đồ án tổng hợp một số dẫn xuất flavonoid và khảo sát hoạt tính gây độc tế bào

    Đại học Quốc Gi a Tp.HCM CỘNG HOÀ Xà HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐH BÁCH KHOA Độc lập - Tự do - Hạnh phúc Số: _______ /BKĐT TỒNG QUAN LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC BỘ M 1. Đầu đề luận án: Tổng Hợp Một Số Dẫn Xuất Flavonoid Và Khảo Sát Hoạt Tính Gây Độc Tế Bào 2. Nhiệm vụ (yêu cầu về nội dung và số liệu ban đầu): Giới thiệu tổng quan, lý thuyết cho đề tài Thực nghiệm sơ bộ Định hướng nghiên cứu trong tương lai 3. Ngày giao nhiệm vụ luận án: 02/ 2012. 4. Ngày hoàn thành nhiệm vụ: 26/04/2012. 5. Họ tên người hướng dẫn: Phần hướng dẫn: TS. Hoàng Thị Kim Dung …………………… …………………… Nội dung và yêu cầu LVTN đã được thông qua Bộ môn. Ngày tháng năm 2012 Ngày tháng năm 2012 CHỦ NHIỆM BỘ MÔN NGƯỜI HƯỚNG DẪN CHÍNH (Ký và ghi rõ họ tên) ( Ký và ghi rõ họ tên) PHẦN DÀNH CHO KHOA, BỘ MÔN: Người duyệt (chấm sơ bộ): Đơn vị: Ngày bảo vệ: Điểm tổng kết: Nơi lưu trữ luận văn:   ÔN KỸ THUẬT HỮU CƠ HỌ VÀ TÊN NGÀNH NGÔ HOÀNG VƯƠNG KỸ THUẬT HỮU CƠ MSSV LỚP 60802693 HC08CHC  MỞ ĐẦU Ngày nay cùng với sự phát triển như vũ bão của nền khoa học công nghệ, đời sống con người đã được tiện nghi hơn trước. Tuy nhiên kéo theo nó là những hậu quả đối với môi trường và con người. Sự bùng nổ về công nghiệp đã làm cho môi trường bị ô nhiễm nghiêm trọng gây ra rất nhiều bệnh tật cho con người trong đó có ung thư, và cuộc đua tìm thuốc chữa bệnh được bắt đầu. Một số loại thuốc được tổng hợp hoàn toàn, một số có nguồn gốc từ tự nhiên. Theo các nhà khoa học, các hợp chất trong cây cỏ có hoạt tính sinh dược học cao. Hoạt tính này có được một phần là docác thành phần flavonoid trong những bộ phận của cây cỏ. Không những vậy, nhiều nghiên cứu phát hiện rằng các dẫn xuất tổng hợp từcác flavonoid cho hoạt tính sinh dược học cao hơn, có nhiều ứng dụng trong ngăn ngừa và chữa trị một số bệnh như ung thư, tim mạch, kháng sinh, kháng viêm. Trong số đó có Quercetin và Luteolin là hai Flavonoid có nhiều trong tự nhiên. Trên cơ sở Quercetin và Luteolin chúng tôi tiến hành tổng hợp một vài dẫn xuất của chúng và xét nghiệm hoạt tính gây độc tế bào đối với tế bào ung thư. Từ đó làm nền tảng để thực hiện những bước tổng hợp các dẫn xuất khác tiếp theo trong những nghiên cứu sâu hơn về flavonoid.    