Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường Nghiên cứu về hoá học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường
Trang 1BO Y TE
TRUONG DAI HOC DUOC HA NOI
Ø2 #@» 2@OoKA BAR PHAM THI DUYEN
| NGHIEN CUU VE HOA HOC VA MOT
SO TAC DUNG SINH HOC CUA BAI
THUOC THEO HUONG CHUA
DAI THAO DUONG KHOÁ LUẬN TÓT NGHIỆP DƯỢC SỸ
Người hướng dẫn: PGS - TS Vũ Văn Điền
Nơi thực hiện: — 1 Bộ môn Dược học cổ truyền
2 Bộ môn Dược lực
3 Viện Dược liệu TW
Thời gian thực hiện : tháng 8/2009 đến tháng 5/2010
Trang 2LOI CAM ON
Em xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Thây giáo,
PGS -TS Vũ Văn Điền vì sự tận tụy nhiệt tình chỉ bảo của Thây trong suốt quá trình em thực liện khoá luận này
Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới các Thây, Cô giáo, các
anh chị kỹ thuật viên bộ môn Dược học cỗ truyễn, bộ môn Dược lực trường Đại học dược Hà Nội, các cán bộ, kỹ thuật viên khoa sinh hóa - dược lý Viện Dược liệu TH, gia đình, bạn bè và đồng nghiệp đã tạo điều kiện giúp đỡ em hoàn thành khóa luận
Hà Nội, tháng 5/2010
Trang 3
MUC LUC DAT VAN DE
CHUONG I: TONG QUAN Trang
1.1 Vài nét về bệnh đái tháo đường .e- «- ss°5s<ssesexsexsessee 1
1.1.1 Theo quan điểm y hoc hién Gaii ccecsccecsecscsscescsecseencencsecsseneenceees 1
1.1.2 Theo quan điểm y hoc c6 truyen c.ccccsescccesecseesessesesscescseeseencseeseess 8 1ã B§LtiuGc 001166 Ga gang ng gi nclktecgiikGscggtintGagagi II ru H1 K K UÏỷÏÝŸ_ HH na rSrTSSKSốS S6 K6 II
1.2.2 Tóm tắt đặc điểm của các vị thuốc trong bài thuốc 12 CHƯƠNG II: ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1 Nguyên liệu, đối tượng, phương tiện nghiên cứu - .-‹- 18
2.2 Piro Whats Wi etn CỮU duiacinecccticcgc2x606646642264244614226264262v42632 19
CHUONG III: THỰC NGHIỆM, KẾT QUÁ VÀ BÀN LUẬN
3:1 Bao che cao 16he DA HhilObiscsncicnccrimnecmunmannnunamsans 23
3.2 Nghién ciru vé thamh phan hod hOC sssscccssscssssssssessesssescseessesceseneeeees 23
3.3 Nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của cao lỏng bài thuốc 36 3.3.1 Thử tác dụng trên mô hình chuột gây tăng GH bằng STZ 36 3.3.2 Thử tác dụng trên mô hình chuột gây tang GH bang Alloxan 43 ni nên 0 eeeneensereneneeenirtsinirouaeserlndtdiiemdsolidtermnomsebasoisercE Tri 46
CHƯƠNG IV: KÉT LUẬN VÀ ĐÈ XUẤT
KH Giai Eriassrmdsss= 50
42 Một ý kiện đề VHẤẲ ueaeiiiianiiiaieuieauagdiaiakgkgieiaaglosiiesseosie 51
Trang 4CHU GIAI CHU VIET TAT VA KY HIEU
CHU VIET TAT NOI DUNG
ADA American Diabetes Association
BT Bài thuốc
DĐVN II Dược điển Việt Nam III
DHCT Dược học cô truyền
DTD Đái tháo đường
GH Glucose huyết
HDL High density lipoprotein (lipoprotein tỷ trọng cao) LDL Low density lipoprotein (lipoprotein tỷ trọng thấp) RLDNG Rối loạn dung nạp Glucose
SKLM Sắc ký lớp mỏng
STZ Streptozocin TG Triglycerid
Trt) Thé trong
TVQK Tinh vi quy kinh
YHCT Y hoc cé truyén
Trang 5DANH MUC BANG
Trang
Bảng 2 Kết quả định tính sơ bộ thành phần hoá học của bài thuốc 28
Bảng 3.1 Sự thay đối glucose huyết trước và sau khi uống thuốc ở
ngày thứ nhất trên mô hình chuột gây tăng GH bằng STZ 37 Bảng 3.2 Sự thay đổi glucose huyết trước và sau khi uống thuốc ở
ngày thứ tư trên mô hình chuột gây tăng GH bằng STZ 39 Bảng 3.3 Sự thay đổi glucose huyết sau 4 ngày uống thuốc trên mô
hình chuột gây tăng GH bằng STZ 41
Bảng 3.4 Sự thay đổi glucose huyết trước và sau khi uống thuốc trên
mô hình chuột gây tăng GH bằng Alloxan 44
DANH MỤC HÌNH
Trang
Hình 2.1 Sắc ký đồ Cát căn và bài thuốc 30
Hình 2.2 Sắc ký đồ Hoàng kỳ và bài thuốc 31
Hình 2.3 Sắc ký đồ Mạch môn và bài thuốc 32
Hình 2.4 Sắc ký đồ Sinh địa và bài thuốc 33 Hình 2.5 Sắc ký đồ Thương truật và bài thuốc 34
Hình 2.6 Sắc ký đồ Tri mẫu và bài thuốc 35
Trang 6DAT VAN DE
Đái tháo đường (ĐTĐ) là một bệnh rối loạn chuyền hoá với biểu hiện là
tăng đường huyết, có xu hướng gia tăng cùng với sự phát triển mạnh của kinh
tế - xã hội Bệnh mang tính chất mạn tính, kéo dài với những biến chứng nặng
nề và tỷ lệ tử vong cao Đến nay chưa có thuốc điều trị đặc hiệu nên người bị
bệnh sẽ phải sống chung với bệnh tật gần như suốt đời, như vậy cũng đồng
nghĩa với việc người bệnh phải dùng thuốc thường xuyên, đó là một gánh
nặng về kinh tế, tỉnh thần cho người bệnh, gia đình người bệnh cũng như cho toàn xã hội Khi dùng thuốc tây y để điều trị hiệu quả giảm đường huyết
nhanh nhưng hau hết chúng đều kèm theo tác dụng bất lợi và người bệnh có xu hướng phải tăng liều hoặc thay thuốc, điều đó ảnh hưởng nhiều đến sức
khỏe người bệnh, mặt khác giá thuốc tây thường cao người bệnh khó có khả năng chỉ trả khi dùng thuốc kéo dài
Từ lâu các lương y, các thầy thuốc đông y cũng đã sử dụng thuốc có
nguồn gốc thảo dược để điều trị bệnh tiêu khát với những triệu chứng người
nóng, gầy, háo khát gần giống bệnh ĐTĐ ngày nay (ăn nhiều, uống nhiều, tiêu nhiều, gầy nhiêu ).Tuy dùng thuốc đông y thể hiện tác dụng còn chậm,
không thuận tiện cho người sử dụng song ít tác dụng phụ, giá thành thấp,
nguồn nguyên liệu phong phú nên vẫn có nhiều người ưa dùng
Để góp phần đáp ứng nhu cầu sử dụng thuốc điều trị ĐTĐ ngày càng nhiều, đồng thời góp phần nghiên cứu tác dụng của thuốc cổ truyền trong điều
trị ĐTĐ dưới ánh sáng khoa học, chúng tôi tiến hành đề tài “Nghiên cứu về
hóa học và một số tác dụng sinh học của bài thuốc theo hướng chữa đái tháo đường” với mục tiêu sau:
1 Định tính các nhóm chất chính và kiểm tra sự có mặt của các vị thuốc
trong bài thuốc bằng SKLM
Trang 7CHUONG I: TONG QUAN
1.1 Vai nét vé bénh dai thao dudng
1.1.1 Theo quan diém y hoc hién dai 1.1.1.1 Khái niệm
Đái tháo đường (ĐTĐ) là bệnh rồi loạn chuyển hóa do nhiều nguyên nhân khác nhau gây nên, đặc trưng của bệnh là tăng glucose huyết mạn tính cùng với rồi loạn chuyển hóa hydratcarbon, lipid, protein do thiếu insulin có
kèm hoặc không kèm kháng insulin với các mức độ khác nhau Hệ quả của
tăng glucose huyết mạn tính làm tốn thương nhiễu cơ quan như: mắt, thận,
thân kinh [3]
1.1.1.2 Phân loại
Theo hiệp hội đái tháo đường Mỹ - (ADA) 1997:
® ĐTÐ typ I (ĐTĐ phụ thuộc insulin): Do tôn thương hoặc suy giảm chức
năng tế bào B của tiểu đảo Langerhans của tụy Thường xuất hiện ở người trẻ tuổi (10-20 tuổi) Nguyên nhân:
- Do tự miễn
