 27 nghìn [2] Cũng nhiều địa bàn khác tỉnh, huyện Kon Rẫy có điều kiện thuận lợi để phát triển cà phê Người dân sống địa bàn huyện Kon Rẫy phần lớn sống chủ yếu dựa vào nông nghiệp, mà cà phê trồng mang lại nguồn thu nhập cao cho người dân Tuy nhiên, điều kiện nước ta khơng thích hợp với cà phê mà phù hợp với nhiều loại vi sinh vật (VSV ) gây bệnh cho cây, vườn cà phê xuất nhiều bệnh gây thiệt hại không nhỏ cho nông dân tỉnh Kon Tum nói riêng nước nói chung Trong đó, bệnh thối rễ nấm Fusarium sp cho bệnh gây hại cho cà phê Nấm Fusarium sp gây thối cổ rễ, đốm [3] Chúng xâm nhiễm vào rễ non rễ bị thương tuyến trùng gây Bệnh ảnh hưởng lớn đến sinh trưởng, phát triển suất cà phê Để trị bệnh thối rễ cho cà phê, người dân thường phun loại thuốc bảo vệ thực vật, thuốc hóa học, CF3.6 CF 4.9 Bảng 3.8: Mơ tả phân loại hình dạng chủng vi khuẩn có khả đối kháng nấm bệnh Kí hiệu chủng CF1.1 CF1.10 CF1.11 Đặc điểm hình thái Gram Hình dạng Bào tử + Hình que Có + Hình que Có + Hình que Có CF1.12 + Hình que Có CF3.6 + Hình que Có CF4.9 + Hình que Có STT Đặc điểm khuẩn lạc lồi nhẵn, trắng đục Tròn, nhẵn, trắng Khuẩn lạc màu trắng, bám chặt vào môi trường nhắn nhúm Trơn, nhầy, màu phớt cam, lan dần xung quanh Trịn, màu trắng đục, mép có cưa Trơn, lan dần xung quanh, màu phớt hồng Kết thu cho thấy: - Nhuộm Gram : Ở vật kính 100, chúng tơi thấy vi khuẩn có dạng trực khuẩn, xếp thành chuỗi dài, bắt màu tím, điều chứng tỏ chủng vi khuẩn phân lập thuộc nhóm Gram (+) 35 - Nhuộm bào tử phương pháp nhuộm Carbolic Fuchsin: Khi tiến hành nhuộm bào tử quan sát kính hiển vi vật kính 100 xác định VK sinh nội bào tử Theo hình thái khuẩn lạc số đặc điểm sinh học chủng vi sinh vật đánh giá sơ thuộc chi Bacillus dựa theo khóa phân loại Bergey 3.3.2 Kết quan sát, định danh 3/9 chủng nấm mốc Tiến hành nhuộm, quan sát định danh 3/9 chủng nấm mốc có hoạt tính đối kháng mạnh với nấm Fusarium sp Kết thể hình 3.8, hình 3.9 bảng 3.9 a) b) c) N1.1 Hình 3.8: Tản nấm N1.3, N1.2, N1.1 phát triển môi trường PDA a) Nấm Aspergillus sp N1.3 b) Nấm Aspergillus sp N1.2 c) Nấm Trichoderma sp N1.1 36 a) b) c) Hình 3.9: Kết quan sát chủng nấm mốc N1.3, N1.2, N1.1 kính hiển vi( x100) a) Nấm Aspergillus sp N1.3 b) Nấm Aspergillus sp N1.2 c) Nấm Trichoderma sp N1.1 Bảng 3.9: Đặc điểm chủng nấm mốc N1.1, N1.2, N1.3 Bào tử Kí hiệu Sợi nấm cuống sinh Hình thái khuẩn lạc bào tử chủng N1.1 Khuẩn lạc ban đầu trắng, sau Sợi nấm không màu, phân ngày chuyển qua màu lục, nhánh phức tạp, có vách cầu, màu hệ sợi nấm sinh trưởng mạnh, ngăn, cuống bào tử hình xanh lục khơng tiết sắc tố N1.2 nhạt Khuẩn lạc ban đầu có màu Sợi nấm khơng màu, phân Bào tử hình trắng, sau ngày chuyển qua nhánh, có vách ngăn Giá cầu, màu thể bào tử nhẵn, bọng xanh đậm màu xanh đen, hệ sợi nấm sinh trưởng mạnh, không tiết sắc tố Khuẩn lạc rắn màu đen, sợi N1.3 chai Bào tử hình nấm xốp màu xám trắng, sinh trưởng nhanh, không tiết sắc tố đính hình cầu, thể bình tầng Sợi nấm khơng màu, phân Bào tử