MỤC LỤC !"# $%& 1.1. '& 1.1.1. ()*+*,-& 1.1.2. (.+/01*2 1.1.3. *34567 8/90+0*:& 1.2. ;<$;= 1.2.1. >?+@63A3B+(*C+= 1.2.2. C+D*9E6F>310G 1.2.3. H+(6(F39I3/JK 1.2.4. L+:M+K 1.3. ; % %%>?+@63A3B+(*C+ % %%C+D*9E6F>310 % % %H+(6(F39I3/J % %N%L+:M+N %N%N %O%  PQ RS"T$ UV W XY  $Z' & %O%%*,+3[\+.]^_63`aE0& %O%%H+(b()+>+3([67c/90+0*:& %O% %H+(b()+>+3([67>463*+2 %O%N%H+(b()+>+3([67>30/*+2 $%d$P= %%$!d$P=  N  %%e$ef$g= % %Ud$PG $ %"hi$L   %%S<jd$P   %%Pi$L   %%%(*`3ak   %%%M+6M   % %YRX$lY$"mXn$$Zo p   % %$)6q([r+q()qq(.+3H6(st+q(u-   % %l)6^k+((0133H+(.]^_63`aE0  %N%  O  CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN 1.1. FLAVONOID  vww x '/90+0*: /E +(y+(\q 6(F3-E>q(+0/ 3(B69I3w310+C+-E>6(06)6/01* 4>w(0wz>t{(|+/}+6)6'/90+0*:6~-E>9E+•:03Ac/9>s/E-E>9E+€•3>] 9I]w-_3s@s‚63@6~-E>ƒ+(w3H-w^„wb(…+-E>6†+^[\6ƒ`q9E0+(~-+E]9‡ 9ˆ-‰3(~(D66(Š+6~6‹+b(>+s[Œ+6•+at+%'/90+0*:6~6F>34Š66r at+ /E w Ž:*q(+]/ q40q+ +(• /E  95+ a+•+ 9E V +@* 9}* +(> z> -_3 :.]6~  64a0+w (] +~*6)6(b()6 /E6F>310b(>+ b*‘>$&’$ ’$&%$F>34Š6/E -_395+ bH+(0‰6 (“% $)6(^)+(s@ 3>”3(0 :.]$  ^~+(](“w +`>:.]$  ^~+ 3(‡ ^)+(s@a‚3 ^|> 3A :k 95+ 9}* :k +>]C+ 3@ 0ƒ]+ -+ s@  4?*^)+(3*`q^`+95+w65+ 95+ V ^)+( s@ q(M% `> :.] $  (“ 3(‡ ^)+( s@ 6(H+( 34C+ 95+ V 9E ^)+(s@ q(M34C+ 95+% 16((“ 16( bH+ ([Œ+ 8/90+0*:6~-+ -_3(0‰6 +(*ˆ> +(~- ’ “ 9k 34H O 9E 2 34C+ +(.+  9E “ 9k 34H w Nw O 34C+ +(.+ V% $)6 8/90+0*: 6~ 3(‘ (*,+ :*,+ “ :1+ 3B :0  (0‰6 :1+ /]60s*:% $)6 ^[Œ+ 3([Œ+  ‰q +(F3 /E ^[Œ+ Ž />60sw b` ^~ /E Ž  /630sw Ž 4(-+0sw Ž4a*+0sw Žq*qs 9E 6*: >40+*6%  &  40+^s@ 34[“+ (\q3(‡ -16(  64a0+^~+95+9}* 95+9E310+C+:k 95+ $6~6(•0ƒ]%k95+ $6~3(‘/E:*(]40ƒ]q]4+w–Žq]40+w:*(]40–Ž q]40+% 1* 6)695+ 6~^H+( -_3 (0‰6 +(*ˆ> +(~- (]:40ƒ] 3B :0(0‰6^—3(] 3(` -_3q(|+w9‡ 9I] 9ˆ at+6(F36(Š+ /E6)6q0/]q(+0/6~3H+( 6*:% *(]:40q]4+ –Žq]40+ *(]:40 –Žq]40+ $)6q0/]q(+0/ 6~ 3(‘ q(t+ •+ /˜+ +(> z> 6)6 +(~- (]:40ƒ]/ ^‘ 310 3(E+( 6)6 q(.