- Do bệnh lý của tuy
- Do các loại thuốc và hoá chất độc gây rối loạn chức năng tế bào
(Dilantin, Pentamidine )
- Do các bệnh nội tiết khác, bệnh nhiễm trùng
- ĐTĐ liên quan đến dinh dưỡng
- ĐI typ I không rõ nguyên nhân [Š4],[77]
® ĐTPĐ trp 2 (ĐTĐ không phụ thuộc insulin): Thường xuất hiện ở người lớn
tuổi hơn, tuy nhiên người trẻ tuổi cũng có thể bị mắc bệnh ĐTĐ typ 2 đặc biệt là
Trang 8- Do khang insulin, khang insulin két hop véi giảm kha nang bài tiết
insulin
- Do khuyết tật về gen trong hoạt động của insulin - Do kháng thể tranh chấp với insulin tại thụ thể
- Do thuốc (acid nicotinic, glucocorticoid, đối kháng a adrenergic, thiazid, hormon tuyến giáp )
- ĐTĐ liên quan đến hội chứng về gen [54],[77]
® DTD thai nghén: là nói tới những phụ nữ được phát hiện có rỗi loạn
dung nap glucose hodc DTD khởi phát trong thời kỳ mang thai [Š4| Loại trừ các trường hợp:
- Các thai phụ được chẩn đoán đái tháo đường trước khi có thai
- Các thai phụ đang mắc bệnh hoặc dùng các thuốc có ảnh hưởng tới chuyên hoá đường [47]
1.1.1.3 Dịch tễ đái tháo đường
a/ Trén thé giới
Bệnh đái tháo đường có tốc độ phát triển nhanh: vào những năm cuối thế kỷ
XX đầu thế kỷ XXI, đái tháo đường là bệnh không lây phát triển nhanh nhất,
nó là nguyên nhân gây tử vong đứng hàng thứ tư hoặc thứ năm ở các nước phát triển [3],[5] nhưng bệnh cũng được xem là “đại dịch” ở các nước đang phát
triển, trong đó đa số là đái tháo đường typ 2 Sự bùng nỗ đái tháo đường typ 2
và những biến chứng của bệnh đang là thách thức lớn với cộng đồng [5]
Năm 1994 cả thế giới có 110 triệu người mắc bệnh ĐTĐ
Năm 2006 cả thế giới đã có 246 triệu người mắc bệnh ĐTĐ [4],[5]
Theo dự báo của WHO năm 2025 sẽ có 300- 330 triệu người mắc bệnh
ĐTĐ chiếm tỷ lệ 5,4% dân số toàn cầu, còn dự báo của quỹ ĐTĐ thế giới
Trang 9Tỷ lệ đái tháo đường cao nhất là khu vực Bắc Mỹ (7,8%), Địa Trung Hải và
Trung Đông (7,7%), Đông Nam Á (5,3%), Châu Âu (4,9%), Trung My (3,7%),
Tây Thái Bình Dương (3,6%), Châu Phi (1,2%)[5]
Tỷ lệ bệnh tăng nhanh, đặc biệt ở các nước đang phát triển là do có sự thay
đối nhanh chóng về lối sống, thói quen ăn uống và ít vận động thể lực [5].[20] Đái tháo đường thai kỳ cũng là một vấn đề đáng lo ngại bởi nguy cơ phát
triển thành DTD cao (30-60%) và có thể gây biến chứng cho mẹ và thai nhi
Theo hiệp hội ĐTĐ Mỹ (2000) tỷ lệ ĐTĐ thai kì là 7% và dao động trong khoảng I- 14% [74]
Chi phí cho điều trị ĐTĐ là một khoản không nhỏ Ước tính mỗi năm để
chữa căn bệnh này trên thế giới phải chi khoảng 215 - 375 tỷ USD [28] Riêng
ở Mỹ chỉ phí cho điều trị ĐTĐ typ 2 năm 2002 là 110 tỷ USD trong đó 90 tỷ cho chi phí trực tiếp và 20 tỷ cho chi phí gián tiếp [78] b/ Ở Việt Nam: Việt Nam là nước đang phát triển nên tình hình ĐTĐ có xu hướng gia tăng đặc biệt ở các thành phố lớn [4].[6].[30] Năm 2001 tỷ lệ mắc DTD 6 khu vực nội thành của 4 thành phố lớn Hà Nội- Hải Phòng-Đà Nẵng-TP HCM là 4%, tỷ lệ RLDNG là 5,1% [2] Năm 2003 tỷ lệ ĐTĐ ở Hà Nội tăng lên 4,2% [30] và năm 2005 tỷ lệ mắc bệnh ở Hà Nội đã
là 6,7% dân số [32] Tỷ lệ mắc ĐTĐ tăng nhanh trên toàn quốc: theo điều tra
của bệnh viện nội tiết TW (2002) tỷ lệ mắc ĐTĐ chung cả nước là 2,7%
(trong đó thành phố 4,4%, đồng bằng 2,7%, trung du 2,2%, miền núi 2,1%)
đến tháng 10/2008 tỷ lệ này là 5% và ở một số thành phố lớn là 7,2% [4],
[6].[30].[64] Các yếu tố nguy cơ phổ biến nhất là BMI cao (18,6%), tăng
huyết áp (16,8%), ít hoạt động thẻ lực (12%), vòng eo lớn (9,9%), 40,8% là
đối tượng từ 30- 64 tuổi có một hoặc nhiều yếu tố nguy cơ [4]
Theo một số nghiên cứu về ĐTĐ thai kỳ ở Hà Nội và TP HCM thì tỷ lệ
Trang 10kỳ có tương quan tỷ lệ thuận với tuổi của bà mẹ khi mang thai nhất là khi bà
mẹ mang thai ở tuôi trên 35 [4]
Chi phi DTD ở VN có nhiều tốn kém do người bệnh được phát hiện muộn
và có nhiêu biến chứng, điều trị khó khăn Theo điều tra của quỹ International
Insulin Foundation chi phi cho diéu tri bénh DTD tai Viét Nam trong năm 2007 đã vượt quá 660 triệu USD [30] Một khảo sát về chỉ phí điều trị ĐTĐ ở
bệnh viện Bạch Mai cho thấy: chỉ phí thuốc chiếm 67,8% so với chi phí điều
trị trực tiếp, cao hơn nhiều so với các nước khác như Australia tỷ lệ này xấp
xỉ 50% hay ở Nam Mỹ và Caribê là 52,7% [64]
1.1.1.4 Chan đoán
a/ Tiêu chuẩn chin dodn
e_ Tiêu chuẩn chân đoán ĐTĐ của WHO năm 1998
Đường huyết lúc đói > 126 mg/dl ( > 7 mmol/l) (ít nhất 2 lần xác định)
Đường huyết 2h sau ăn > 200mg/dl ( > 11,1 mmol/l)
e Chân đoán rối loạn dung nạp Glucose
Đường huyết lúc đói < 126 mg/dl ( < 7 mmol/l)
Đường huyết 2h sau uống 75g đường < 200mg/dl ( <11,1 mmol/l)
b/ Chẵn đoán phân biệt:
e ĐT typ I: Thường gặp ở người < 30 tuổi và trẻ em, khởi phát mang
tính đột ngột
+ Hội chứng tăng đường huyết: Đái nhiều, uống nhiều, ăn nhiều, chóng đói, gầy sút nhanh và luôn có cảm giác khô miệng
+ Cận lâm sàng:
Đường huyết lúc đói thường tăng rất cao trên 3g/1
Đường niệu nhiều, thường > 20g/1 Ceton niệu (+), rối loạn lipid
HbA Ic tang cao, biểu hiện của mắt cân bằng đường huyết kéo dài
Trang 11e PTD typ 2: Gặp ở bất cứ lứa tuổi nao, da sé thudng > 40 tudi, bénh tién triên âm thầm, hiếm gặp các trường hợp có triệu chứng lâm sàng điền hình
Đặc điểm: Thường gặp trong gia đình có người đã được chân đoán ĐTĐ hoặc phụ nữ sinh con > 4 kg
Cận lâm sàng: Đường huyết tăng vừa 2 -3g
Cholesteron tăng cao
Protein niệu xuất hiện khi có biến chứng thận [3].[7].[8],[17].[55]
1.1.1.5 Diéu tri DTD
a/ Ché dé an uéng:
Mục đích: Duy trì chất lượng cuộc sống cho người bệnh, làm giảm nhẹ
triệu chứng giúp bệnh nhân (BN) có cuộc sống và sinh hoạt gần như bình thường
và duy trì cân bằng chuyển hoá, tránh các biến chứng nguy hiểm cho người bệnh
—>Chế độ ăn thích hợp phải tuỳ điều kiện của từng BN như: người béo hay gây,
lao động thê lực hay không, có biến chứng hay không, có rèn luyện TDTT
không, kinh tế gia đình thế nào? nhưng phải đảm bảo các yêu cầu sau:
-_ Giờ giấc ăn phải đều - Chia ra nhiéu bita
- Luong calo tuy thuộc từng bệnh nhân (gay thi tang luong calo dé tranh
thoái hoa protid va lipid, béo thi giam ca glucid, protid, lipid )
> Nén chon nhiing loai thuc pham gay tang dudng huyét tir tir nhu banh my,
