Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của một loài thuộc chi gynura

• Về thành phần hoá học: + Định tính các nhóm chất có trong dược liệu nghiên cứu.. THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA CÁC LOÀI THUỘC CHI GYNURA Hầu hết các tài liệu trong nước chúng tôi thu thập đượ

Bộ Y Tế TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI

THÁI THỊ CHI MAI

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THựC VẬT, THÀNH PHẦN HOÁ HỌC, VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA* / * • *

(KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHOÁ 1999 - 2004)

ThS NGUYỄN SƠN NAM

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI Thời gian thực hiện : 20/2 /2004 ĐẾN 20/5/2004

Hà Nội 05 - 2004

LỜI CẢM ƠN

Với sự chỉ bảo và giúp đỡ tận tình của các thầy cô giáo, tôi đã hoàn thành khoá luận tốt nghiệp, đồng thời tôi cũng học thêm được nhiều điều không chỉ về chuyên môn mà cả về cách tư duy trong công việc và cách đối nhân xử thế.

Tôi xin bày tỏ lời biết ơn sâu sắc tới:

GS TS Phạm Thanh Kỳ — người thầy đã nhiệt tình tạo điều kiện cho tôi tham gia nghiên cứu khoa học.

ThS Nguyễn Sơn Nam - nghiên cứu sinh trực tiếp hướng dẫn tôi làm tốt nghiệp

Đã dìu dắt, chỉ bảo, đống góp ỷ kiến quý báu cho tôi, giúp tôi có thêm sự miệt mài trong nghiên cứu khoa học.

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn: TS Đỗ Ngọc Thanh, PGS TS Chu Đình Kính,

TS Nguyễn Viết Thân, TS Phùng Thị Vinh, DS Nguyễn Kim Phượng, TS Cao Văn Thu; DS Trần Công Binh, DS Nguyễn Bá Công cùng các thầy cô giáo, các kỹ thuật viên Bộ môn Dược liệu, các phòng ban trong trường, các cán bộ Viện Kiểm nghiệm, Viện hoá học, Viện Y học cổ truyền đã tạo điều kiện tốt cho tôi trong quá trình thực hiện khoá luận này.

Cuối cùng tôi xin cảm ơn gia đình và bè bạn đã động viên khích lệ tôi- là chỗ dựa tinh thần cho tôi trong quá trình làm khoá luận tốt nghiệp.

Hà Nội, ngày 22 tháng 05 năm 2004

Sinh viên: Thái Thị Chi Mai

MỤC LỤC

ĐẶT VẤN Đ Ể 1

PHẦN I : TỔNG QUAN 2

1.1 Vị trí của chi Gynura trong giới thực vậ t 2

1.2 Vài nét về đặc điểm thực vật vổ phán bố của các loài thuộc chi Gynura 3

1.2.1 Đặc điểm thực vật chung của chi Gynura 3

1.2.2 Đặc điểm thực vật và phân bố của một số loài thuộc chi Gynura có ở Việt N am 4

1.2.3 Thành phần hoá học của các loài thuộc chi Gynura g 1.2.4 Công dụng của các loài thuộc chi Gynura 2

1.3 Những kết quả nghiên cứu ở trong nước

PHẦN n : THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ J2 2.1 Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 12

2.1.1 Nguyên liệ u 12

2.1.2 Phương pháp nghiên cứu ị2 2.2 Thực nghiệm và kết quả

2.2.1 Về thực vật

2.2.2 Về thành phần hoá h ọ c

2.2.3 Thử tác dụng sinh h ọ c

PHẦN n i : KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT

44 3.1 Kết lu ậ n 44

3.2 Đề xuất ^

TÀI LIỆU THAM KHẢO 46

ĐẶT VẤN ĐỂ •

Giáo sư Phạm Hoàng Hộ từng viết [13]: “ .Hiển hoa là ân nhân vô giá của loài người Hiển hoa cho ta nguồn thức ăn căn bản hằng ngày Lúc đầy nguồn sống, lúc nhàn rỗi, chính hiển hoa cung cấp cho loài người thức uống ngon lành để say sưa cùng vũ trụ Lúc ốm đau, cũng chính cây cỏ giúp cho ta dược thảo hiệu linh ” Loài người vẫn khồng ngừng tìm hiểu và khai thác những nguồn dược liệu làm thuốc trong thiên nhiên

Bầu đất là một loại cây rất đỗi quen thuộc thường được dùng để nấu canh

ăn hàng ngày Theo kinh nghiệm dân gian, cây này được dùng làm thuốc mát, chữa một số bệnh thông thường như sốt, đắp ngoài trị mụn nhọt và cả bệnh đái tháo đường - một căn bệnh mang tính thời sự, đang ở giai đoạn bùng nổ trên toàn thế giới

Để góp phần nâng cao giá trị sử dụng của dược liệu, chúng tôi tiến hành

thực hiện đề tài nghiên cứu cây Bầu đất (Gynura sp.) với các nội dung chính

sau:

• Về thực vật:

+ Mô tả đặc điểm thực vật và định tên khoa học của cây

+ Mô tả đặc điểm vi phẫu thân, lá và đặc điểm bột thân, lá

• Về thành phần hoá học:

+ Định tính các nhóm chất có trong dược liệu nghiên cứu

+ Định lượng các thành phần chính có trong dược liệu

+ Chiết xuất và phân lập thành phần chính

+ Sơ bộ nhận dạng chất phân lập được trong cây

• Về tác dụng sinh học:

+ Thử độc tính cấp

+ Thử tác dụng kháng khuẩn

+ Thử tác dụng hạ đường huyết

PHẦN I: TỔNG QUAN

1.1 VỊ TRÍ CỦA CHI GYNVRA TRONG GIỚI THựC VẬT • • •

Gynura là một chi nằm trong phân họ Hoa ống của họ Cúc (Asteraceae

hay Compositae)- họ duy nhất của bộ Cúc (Asterales) thuộc phân lớp Cúc (Asteridae); Phân lớp Cúc thuộc lớp Ngọc lan (.Magnoliopsida) trong ngành Ngọc Lan cMagnoliophyta) nằm trong phân giới thực vật bậc cao [8]

Sơ đồ vị trí của chi như sau

Khoá phân loại đơn giản của chi Gynuraịl 7][29]:

Bộ cúc

Họ Cúc

Nhóm 1: Đầu trạng toàn hoa hình ống

CỦA CÁC LOÀI THUỘC CHI GYNURA

1.2.1 ĐẶC ĐIỂM THỤC VẬT CHUNG CỦA CHI GYNURA

Theo “Tóm tắt đặc điểm các họ cây thuốc” của GS Vũ Văn Chuyên [9]

và các tài liệu phân loại thực vật học [18] [7] [17] [29], các cây thuộc Chi

Gynura có các đặc điểm chung của họ Cúc và một số đặc điểm riêng như sau:

Cây thuộc thảo, ít khi cây to Rễ đôi khi phồng to thành rễ củ Lá đơn, thường mọc so le, ít khi mọc đối, có khi thành hoa thị, không có lá kèm; phiến lá ít khi nguyên; thường khía răng cưa hoặc chia thuỳ

Cụm hoa đầu gồm nhiều hoa mọc ở kẽ những vẩy và bao bọc bởi một tổng bao lá bắc Hoa lưỡng tính Đài hoa rất giảm, thường biến đổi thành một mào lông tơ nhiều, trắng, mịn Năm cánh hoa liền nhau tạo thành tràng hình ống; 5 nhị dính liền nhau bởi bao phấn thành một ống bao quanh vòi nhuỵ; vòi nhuỵ dài, núm nhuỵ xẻ đôi có lông; bầu hạ một ô đựng một noãn Qủa bế có mào lông Hạt không có nội nhũ

1.2.2 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ PHÂN B ố CỦA MỘT s ố LOÀI

THUỘC CHI GYNURA CÓ Ở VIỆT NAM

Dựa theo các tài liệu “Cây cỏ Việt Nam” của Phạm Hoàng Hộ [13],

“Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam” của Đỗ Tất Lợi[15], “Cây cỏ có ích

ở Việt Nam” của Võ Văn Chi [5] và “Từ điển cây thuốc Việt Nam” [6], chúng tôi tập hợp được một số loài của chi như sau:

♦> Gynura auriculata Cass.

Tên Việt Nam: Kim thất tai

cỏ mọc hàng năm, thân cao 50 cm, không nhánh Lá có phiến thon ngược, đầu tù, đáy từ từ hẹp, mỏng, gân phụ 5-7 cặp, gân tam cấp mảnh, bìa

có răng thưa; đáy cuống có tai cao 5 mm, dạng lá bẹ Phát hoa ở ngọn, dài 20

cm, ít hoa đầu; cọng dài; tổng bao cao 1,2-1,5 cm, lá hoa 1 hàng; hoa ống cả, màu cam Quả bế có lông mào do tơ trắng, mịn

Phân bố: mọc nhiều ở Vịnh Hạ Long

❖ Gynura aurantica (Blume) DC.

Tên khác: Cacalia aurantica BL.

Tên Việt Nam: Kim thất nhung

Cỏ bò rồi đứng; thân và lá đầy lông đứng đỏ tím Lá có phiến mập mạp, bìa có răng thưa và thuỳ cạn; cuống ngắn Cụm hoa đầu họp thành xim ở trên đầu ngọn; trong đầu hoa toàn hoa hình ống, màu vàng da cam sáng rực Quả

bế có lông mào do tơ nhiều mịn trắng

Phân bố: các nước Đông Nam Á, gặp nhiều ở vùng núi đảo Giava (Inđônexia) Ở nước ta thường được trồng làm cảnh

❖ Gynura barbaraefolia Gagnep.

Tên Việt Nam: Cải kim thất

Cây thảo cao 80 cm, có lông, thân non có cạnh Lá xếp dọc theo thân,

có lông, thuỳ sâu, 1 thuỳ ở gốc cuống có dạng lá kèm, gân phụ 4 cặp Ngù hoa kép, chia nhiều nhánh, mỗi nhánh có 1-3 hoa màu vàng, cao 1,5 cm; lá bắc hẹp, cao 4-9 mm Quả bế cao 1,7 mm, nhám; lông mào gồm nhiều tơ trắng mịn

Ra hoa tháng 1 -4

Phân bố: Mọc hoang các vùng đồi bãi, savan cỏ và cả trên núi đá, núi đất sa thạch từ Nam Hà, Ninh Bình đến Quảng Trị, Thừa Thiên Huế, Kon Tum, Lâm Đồng

❖ Gynura bicolor DC.

Tên Việt Nam: Cải kim thất hai màu

Cây thảo cao 30-60 cm, sống nhiều năm; toàn thân bóng và không có lông Lá mọc so le, hình bầu dục nhọn hai đầu, dài 6-9 cm, rộng 1,5-3 cm, mặt trên màu lục, mặt dưới màu tía; cuống lá ngắn, màu hồng tím Cụm hoa ở ngọn, ít đầu hoa; trong mỗi đầu chỉ chứa toàn hoa hình ống, màu vàng Quả có mào lông.

Phân bố: mọc nhiều ở đảo Molucca, được trồng ở nhiều nước và ở nước

❖ Gynura bodinieri Lévl.