hình nhánh, có vách ngăn Giá cầu, màu đen bào tử thể nhẵn, bọng đính hình chùy, thể bình tầng 37 Dựa vào sai khác quan sát đặc điểm hình thái, màu sắc khuẩn lạc mơi trường ni cấy; quan sát kính hiển vi hình dạng cuống sinh bào tử, bào tử sợi nấm Áp dụng khóa phân loại Robert A Sam Son, Phoma1984 [7] Kubbick Harman (1998) [36], [37] định danh 3/9 chủng nấm có khả đối kháng trung bình mạnh Trong chủng N1.1 thuộc chi Trichoderma sp chủng N1.2, N1.3 thuộc chi Aspergillus sp 3.4 NGHIÊN CỨU TẠO CHẾ PHẨM VI SINH PHÒNG TRỪ NẤM FUSARIUM SP 3.4.1 Kết kiểm tra khả đối kháng chủng vi sinh vật tuyển chọn làm chế phẩm Từ kết cho thấy chủng CF1.11 N1.1 có hoạt tính đối kháng nấm bệnh mạnh Tiến hàn chọn chủng để tạo CPVS CPVS tạo từ chủng VSV, cần tiến hành kiểm tra tính đối kháng chủng VSV tuyển chọn Chủng VK Bacillus CF1.11 nấm mốc Trichoderma N1.1 cấy đối xứng đĩa thạch theo dõi phát triển ngày Kết thể hình 3.10 Hình 3.10: Sự phát triển chủng CF1.11 N1.1 sau ngày cấy đĩa thạch 38 Kết hình cho thấy sau ngày cấy chuyền chủng VSV CF1.11 N1.1 phát triển tốt môi trường PDA, khơng có tượng ức chế lẫn chủng Như tạo CPVS đa chủng từ chủng VSV 3.4.2 Kết nghiên cứu tạo chế phẩm chủng VSV (vi khuẩn Bacillus CF1.11 nấm mốc Trichoderma N1.1) có khả đối kháng mạnh với nấm bệnh Fusarium sp sử dụng để tiến hành lên men xốp tạo chế phẩm Để xác định hiệu chủng vi sinh vật riêng lẻ lựa chọn tỉ lệ chất mang tốt nhất, tiến hành tạo công thức ( CT) chế phẩm với tỉ lệ chất mang khác Chất mang lựa chọn có giá thành hợp lý, khơng bị hạn chế nguồn nguyên liệu, đảm bảo nguồn cung cấp sản xuất với số lượng lớn chế phẩm có CT sau:  Chế phẩm chứa vi khuẩn Bacillus: + CT1: 10% rỉ đường 30% bột đậu tương, 60% cám gạo  Chế phẩm đa chủng Bacillus sp Trichoderma sp.: + CT2: 10% rỉ đường, 15% bột đậu tương, 30% cám gạo, 45% thóc + CT3: 10% rỉ đường, 15% bột đậu tương, 45% cám gạo, 30% thóc + CT4: 10% rỉ đường, 15% bột đậu tương, 40% cám gạo, 40% thóc  Chế phẩm chứa nấm Trichoderma sp.: + CT 5: 100% thóc Chủng Bacillus tuyển chọn ni cấy riêng rẽ môi trường lỏng, chủng Trichoderma tuyển chọn nuôi cấy hộp petri môi trường thạch PDA Khi trình sinh trưởng chủng tuyển chọn đạt tốt tiến hành tiếp giống vào chất mang theo tỷ lệ 10%, trình lên men xốp trì điều kiện thơng khí, vơ trùng nhiệt độ 30 oC, đảo trộn định kỳ nhằm đạt hiệu lên men tối ưu Sau kết thúc q trình lên men, chế phẩm sấy khơ ẩm độ khoảng 10 %( đạt tiêu định lượng bắt buộc phân bón- Cơng văn số 2114/ BCT-HC) đóng gói 39 a) c) b) d) e) Hình 3.11: Chế phẩm VSV sau sấy khơ đóng gói a) CT1, b) CT2, c) CT3, d) CT4, e) CT5 Sử dụng công thức chế phẩm khác nhau, sau tiến hành lên men xốp chủng VSV tuyển chọn, thu nhận chế phẩm có số lượng bào tử VSV khác nhiều Kết phân tích mật độ vi sinh có chế phẩm cơng thức tóm tắt bảng 3.10 sau: Bảng 3.10 Số lượng bào tử thu công thức lên men tạo chế phẩm Công thức Số lượng bào tử (x 10 CFU/g) Bacillus sp Trichoderma sp CT1 7,12 a CT2 4,60 b 7,95 a CT3 6,32 c 