gạo, sữa chua, sữa không bơ, thịt không hoặc có ít mỡ, cá , các loại thực
phẩm có chất xơ để gây cảm giác no lâu, giảm hấp thu đường từ thức ăn
giúp duy trì đường huyết ở mức thấp cả ngày Không nên chọn những thức ăn
có hàm lượng đường cao thuộc nhóm chứa đường hấp thu nhanh, rượu [54]
b/ Vận động thể lực: |
Vận động thể lực làm tăng nhạy cảm của insulin với tổ chức đích, làm
Trang 12tụy ở người bình thường, giảm nguy cơ xơ vữa động mạch do giảm nồng độ
cholesteron, LDL, TG và tăng nồng độ HDL [54]
c( Điêu trị bằng thuốc
Mục đích của thuốc điều trị:
- Phục hồi và duy trì một thể trạng hợp lý (hoặc phát triển bình thường đối
VỚI trẻ em)
- _ Làm giảm triệu chứng tăng đường huyết và đường niệu
- _ Điều trị các biến chứng của bệnh (nếu có)
Bệnh DTD thường có nhiều biến chứng đa dạng và nguy hiểm nên điều trị
ĐTĐ cần phối hợp hài hoà giữa chế độ ăn uống, vận động thẻ lực và sử dụng
thuốc hợp lý
® Diéu tri bang insulin: thuong dùng cho DTD typ 1, ngoai ra còn dùng
phối hợp với thuốc khác trong điều trị ĐTĐ typ 2 khi các thuốc chống ĐTĐ tông hợp không còn hiệu quả [1].[16]
Insulin do tế bào B đảo Langerhans tiết ra, có tác dụng làm giảm glucose máu do tăng vận chuyên glucose vào trong tế bào, đặc biệt tế bào gan, cơ, mô mỡ để tế bào sử dung glucose, sinh ra năng lượng cho mọi hoạt động của cơ
thể [11],[16] Để làm thuốc, insulin có thể chiết từ tuyến tụy của bò hay lợn,
bán tông hợp hoặc dùng phương pháp tái tổ hợp gen [16]
Dựa trên thời gian tác dụng, các chế phâm insulin duoc phan thanh:
+ Insulin tác dụng nhanh: Actrapid Hmge
+ Insulin tac dung trung binh: Semilente MC (Zinc)
+ Insulin tac dung h6n hop: Mixtard Hmge
+ Insulin tac dung cham:Endopancrin, Zinc Protamin + Insulin tac dung kéo dai: Ultralente [17]
* Cac thudc tan dwoc ha glucose huyét bang dwong udng:
1 Sulfonylurea (SH): là các sulfamid có tác dụng hạ đường huyết dùng điều
Trang 13Tác dụng: Kích thích trực tiếp tế bào B dao Langerhans cua tuyén tuy, tang
sản xuất insulin làm giảm nồng độ glucose trong máu, mặt khác các thuốc này lam giam tinh khang insulin [17]
Dựa vào cường độ tác dụng của SH, các SH được chia làm 2 loại:
- SH thế hệ I gồm: Tolbutamid, tolazamid, chlorpropamid, acetohexamid,
carbutamid có hoạt tính sinh học yếu, thời gian tác dụng kéo dài nên có
nguy cơ gây hạ đường huyết dưới mức bình thường do đó không còn sử dụng trên lam sang [16]
- SH thế hệ II gồm: Gilipizid, glibenclamid, gliclazid, glybuzid có tác dụng
mạnh hơn thế hệ I
2 Dân xuất Biaguanid:
Tác dụng: ức chế hấp thu glucose ở ruột, tăng nhập glucose vào tế bảo, kích thích phân hủy và ức chế tái tạo glucose, ngoài ra còn có tác dụng giảm lipid máu Tuy nhiên do có nhiều tác dụng phụ, đặc biệt là nguy cơ gây nhiễm toan acid lactic nên việc sử dụng các biguanid ngày càng hạn chế Metformin
là thuốc duy nhất trong nhóm được chỉ định rộng rãi trong điều tri DTD typ 2, đặc biệt là ĐTĐ typ 2 thể béo [7].[16].[44]
3 Thuốc ức chế œ-gÏucosidase
Nhóm thuốc này, tiêu biểu là Acarbose có tác dụng làm giảm và chậm hấp thu
carbohydrat ở ruột non, chống tăng glucose huyết sau khi ăn do ức chế ơ-
ølucosidase Khác với SH, Acarbose không làm tăng tiết insulin, không làm hạ đường huyết, thường dùng điều trị ĐTĐ typ 2 đơn thuần hoặc phối hợp với SH [16]
4 Các Thiazolidindion (TZD)
TZD là các thuốc có tác dụng làm tăng nhạy cảm của insulin ở mô đích, làm giảm sự kháng insulin, tăng nhập glucose vào tế bào và tăng
Trang 14đường huyết và cần phải chỉnh liều Ngoài ra TZD còn có tác dụng phân
bố lại mỡ (làm giảm mỡ nội tạng và tăng khối lượng mỡ dưới da) tuy
nhiên nếu dùng một mình các TZD không làm tăng cân [16]
Các thuốc điều trị ĐTĐ nói trên đều có hiệu quả điều trị nhanh, mạnh nhưng cũng kèm theo nhiều tác dụng phụ và độc tính khi dùng kéo dài
1.1.2 Theo quan diém y hoc cé truyén
1.1.2.1 Khái niệm
Dai đường thuộc phạm vi chứng tiêu khát của y học cỗ truyền, biểu
hiện người nóng, háo khát, gầy, môi miệng khô, ăn nhiều, uống nhiều thể hiện của chứng âm hư nội nhiệt (chứng tam đa nhất thiểu: uống nhiều, tiểu nhiều,
ăn nhiều mà người vẫn gầy còm) [13],[61]
1.1.2.2 Nguyên nhân chung:
Do nghiện rượu hoặc ăn nhiều thứ béo ngọt, ăn uống không điều độ, do sang chấn tỉnh thần tạo thành hỏa nhiệt, uất nhiệt làm phần âm của các phủ,
tạng phế, tâm, vị, thận bị hao tốn Hỏa làm tiêu hao chân âm, chất dịch bị khô kiệt: hoả làm phế âm hư gây chứng khát, vị âm hư gây đói, người gầy, thận
âm hư không tàng trữ tỉnh hoa của ngũ cốc gây tiểu tiện ra chất đường
Âm hư kết hợp với táo nhiệt gây tiêu hao tân dịch ở phế vị và âm tỉnh của thận Vì trọng điểm âm hư là ở thận, âm thương liên lụy đến dương, nên bệnh
kéo dài làm thận dương cũng hư [12].,[13 |.[6Š] 1.1.2.3 Phép chữa chung
Lấy dưỡng âm thanh nhiệt, sinh tân dịch là cơ sở, nhưng trên lâm sàng
hội chứng của bệnh đái đường có khi thiên về khát nhiều, hay thiên về đói nhiều mà có trọng điểm gia giảm, vì thận là nguồn gốc của âm dịch và nơi
tàng trữ tỉnh vi của thủy cốc nên vẫn lấy bô thận âm là chính [13]
Trang 151.1.2.4 Phan loai
Các danh y Trung Hoa cho bệnh tiêu đường do nhiều nguyên nhân khác nhau theo những cách biện chứng luận trị riêng
Theo Quách Sĩ Khôi bệnh tiểu đường vốn bệnh ở than, Dong Kiến Hoa cho rằng thủy cốc không được phân bố đầy đủ, Trịnh Hán Kiều cho rằng yếu tố đàm thấp là trọng yếu, Ngụy Tử Hiếu - Châu Như Chính - Vu Chí Tường lại cho răng bệnh đi từ can [45] nhưng đa số căn cứ vào bệnh cơ, chứng trạng chia làm 3 thể bệnh:
- Thượng tiêu: do phế hoả ủng thịnh hoặc do tạng khác (vị, tâm) truyền
vào làm cho phế bị nhiệt đốt gây tổn thương âm dich
Triệu chứng: miệng khát, uống nhiều, cô họng khô táo, tiểu tiện nhiều lần,
chất lưỡi đỏ, rêu vàng, mạch sác là chứng thiên về nhiệt, nếu tiểu nhiều, người
gay nhanh, mệt mỏi yếu sức, thở ngắn, mạch trầm trì là chứng thiên về hàn,
do khí với tân đều suy hao mà sinh ra
- Trung tiêu: Do vị hỏa tích nhiệt, gây hao tổn chất tỉnh vi, tinh huyết bi
ton thong ma sinh ra
Triệu chứng: ăn nhiều, chóng đói, người gây yếu, có khi đại tiện bí kết, tiểu
tiện vàng đỏ và đi đái luôn, chất lưỡi đỏ, rêu lưỡi vàng khô, mạch hoạt sác
- Hạ tiêu: Do thận âm suy tổn không liễm dương, dương uất sinh nhiệt, vi khí suy tơn khơng chưng hố tân dịch được hoặc đo tổn thương tân dịch, tỳ