Tên Việt Nam: Kim thất Bodinier

Cây thảo sống nhiều năm, cao 20 - 60 cm, có củ to lcm Lá chụm ở đất,

lá dưới có phiến nguyên, lá trên có phiến hình đàn, dài 4-6, rộng 1,5-3 cm Hoa đầu 2-3 cái, trên thân cao 50-60 cm, mỗi cái cao 1-1,3 cm, rộng 1 cm, toàn hoa hình ống, màu vàng; lá bắc 1 hàng, không lông; hoa có ống cao 12

mm, phần phù cao 4 mm; bao phấn thon Quả bế nhỏ, có rạch; mào lông gồm nhiều sợi màu trắng

❖ Gynura colaniae Merr.

Tên Việt Nam: Kim thất Colani

Cỏ leo, không lông Lá có phiiến xoan thon, to 11 X 5 cm, chót nhọn, đáy tù tròn, bìa có răng rất thưa, gân phụ 5-6 cặp; cuống dài 1 cm Phát hoa ở ngọn, nhánh dài; cọng dài mang hoa đầu có tổng bao cao 1,5 cm, lá hoa 1

hàng; hoa vàng Quả bế có lông mào mịn trắng, dài 1,5 cm

Phân bố: Tìm thấy ở Hà Bắc

❖ Gynura crepidioides Benth.

Tên khác: Crassocephalum crepidioides (Benth.) s Moore.

Tên Việt Nam: Rau tàu bay, Kim thất

Cây thảo mập, mọc đứng cao tới lm Thân tròn hay khía rãnh, màu xanh Lá mỏng, hình trứng dài to 7 X 3 cm; phần chóp phiến lá có hình thoi; phần dưới có những thuỳ xẻ sâu; mép lá có răng cưa không đều; gân phụ 6-7 cặp; mặt trên lục đậm, mặt dưới lợt Cụm hoa dạng đầu, mọc ở nách lá hoặc ở

ngọn, gồm nhiều hoa màu hồng nhạt; bao chung gồm 2 hàng lá bắc hình sợi Quả bế hình trụ, có một mào lông trắng ở đỉnh.

❖ Gynura divaricata (L.) DC.

Tên Việt Nam: Bầu đất hoa vàng, Kim thất giả, Rau tàu bay,

Cây thảo lưu niên, cao 30- 50 cm, có rễ củ Lá chụm ở gốc, phiến thon,

nguyên hay có thuỳ khá sâu, mép có vài răng thưa, có ít lông hay khổng lông, gân phụ 5-6 cặp, cuống 1-2 cm Chùm 3-5 hoa đầu cao 1-1,5 cm, màu vàng tươi Quả bế cao 2,5 mm; mào lông gồm nhiều tơ mịn màu trắng

Phân bố: Ấn Độ, Trung Quốc, Lào , Campuchia, Thái Lan và Inđônêxia

Ở nước ta, có gặp ở các vùng núi và trong các savan cỏ từ Lạng Sơn, Thái

Nguyên, Hà Tây, Ninh Bình, Quảng Trị, Quảng Nam đến KonTum, Gia lai,

Lâm Đồng và vài nơi khác ở Nam Bộ.

❖ Gynura ecalyculata DC.

Tên khác: Emilia sonchifolia (L) DC., Cacalia sonchifolia (L.)

Tên Việt Nam: Cây rau má lá rau muống

Cây nhỏ mọc hàng năm, thẳng đứng cao 0,2- 0,4 m; thân nhẵn Lá phía dưới hình mắt chim hoặc hình trứng, có khi gốc hình tim, mép có răng cưa hoặc hơi chia thuỳ nhỏ, cuống dài; những lá sau hình 3 cạnh chia lông chim, thuỳ tận cùng hình trứng hơi 3 cạnh, răng cưa to thô; lá ở trên hình 3 cạnh dài, không cuống, có tai và ôm vào thân Cụm hoa đầu hình trụ, dài 8-9 mm, rộng

4 mm, thường tụ 2-4 chiếc, cuống gầy, dài 3-6 cm Hoa màu vàng, hồng hoặc hơi tím Quả bế dài 5,5 mm có gọng ngắn

Phân bố: Mọc hoang ở khắp các bãi, hàng rào Thường mọc ở các nước nhiệt đói châu Á và miền Nam Trung Quốc

❖ Gynura lycopersicifolia DC.

Tên Việt Nam: Kim thất lá tô mách

Cây thân thảo mập, đa niên Thân có 5 cạnh cao đến 1,5 m ở nơi rậm rập Lá có phiến hình đàn, xẻ thành đoạn hẹp, mép có vài răng, có lông,

thường có màu đo đỏ; cuống có tai nhại lá bẹ to Cụm hoa hình đầu trên cọng dài, hoa màu cam đậm Quả bế nâu, lông mào do tơ mịn, trắng, dài 5 mm.

Phân bố: Thường mọc ở đất hoang hoặc ven rừng

♦♦♦ Gynura nitida DC.

Tên Việt Nam: Cải giả, Kim thất láng

Cây thân thảo Lá có phiến thon dài 10-13 cm, rộng 2-2,5 cm, đầu nhọn, mép có răng thấp nhọn, gân phụ 6 cặp, cuống dài 1 cm Cụm hoa đầu màu vàng, cao 1,5 cm, lá bắc 2 hàng, hàng ngoài ngắn, hàng trong dài đến 1,5 cm, không lông Quả bế có lông mào trắng mịn, dài l,5cm

Phân bố: Cây mọc ở trong rừng thưa, dọc bờ nước Ở nước ta, cây mọc tại nhiều nơi từ Cao Bằng, Lạng Sơn, Bắc Cạn, Quảng Ninh, Phú Thọ, Lai Châu tới Kon Tum, Gia Lai, Đắc Lắc và Lâm Đồng

❖ Gynura procumbens (Lour.) Merr.

