Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của một loài thuộc chi gynura

Bộ Y Tế TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI THÁI THỊ CHI MAI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THựC VẬT, THÀNH PHẦN HOÁ HỌC, VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA * / * • * MỘT LOÀI THUỘC CHI GYNURA • # (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ KHOÁ 1999 - 2004) Người hướng dẫn : GS.TS. ThS. NGUYỄN SƠN NAM Nơi thực hiện : BỘ MÔN DƯỢC LIỆU TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI Thời gian thực hiện : 20/2 /2004 ĐẾN 20/5/2004 Hà Nội 05 - 2004 ịẦ LỜI CẢM ƠN Với sự chỉ bảo và giúp đỡ tận tình của các thầy cô giáo, tôi đã hoàn thành khoá luận tốt nghiệp, đồng thời tôi cũng học thêm được nhiều điều không chỉ về chuyên môn mà cả về cách tư duy trong công việc và cách đối nhân xử thế. Tôi xin bày tỏ lời biết ơn sâu sắc tới: GS. TS. Phạm Thanh Kỳ — người thầy đã nhiệt tình tạo điều kiện cho tôi tham gia nghiên cứu khoa học. ThS. Nguyễn Sơn Nam - nghiên cứu sinh trực tiếp hướng dẫn tôi làm tốt nghiệp Đã dìu dắt, chỉ bảo, đống góp ỷ kiến quý báu cho tôi, giúp tôi có thêm sự miệt mài trong nghiên cứu khoa học. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn: TS. Đỗ Ngọc Thanh, PGS. TS. Chu Đình Kính, TS. Nguyễn Viết Thân, TS. Phùng Thị Vinh, DS. Nguyễn Kim Phượng, TS. Cao Văn Thu; DS. Trần Công Binh, DS. Nguyễn Bá Công cùng các thầy cô giáo, các kỹ thuật viên Bộ môn Dược liệu, các phòng ban trong trường, các cán bộ Viện Kiểm nghiệm, Viện hoá học, Viện Y học cổ truyền đã tạo điều kiện tốt cho tôi trong quá trình thực hiện khoá luận này. Cuối cùng tôi xin cảm ơn gia đình và bè bạn đã động viên khích lệ tôi- là chỗ dựa tinh thần cho tôi trong quá trình làm khoá luận tốt nghiệp. Hà Nội, ngày 22 tháng 05 năm 2004 Sinh viên: Thái Thị Chi Mai CHÚ GIẢI CHỮ VIẾT TẮT CT : Cách thuỷ CNQG : Công nghệ Quốc gia dd, DD : Dung dịch DC : Dịch chiết DM : Dung môi DMSO : Dimethyl sulfocid đđ, ĐĐ : Đậm đặc PĐ : Phân đoạn Pư : Phản ứng Qsát : Quan sát SKLM : Sắc ký lớp mỏng Tp : Cắn A2 toàn phần TT : Thuốc thử t.t.c : Thể trọng chuột TTKHTN : Trung tâm khoa học tự nhiên TWQĐ : Trung ương quân đội MỤC LỤC ĐẶT VẤN Đ Ể 1 PHẦN I : TỔNG QUAN 2 1.1. Vị trí của chi Gynura trong giới thực vật 2 1.2. Vài nét về đặc điểm thực vật vổ phán bố của các loài thuộc chi Gynura 3 1.2.1. Đặc điểm thực vật chung của chi Gynura 3 1.2.2. Đặc điểm thực vật và phân bố của một số loài thuộc chi Gynura có ở Việt Nam 4 1.2.3. Thành phần hoá học của các loài thuộc chi Gynura g 1.2.4. Công dụng của các loài thuộc chi Gynura 2 1.3. Những kết quả nghiên cứu ở trong nước PHẦN n : THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ J2 2.1. Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 12 2.1.1. Nguyên liệu 12 2.1.2. Phương pháp nghiên cứu ị2 2.2. Thực nghiệm và kết quả 2.2.1. Về thực vật 2.2.2. Về thành phần hoá học 2.2.3. Thử tác dụng sinh học PHẦN n i : KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 44 3.1. Kết luận 44 3.2. Đề xuất ^ TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 ĐẶT VẤN ĐỂ • Giáo sư Phạm Hoàng Hộ từng viết [13]: “ Hiển hoa là ân nhân vô giá của loài người. Hiển hoa cho ta nguồn thức ăn căn bản hằng ngày Lúc đầy nguồn sống, lúc nhàn rỗi, chính hiển hoa cung cấp cho loài người thức uống ngon lành để say sưa cùng vũ trụ. Lúc ốm đau, cũng chính cây cỏ giúp cho ta dược thảo hiệu linh ”. Loài người vẫn khồng ngừng tìm hiểu và khai thác những nguồn dược liệu làm thuốc trong thiên nhiên. Bầu đất là một loại cây rất đỗi quen thuộc thường được dùng để nấu canh ăn hàng ngày. Theo kinh nghiệm dân gian, cây này được dùng làm thuốc mát, chữa một số bệnh thông thường như sốt, đắp ngoài trị mụn nhọt và cả bệnh đái tháo đường - một căn bệnh mang tính thời sự, đang ở giai đoạn bùng nổ trên toàn thế giới. Để góp phần nâng cao giá trị sử dụng của dược liệu, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài nghiên cứu cây Bầu đất (Gynura sp.) với các nội dung chính sau: • Về thực vật: + Mô tả đặc điểm thực vật và định tên khoa học của cây. + Mô tả đặc điểm vi phẫu thân, lá và đặc điểm bột thân, lá. • Về thành phần hoá học: + Định tính các nhóm chất có trong dược liệu nghiên cứu. + Định lượng các thành phần chính có trong dược liệu. + Chiết xuất và phân lập thành phần chính. + Sơ bộ nhận dạng chất phân lập được trong cây. • Về tác dụng sinh học: + Thử độc tính cấp. + Thử tác dụng kháng khuẩn. + Thử tác dụng hạ đường huyết. PHẦN I: TỔNG QUAN 1.1. VỊ TRÍ CỦA CHI GYNVRA TRONG GIỚI THựC VẬT • • • Gynura là một chi nằm trong phân họ Hoa ống của họ Cúc (Asteraceae hay Compositae)- họ duy nhất của bộ Cúc (Asterales) thuộc phân lớp Cúc (Asteridae); Phân lớp Cúc thuộc lớp Ngọc lan (.Magnoliopsida) trong ngành Ngọc Lan cMagnoliophyta) nằm trong phân giới thực vật bậc cao. [8] Sơ đồ vị trí của chi như sau Khoá phân loại đơn giản của chi Gynuraịl 7][29]: Bộ cúc Họ Cúc Nhóm 1: Đầu trạng toàn hoa hình ống. I 1. Hoa lưỡng tính. 2. Lá mọc cách. 3’. Mỗi tổng bao chỉ chứa một đầu trạng 4. Tổng bao gồm nhiều hàng lá bắc 5. Tổng bao gồm hai hàng lá bắc, hàng trong lớn và mép xít nhau. Gynura. 