táo mà sinh bệnh
Triệu chứng: Miệng khát, uống nhiều, tiểu nhiều, người nóng nảy, vật vã,
chất lưỡi đỏ, không rêu, mạch trầm tế sác [6 I].[62]
1.1.2.5 Một số dược liệu có tác dụng hạ đường huyết
Trang 1610
Nhiều nước trên thế giới cũng sử dụng và nghiên cứu thuốc cô truyền để
trị bệnh tiêu đường như Malaysia dùng cao nước xuyên tâm liên, ở Jordan ding cay Paronychia Lam, ho Cam chướng; ở Ân Độ dùng hạt cây móc mèo Caesalpinia bonducella ho đậu Trung Quốc - một nước có nên y học cỗ
truyền mạnh nhất thế giới sử dụng thuốc cổ truyền để trị bệnh tiểu đường rất nhiều, có nhiều nghiên cứu ly vị (Sinh địa, Tri mẫu, Hoàng liên ) hay nghiên
cứu các phương thuốc cỗ truyền khác nhau trên thực nghiệm cũng như trên
lâm sang [56]
Ở Việt Nam, nền YHCT cũng có lịch sử hàng ngàn năm phát triển, nhân dân ta đã tích lũy được nhiều kinh nghiệm, đúc kết lại và truyền từ đời này qua đời khác Những năm gần đây, với sự phát triển của
khoa học chúng ta đã nghiên cứu trên thực nghiệm cũng như trên lâm
sàng, tìm mới và kiểm chứng tác dụng hạ đường huyết của các vị thuốc
người xưa thường dùng theo YHCT và kinh nghiệm dân gian như: Thổ
phục linh [40],[72], Mướp đắng [33].[34], [58].[60] Sinh dia [27],[60],
Tri mẫu [27], Y dĩ [28], Cau kỷ tử [48], Diệp hạ châu [36].[38], Cỏ ngọt [52] Dây thìa canh [50], Bằng lăng nước [29],[35], [53], cây Chè
[43], Oi [21],[42],[59] theo thống kê của Đặng Thị Phương Nga [46] có 35 nghiên cứu được lý về tác dụng hạ glucose huyết của 28 loài trên động vật thực nghiệm với các phương pháp khác nhau và có 18 loài đã được kết luận là có tác dụng hạ glucose huyết Hiện nay các thành phần
hoá học trong dược liệu có tác dụng hạ đường huyết còn được biết đến
rất ít, chủ yếu dựa vào dịch chiết toàn phần [56] Vũ Ngọc L6 [39],[40] cũng đã tổng kết 59 loài cây thuốc trị bệnh tiểu đường trong đó có 3I loài có hoạt chất hạ đường huyết và 1 số đã được chiết tách nghiên cứu:
Trang 1711
asphodeloides Bunde.), polysacchasid trong Sinh địa, Kỷ tử, Mạch mon, iridoid catapol trong Sinh dia (Rhemannia glutinosa Gaernt.)[ 15],
flavonoid trong Cat can, trichosan A trong Thién hoa phan [56] v.v
Một số bài thuốc điều trị ĐTĐ cũng đã được nghiên cứu [31].[60].[63], [66], một số chế phẩm điều trị ĐTĐ là thuốc cổ truyền đã được lưu hành như:
Thanh long của công ty đông dược Bảo Long, viên nén /iểu đường Đông Đô của Công ty dược phẩm dược liệu Hà Nội [57] bột 4DM (Anti Diabetic Momordica) va cao RMD (Rhemannia Momordica Diabetic) do vién dugc liệu TW bào chế [60], Diabetna từ cây dây thìa canh của công ty Nam Dược
1.2 Bài thuốc nghiên cứu
1.2.1 Công thức: Tri mẫu 18g Sinh địa 30g Cát căn 14g Mạch mơn 20g Hồng kỳsống lóg Thương truật 12g - Cơ sở xây dựng bài thuốc:
+ Dựa vào lý luận của YHCT, các triệu chứng biểu hiện của bệnh tiêu khát + Dựa vào tính năng của các vị thuốc phù hợp đề điều trị triệu chứng của bệnh + Dựa và tác dụng dược lý và thành phần hóa học của các vị thuốc đã được
chứng minh có tác dụng hạ đường huyết
Từ đó PGS - TS Vũ Văn Điền đã xây dựng nên bài thuốc để nghiên cứu
- Công năng: Dưỡng âm, sinh tân, chỉ khát, ích khí
- Chủ trị: Người âm hư, háo khát, gầy yếu, mệt mỏi, táo bón
Trang 1812
- Phân tích phương thuốc:
Sinh địa: thanh nhiệt, sinh tân là quan, st Mach mon: thanh nhiệt, dưỡng
âm sinh tân, 7z¡ mẩu: tả hoa thanh nhiệt là than; Cat căn: sinh tân, chỉ khát;
sinh Hoàng kỳ: ích khí, sinh huyết, sinh tân; 7zơng truật: khai uất kết, sơ
thông khí cơ, khơi thông tân dịch là tá
1.2.2 Tóm tắt đặc điểm của các vị thuốc
1.2.2.1 Sinh dia (Radix Rehmannia glutinosae)
- Vị thuốc là rễ củ phơi sấy khô của cây địa hồng (Rehmamnia gÌutinosa
Gaernt.) Họ Hoa mõm chó (Serophulariaceae) [4I ].[68]
- TVQK: Vị ngọt đăng, tính lạnh Quy kinh: tâm, can, thận, tiểu trường
[9],{15].1371.141].167].169]
- Công năng: Bồ âm, thanh nhiệt, sinh huyết dịch, làm mát máu, cầm máu
[9].,[67].[68], lợi tiểu [68], hạ đường huyết [39].[46].[56]
- Công dụng: Trị chứng âm hư, khát nước nhiều, tân dịch khô, thổ huyết, băng huyết, động thai, ban chẩn, tâm thần không yên [19].[37],[67].[68], tri
sốt, chống triệu chứng già, trị đi đứng khó
- Thành phần hoá học: trong rễ củ sinh địa có hydratcarbon, iridoid
glycosid, acid amin, caroten [37],[56]
- Tác dụng dược lý: Nước sắc sinh địa có tác dụng hạ đường huyết trên
thỏ bằng đường uống [41] Cơ chế do sinh địa kích thích bài tiết insulin nội
sinh, giảm hàm lượng glycogen ở gan của chuột nhắt bình thường [39]
Ngoài ra có nhiều nghiên cứu về tác dụng khác của sinh địa: an
thần, lợi tiểu, tác dụng điều hoà và kích thích miễn dịch [69],cầm
Trang 1913
- Kiêng ky: Sắt [69], người tỳ vị hư hàn và thấp nhiệt, dương hư [15], [37]
- Liều dùng: 9-15g/ ngày, dưới dạng sắc hoặc cao
1.2.2.2 Hoang ky (Radix Astragali membranacei)
- Vị thuốc là rễ phơi sấy khô của cây Hoang ky (Astragalus
membranaceus Fisch.) Ho Dau (Fabaceae) [15],[41]
- TVQK: Vi ngot, tinh 4m Quy kinh: phé, ty [15],[37],[41],[67],[69] - Công nang: bo khí thăng dương, liễm hãn, lợi tiểu, tiêu thững Sinh
hoàng kỳ giải độc, sinh tân [67 ]|.,[69| - Công dụng:
+ Hoàng kỳ sống chữa ĐTĐ đặc biệt dùng tốt cho người bị ĐTĐ mà
huyết áp cao, đái đục, đái buốt, phù thũng, viêm thận mạn, lở loét, trúng
phong [15],[19],[39],41].[46].[56].[67], liều dùng: 6-12g/ngày
+ Hoang ky tam mật: chữa suy nhược lâu ngày, ra mô hôi, bổ khí,
thăng dương, bồ tỳ vị [69] liều dùng 3-9g/ngày
- Thành phan hoa học: Trong rễ hoàng kỳ có saponin astragalosid, gôm, saccharose, acid amin, betain, cholin, chat nhay, flavonoid [37],[41],[56]
- Tác dụng dược lý: bột đơng khơ hồng kỳ (nồng độ 0,1mg/ml) ức chế duoc aldose reductase [39],[69]
Một số nghiên cứu về tác dụng khác của hoàng kỳ: tác dụng trên hệ miễn
dịch, tăng sức co bóp của tim, giãn mạch, hạ áp, lợi tiểu, kháng khuẩn [15],[41],[69], kích thích sự phát triển của cơ thể, bảo vệ gan [69]
- Kiêng ky: người ngoại cảm, tích trệ, phụ nữ có thai không nên dùng 1.2.2.3 Mạch môn (Radix Ophiopogoni)
- Vị thuốc là rễ củ của cây Ophiopogon japonicus (L.f) Ker-Gawl Ho thiên môn (Asaragaeceae) [68]
Trang 2014