Tên khác: Cacalia procumbens Lour., Gynura sarmentosa DC., Gynura

finlaysoniana DC., Cacalia cylindrifolia Wall., Sonchus valubilis Rumph.,

Tên Việt Nam: Bầu đất, Kim thất, Rau lúi, Bầu đất dây

Cây thân thảo bò hơi leo, cao đến lm Thân mọng nước có nhiều cạnh

Lá có hình phiến dày, dòn, thon; xanh lợt mặt dưới, hơi tía mặt trên và xanh ở gân, dài 3 - 8 cm, rộng 1,5 - 3,5 cm, khía răng ở mép, cuống dài cỡ 1 cm.Cụm

hoa ở ngọn cây, gồm nhiều hoa đầu màu tía; các hoa trong đầu hoa hình ống, màu vàng da cam Quả bế có 3 cạnh, mang một mào lông trắng ở đỉnh.

Phân bố: Mọc ở nơi ven rừng, ven đồi, nơi ẩm ở nhiều nước châu Á như

Ấn Độ, Inđônêxia, Thái Lan, Philippin và Việt Nam Ở nước ta, cây mọc hoang nhưng cũng thường được trồng để nấu rau ăn và làm thuốc

❖ Gynura pseudochina (L.) DC.

Tên khác: Cacalia bulbosa (Lour.)

Tên Việt Nam: Thổ tam thất, Bầu đất dại, Tam thất giả, Nam bạch truật, Ngải rét (Sađéc), Bầu đất củ

Cây thảo mọc thẳng đứng, nhẵn, có rễ nạc tròn, có thớ trông như dạng

củ tam thất Lá mọc gốc, hình trái xoan ngược hay thuôn, gần nhẵn hay có

lông phấn, chóp tròn, gốc thót lại hẹp dà, mép hầu như nguyên hoặc lượn sóng

hoặc xẻ lông chim; dài 10 - 15 cm; rộng 1,5 - 5cm Cụm hoa đầu màu vàng,

xếp 4 - 5 thành ngù đầu ngọn; tổng bao lá bắc gồm nhiều hàng hình dạng

khác nhau Quả bế hình trụ dài 2,5 mm, có 10 cạnh

Phân bố: Mọc nhiều ở các savan cỏ khô hạn khắp Đông Duơng và cũng

phổ biến ở Ấn Độ, Inđônêxia, Thái Lan, Trung Quốc Ở nước ta, thường gặp

ở vùng núi Quảng Trị, Lâm Đồng, Tây Ninh cho tới đồng bằng.

❖ Gynura segetum Lour.

Tên khác: Gynura japonica (Thunb.) Juel, Senecio japonica Thunb.,

Gynura pinnatifida Lour.,

Tên Việt Nam: Kim thất Nhật, Cúc tam thất, Bạch truật nam, thổ tam

thất

Cây thảo sống lâu năm, cao 0,5- 1,1 m, lúc non màu tím tía Rễ mẫm

tròn Trong có chất bột màu trắng, lúc tươi hơi có nhớt Lá mọc so le, sít nhau,

phiến hình xoan, dài 10 - 25 cm, rộng 5 - 1 0 cm, xẻ thuỳ lông chim không

đều, mép có răng thưa; trên mặt lá đổi khi có nhiều đốm tím; cuống dài 2 - 4

cm, có tai như lá kèm hình buồm rộng Cụm hoa đầu màu vàng sẫm đến vàng

cam, có cuống dài, có lá bắc nhỏ; bao chung cao 1 - 5 cm, vói vài lá bắc phía

ngoài nhỏ Quả bế có lông mào trắng, mịn

Phân bố: Nhật Bản, Trung Quốc, Việt Nam Ở nước ta, cây mọc hoang

ở vùng chân núi, đồi cỏ hoặc bãi bằng

1.2.3 THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA CÁC LOÀI THUỘC CHI

GYNURA

Hầu hết các tài liệu trong nước chúng tôi thu thập được về chi Gynura

đều chưa nghiên cứu về thành phần hoá học Riêng trong tài liệu “Những cây

thuốc và vị thuốc Việt Nam”[15] và “Từ điển cây thuốc Việt Nam” [6] có ghi:

- Trong cây Rau tàu bay (Gynura crepidioides) có 93,1% nước, 2,3-

2,5% protid, 1,7-1,9% glucid, 1,6% cellulose, 0,9% tro, 81mg% canxi,

25mg% p, 3,4% caroten, 10mg% vitamin c, không có chất độc phá hoại hồng cầu hay làm hại máu nhưng chứa hàm lượng sắt rất ít [15]

- Trong củ loài Kim thất Nhật (Gynura segetum, Gynura japonica,

Gynura pinnatifida) có chứa: seneciphyllinin và seneciphyllin.