1.2. VÀI NÉT VỂ ĐẬC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ PHÂN Bố CỦA CÁC LOÀI THUỘC CHI GYNURA 1.2.1. ĐẶC ĐIỂM THỤC VẬT CHUNG CỦA CHI GYNURA Theo “Tóm tắt đặc điểm các họ cây thuốc” của GS. Vũ Văn Chuyên [9] và các tài liệu phân loại thực vật học [18] [7] [17] [29], các cây thuộc Chi Gynura có các đặc điểm chung của họ Cúc và một số đặc điểm riêng như sau: Cây thuộc thảo, ít khi cây to. Rễ đôi khi phồng to thành rễ củ. Lá đơn, thường mọc so le, ít khi mọc đối, có khi thành hoa thị, không có lá kèm; phiến lá ít khi nguyên; thường khía răng cưa hoặc chia thuỳ. Cụm hoa đầu gồm nhiều hoa mọc ở kẽ những vẩy và bao bọc bởi một tổng bao lá bắc. Hoa lưỡng tính. Đài hoa rất giảm, thường biến đổi thành một mào lông tơ nhiều, trắng, mịn. Năm cánh hoa liền nhau tạo thành tràng hình ống; 5 nhị dính liền nhau bởi bao phấn thành một ống bao quanh vòi nhuỵ; vòi nhuỵ dài, núm nhuỵ xẻ đôi có lông; bầu hạ một ô đựng một noãn. Qủa bế có mào lông. Hạt không có nội nhũ. 1.2.2. ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ PHÂN Bố CỦA MỘT s ố LOÀI THUỘC CHI GYNURA CÓ Ở VIỆT NAM Dựa theo các tài liệu “Cây cỏ Việt Nam” của Phạm Hoàng Hộ [13], “Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam” của Đỗ Tất Lợi[15], “Cây cỏ có ích ở Việt Nam” của Võ Văn Chi [5] và “Từ điển cây thuốc Việt Nam” [6], chúng tôi tập hợp được một số loài của chi như sau: ♦> Gynura auriculata Cass. Tên Việt Nam: Kim thất tai. 3 cỏ mọc hàng năm, thân cao 50 cm, không nhánh. Lá có phiến thon ngược, đầu tù, đáy từ từ hẹp, mỏng, gân phụ 5-7 cặp, gân tam cấp mảnh, bìa có răng thưa; đáy cuống có tai cao 5 mm, dạng lá bẹ. Phát hoa ở ngọn, dài 20 cm, ít hoa đầu; cọng dài; tổng bao cao 1,2-1,5 cm, lá hoa 1 hàng; hoa ống cả, màu cam. Quả bế có lông mào do tơ trắng, mịn. Phân bố: mọc nhiều ở Vịnh Hạ Long. ❖ Gynura aurantica (Blume) DC. Tên khác: Cacalia aurantica BL. Tên Việt Nam: Kim thất nhung. Cỏ bò rồi đứng; thân và lá đầy lông đứng đỏ tím. Lá có phiến mập mạp, bìa có răng thưa và thuỳ cạn; cuống ngắn. Cụm hoa đầu họp thành xim ở trên đầu ngọn; trong đầu hoa toàn hoa hình ống, màu vàng da cam sáng rực. Quả bế có lông mào do tơ nhiều mịn trắng. Phân bố: các nước Đông Nam Á, gặp nhiều ở vùng núi đảo Giava (Inđônexia). Ở nước ta thường được trồng làm cảnh. ❖ Gynura barbaraefolia Gagnep. Tên Việt Nam: Cải kim thất. Cây thảo cao 80 cm, có lông, thân non có cạnh. Lá xếp dọc theo thân, có lông, thuỳ sâu, 1 thuỳ ở gốc cuống có dạng lá kèm, gân phụ 4 cặp. Ngù hoa kép, chia nhiều nhánh, mỗi nhánh có 1-3 hoa màu vàng, cao 1,5 cm; lá bắc hẹp, cao 4-9 mm. Quả bế cao 1,7 mm, nhám; lông mào gồm nhiều tơ trắng mịn. Ra hoa tháng 1-4. Phân bố: Mọc hoang các vùng đồi bãi, savan cỏ và cả trên núi đá, núi đất sa thạch từ Nam Hà, Ninh Bình đến Quảng Trị, Thừa Thiên Huế, Kon Tum, Lâm Đồng. ❖ Gynura bicolor DC. Tên Việt Nam: Cải kim thất hai màu. 4 Cây thảo cao 30-60 cm, sống nhiều năm; toàn thân bóng và không có lông. Lá mọc so