- Công năng: Nhuận phế, giảm ho, cầm máu, làm mát tim, thanh nhiệt,
dưỡng âm, sinh tân [39],[46],[67,[67]
- Công dụng: Chữa chứng phế nhiệt sinh háo khát trong bệnh tiểu đường [56] ho khan, lao phổi, nóng âm ¡ về chiều, tâm phiền, khát nước, chảy máu cam, khái huyết, còn dùng lợi tiểu, chữa táo bón, thiếu sữa, lở ngứa [19].[68],[69]
- Thành phần hoá học: trong rễ củ mạch môn có polysaccharid, chất nhay,
flavonoid, saponin steroid: ophiopogenin, diosgenin, sitosterol [39],[41], [56],[68]
- Tac dụng dược lý: dịch chiết với nước của mạch môn có tác dụng
hạ đường huyết kéo đài trên thỏ bình thường và thỏ gây ĐTĐ bằng
Alloxan [69] Ngoài ra mạch môn có nhiều tác dụng dược lý đã được nghiên cứu và chứng minh: tác dụng chống viêm, gây teo tuyến ức,
chống ho, long đờm [69]
- Kiêng ky: Người tỳ vị hư yếu, ăn uống chậm tiêu, ïa chảy không dùng [37],[41],[67]
1.2.2.4 Tri mẫu (Rhizoma Anemarrhenae)
- Vị thuốc là thân rễ của cây Azemarrhena asphodeloides Bunge Họ hành toi (Liliaceae) [15],[68] - TVQK: vi dang, tính mát, không độc [41],[69] quy kinh phế, thận, tỳ, vị [15],[37],[69] - Céng nang: Tu than, bé thuỷ, ích khí, tả hoả, hoạt tràng, sinh tân chỉ khát, tu 4m thoai chung [15],[41],[67],[69]
- Công dụng: Giải nhiệt, trị tiêu khát [37],[41],[46].[69], (đặc biệt với
ĐTĐ không phụ thuộc insulin [65]), âm hư táo nhiệt, đại tiểu tiện không lợi
[67] chữa ho do phế nhiệt, ho khan, đờm đặc, sốt cao do nhiệt nhập lý [15],
[37],[41],[56],[67],[69]
Trang 2115
- Thành phần hoá học: trong than ré tri mau c6 saponin steroid:
timosaponin, asphonin , các xanthon C-glycosid: mangiferin, isomangiferin, [40].[41].[67].[69] ngoài ra còn có dầu béo, đường, chất thơm [67]
- Tác dụng dược lý: Cao nước tri mẫu làm giảm glucose huyết sau khi cho chuột nhắt uống liều 90mg/kg, mangiferin trong tri mẫu có tác dụng hạ ølucose huyết trên các mô hình chuột ĐTĐ thực nghiệm, do làm tang bai tiết insulin, tăng nhạy cảm của mô đích với insulin và/hoặc ức chế phân hủy glycogen ở gan Trên chuột nhắt trắng, các polysaccharis từ rễ và thân
tri mẫu cũng làm giảm glucose huyết và glycogen ở gan với liều 50, 100,
300mg/kg [40]
Tri mẫu có một số tác dụng được lý khác như: tác dụng kháng khuẩn, hạ
sốt, ức chế ngưng kết tiểu cầu, ức chế ung thư biểu mô và hạn chế tôn thương do tia xa [69]
- Kiêng ky: người tỳ hư, đại tiện lỏng, những người có biểu chứng chưa giai [15],[37]
- Liéu dung: 4-10g/ngay
1.2.2.5 Cat cain (Radix puerariae)
- Vị thuốc là rễ củ phơi sấy khô của cây sắn dây (Pueraria thomsonii
Benth.) hg dau (Fabaceae) [41],[68]
- TVQK: Vi ngot, cay, tinh binh Quy kinh: ty, vi [15],[37],[41],[67],[69] - Céng nang: Giai co, thodi nhiét, sinh tan chi khat [15],[37],[41],[67],
[69], thoai chan [37], thang duong, chi ta [14],[69], thanh trang chi ly, ha
huyết áp [15]
- Công dụng: chữa cảm sốt, phong nhiệt, miệng khát, sởi mọc không đều [19],[37], tiết tả, ly ra máu [19],[15].[37].[67].[69], chữa tiêu khát
[46][39], bí tiểu, đái buốt, đái rắt [15], điều trị đau thắt ngực do co thắt
Trang 2216
- Thanh phan hoá học: Trong rễ củ cát căn có tỉnh bột, saponosid, dẫn chất
isoflavon nhu: puerarin, daidzin, daidzein, kakoein [9],[37],[39],[41],[69]
- Tac dung dược lý: Nước sắc sắn dây với liều 6-8g/kg có tác dụng hạ đường huyết, puerarin có tác dụng làm hạ đường huyết trên chuột nhắt trắng thực nghiệm gây tăng đường huyết bằng alloxan với liều
250-500mg/kg [56],[69] Kokaein có tác dụng làm hạ glucose huyết
trên chuột nhắt gây tăng đường huyết bằng alloxan hay adrenalin [39]
Ngoài ra có nhiều nghiên cứu về tác dụng khác của cát căn như: tác
dụng hạ huyết áp [41],[69] co thắt cơ hô hấp, gây hưng phấn tử cung cô
lập của chuột [4l], tác dụng giãn mạch vành, chống loạn nhịp, làm tăng
lưu lượng máu qua não, và tác dụng chống ung thư [69]
- Kiêng ky: Những người thượng tiêu thịnh, hạ tiêu hư, âm hư hoả vượng
[15],[37]
1.2.2.6 Thương truật (Rhizoma Atractylodis)
- Vị thuốc là thân rễ phơi sấy khô của cây Thương truat (Atractylodes
lancea (Thunb) DC) Ho Cuc (Asteraceae) [15],[68],[69]
- TVQK: Vị cay đắng, tinh 4m Quy kinh: ty, vi [15],[19],[37],[41]
- Công năng: Lợi tiêu hoá, trừ thấp [15],[41].[69], phat han chi tả [37], [41]
- Công dụng: Chữa tỳ vị hư hàn ,khó tiêu, tiêu chảy [19].[37]., trị phù
thũng [19],{69], đái tháo đường [40],{41].[46 ].[69], trị viêm dạ dày, ruột [56],
[69], nam da [69]
- Thành phần hoá học: Trong rễ thương truật có glycosid kali atractylat,
tinh dầu, polysaccharid, Vitamin A, C, BI [37].[41].[69]
Trang 2317
Bảng dùng cao thương truật tiêm dưới da thỏ với liều 6g dl/kg thấy trong vòng 2-5h lượng đường máu giảm xuống [41]
Liều nhỏ tỉnh dầu thương truật có tác dụng trấn tĩnh đối với một loại ếch xanh nhưng dùng liều cao có tác dụng ức chế trung khu thần kinh
rồi chết do ngừng hô hấp [41] Khi dùng cao nước thu được sau khi
chiết thân rễ thương truật với methanol với liều 140mg/kg/ngày có tác
dụng kéo đài thời gian sống sót của chuột nhắt trắng gây nhiễm nắm
Candida albicans [69]
- Kiêng ky: Âm hư có nhiệt, tiện bí, nhiều mô hôi không nên dùng [15] - Liều dùng: 5-10g/ngày
Trang 2418
CHUONG II: BOI TUQNG VA PHUONG PHAP NGHIEN CUU
2.1 Nguyên liệu, đối tượng, phương tiện nghiên cứu 2.1.1 Nguyên liệu:
- Các vị thuốc được mua ở cửa hàng thuốc bắc phố Lãn Ông, đem về sơ chế sạch, cân từng vị theo công thức trong bài thuốc
- Bài thuốc được chế theo phương pháp bào chế cao lỏng
2.1.2 Đối tượng nghiên cứu:
Chuột nhắt trắng thuần chủng (giống Swiss) cả hai giống, khoẻ mạnh,
trọng lượng 20-22g do Viện vệ sinh dịch tế TW cung cấp
2.1.3 Phương tiện nghiên cứu / Máy móc và trang thiết bị
- Máy đo đường huyết tự động One Touch Ultra và bộ kit thử của hãng Johnson & lohnson, Mỹ
- Kit định lượng glucose hãng HUMAN
- Máy định lượng sinh hoá bán tự động SCOUT
- Máy l¡ tâm lạnh HETECH
- Âm sắc thuốc Hàn Quốc - Tủ sấy Memmert - Đèn tử ngoại Camag - Ong eppendort 1,5ml - Các dụng cụ thí nghiệm khác thuộc bộ môn DHCT, bộ môn được lực b/ Hoá chất
- Steptozotocin (Zanosar) do công ty MP Biomedicals (France) cung cấp - Alloxane tetrahydrate - SIGMA
- Gliclazide (Diamicron/Servier - France) vién nén 80mg
- Dung mơi, hố chất khác do phòng giáo tài trường đại học Dược cung