Tìm trên mạng Internet, chúng tôi thấy một số bài báo ở các Website nêu thành phần hoá học một số cây:

- Trong rễ cây Kim thất Nhật [23] có: một quinonoid terpenoid là (-)- alpha- tocospirone; một chất màu mới là (-)- gynuraone; 3 steroid mới là (22

E, 24 S) - 7 alpha- hydroperoxystigmasta- 5, 22- dien- 3 beta- ol; (22 E, 24 S)

- stigmasta- 1,4,22- trien-3-one và (24 R)- stigmasta- 1,4- dien- 3- one cùng với 15 chất đã biết khác như oxid caryophyllene; 6-acetyl- 2,2 - dimethylchroman- 4- one; vanillin; 2,6- dimethoxy- 1,4- benzoquinone và acid benzoic Trong củ cây này có chứa alcaloid, người ta đã phân lập được 4 chất là: senecionine, senephyllin, seneciphyllinine và (E) - seneciphylline[27]

- Trong cây Gynura elliptica người ta phân lập được: (+)- gynunone,

một chất màu và 6 chất khác ở phân đoạn CHC13 trong đó có 6-acetyl - 2,2- dimethylchroman-4-one và vanillin [24]

Tìm trong các kỳ của tạp chí “ Phytochemistry”, chúng tôi thu thập thêm thông tin như sau:

- Trong cây Rau tàu bay (Gynura crepidioides) có Gynurone- một

coumarin terpenoid [20]

1.2.4 CÔNG DỰNG CỦA CÁC LOÀI THUỘC CHI GYNURA

Theo các tài liệu [5][6] [15] [13] ghi công dụng của các loài thuộc chi Gynura như sau:

+ Cây kim thất Bodinier: Rễ củ dùng làm thuốc trị sản hậu ứ trệ, chảy máu mũi, thổ huyết, đau phong thất, mụn nhọt lở ngứa

+ Cây rau tàu bay (Gynura crepidioides)' ngọn non dùng nấu canh, cây

dùng làm thuốc mát, chữa ho Nhân dân còn dùng lá tươi giã nát đắp trị rắn cắn, rết cắn

+ Cây cải kim thất (Gynura barbaraefoli): chữa phong thấp, ngọn và lá

non có thể dùng nấu ăn thay rau

+ Cây kim thất hai màu (Gynura bicolor): trị đau bụng kinh, băng

huyết, ho ra máu, vết thương chảy máu, lở loét lâu không liền miệng Rễ cây được dùng trị phụ nữ sau khi đẻ bị ứ trệ đau bụng, băng huyết và sốt rét

+ Cây bầu đất hoa vàng: 1 Trị viêm phế quản, lao phổi, ho gà 2 Đau mắt đỏ, đau răng 3 Thấp khớp, đau nhức xương 4 Xuất huyết tử cung

+ Cây bầu đất (Gynura procumbens)' 1 Chữa đái són, đái buốt 2 Phụ

nữ viêm bàng quang mãn tính, khí hư bạch đói, bệnh lậu, kinh nguyệt không đều 3 Trẻ em đái dầm, ra mồ hôi trộm 4 Sốt phát ban và lỵ Ở Trung Quốc,

rễ và toàn cây được dùng làm thuốc trị mụn nhọt lở nhứa, đòn ngã, gãy xương, phong thấp, viêm phổi, lao phổi

+ Cây bầu đất dại (Gynura pseudochina)’ Lá làm tan sưng và giảm đau,

giải nhiệt và tiêu độc, cũng được dùng trị xuất huyết tử cung, lỵ và tiêu viêm các vết thương Rễ củ bổ dưỡng điều huyết Ở Trung Quốc, rễ dùng chữa ho, làm mát máu, sinh tân dịch Nhân dân còn dùng ngoài, giã nhỏ đắp chữa sưng đau, mụn nhọt, chữa rắn cắn, rết cắn

1.3 NHỮNG KẾT QUẢ NGHIÊN cứu Ở TRONG NƯỚC

Luận Văn cao học của ThS Nguyên Sơn Nam [16] và khoá luận tốt nghiệp của DS Nguyễn Bá Công [10] nghiên cứu về đặc điểm thực vật, thành

phần hoá học và tác dụng sinh học của cây Kim thất (Gynura procumbens)

năm 2001 cho thấy:

+ Đã mô tả đặc điểm thực vật và định tên khoa học loài Gynura nghiên cứu là: Gynura procumbens (Lour.) Meư (= G sarmentosa DC.) Asteraceae.

+ Đã xác định đặc điểm vi phẫu lá, thân và đặc điểm bột lá, thân của

loài G procumbens (Lour.) Merr.

+ Đã xác định trong dược liệu có Flavonoid, sterol, caroten, chất béo

+ Đã chiết xuất và phân lập được 2 vết chất có màu tím kí hiệu là Tị, T2

và 2 chất có màu vàng kí hiệu là Vj, v 2 Các chất phân lập được mới chỉ đo phổ u v và IR sơ bộ nhận xét chúng là những hợp chất thuộc nhóm flavonoid

+ Đã thử độc tính cấp cho thấy với liều tối đa có thể cho chuột uống vẫn không tìm được liều LD50 và tất cả chuột thí nghiệm không chết con nào, không có biểu hiện ngộ độc, chuột ăn uống bình thường

+ Đã công bố về tác dụng giảm đau, tác dụng ức chế phù viêm chân chuột, tác dụng chống oxy hoá với mô hình thử trên tế bào gan chuột, tế bào não chuột và tác dụng dọn gốc tự do trong hệ xanthin/ xanthin oxydase

PHẦN H: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ

2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u

2.1.1 NGUYÊN LIỆU

Cây Bầu đất (Gynura sp.) được trồng tại Bệnh Viện TWQĐ 108, Hà

Nội; lấy mẫu cây có hoa để định tên khoa học; thu hái bộ phận trên mặt đất từ tháng 8 - 1 0 năm 2003, phơi sấy khô và cho vào túi polyetylen để nơi thoáng mát làm nguyên liệu nghiên cứu

2.1.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ú u

❖ Đặc điểm thực vật# • #

+ Vi phẫu cắt và nhuộm kép theo phương pháp ghi trong tài liệu “ Thực tập dược liệu” phần vi học [2]