6,71 b CT4 4,49 b 7,30 b CT5 11,23 d Ghi chú: Các số cột có chữ theo sau(a, b, ) khác sai khác có ý nghĩa mặt thống kê mức α= 0,05 40 Kết cho thấy: Đối với chủng Bacillus sp ta thấy CT chứa Bacillus sp thu mật độ Bacillus lớn (7,12 x 10 CFU/g) Tiếp theo CT3 với mật độ 6,32 x 10 CFU/g Ở CT 2, CT4 mật độ VK hẳn so với CT1 CT3 Ta thấy CT có tỉ lệ cám gạo cao mật độ Bacillus thu lớn Điều chứng tỏ tỷ lệ cám gạo có thành phần chất mang ảnh hưởng đến khả sinh trưởng phát triển Bacillus Đối với chủng Trichoderma sp., ta thu mật độ bào tử Trichoderma lớn CT (11,23 x 10 CFU/g), công thức chứa nấm Trichoderma với chất mang 100% thóc Tiếp đến CT với mật độ 7,95 x 10 CFU/g cuối CT 3, CT4 Ta kết luận với CT có tỉ lệ thóc cao lượng bào tử Trichoderma thu lớn, tỉ lệ thóc có thành phần chất mang ảnh hưởng đến khả sinh trưởng sinh bào tử nấm Trichoderma Như vậy, dễ dàng nhận thấy lên men xốp riêng lẻ chủng Bacillus sp Trichoderma sp ta thu chế phẩm có mật độ VSV cao nhất, cịn lên men chúng với tạo chế phẩm đa chủng mật độ chúng chế phẩm giảm đáng kể Điều chủng phù hợp với CT chất mang khác Với chất mang thóc tạo điều kện thơng thống, tơi xốp dễ dàng cho sợi nấm Trichoderma phát triển, nhiên kích thước hạt thóc lớn khiến Bacillus khó sinh trưởng Mặt khác với chất mang cám gạo bột đậu tương với kích thước nhỏ dễ dàng cho Bacillus sinh trưởng có độ tơi xốp khơng cao nên nấm Trichoderma phát triển 3.5 ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA CHẾ PHẨM TRONG ƯƠM HẠT CÀ PHÊ Không phải tất chủng VSV kháng nấm có hoạt tính mơi trường đất, phun mơi trường đất nhiều yếu tố tác động đến VSV ni cấy phịng thí nghiệm với điều kiện dinh dưỡng, nhiệt độ, ẩm độ tối ưu hóa cho chúng sinh trưởng tốt Ngồi mơi trường đất, điều kiện nhiệt độ độ ẩm thường xuyên thay đổi tùy vào điều kiện thời tiết, mùa vụ, nhiệt 41 độ ngày đêm, đất ruộng có nhiều VSV khác, chúng cạnh tranh với VSV môi trường sống, dinh dưỡng, làm hoạt tính VSV kháng nấm Để đánh giá khả kháng nấm bệnh Fusarium sp cà phê chế phẩm ngồi mơi trường đất, tơi tiến hành thí nghiệm sau: - Chuẩn bị thùng xốp lớn chứa: 20% cát + 30% phân bò + 50% đất qua xử lí - Lây bệnh nhân tạo vào đất cho mẫu cách trộn bào tử nấm bệnh vào đất - Gieo hạt cà phê xử lý vào đất, mẫu gieo 10 hạt - Sau ngày trộn chế phẩm vào mẫu để lại mội mẫu đối chứng không trộn chế phẩm Kết thí nghiệm thể bảng 3.11, hình 3.12 hình 3.13 Bảng 3.11 Kết tỉ lệ nảy mầm Mẫu Tỉ lệ nảy mầm Mẫu dối chứng 30% Mẫu CT ( chế phẩm Bacillus) 60% Mẫu CT 70% Mẫu CT3 50% Mẫu CT4 60% Mẫu CT5 ( chế phẩm Trichoderma) 80% Hình 3.12: Hạt cà phê giống khơng nảy mầm 42 b a Hình 3.13: Cây cà phê nảy mầm a) Mẫu đối chứng không dùng chế phẩm; b) Mẫu sử dụng chế phẩm CT5 Từ hình 3.14 dễ dàng nhìn thấy hạt cà phê giống khơng nảy mầm có màu đen bị bao phủ sợi nấm màu trắng hồng, chứng tỏ hạt cà phê bị nhiễm nấm Fusarium sp khiến hạt nảy mầm Kết thí nghiệm mẫu có sử dụng chế phẩm tỉ lệ nảy mầm cao hẳn mẫu đối chứng không sử dụng chế phẩm