Trang 2519
2.2 Phương pháp nghiên cứu
2.2.1 Điều chế cao lỏng
Thang thuốc được sắc lặp lại 3 lần (bằng ấm sắc thuốc Hàn Quốc) , gộp
các dịch sắc, cô thành cao lỏng 2:1 (2g được liệu/ Iml cao lỏng) [IS]
2.2.2 Nghiên cứu thành phần hoá học
* Định tính một số nhóm chất trong cao lỏng bài thuốc bằng các phản ứng
hoá học: Tiến hành các phản ứng định tính với các thuốc thử chung và thuốc thử đặc hiệu của từng nhóm chất theo các phương pháp thường quy được ghi trong các tài liệu [9],[10],[26]
* Kiểm tra sự có mặt của các vị thuốc trong cao lỏng bằng SKLM: theo
phương pháp thường quy, triển khai trên một số hệ dung môi, chọn hệ có vết rõ, dễ nhận biết được vị thuốc trong cao lỏng để ghi lại kết quả [9],[10], [141,26]
2.2.3 Phương pháp định lượng Glucose huyết
2.2.3.1 Trên mô hình chuột nhắt trắng gây tăng GH bằng S1Z
Glucose huyết được định lượng bằng máy đo GH One Touch Ultra (phương pháp glucose oxydase) theo nguyên tắc:
Dùng enzym glucose oxydase (GOD) để oxy hóa glucose thành acid øluconic và hydroperoxyd (H;O;) theo phan trng (1)
H;O; tạo thành sẽ bị phân huỷ bởi peroxydase, giải phóng O;, oxy hóa O-Dianisidin để tạo thành phức chất có màu vàng nâu theo phản ứng (2)
GOD
Glucose + H,0 + O2 ——— acid gluconic + H,0, (1)
POD
O-Dianisidin + HạO; ———> phức hợp màu vàng nâu + HO (2)
Cường độ màu được xác định bằng phương pháp đo quang tương ứng với lượng đường cần định lượng
Trang 2620
2.2.3.2 Trén mé hinh chuét nhat trang gay tang GH bang Alloxan
Hàm lượng Glucose trong huyết thanh được định lượng theo phương phap Barham va Trinder [25]
Ding enzym glucose oxydase (GOD) dé oxy hdéa glucose thanh acid gluconic và hydroperoxyd (H;O;) theo phản ứng (I)
HạO; tạo thành sẽ phản ứng với phenol và 4-aminophenazon nhờ xúc tác của enzym peroxydase (POD) để tạo thành phức hợp quinoneimin màu đỏ tím theo phản ứng (3)
GOD
Glucose + HạO + O¿ ————* acid gluconic + HạO; (1)
POD
H,O, + 4-aminophenazon + phenol ——-> quinoneimin + 4H,O (3)
Sau khi lấy máu, để máu đông, rồi ly tâm lạnh ở 3000 vòng/phút trong 5
phút đề tách lấy huyết thanh
Định lượng GH bang kit theo chỉ dẫn của nhà sản xuất (Human), sử dụng
máy sinh hóa bán tự động Scout của Italia
2.2.4 Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết của cao lỏng 2:1 2.2.4.1 Trên mô hình chuột nhắt trắng gây tăng GH bang STZ
STZ là một dẫn xuất của nitrosourea (là một kháng sinh phô rộng được
chiết xuất từ nắm Streptomyces achromogene [33],[49],[75] trực tiếp gây độc
cho tế bào tiểu đảo tụy, ức chế quá trình sinh tiền chất insulin và sự bài tiết
insulin do đó gây thiếu insulin và gây tăng đường huyết
Thử nghiệm trong điều kiện sinh lý (chuột vẫn ăn uống bình thường trong quá trình thí nghiệm)
- Chuột thí nghiệm được tiêm mang bung dung dich STZ (150mg/kg)
[28].[50].[70] được pha trong hệ đệm citrat 0,1M, pH= 4,5 để gây tăng đường
huyết Sau 72h, định lượng GH, lựa chọn những con có đáp ứng tăng đường
Trang 2721
- Ngày thứ nhất: định lượng GH của các lô ở các thời điểm 0h (trước khi uống thuốc) và 4h sau khi uống thuốc So sánh GH trước và sau 4h uống thuốc và so sánh GH giữa các lô
- Ngày 2, 3: cho chuột ăn uống bình thường và uống thuốc thử lúc 8h sáng (lô chứng bệnh lý uống nước cất, lô chứng dương uống thuốc chuẩn Gliclazid) - Ngày thứ tư: Định lượng GH của các lô ở thời điểm 0h và 4h sau khi dùng thuốc So sánh, đánh giá mức GH như ngày thứ nhất, và so sánh giữa ngày thứ tư với ngày thứ nhất Kết quả tỷ lệ giảm GH được tính theo công thức (1): Chưước— Cseu #= ——— x0 ®@ (Ù Cruse X: Độ giảm GH (%)
C;„„: nồng độ GH sau khi dùng thuốc (mmol/I hoặc mg/dl)
C„„¿.: nồng độ GH trước khi dùng thuốc (mmol/l hoặc mg/dl)
2.2.4.2 Trên mô hình chuột nhắt trắng gây tăng GH bang Alloxan
Alloxan cũng là tác nhân phá hủy tế bào ÿ tiểu đảo tụy, làm giảm lượng Insulin trong máu dẫn đến gây tăng glucose huyết [33],[49],[73]
Hai ngày sau khi tiêm vào tĩnh mạch đuôi chuột dung dịch Alloxan trong
nước muối sinh lý với liều 65mg/kg [70], định lượng GH trước dùng thuốc
(Gạ) (lúc đói), loại bỏ những con không đủ điều kiện thí nghiệm (GH quá cao hoặc quá thấp) và chia chuột thành 4 lô để làm thí nghiệm
Cho chuột uống thuốc thử trong 7 ngày liên tục (chứng bệnh lý uống nước
cất, chứng dương uống thuốc chuẩn Giielazid), đến ngày thứ 7, sau khi uống thuốc 1 giờ, định lượng GH sau dùng thuốc (G7) (lúc đói)
Trang 2822
Tính % giảm GH trước và sau khi uống thuốc ở tất cả các lô theo công
thức (1) và so sánh GHl giữa các lô
2.2.5 Xử lý số liệu
Các kết quả nghiên cứu được biểu thị = Xrp + SE xử lý theo phương pháp thống kê sinh học Test t- student, str dung phan mềm Microsoft Excel 2003
Với độ tin cậy 95%, sự khác biệt có ý nghĩa thống kê nếu P < 0,05 và không
Trang 2923
CHUONG III: THU'C NGHIEM, KET QUA VA BAN LUẬN
3.1 Bào chế cao lỏng bài thuốc
Bài thuốc đông y thường được sử dụng ở dạng thuốc nước, mặt khác khi
chuyên sang dạng bào chế hiện đại thì chuyển từ dạng cao lỏng sang cao khô
để bào chế, vì vậy chúng tôi bào chế dạng cao lỏng đề thử cho gần với thực tế sử dụng
Các vị thuốc được chế biến sạch đạt tiêu chuẩn DĐVN III, cân khối lượng từng vị theo công thức bài thuốc Cân 6 thang, lấy 2 thang cho vào | 4m sac
Sắc lần 1: 2 thang/ ấm, thêm nước sạch ngập dược liệu 2cm, sắc khoảng
lh, con độ 300ml
lần 2: thêm nước ngập dược liệu 2cm sắc khoảng I.Sh, còn độ 300m1
lần 3: thêm nước ngập dược liệu 2cm sắc khoảng I.5h, còn độ 300ml Gộp 3 dịch chiết của 3 ấm, lọc nóng qua bông, cô cách thủy còn 330ml được cao lỏng 2:1 (2g dược liệu/ Iml cao lỏng)
* Nhận xé: Cao lỏng thu được có màu đen, hơi sánh, mùi thơm của dược liệu, vị ngọt đăng
3.2 Nghiên cứu về thành phần hoá học
3.2.1 Định tính một số nhóm chất chính trong cao lỏng
® Định tính FLAVONOID
Chiết xuất: Lây 5ml cao lỏng (2:1) hoà tan vào 10ml cồn 60°, để lắng, lọc (gấp nếp) Bốc hơi cồn, hoà tan cắn vào 10 ml nước cất Lắc với ether đầu hoa 3 lần, mỗi lần 10ml để loại tạp Bỏ lớp ether dầu hoả, lấy lớp nước, đem
lắc với ethyl acetat 3 lần, mỗi lần 10 ml Gộp các dịch chiết ethyl acetat, bốc hơi dung môi, lấy căn hoà tan vào 10m] cồn 90° để làm phản ứng định tính
Trang 3024
1 Phản ứng với kiêm loãng