+ Quan sát vi phẫu sau khi nhuộm kép dưới kính hiển vi

+ Phân tích hoa bằng kính lúp nổi Nikon của Nhật Bản

+ Định lượng Coumarin và Flavonnoid bằng phương pháp cân

+ Phân lập Flavonoid bằng sắc ký cột hấp phụ và sắc ký lọc gel theo tài liệu [12] [19]

+ Đo phổ u v và IR tại phòng thí nghiệm trung tâm của trường Đại học Dược Hà Nội

+ Đo phổ khối (MS) tại Viện Hóa học - 1'1'KHTN và CNQG

♦> Thử tác dụng sinh học

+ Thử độc tính cấp theo phương pháp xác định độc tính cấp của thuốc

cổ truyền trong qui chế năm 1996 [4] tại Viện kiểm nghiệm

+ Thử tác dụng kháng khuẩn theo phương pháp hiện đại của Vanden Bergher và Vlietlink (1994) tiến hành trên phiến vi lượng 96 giếng, kháng sinh kiểm định bao gồm: Ampixilin, Tetracyclin, Amphoterilin B và Nystatin tại phòng thăm dò tác dụng sinh học của Viện hoá học

+ Thử tác dụng hạ đường huyết: gây tăng đường huyết thực nghiệm bằng dung dịch Alloxan monohydrat tiêm tĩnh mạch đuôi chuột theo tài liệu [25], kít định lượng Glucose do hãng Human cung cấp, thực hiện trên máyđịnh lượng sinh hoá bán tự động Scout tại Viện dược liệu

2.2 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ

2.2.1 VỀ THỰC VẬT

*♦♦ Đặc điểm hình thái cây Bầu đất (Gynura sp.)

Cây Bầu đất (Gynura sp ) trồng ở trong Bệnh Viện TWQĐ 108 có các

đặc điểm sau:

Cây thân thảo mọc bò, phía ngọn mọc đứng, dài khoảng 0,5 - 1,5 m, có khi lên đến 2 m Thân có 5 cạnh, lúc non màu xanh có xen lẫn những vệt tím Lúc già thân chuyển màu xám Đốt thân dài khoảng 3 - 5 cm Bề mặt thân

và lá được bao bọc bởi lông nhỏ và thưa

Lá đơn nguyên, mọc so le Kích thước trung bình dài 8 - 1 5 cm, rộng 4

- 5 cm, cuống lá khoảng 1 - 2 cm Lá giòn, mọng nước, đầu lá hình thoi nhọn,

tù về phía đáy Mặt trên lá màu xanh sẫm, mặt dưới hơi lợt Mép lá có khía răng thưa Gân lá hình lông chim

Cụm hoa đầu mọc ở ngọn cành, mang nhiều đầu Mỗi đầu cao khoảng

2 cm được bao bọc bởi một tổng bao lá bắc gồm 2 hàng lá bắc màu xanh pha tím, hàng trong dài bằng một nửa độ dài đầu, hàng ngoài ngắn hơn Hoa màu cam nâu, lưỡng tính Đài hoa biến thành mào lông tơ mịn, trắng Tràng hoa

hình ống, cao khoảng 1,5 mm, gồm 5 cánh hoa hàn liền Nhị 5, liền nhau ở

bao phấn tạo thành một vòng bao quanh vòi nhụy, chỉ nhị đính gốc, mỗi nhị cao 5 mm, gốc chỉ nhị đính vào tràng hoa Nhụy gồm vòi nhụy dài, núm nhụy

xẻ đôi, màu vàng sẫm, thò ra khỏi tràng hoa, phủ đầy lông Bầu dưới, 1 ô, 2 lá noãn hàn liền Quả bế, mang mào lông tơ mịn, trắng

Hình 1: Cây mọc ở Viện 108 Hình 2: Cành mang hoa.

Hình 3: Hoa đầu Hình 4: Một hoa riêng Hình 5: Hoa đơn và

lẻ tổng bao lá bắc

Chúng tôi đã gửi mẫu cây có hoa tói giáo sư Vũ Văn Chuyên và gửi tới Viện sinh thái tài nguyên sinh vật để định tên khoa học Đồng thời chúng tôi cũng đã làm tiêu bản mẫu cây khô để lưu mẫu Kết quả định tên khoa học của

cây Bầu đất chúng tôi nghiên cứu là: Gynura crepidỉoides (Benth.)

Asteraceae.

❖ Đặc điểm vi phẫu lá (Hình 7)

Sau khi cắt vi phẫu lá bánh tẻ phần có chứa gân lá, tẩy và nhuộm kép ;quan sát dưới kính hiển vi thấy các đặc điểm sau:

• Phần gân lá: gân dưới lồi rõ, gân trên hơi lồi.

- Biểu bì trên và dưới (/) cấu tạo bởi một lớp tế bào hình trứng, kích thước nhỏ xếp đều đặn, rải rác có các lỗ khí (biểu bì dưói có nhiều lỗ khí hem biểu bì trên), trên biểu bì có lông che chở đa bào

- Mô dày (2) gồm 1-2 lớp tế bào xếp sát biểu bì trên và dưới; tế bào

- Mô khuyết (5) nằm sát mô giậu, cấu tạo bởi các tế bào thành mỏng

xếp lộn xộn, có nhiều khe trống

❖ Đặc điểm vi phẫu thân (Hình 8)

Cắt vi phẫu phần thân bánh tẻ, tẩy, nhuộm kép Mặt cắt hình đa giác nhiều cạnh Soi dưói kính hiển vi từ ngoài vào trong thấy:

- Biểu bì (/) cấu tạo bởi một lớp tế bào hình chữ nhật xếp đều đặn

- Mô dày (2) gồm các tế bào hình trứng hay hình đa giác có thành dày

phát triển ở góc, kích thước lớn hơn tế bào biểu bì, xếp thành 2 - 3 hàng

- Mô mềm vỏ (3) gồm các tế bào hình tròn hay đa giác, thành mỏng,

kích thước không đều

- Các bó libe gỗ-libe (5) và gỗ (6) - xếp thành vòng đồng tâm và liên

tục

- Sợi (4) nằm sát phía ngoài của libe.