+ 3™ q(•6 31q (r+ (0‰6 6~ 3(‘ /*C+ b`3 9}* 6)6 (\q 6(F3 b()6 340+6.] +([ 6)60••:1+ /]60s*:€w(0‰6 q403*+%   r+ NKKK (\q 6(F3 8/90+0*: ^— ^[\6 q(.+ /Iq 9E q(.+ /01*% [Œ* 3 :B 9E0 +(~-3)6:M+ 9E 6F>34Š6(~(D6^‘q(.+/01*6)6 8/90+0*:% %%%%(.+/01*3(0+(~-3)6 :M+vNwOw&w2w=wGx ?-N+(~- 6(H+(/E$wz>463*+wa*08/90+0*: (D 6*34>s 9E 4[\> ^6(•6 “ 34E ƒ+(% Procyanidolic oligomer (PCO) _3 340+ +(y+ +(~- 8/90+0*: 3(B6 9I3 (y> H6( +(F3 /Eq40+3(06]+*:*+ • q406]+*:*+€%(~- +E] -+ /1* 4F3 +(*ˆ> H6( /\* 6(0 s•6 b(„% _3 (š+(\q ?-6)6 q40+3(06]+*:*+ +(k 34‹+w 3- 34‹+w3• 34‹+ 9E 6)6 q(.+ 3™ 34‹+ q(.+ /}+ (r+ ^[\6 D* 6(>+ /E q406]+*:0/*6 0/*0-4w D* 3‚3 /E $% $ 6~ 340+ +(*ˆ> /01* 3(B6 9I3 9E 4[\> 9+ ^„w3>]+(*C+ 9ˆ -‰3 3([r+ -1* +[Œ* 3 (]:‹+ $340+:k6(6(*`3(13+(0 (0‰69„6.]3(…+9‹+ a*‘+% $(*`3 ƒ>F3 q40+3(06]+*:*+ 9E$6~ 4F3 +(*ˆ> 3)6 ^_+ :[\6 /J3•++?+  2  ^_ 9*3-*+ $ +_* aE0w *t- 3H+( 3(F- 3H+( :› 9œ 67 3(E+( -16( -)>w 3(> :D+ 6)6 6(F3 0ƒ] (~ 9E 6)6 @6 3B :0w •6 6(` sBq()(7]60//+w{$0//+ /E/01* q403*+ q(• a*`+ +(F3 340+ 6r 3(‘ *Šq :>] 34‡ sB 30E+ 9ž+ 67 6(F3 +ˆ+w .+ 6rw :.] 6(Ÿ+w sM+ b(}qw{$0//+ 6†+ (š 34\6(0 6F>34Š6 :9E 3(E+( -16( -)>% $F>34Š667 $ $(*`3 ƒ>F3 $ (š 34\ 9E at0 9, 6)6 6F> 34Š6 60//+ -_3 6)6( (y> (*,>w t+( ([“+ /C+ 6(>]‘+ (~ 60//+ aŸ+ +(*ˆ> 6)6(% $(Š+ /E- 3•+ 6[Œ+ 6)6 s\* /*C+ b`3 6( 0w *Šq 67+ 6@ 3(C- 6)6 s\* 60//+ /*C+ b`3 6( 0 340+ 6(F3 6•+at+ 67 -…/*C+b`3%$(Š+6†++•++A 6)63•+ 3([r+ :0@63B :0 +(Œ b(t +•+ 6(@+ 0ƒ] (~ -1+( 9E (013 ^_+ 3(> :D+ @6 3B :0% r+ +yw $ 65+ •6 6(` sB q(.+ (7] 60//+ ƒt] 4 :0 6)6 -+ -E a16( 6|> (0‰6 9* b(>u+ 3*`3 4340+ z>) 34‡+(9*C- +(*›-% $+•+ 6(‰+ sB q(~+ 3(H6( 9E 3•+ (\q 6)6(\q 6(F3/E- 3•+ 3‡+( 341+ 9*C- 9E :k•+w +([ (*s3-*+w s4*+ q403s wq40s3/+:*+sw />b034*+w { |> (`3 6)6 3)6 ^_+ 34C+ +—0 67 $ ^ˆ>:0 b(t+•+6(@+0ƒ](~ -1+( 67 +~% $(@+ 0ƒ](~ 9E 3(> :D+ @6 3B:0 *Šq +•+ +A 6)6 3•+ 3([r+ :0  =  @6 3B :0 6†+ +([ :0 sB 0ƒ] (~% $)6 3([r+ 3•+:0 @6 3B :0 /*C+ z>+ 6(‰3 6(¡ 9}* 3*`+ 34‡+( /—0 (~ 6†+ +([ 9}* -D* a,+( /J 3(0)* (~ -1+ 3H+( b()6w ?