Cho 2ml dịch chiết vào ống nghiệm thêm 3 giọt NaOH 10% - Lắc kỹ
- Kết quả: dung dịch chuyển sang màu vàng sáng (phản ứng dương tính)
2 Phan ung voi hoi NH;
Nhỏ 2 giọt dịch chiết lên 2 vị trí khác nhau của giấy lọc, để khô, 1 vét che
kín, 1 vết hơ lên miệng lọ chứa NH; đặc
- Kết quả: Vết được hơ có màu vàng tăng lên (phản ứng đương tính) 3 Phản ứng Cyanidin
Cho 2ml dịch chiết vào ống nghiệm thêm 1 ít bột magie và nhỏ từ từ 3
giọt HCI đặc, đun nóng
- Kết quả: Dung dịch xuất hiện màu cam ánh hồng (phản ứng dương tính)
4.Phan ung voi dung dich FeCl;
Cho 2ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2 giọt FeCl; 5%, lắc đều
- Kết quả: Dung dịch xuất hiện màu xanh lục (phản ứng dương tính)
Nhận xét: Qua các phản ứng trên sơ bộ nhận định bài thuốc có flavonoid
® Định tính SAPONIN
Chiết xuất: Lẫy 5ml cao lỏng, hoà tan vào 10ml nước đun nóng cho tan hết
Để nguội, lắc với ether dầu hoả 3 lần, mỗi lần 10ml để loại tạp, đun nóng để
đuổi hết ether dầu hoả, sau đó chiết với n-butanol 3 lần, mỗi lần 10ml Gộp các dịch chiết n-butanol lại, làm khan bằng Na;SO¿ khan, bốc hơi dung môi,
cắn thu được hoà tan vào 10ml cồn 90° để làm phản ứng định tính
Định tính:
l Quan sát hiện tượng tạo bọt: Lây 2ml cao lỏng, thêm 5ml
nước cất, đun nóng nhẹ, để nguội, lắc mạnh trong vòng 5 phút
Trang 3125
Lay 2ml dich chiét cho vao 6ng nghiém thém Iml anhydric acetic thém | giot
H;SO¿ đặc
Dẫn chất steroid cho màu xanh lá
Dẫn chất triterpenoid cho màu đỏ
- Kết quả: Dung dịch có màu xanh lá (phản ứng dương tính với saponin steroid)
3 Phản ứng Salkowski
Lấy 2ml dịch chiết cho vào ống nghiệm, bốc hơi tới cắn Hoà tan cắn băng
Iml Cloroform thêm 1 giọt H;SO¿ đặc
- Kết quả: Dung dịch có màu vàng chuyển sang đỏ sẵm (phản ứng
dương tính)
4 Phản ứng sơ bộ phân biệt 2 loại Saponin
Lấy 2 ống nghiệm dung tích 20 ml, cho 5ml NaOH 0.1N vào lống (1)
và 5ml HCI 0.1N vào I ống nghiệm khác (2)
Cho vào mỗi ống nghiệm 2-3 giọt dịch chiết cồn (ở trên) Lắc mạnh cả 2 ống trong 3 phút Quan sát cột bọt
- Kết quả: cột bọt ống (1) cao gấp 3 lần cột bọt ống (2)
=> sơ bộ kết luận bài thuốc có saponin steroid
Nhận xét: Qua các phản ứng trên sơ bộ nhận định bài thuốc có saponin
steroid
® Dịnh tính IRIDOID GLYCOSID
Chiết xuất: Lây 5ml cao lỏng (2:1), hoà tan với 30ml nước cất, đun nóng cho tan, lọc (gấp nếp) Lắc dịch lọc với ether dầu hoả, sau đó lắc 3 lần với n-
buthanol, mỗi lần 15ml Gộp các dịch chiết n-butanol lại đem bốc hơi đến
căn Căn thu được hoà tan trong 5ml methanol để làm phản ứng Định tính:
1 Phản ung Trim-Hill: Lay 1ml dụng dịch thử thêm 1-2 giọt
Trang 3226
- Kết quả: xuất hiện màu tím đỏ (phản ứng dương tính)
2 Phản ứng với thuốc thử Libermamn - Bourchardat Lấy 2ml dịch chiết, thêm 1ml anhydric acetic và I giọt HạSO¿ đặc
- Kết quả: Xuất hiện màu đỏ nâu (phản ứng đương tính)
Nhận xét: Qua các phản ứng trên sơ bộ nhận định bài thuốc có iridoid
® Dinh tinh SACCHARID
Chiết xuất: Lâý 5ml cao lỏng, hoà tan/10ml nước nóng, để nguội, lọc lấy dịch lọc làm thí nghiệm
Dinh tinh: Lay: Ông 1: 4ml dịch lọc +4 giọt d” Lugol
Ống 2: 4ml nước cất + 4 giọt d” Lugol
- Kết quả: Ông 1 xuất hiện màu xanh đen (phản ứng dương tính)
Nhận xéi: Qua phan ứng trên sơ bộ nhận định bài thuốc có saccharid
® Định tính ACID HỮU CƠ
Chiết xuất: Lẫy 5ml cao lỏng, thêm 5ml nước cất khuấy đều Thêm I ít bột Na;CO; lắc nhẹ
- Kết quả: xuất hiện nhiều bọt khí (phản ứng dương tính)
Nhận xé(: Qua phản ứng trên sơ bộ nhận định bài thuốc có acid hữu cơ
® Định tính ACID AMIN
Chiết xuất : Lẫy 5ml cao lỏng lắc với ether dầu hỏa để loại tạp, thêm đồng
lượng acetone lắc đều, để tủ lạnh 3h, lọc lấy dịch lọc, loại màu bằng than
hoạt, cô dịch lọc còn 5ml để làm phản ứng định tính
Dinh tinh: Lay 2ml dịch lọc, thêm 3 giọt TỶ Ninhydrin, đun cách thuỷ 2-3 phút
Kết quả: xuất hiện màu tím sẫm (phản ứng dương tính)
Nhận xét: Qua phản ứng trên sơ bộ nhận định bài thuốc có acid amin
® Dinh tinh GLYCOZID TIM
Chiết xuất: Lấy 10ml cao lỏng pha loãng bằng 10ml] nước cất, thêm 2ml dung
Trang 3327
qua giấy lọc gấp nếp Dùng dˆ Na;SO¿ để loại chì acetat thừa, (không còn
tủa), để lắng, lọc, chuyên sang bình gạn 100ml Dịch lọc được chiết bằng cloroform Nếu dịch chiết còn lẫn nước thì lọc lại qua một lớp bông và làm
khan bằng NazSO¿ Chia đều dịch chiết vào 4 ống nghiệm nhỏ đã được sây khô Đặt các ống nghiệm lên giá và bốc hơi trên nồi cách thuỷ đến khô, lấy cắn để làm định tính
Định tính:
1 Phản ứng của khung Steroid ( phản ung Libermann)
Cho vào ống nghiệm có chứa cắn 1ml anhydric acetic, lắc đều cho tan
hết cắn Nghiêng ống nghiệm 45°, cho từ từ theo thành ống nghiệm 0.5ml H;SO¿ đặc (tránh xáo trộn)
- Kết quả: Mặt tiếp xúc 2 lớp không xuất hiện vòng màu tím đỏ
Lắc ống nghiệm lớp trên có màu nâu đỏ nhạt (phản ứng âm tính)
2 Phản ứng của vòng lacton 3 cạnh
a/ Phan ung Baljet
Cho vào ống nghiệm chứa cắn 2ml cén 90° lắc đều cho tan cắn, nhỏ từng giọt T’ Baljet
- Kết quả: Xuất hiện màu vàng nhạt (phản ứng âm tính) bí Phản ứng Legal
Cho vào ống nghiệm chứa cắn 2ml côn 90° lắc đều cho tan cắn Nhỏ I- 3 giọt T° Natri nitroprussiat 0.5% và 2 giọt NaOH 10% Lắc đều
- Kết quả: Xuất hiện màu vàng (phản ứng âm tính) 3 Phản ứng của phân đường
Phản ứng Keller-Kiliani: Cho vào ông nghiệm chứa cắn 2ml cồn 90° Lắc đều
cho tan cắn Thêm 3 giọt d” FeCl› 5% pha trong acid acetic Lắc đều Nghiêng ống
nghiệm 45°, cho từ từ theo thành ống nghiệm 0.5ml H;SO¿ đặc (tránh xáo trộn)
Trang 3428
Nhận xét: Qua các phản ứng định tính sơ bộ kết luận trong cao lỏng
bài thuốc không có glycosid tim Kết quả định tính được tóm tắt ở bảng 2 Bảng 2: Kết quả định tính sơ bộ thành phân hoá học của bài thuốc STT | _ Nhóm chất Phản ứng định tính Kết quả | Sơ bộ k.luận L | Klavonoid Phản ứng Cyanidin 444 Phản ứng với kiềm +++ Có Phản ứng với FeC]: 5% +++ Phản ứng với hơi NHạ + 2 | Saponin Hién tugng tao bot +++ Phản ứng Salkowski + Có Phản ứng Libermann-Bourchardat a
Phan tmg ph.biét 2 loai saponin S steroid 3 | Glycosid tim | Phan tng Liberman -
Phan tmg Baljet Không có Phản ứng Legal -
Phản ứng Keller-Kiliani -
4 | Acidhituco’ | Phan ứng với Na,CO; +++ Có
Trang 3529
Nhân xét: Qua các phản ứng định tính ở trên, chúng tôi sơ bộ kết luận