- Mô mềm ruột (7) cấu tạo bởi các tế bào hình trứng, hình đa giác,

thành mỏng, kích thước càng vào phía trong càng lớn

❖ Đặc điểm bột lá (Hình 9)

Bột màu xanh xám, mùi hắc, vị nhạt Quan sát dưói kính hiển vi thấy:

- Mảnh biểu bì mang lỗ khí gồm hai tế bào hình hạt đậu (1)

- Lông che chở đa bào (2).

Hình 7: Vi phẫu lá

1

2

ml nước nóng và lọc nóng, làm như vậy 3 lần Dịch lọc thu được đem lắc 3 lần với CHC13 mỗi lần khoảng 5 ml CHCI3, lấy lớp CHCI3 cô cạn đến c ắ n , hoà cắn trong Ethanol 90° và làm các phản ứng sau:

Acid hoá ống 1 bằng HC1 đặc, ống 1 trở nên đục như ống 2

4 Phản ứng của thân và lá đều dương tính

- Phản ứng với TT Diazo:

Cho vào ống nghiệm 1 ml dịch chiết, thêm vào đó 2 ml NaOH 10% Đun trên cách thuỷ đến sôi rồi để nguội, thêm vài giọt TT Diazo mới pha, thấy xuất hiện màu đỏ sim

Phản ứng của thân và lá đều dương tính

- V i thăng hoa:

Cho một ít bột dược liệu vào nút chai bằng nhôm Đun nhẹ dưới nút nhôm cho bay bớt hơi nước sau đó đậy lên trên bằng 1 phiến kính dày, mặt trên phiến kính có để một ít bông thấm nước Tiếp tục đun nóng cho vi thăng hoa Lấy phiến kính ra, bỏ bông thấm nước, lật ngược tấm kính rồi soi dưới kính hiển vi, thấy tinh thể hình kim màu vàng Sau đó nhỏ lên tấm kính 1 giọt

TT KI 10%, đem soi dưới kính hiển vi, thấy tinh thể hình kim chuyển sang màu tím.

Thân và lá đều cho kết quá dương tính

- Quan sát huỳnh quang:

Nhỏ một giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc, hơ trên ngọn lửa đèn cồn cho

khô Nhỏ tiếp lên đó một giọt NaOH 5%, hơ cho khô Bịt một nửa phần giấy

lọc thấm dịch chiết bằng tấm kim loại và đặt tấm giấy lọc dưới ánh sáng u v trong vòng 10 phút Bỏ miếng kim loại ra và quan sát dưới đèn u v thấy phần giấy lọc thấm dịch chiết không bị che có huỳnh quang sáng hơn phần bị che

Tiếp tục đặt giấy lọc dưới ánh sáng ƯV mà không che miếng kim loại Quan sát thấy phần giấy lọc thấm dịch chiết đã bị che dần sáng lên

Phản ứng dương tính

- Phản ứng với hơi amoniăc:

Nhỏ một giọt dịch chiết lên giấy lọc, để khô rồi đặt lên miệng lọ amoniăc đã mở nút, thấy màu vàng của vùng giấy lọc thấm dịch chiết tăng lên

4 Phản ứng dương tính

- Phản ứng với dd FeQ3 5%:

Cho vào ống nghiệm nhỏ 1 ml dịch chiết Thêm vài giọt dd FeCl3 5% thấy xuất hiện màu xanh

+ Ông 1: thêm vào 3 - 5 giọt TT Mayer, lắc nhẹ và thấy dung dịch hơi vẩn đục.

+ Ống 2: thêm vào 2- 3 giọt TT Dragendorff, lắc mạnh, thấy xuất hiện tủa màu vàng nâu

+ Ống 3: thêm vào 2- 3 giọt TT Bouchardat, thấy xuất hiện nhiều tủa màu nâu đen

+ Ống 4: thêm vào 2- 3 giọt acid picric, thấy có nhiều tủa vàng tươi trong dung dịch và bám vào thành ống nghiệm

+ Ống 5: thêm vào 2- 3 giọt TT acid silicotungstic, thấy xuất hiện tủa màu trắng

Cả 5 phản ứng của thân và lá đều dương tính

Kết luận: Cả thân và lá đều chứa Alcaloid.

■ Định tính glycosid tim

Cân lượng bột dược liệu (thân, lá) khoảng 10 g cho vào bình nón dung tích 250 ml, thêm vào đó 100 ml nước cất, lắc để dược liệu thấm đều nước và

để ngâm lạnh qua đêm Gạn dịch chiết ra một cốc có mỏ, thêm khoảng 5 ml

dd chì acetat để loại tạp, khuấy đều thấy xuất hiện tủa trắng Lọc qua giấy lọc gấp nếp

Thử xem đã đủ lượng chì acetat chưa: hứng lấy vài giọt dịch chiết đầu tiên, thêm tiếp vào đó vài giọt dd chì acetat, nếu có tủa đục thì ngừng lọc,

thêm khoảng 1 ml chì acetat nữa vào toàn bộ dịch chiết, khuấy đều và lọc lại Tiếp tục thử đến khi dịch lọc không còn tủa với chì acetat là được.