Trong mẫu sử dụng chế phẩm CT5 có tỉ lệ nảy mầm cao Như vậy, chế phẩm CT5 có hiệu cao việc phịng trừ nấm Fusarium sp Thí nghiệm tiếp tục theo dõi để quan sát phát triển cà phê sau nảy mầm 43 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Phân lập nấm bệnh Fusarium, 31 chủng VK chủng nấm mốc từ mẫu thu thập vườn cà phê khác địa bàn huyện Kon Rẫy, tỉnh Kon Tum Xác định chủng VK thuộc chi Bacillus, chủng nấm mốc thuộc chi Trichoderma chủng nấm mốc thuộc chi Aspergillus Xác định 13 chủng có khả đối kháng với nấm bệnh Fusarium sp., gồm chủng VK Bacillus chủng nấm mốc Trong đó, có chủng nấm N1.1, N1.3 chủng vi khuẩn CF 1.10, CF 1.11, CF 4.9 có hoạt tính đối kháng mạnh với nấm Fusarium sp Tuyển chọn chủng VK Bacillus CF1.11 nấm Trichoderma N1.1 có khả đối kháng nấm Fusarium mạnh làm đối tượng nghiên cứu tạo chế phẩm sinh học Chế tạo loại chế phẩm sinh học phòng trừ nấm Fusarium sp cà phê Xác định chế phẩm CT5 tạo từ chủng nấm Trichoderma sp với chất mang 100% thóc cho hiệu phịng, trừ nấm bệnh tốt trình ươm hạt cà phê KIẾN NGHỊ Do thời gian giới hạn đề tài, với điều kiện thực nghiệm hạn chế nên việc nghiên cứu sản xuất chế phẩm chưa tiến hành đầy đủ Vì vậy, đề tài kiến nghị số phương hướng nghiên cứu cần thực sau: Nghiên cứu tìm thêm chất mang phù hợp để tạo chế phẩm đa chủng Nghiên cứu điều kiện sản xuất bảo quản chế phẩm, từ hồn thiện thêm quy trình sản xuất chế phẩm sinh học phòng trừ nấm bệnh Fusarium sp Tiếp tục nghiên cứu, đánh giá tác động chế phẩm CT5 nấm bệnh vườn ươm cà phê huyện Kon Rẫy, Tỉnh Kon Tum 44 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Ngô Anh (2009), “Nấm học”, NXB Đại học Huế, Huế Bộ nông nghiệp phát triển nông thôn (2012), Báo cáo trạng sản xuất, giải pháp phát triển trồng tái canh cà phê thời gian tới Cục Trồng Trọt, 19tr Nguyễn Văn Chiến cộng (2007), “Giáo trình quản lý sâu bệnh hại cà phê”, Bộ nông nghiệp phát triển nông thôn Cục Thống kê Kon Tum (2015), “Niên giám thống kê”, Kon Tum Nhữ Viết Cường cộng (2013), Một số kết phân lập bệnh nấm gây hại vườn ươm cà phê Chiềng Mung Sơn La Cao Ngọc Diệp, Nguyễn Văn Thành, Nguyễn Văn Bá (2005),”Giáo trình mơn nấm học” Viện nghiên cứu phát tiển công nghệ sinh học Nguyễn Lân Dũng, Giáo trình vi sinh vật học, tr 161-366 Nguyễn Lân Dũng (dịch) (1983), “Thực hành vi sinh vật học”, NXB Đại Học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội Nguyễn Lân Dũng, Bùi Xuân Đồng, Lê Đình Lương (1982), “Vi nấm”, NXB khoa học kĩ thuật Hà Nội 10 Nguyễn Lân Dũng Dương Văn Hợp (2007), "Giới thiệu số kỹ thuật bảo quản vi sinh vật" Trung tâm Công nghệ Sinh học, Đại học Quốc gia Hà Nội 11 Vũ Minh Đức, Ngô Tự Thành, Bùi Thị Việt Hà, Chu Văn Mẫn, Nghiên cứu hoạt tính enzym ngoại bào số chủng Bacillus phân lập khả ứng dụng chúng xử lí nước thải, Khoa Sinh, Trường đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN 12 Phan Duy Huynh (2011), Giải pháp xóa đói giảm nghèo huyện Kon Rẫy, tỉnh Kon Tum, luận văn thạc sỹ kinh tế, Đại học Đà Nẵng 