trong cao lỏng 2:1 của bài thuốc có chứa các nhóm chất: saponin, flavonoid, acid hữu cơ, iridoid gÌycosid, acid amin và polysaccharid, không có glycosid tim Các nhóm chất có trong cao lỏng bài thuốc đều có mặt trong các vị thuốc
của bài thuốc như:
- Flavonoid có trong Cát căn, Hoàng kỳ, Mạch môn, Thương truật - Saponin có trong Hoàng kỳ, S steroid có trong Mạch môn, Tri mẫu - Iridoid có trong Sinh địa
- Polysaccharid có trong Sinh địa, Hồng kỳ, Mạch mơn, Tri mẫu, Cát căn
- Acid hữu cơ có trong Sinh địa - Acid amin có trong Sinh địa
3.2.2 Kiểm tra sự có mặt của các vị thuốc trong cao lỏng bằng SKLM * Chuẩn bị dịch chấm sắc ký:
- Cân số gram mỗi vị dược liệu đã được tán nhỏ thành bột tương ứng có trong 5ml cao lỏng 2:1 của bài thuốc Cu thé: Tri mau 1,642 Sinh dia 2,73g Cát căn l,27g Mạch mơn 1,82¢ Hoang ky 1,45¢g Thuong truat l,lg
- Cho riêng mỗi vị vào các ống nghiệm to, thêm 10ml methanol, đun sôi
cách thủy 10 phút, lọc, lấy dịch đem bốc hơi dung môi còn Iml được dịch
chấm sắc ký của từng vị thuốc
- Lây 5ml cao lỏng thêm 10ml methanol, đun sôi cách thủy 10 phút, lọc, lấy
Trang 3630
a/ Dinh tinh vi thuéc Cat can trong cao lỏng bài thuốc
- Dịch chấm sắc ký của được liệu Cát căn (C) - Dịch chấm sắc ký của bài thuốc (BT)
- Ban mỏng Silicagel GF254 tráng sẵn, hoạt hoá ở 110°C trong 1h
- Hệ dung môi triển khai gồm:
Hệ(I) cloroform : methanol : nước (15:5:0.5) Hệ (II) ethylacetat : acid acetic : nước (20:3:4) Hệ (HI) petro ether : ethylacetat (1:1) Hệ (IV) toluen: ethyl acetat: acid formic (5:6:1)
- Triển khai sắc ký: Chấm 2 vết dịch chiết của Cát căn và bài thuốc trên
cùng một bản mỏng, chạy trên cùng một hệ dung môi đến vạch giới hạn dung
môi (cách mép trên Iem), lấy ra, để khô tự nhiên Hiện vết dưới ánh sáng tử
ngoại ở bước sóng 254nm và 365nm Hiện màu bang dung dịch kiềm Trong các hệ dung môi trên thì hệ (HH) là rõ hơn cả
Kết quả SKLM được ghi dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 254nm, thể hiện ở hình 2.1
Nhận xét : Sắc ký đồ của cao lỏng BT cho 6 vết
Trang 3731
b/ Dinh tinh vi thuéc Hoang kj trong cao léng bai thudc
- Dịch chấm sắc ký của dược liệu Hoang ky (H)
- Dịch chấm sắc ký của bài thuốc (BT)
- Bản mỏng Silicagel GF254 tráng sẵn, hoạt hoá ở 1 10°C trong lh
- Hệ dung môi triển khai gồm:
Hệ(I) cloroform : methanol : nước (65:35:10) Hé (If) ethyl acetat: acid acetic: nude = (8:2:1) Hệ (IH) cloroform : aceton: acid formic (7:3:0.5) Hệ (IV) toluen : ethylacetat : acid formic (5:6:1)
- Triển khai sắc ký: Chấm 2 vét dịch chiết của Hoàng kỳ và bài thuốc trên
cùng một bản mỏng, chạy trên cùng một hệ dung môi đến vạch giới hạn dung
môi (cách mép trên Icm), lấy ra, để khô tự nhiên Hiện vết dưới ánh sáng tử
ngoại ở bước sóng 254nm và 365nm Hiện màu bằng dung dich H,SO, 10% trong EtOH (TT)
Trong các hệ dung môi trên thì hệ (III) hiện vết rõ hơn cả
Kết quả SKLM được ghi dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 365nm, thể
hiện ở hình 2.2
Nhận xét : Sắc ký đồ của cao lỏng BT cho
6 vết trong đó có 4 vết có Rf tương đương
với sắc ký đồ của Hoàng kỳ
Kết luận: Sơ bộ nhận định trong cao lỏng BT có vị thuốc Hoàng kỳ
Trang 38
32
c/ Dinh tinh vi thuéc Mach mén trong cao léng bai thudc - Dịch chấm sắc ký của được liệu Mạch môn (M)
- Dịch chấm sắc ký của bài thuốc (BT)
- Ban mong Silicagel GF254 trang sin, hoat hoa 6 110°C trong 1h - Hệ dung môi triển khai gồm:
Hệ(I) cloroform : methanol (8:2) Hệ(I) cloroform : ether dầu hỏa (9:1) Hệ (HH) n- butanol : ethylacetat : acid acetic : nước (6:4:3:2)
Hệ (IV) cloroform : aceton : methanol (8:2:1)
- Triển khai sắc ký: Chấm 2 vét dịch chiết của Mạch môn và bài thuốc trên
cùng một bản mỏng, chạy trên cùng một hệ dung môi đến vạch giới hạn dung
môi (cách mép trên Icm), lấy ra, để khô tự nhiên Hiện vét dưới ánh sáng tử
ngoại ở bước sóng 254nm và 365nm Hiện màu bằng dung dịch H;SO¿ 10% trong EtOH (TT)
Trong các hệ dung môi trên thì hệ (IV) là rõ hon ca
Kết quả SKLM được ghi dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 365nm, thể hiện ở hình 2.3
Nhận xét : Sắc ký đồ của cao lỏng BT cho 5 vết
Trang 3933
d/ Định tính vị thuốc Sinh địa trong cao lỏng bài thuốc
- Dịch chấm sắc ký của dược liệu Sinh địa (S) - Dịch chấm sắc ký của bài thuốc (BT)
- Bản mỏng Silicagel GF254 tráng sẵn, hoạt hoá ở 110°C trong lh
- Hệ dung môi triển khai gồm:
Hệ (I) cloroform : methanol : nước (14:6:1) Hé (Il) n-butanol: cloroform: methanol: nude (2:4:2:0.5) Hệ (III) cloroform : aceton (7:3)
Hé (IV) toluen : ethyl acetat : acid formic (5:6:1)
- Triển khai sắc ký: Chấm 2 vét dịch chiết của Sinh địa và bài thuốc trên
cùng một bản mỏng, chạy trên cùng một hệ dung môi đến vạch giới hạn dung môi (cách mép trên Icm), lấy ra, để khô tự nhiên Hiện vết dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 254nm và 365nm Hiện màu bằng thuốc thir Trim - Hill
Trong các hệ dung môi trên thì hệ (IV) là rõ hơn cả
Kết quả SKLM được ghi dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 365nm, thể
hiện ở hình 2.4
Nhận xét : Sắc ký đồ của cao lỏng BT cho 3 vết trong đó có 2 vết có Rf tương đương với sắc ký đồ
của Sinh địa
Kết luận: Sơ bộ nhận định trong cao lỏng BT có vị
thuốc Sinh địa
Trang 40
34
W Định tính vị thuốc Thương truật trong cao lỏng bài thuốc - Dịch chấm sắc ký của dược liệu Thương truật (Thì)
- Dịch chấm sắc ký của bài thuốc (BT)
- Bản mỏng Silicagel GF254 tráng sẵn, hoạt hoá ở 1 10°C trong Ih
- Hệ dung môi triển khai gồm:
Hệ (I) ethylacetat : ethanol : nước (10:2:1)
Hệ (II) ether dầu hỏa : ethylacetat (20:1)
Hệ (HI) cloroform : methanol : aceton (5:5:2) Hệ (IV) cloroform : aceton (7:3)
- Triển khai sắc ký: Chấm 2 vét dịch chiết của Thương truật và bài thuốc
trên cùng một bản mỏng, chạy trên cùng một hệ dung môi đến vạch giới hạn
dung môi (cách mép trên Icm), lấy ra, để khô tự nhiên Hiện vết dưới ánh
sáng tử ngoại ở bước sóng 254nm và 365nm
Trong các hệ dung môi trên thì hệ (IV) là rõ hơn cả
Kết quả SKLM được ghi dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 254nm và
365nm, thể hiện ở hình 2.5
Hình 2.5: Sắc ký đề Thương truật và bài thuốc
Nhận xét : Sắc ký đồ của cao lỏng BT cho 6 vết trong đó có 4 vết có Rf