- a,+( 3*-w 9*C- b(}qw >+ 3([w{ œ 9E 6(0/s340/ 4F3 :› ak 3•+ 3([r+ :0 6)6 @6 3B:0% (* ak3•+ 3([r++([ 9I]w 6(Š+ 3104 6)6:˜+ ƒ>F36~^_6 3H+( 3[r+ •+ /E /*q*: q40ƒ*:w6(0/s340/ q0ƒ*:% [Œ* b()-q()46)6 ^‰6 3H+(6(@+0ƒ](~9E3(>:D+@63B:067$ /E ¢6z>s sz>/*4w +•- G=&% (*ˆ> q([r+ q()q(*,+^1* 9Eq(•6 31q^—6(•+-*+((013 ^_+at0 9, -16( -)>67$9E310 6rs“9y+6(‚6 6(09*,6 s™:M+$340+^*ˆ>34k 6)6 a,+( /J-16(-)>%$)6 q([r+ q()q +E] 6(03(F]$6~b(t +•+ • *y@63B:0 (]:40ƒ]/% • *y/*q*: q40ƒ*:% • E- 6(I- 34›^)+b‘sBb(“* ^|>67z>) 34‡+(q40ƒ*: (~ /*q*:% • ‡-*y6)6q(.+ 3™s‚33B:0w*Šq+•+ 6(‰+sBq40ƒ*:(~/*q*::0 s‚3% • L66(`sB st+ s*+( 4 @63B :0aŸ+ 6)6(•6 6(` b(…+ 61+( 34+( -+ƒ+3(*+0ƒ*:s • L66(`sB3•+ 3([r+ :06)6+•]-•(]/>40+*:sw /s3sw 60//+sw{€ 6~3(‘/E-3(0)*(~6F>34Š6-…/*C+ b`3% 013 ^_+ 6(@+ 0ƒ] (~ 67 $ 4F3 -1+(w Fq b(0t+ OK /|+ s0 9}* 9*3-*+ $ 9E ;% ! 6Fq ^_ 3` aE0w -_3 340+ +(y+ ^‰6 3H+( (y> H6( +(F3 67 $ ’3(> :D+ @6 3B :0 /E +(Œ 9E0 6F>34Š6 (~(D6 6†+ +([ sB /*C+ b`3 6(‰3 6(¡67+~9}* -E+ 3` aE0% (Œ 9I]-E$6~ 3(‘ at0 9, 3` aE0 6(@+/1* 6)6 3•+ 3([r+ :0 6)6 @6 3B:03+ 340+ +[}6 /˜+6)6 @63+ 340+:|> -_36)6( (*,> z>t% Quercetin  G  >463*+ /E -_3 8/90+0*: ^[\6 q(.+ a@ 4_+ 4—* 340+ 3B +(*C+% >463*+ /E -_38/90+0*:aˆ+ 9y+ 9E (013^_+ +(F367 8/90+0*: 340+ 6)6 +(*C+ 6•> 3A 34[}6 ^`++]%(*ˆ>6(`q(u-3A :[\6 3(t06~3)6^_+3@3+(Œ9E03(E+( q(|+ z>463*+9}* (E- /[\+ 60% $F>34Š667 >463*+  K [...]... protein tổng hay số lượng tế bào Sự thay đổi lượng tế bào so với mẫu đối chứng phản ánh độc tính tế bào của chất thử THỬ NGHIỆM KHẢ NĂNG GÂY ĐỘC TẾ BÀO - Giải đông nguồn tế bào ung thư bảo quản trong nitơ lỏng và nuôi cấy tế bào đến thế hệ thứ 4 (P4) - Nuôi tế bào trong bình nuôi cấy đạt độ phủ khoảng 70 - 80% - Phủ tế bào vào các giếng trên đĩa 96 giếng với mật độ tế bào/ giếng ban đầu là 10 4 tế bào/ giếng... HAK-1B, và LLC Lewis ung thư biểu mô tế bào phổi TRAIL là một chất có khả năng gây độc tế bào một cách có chọn lọc nên được sử dụng như một chất chống ung thư tiềm năng Sự kết hợp giữa Luteolin với TRAIL được thử nghiệm với tế bào ung thư phổi trên chuột cho thấy hoạt động chống ung thư của TRAIL được tăng lên đáng kể Sự tăng trưởng của khối u bị ức chế, khối lượng của khối u