13 Phạm Thị Lịch ( 2013), nghiên cứu tạo chế phẩm enzyme chitinase từ chủng Trichoderma sp phòng từ vi nấm gây hại cà phê, luận văn thạc sỹ sinh học, trường Đại học Sư phạm TP Hồ Chí Minh, TP Hồ Chí Minh 45 14 Nguyễn Đức Lượng, Phan Thị Huyền, Nguyễn Ánh Tuyết( 2003), Thí nghiệm vi sinh vật học, NXB Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh 15 Vũ Triệu Mân, Lê Lương Tề (1998), “Bệnh nông nghiệp”, NXB Hà Nội, Hà Nội 16 Trần Tú Ngà, Đoàn Văn Lư, Phạm Thị Hương, Ngơ Bích Hảo (1993), Kết bước đầu nghiên cứu khoa học, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, tr 82-83.15 17 Nguyễn Hoàng Nghĩa, Nguyễn Văn Thành Phạm Quang Thu (2012),Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh hợp chất hóa học có hoạt tính kháng nấm gây bệnh dòng keo tai tượng khảo nghiệm Thừa Thiên Huế, tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nơng thơn 18 TS Lưu Hồng Ngọc cộng (2009), Nghiên cứu công nghệ sản xuất dịch chiết rễ chút chít Rumex crispus định hướng làm thuốc trừ nấm thảo mộc thân thiện với mơi trường, viện Hóa học Cơng nghiệp Việt Nam, tổng cơng ty Hóa chất Việt Nam 19 PGS.TSKH Nguyễn Xuân Nguyên (2004), Công nghệ xử lý rác thải chất thải rắn, Trung tâm tư vấn, chuyển giao công nghệ nước môi trường 20 Đoàn Triệu Nhạn, Hoàng Thanh Tiệm Phan Quốc Sùng (1999), "Cây cà phê việt nam" 21 Phịng Cơng nghệ Sinh học Enzyme, Nghiên cứu sử dụng chế phẩm sinh học từ vi khuẩn đối kháng để kiểm sốt nấm hại trồng, Viện Cơng nghệ Sinh học (2011) 22 Phan Thị Bích Phượng(2013), Nghiên cứu sử dụng số chủng vi khuẩn Bacillus sp để sản xuất chế phẩm sinh học xử lý nước thải TP Đà Nẵng, khoá luận tốt nghiệp, trường Đại học Sư Phạm – Đại học Đà Nẵng 23 Lê Xuân Phương (2001), “Nấm mốc”, Vi sinh vật công nghiệp, NXB Xây dựng, Hà Nội 24 Nguyễn Thị Chúc Quỳnh, Trần Văn Huy cộng (2016), Nghiên cứu sản xuất, ứng dụng chế phẩm sinh học SH-BV1 phòng trừ tuyến trùng nấm bệnh 46 hại rễ hồ tiêu, cà phê Gia Lai Đăk Nông, Viện khoa học nông nghiệp Việt Nam 25 Nguyễn Thảo(2011) , Sử dụng chế phẩm vi sinh nc26 xử lý rác thải hữu phế thải nông nghiệp, Mạng thông tin khoa học công nghệ Bác Giang 26 Nguyễn Thị Trần Thụy (2009), Nghiên cứu tuyển chọn chủng Bacillus phân lập từ đất vườn sinh protease kiềm, luận văn thạc sỹ sinh học, Đại học sư phạm TP Hồ Chí Minh, TP Hồ Chí Minh 27 Trần Thị Thúy (2013), Nghiên cứu tuyển chọn sản xuất chế phẩm đơn dòng nầm đối kháng Trichoderma phòng trừ tác nhân gây bệnh thối đen ca cao, luận văn thạc sỹ khoa học, Khoa môi trường, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN 28 Trần Công Tiến (2009), Nghiên cứu sử dụng phụ phế phẩm bón cho cà phê vối thời kì kinh doanh huyện CưMGar tỉnh Đắk Lăk, Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp, Đại học Tây Nguyên 29 Tổng cục Thống kê (2005, 2006, 2007, 2008, 2009, 2010, 2011, 2012), Niên giám thống kê, NXB Thống kê Hà nội 30 PGS.TS Nguyễn Kim Vân cộng (2010), Kết nghiên cứu chế phẩm sinh học phịng trừ bệnh hại có nguồn