Dịch lọc thu được đem cho vào bình gạn dung tích 100 ml, lắc với CHCI3 3 lần (10 ml, 10 ml, 5 ml) thu lấy phần dung môi hữu cơ cho vào một cốc có mỏ khô, dịch chiết phải trong suốt, nếu còn lẫn nước thì lọc qua một lớp bông Chuyển toàn bộ dịch chiết vào 4 ống nghiệm nhỏ, khô và cho vào nồi cô cách thuỷ đến cắn Thực hiện các phản ứng sau:

+ Ống 1: làm phản ứng Keller- Kiliani

Cho vào ống nghiệm 0,5 ml ethanol 90° Lắc đều cho hoà tan hết cắn Thêm 2- 3 giọt dd sắt (III) clorid 5% pha trong acid acetic Lắc đều Nghiêng ống nghiệm 45° Thêm đồng lượng acid sulfuric đặc ( 0,5 m l) theo thành ống nghiệm; ở mặt tiếp xúc giữa 2 lớp chất lỏng không thấy có vòng tím đỏ (Phản ứng âm tín h )

+ Ông 2: làm phản ứng Liebermann

Cho vào ống nghiệm chứa cắn 0,5 ml anhydrid acetic Lắc đều để thuốc thử hoà tan hết cắn Nghiêng thành ống nghiệm 45° Thêm đồng lượng acid sulfuric đặc ( 0,5 m l) theo thành ống nghiệm để dịch lỏng trong ống nghiệm được chia thành 2 lớp, không thấy xuất hiện vòng tím đỏ (Phản ứng âm tính)

Cho vào Ống nghiệm chứa cắn 0,5 ml ethanol 90° Lắc đều cho cắn tan

hết Nhỏ từng giọt TT Natri nitroprussiat 0,5 % và n 2 giọt dd NaOH 10%

Lắc đều, không thấy xuất hiện màu đỏ (Phản ứng âm tính)

Kết luận: Thân và lá không chứa Glycosid tìm.

■ Định tính saponin

Hiện tượng tạo bọt: cho vào ống nghiệm lốm 2g bột dược liệu (thân, lá), thêm vào 5 ml nước cất, lắc mạnh trong 2 phút, quan sát hiện tượng tạo bọt trong 15 phút, thấy có bọt tạo thành nhưng bọt không bền nhanh chóng tan đi.

4 Phản ứng âm tính

+ Vi thăng hoa:

Thực hiện vi thăng hoa tương tự như kỹ thuật vi thăng hoa của định tính coumarin Lật ngược tấm kính và quan sát dưới kính hiển vi thấy có tinh thể hình kim màu vàng (Phản ứng dương tính)

Kết luận: Dược liệu không chứa anthraglycosid.

■ Định tính tanin

Cân khoảng 5g bột dược liệu (thân, lá), cho vào bình nón dung tích 50

ml Thêm 25 ml nước cất Đun sôi trong 5 phút Lọc Dịch lọc được chia vào

+ ống 3: 1 ml dịch lọc, thêm một vài giọt dd chì acetat 10%, có xuất hiện tủa bông (Phản ứng dương tính)

+ Ống 4: 1 ml dịch lọc, thêm 1 ml dđ gelatin 1%, không thấy xuất hiệntủa bông trắng (Phản ứng âm tính)

Kết luận: Thân và lá đều không chứa tanin.

■ Định tính đường khử

Cho vào ống nghiệm to khoảng 2g bột dược liệu (thân, lá), thêm 6 mlnước cất Đun sôi Gạn dịch chiết ra một ống nghiệm con Thêm 1 ml ddFehling A và 1 ml dd Fehling B Đun cách thủy trong khoảng 5 phút, thấy

xuất hiện tủa màu đỏ gạch ở đáy ống nghiệm.

4 Phản ứng của thân và lá đều dương tính

Kết luận: Thân và lá chứa đường khử.

■ Định tính axit hữu cơ

Cho khoảng 3 g bột dược liệu (thân, lá) vào ống nghiệm to Thêm 10

ml nước cất, đun sôi Gạn dịch chiết ra một ống nghiệm to khác Thêm vào dịch chiết đó một ít bột Na2C 03 khô Quan sát ống nghiệm, không thấy bọt khí bay lên

Phản ứng âm tính

Kết luận:Thân và lá không chứa chất béo.

■ Định tính caroten

Từ dịch chiết ether dầu hỏa ở phần định tính chất béo trên đem bốc hơi tới khô Thêm 1 - 2 giọt acid sulfuric đặc vào cắn thu được thấy xuất hiện màu xanh ve.

Phản ứng Salkowski: Lấy 2 ml dịch chiết cloroform cho vào ống nghiệm con, thêm từ từ acid sulfuric đặc theo thành ống nghiệm, không thấy xuất hiện một vòng đỏ giữa mặt tiếp xúc của 2 lớp chất lỏng (Phản ứng âm tính)

Kết luận: Thân và lá không chứa sterol.

■ Định tính acid amin

Lấy một lượng 2g bột dược liệu (thân, lá) cho vào ống nghiệm to Thêm nước cất đến ngập dược liệu Đun cách thuỷ trong 5 phút Gạn lấy dịch chiết cho vào một ống nghiêm con Thêm vào đó 2- 3 giọt dd ninhydrin 3% Đun cách thuỷ trong vài phút thấy dung dịch chuyển màu tím đậm

4 Phản ứng dương tính

Kết luận: Thân và lá đều chứa acid amin.

■ Định tính polysaccarid

Lấy khoảng 10 g bột dược liệu (thân, lá) cho vào bình nón dung tích

200 ml Thêm nước cất đến ngập dược liệu Đun cách thuỷ 10 phút Lọc lấy dịch chiết cho vào 1 ống nghiệm to Thêm vào khoảng 2 ml dd Lugol (I2/KI), đun cách thuỷ trong 2 phút thấy dịch chiết chuyển màu tím đỏ