le, hình bầu dục nhọn hai đầu, dài 6-9 cm, rộng 1,5-3 cm, mặt trên màu lục, mặt dưới màu tía; cuống lá ngắn, màu hồng tím. Cụm hoa ở ngọn, ít đầu hoa; trong mỗi đầu chỉ chứa toàn hoa hình ống, màu vàng. Quả có mào lông. Phân bố: mọc nhiều ở đảo Molucca, được trồng ở nhiều nước và ở nước ❖ Gynura bodinieri Lévl. Tên Việt Nam: Kim thất Bodinier. Cây thảo sống nhiều năm, cao 20 - 60 cm, có củ to lcm. Lá chụm ở đất, lá dưới có phiến nguyên, lá trên có phiến hình đàn, dài 4-6, rộng 1,5-3 cm. Hoa đầu 2-3 cái, trên thân cao 50-60 cm, mỗi cái cao 1-1,3 cm, rộng 1 cm, toàn hoa hình ống, màu vàng; lá bắc 1 hàng, không lông; hoa có ống cao 12 mm, phần phù cao 4 mm; bao phấn thon. Quả bế nhỏ, có rạch; mào lông gồm nhiều sợi màu trắng ❖ Gynura colaniae Merr. Tên Việt Nam: Kim thất Colani. Cỏ leo, không lông. Lá có phiiến xoan thon, to 11 X 5 cm, chót nhọn, đáy tù tròn, bìa có răng rất thưa, gân phụ 5-6 cặp; cuống dài 1 cm. Phát hoa ở ngọn, nhánh dài; cọng dài mang hoa đầu có tổng bao cao 1,5 cm, lá hoa 1 hàng; hoa vàng. Quả bế có lông mào mịn trắng, dài 1,5 cm. Phân bố: Tìm thấy ở Hà Bắc. ❖ Gynura crepidioides Benth. Tên khác: Crassocephalum crepidioides (Benth.) s. Moore. Tên Việt Nam: Rau tàu bay, Kim thất. Cây thảo mập, mọc đứng cao tới lm. Thân tròn hay khía rãnh, màu xanh. Lá mỏng, hình trứng dài to 7 X 3 cm; phần chóp phiến lá có hình thoi; phần dưới có những thuỳ xẻ sâu; mép lá có răng cưa không đều; gân phụ 6-7 cặp; mặt trên lục đậm, mặt dưới lợt. Cụm hoa dạng đầu, mọc ở nách lá hoặc ở 5 ngọn, gồm nhiều hoa màu hồng nhạt; bao chung gồm 2 hàng lá bắc hình sợi. Quả bế hình trụ, có một mào lông trắng ở đỉnh. ❖ Gynura divaricata (L.) DC. Tên Việt Nam: Bầu đất hoa vàng, Kim thất giả, Rau tàu bay, Cây thảo lưu niên, cao 30- 50 cm, có rễ củ. Lá chụm ở gốc, phiến thon, nguyên hay có thuỳ khá sâu, mép có vài răng thưa, có ít lông hay khổng lông, gân phụ 5-6 cặp, cuống 1-2 cm. Chùm 3-5 hoa đầu cao 1-1,5 cm, màu vàng tươi. Quả bế cao 2,5 mm; mào lông gồm nhiều tơ mịn màu trắng. Phân bố: Ấn Độ, Trung Quốc, Lào , Campuchia, Thái Lan và Inđônêxia. Ở nước ta, có gặp ở các vùng núi và trong các savan cỏ từ Lạng Sơn, Thái Nguyên, Hà Tây, Ninh Bình, Quảng Trị, Quảng Nam đến KonTum, Gia lai, Lâm Đồng và vài nơi khác ở Nam Bộ. ❖ Gynura ecalyculata DC. Tên khác: Emilia sonchifolia (L) DC., Cacalia sonchifolia (L.) Tên Việt Nam: Cây rau má lá rau muống. Cây nhỏ mọc hàng năm, thẳng đứng cao 0,2- 0,4 m; thân nhẵn. Lá phía dưới hình mắt chim hoặc hình trứng, có khi gốc hình tim, mép có răng cưa hoặc hơi chia thuỳ nhỏ, cuống dài; những lá sau hình 3 cạnh chia lông chim, thuỳ tận cùng hình trứng hơi 3 cạnh, răng cưa to thô; lá ở trên hình 3 cạnh dài, không