gốc đất miền Bắc Việt Nam 31 Nguyễn Văn Viên, Nguyễn Thị Tú, Bùi Văn Công (2011), nghiên cứu sản xuất sử dụng chế phẩm nấm đối kháng Trichoderma viride phòng trừ số nấm bệnh phòng trừ vùng rễ khoai tây, đậu tương, Tạp chí Khoa học Phát triển, Tập 10, số 1: 95 – 102 32 Burgess L.W cộng (2009), Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam, Trung tâm Nghiên cứu Nông nghiệp Quốc tế Australia (ACIAR) 47 Tiếng Anh 33 Bertrand, K.G and Jack, J.P (1998), “Molecular biotechnology priniciples and application of recombinant DNA” 2nd edition , ASM Press Washington, D.C potential for biocontrol Ann Rev Phytopath, 23:23-54 34 Booth C (1971), Fusarium nomenclature, The genus Fusarium, chủ biên, Commonweath Mycological Institute, Kew, Surrey 35 Aaron P Davis cộng (2006), An annotated taxonomic conspectus of the genus Coffea (Rubiaceae), Botanical Journal of the Linnean Society 36 Harman, G E and Kubicek, C P (ed) (1998), Trichoderma and Gliocladium, vol I, Basic biology, taxonnomy and genetics., p.6-10, 64-69 37 Harman, G E and Kubicek, C P (ed) (1998), Trichoderma and Gliocladium, vol II, Enzimes, Biological control and commercial applications 38 C-T Lo, EB Nelson, GE Harman (1996), Biological control of turfgass diseases with a rhizosphere competent strain of Trichoderma harzianum, Plant Dis 80, pp 736-714 39 Julien J Guadet J, Lajay J.F, Brygoo Y (1989), Phylogeny of some Fusarium, as dertermined by large_subumit rARN sequence comparison 40 Papavizas (1985), Trichoderma and Gliocladium: Biology, ecology, and potential for biocontrol, Ann Rev Phytopath, 23: 23-54 41 Gagkaeva T (2008), Introduction to Fusarium taxonomy, Russia St Petersburg 42 Hamel C Vujanovic V, Yergeau E, Arnaud M.S (2006), Biodiversity and Biogeopraphy of Fusarium Species from Northeastern North American Asparagus Fields Based on Microbiogical and Molercular Approaches, Springer Science anh Business Media 43 Nirenberg HI Gerlach W (1982), The genus Fusarium - a pictorial atlas 44 Knight T.E Burgess L.W, Len Tesoriero, Hien Thuy Phan (2008), Diagnotic manual for plant disease in Vietnam, Australian Centre for International Agricultural Research 48 45 Heitman J Lin X (2005), "Chlamydospre Formation during Hyphal Growth in Cryptococcus neoformans", American Society for Microbioly 49 ... bệnh Fusarium sp cà phê huyện Kon Rẫy, tỉnh Kon Tum, ứng dụng chúng sản xuất thử nghiệm chế phẩm vi sinh phòng trừ nấm Fusarium sp CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 CÂY CÀ PHÊ Cây cà phê có nguồn gốc từ... loài Fusarium spp từ hạt vỏ lồi ngơ 1.5.2 Tình hình nghiên cứu sản xuất chế phẩm phòng trừ nấm Fusarium sp a Tình hình nghiên cứu nước Đã có nhiều nghiên cứu chế phẩm sinh học phòng trừ nấm Fusarium. .. sp gây bệnh thối cổ rễ cà phê huyện Kon Rẫy, tỉnh Kon Tum? ?? MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI Phân lập tuyển chọn chủng VSV có hoạt tính đối kháng nấm Fusarium sp gây bệnh thối cổ rễ cà phê huyện Kon Rẫy, tỉnh