cuống, có tai và ôm vào thân. Cụm hoa đầu hình trụ, dài 8-9 mm, rộng 4 mm, thường tụ 2-4 chiếc, cuống gầy, dài 3-6 cm. Hoa màu vàng, hồng hoặc hơi tím. Quả bế dài 5,5 mm có gọng ngắn. Phân bố: Mọc hoang ở khắp các bãi, hàng rào. Thường mọc ở các nước nhiệt đói châu Á và miền Nam Trung Quốc. ❖ Gynura lycopersicifolia DC. Tên Việt Nam: Kim thất lá tô mách. Cây thân thảo mập, đa niên. Thân có 5 cạnh cao đến 1,5 m ở nơi rậm rập. Lá có phiến hình đàn, xẻ thành đoạn hẹp, mép có vài răng, có lông, 6 [...]... chữa rắn cắn, rết cắn 1.3 NHỮNG KẾT QUẢ NGHIÊN cứu Ở TRONG NƯỚC Luận Văn cao học của ThS Nguyên Sơn Nam [16] và khoá luận tốt nghiệp của DS Nguyễn Bá Công [10] nghiên cứu về đặc điểm thực vật, thành phần hoá học và tác dụng sinh học của cây Kim thất (Gynura procumbens) năm 2001 cho thấy: + Đã mô tả đặc điểm thực vật và định tên khoa học loài Gynura nghiên cứu là: Gynura procumbens (Lour.) Meư (= G sarmentosa... màu vàng sẫm đến vàng cam, có cuống dài, có lá bắc nhỏ; bao chung cao 1 -5 cm, vói vài lá bắc phía ngoài nhỏ Quả bế có lông mào trắng, mịn Phân bố: Nhật Bản, Trung Quốc, Việt Nam Ở nước ta, cây mọc hoang ở vùng chân núi, đồi cỏ hoặc bãi bằng 1.2.3 THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA CÁC LOÀI THUỘC CHI GYNURA Hầu hết các tài liệu trong nước chúng tôi thu thập được về chi Gynura đều chưa nghiên cứu về thành phần. .. Amphoterilin B và Nystatin tại phòng thăm dò tác dụng sinh học của Viện hoá học + Thử tác dụng hạ đường huyết: gây tăng đường huyết thực nghiệm bằng dung dịch Alloxan monohydrat tiêm tĩnh mạch đuôi chuột theo tài liệu [25], kít định lượng Glucose do hãng Human cung cấp, thực hiệntrênmáy định lượng sinh hoá bán tự động Scout tại Viện dược liệu 2.2 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.2.1 VỀ THỰC VẬT *♦ Đặc điểm hình... được liều LD50 và tất cả chuột thí nghiệm không chết con nào, không có biểu hiện ngộ độc, chuột ăn uống bình thường + Đã công bố về tác dụng giảm đau, tác dụng ức chế phù viêm chân chuột, tác dụng chống oxy hoá với mô hình thử trên tế bào gan chuột, tế bào não chuột và tác dụng dọn gốc tự do trong hệ xanthin/ xanthin oxydase 11 PHẦN H: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u... nghiệm trung tâm của trường Đại học Dược Hà Nội + Đo phổ khối (MS) tại Viện Hóa học - 1'1'KHTN và CNQG 12 ♦> Thử tác dụng sinh học + Thử độc tính cấp theo phương pháp xác định độc tính cấp của thuốc cổ truyền trong qui chế năm 1996 [4] tại Viện kiểm nghiệm + Thử tác dụng kháng khuẩn theo phương pháp hiện đại của Vanden Bergher và Vlietlink (1994) tiến hành trên phiến vi lượng 96 giếng, kháng sinh kiểm định... một chất màu và 6 chất khác ở phân đoạn CHC13 trong đó có 6 -acetyl - 2,2dimethylchroman-4-one và vanillin [24] Tìm trong các kỳ của tạp chí “ Phytochemistry”, chúng tôi thu thập thêm thông tin như sau: - Trong cây Rau tàu bay (Gynura crepidioides) có Gynurone- một coumarin terpenoid [20 ] 1.2.4 CÔNG DỰNG CỦA CÁC LOÀI THUỘC CHI GYNURA Theo các tài liệu [5][6 ] [15] [13] ghi công dụng của các loài thuộc. .. sắt rất ít [15] - Trong củ loài Kim thất Nhật (Gynura segetum, Gynura japonica, Gynura pinnatifida) có chứa: seneciphyllinin và seneciphyllin Tìm trên mạng Internet, chúng tôi thấy một số bài báo ở các Website nêu thành phần hoá học một số cây: - Trong rễ cây Kim thất Nhật [23] có: một quinonoid terpenoid là (-)alpha- tocospirone; một chất màu mới là (-)- gynuraone; 3 steroid mới là (22 E, 24 S) - 7... Bầu đất (Gynura sp.) được trồng tại Bệnh Viện TWQĐ 108, Hà Nội; lấy mẫu cây có hoa để định tên khoa học; thu hái bộ phận trên mặt đất từ tháng 8 - 1 0 năm 2003, phơi sấy khô và cho vào túi polyetylen để nơi thoáng mát làm nguyên liệu nghiên cứu 2.1.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ú u ❖ Đặc điểm thực vật # • # + Vi phẫu cắt và nhuộm kép theo phương pháp ghi trong tài liệu “ Thực tập dược liệu” phần vi học [2 ]... khoa học Đồng thời chúng tôi cũng đã làm tiêu bản mẫu cây khô để lưu mẫu Kết quả định tên khoa học của cây Bầu đất chúng tôi nghiên cứu là: Gynura crepidỉoides (Benth.) Asteraceae ❖ Đặc điểm vi phẫu lá (Hình 7) Sau khi cắt vi phẫu lá bánh tẻ phần có chứa gân lá, tẩy và nhuộm kép ; quan sát dưới kính hiển vi thấy các đặc điểm sau: • Phần gân lá: gân dưới lồi rõ, gân trên hơi lồi - Biểu bì trên và dưới... TB 29 ❖ Chi t xuất các chất trong cây Cân 500g bột dược liệu, chi t nóng bằng Ethanol 90° trong bình cầu có lắp sinh hàn ngược Gạn và lọc dịch chi t Chi t tiếp vài lần bằng Ethanol 90°, gộp các dịch chi t lại với nhau Cất quay để thu hồi một phần dung môi Cô tiếp dịch chi t đến đậm đặc rồi hoà loãng bằng nước nóng Gạn, lọc nóng qua phễu có giấy lọc Tủa còn lại tiếp tục được hoà vào nước nóng và lọc . 2 1.2. Vài nét về đặc điểm thực vật vổ phán bố của các loài thuộc chi Gynura 3 1.2.1. Đặc điểm thực vật chung của chi Gynura 3 1.2.2. Đặc điểm thực vật và phân bố của một số loài thuộc chi Gynura. Bộ Y Tế TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI THÁI THỊ CHI MAI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THựC VẬT, THÀNH PHẦN HOÁ HỌC, VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA * / * • * MỘT LOÀI THUỘC CHI GYNURA • # (KHOÁ LUẬN TỐT. 4 1.2.3. Thành phần hoá học của các loài thuộc chi Gynura g 1.2.4. Công dụng của các loài thuộc chi Gynura 2 1.3. Những kết quả nghiên cứu ở trong nước PHẦN n : THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