giảm, và gây chết các tế bào. .. ĐỘC TẾ BÀO & TÍNH KHÁNG UNG THƯ CỦA FLAVONOID 1.5.1 Hiện tượng gây độc tế bào Đối với những tế bào bình thường trong cơ thể người khi nó được tạo ra thì đến một thời gian nhất định nó sẽ chết đi (apoptosis) Khi một người bị ung thư ác tính thì cơ chế này sẽ bị rối loạn dẫn đến việc các tế bào ung thư ác tính được sinh ra nhưng không bao giờ chết đi theo cơ chế thông thường Cũng như những tế bào thông... Theo các nghiên cứu gần đây nhất, người ta đã tổng hợp được Quercetin và Luteolin bằng nhiều phương pháp khác nhau, sau khi tham khảo sơ bộ một số tài liệu đã nghiên cứu kết hợp với điều kiện thực nghiệm sẵn có, chúng tôi đã chọn quy trình tổng hợp như sau: Từ Quercetin và Luteolin có sẵn trong PTN chúng tôi sẽ tổng hợp 2 dẫn xuất mới từ Quercetin và 2 dẫn xuất mới từ Luteolin 2 Phương tiện nghiên cứu... Sulforhodamin B (SRB) là một phương pháp nhuộm màu đơn giản và nhạy để xác định độc tính tế bào của một chất SRB là một thuốc nhuộm tích điện âm sẽ liên kết tĩnh điện được với các phần tích điện dương của protein Lượng thuốc nhuộm liên kết sẽ phản ánh lượng protein tổng của tế bào Trong thử nghiệm, tế bào được cố định, rửa và nhuộm với SRB Sau đó SRB liên kết với protein tế bào được hòa tan tạo dung... vị trí 3’ và 5’ còn có tính bảo vệ cao hơn nữa Hoạt tính của tính kháng oxy hóa không chỉ ở chố bắt gốc tự do mà còn điều chỉnh tín hiệu tế bào để chống ung thư bằng cách làm chết tế bào (apoptosis) và chống tăng sinh (antiproliferative) Flavonoid có hoạt tính sinh học mạnh Các tế bào ung thư dường như nhạy cảm với polyphenol hơn những tế bào thường Các flavonoid được xem như là những ứng cử viên tiềm... ung thư đặc biệt là khả năng gây chết tế bào (apoptosis) Tangeretin và nobiletin là những flavonoid hiệu quả nhất trong điều trị ung thư Các thí nghiệm in vitro và in vivo đối với những người bị ung thư vú MDA-MB-435 và MCF-7, và ung thư ruột kết HT-29 cho thấy Tangeretin và nobiletin làm ức chế sự gia tăng của các tế bào trên nhưng lại không gây độc tế bào Đây cũng là một lợi thế trong điều trị ung... kháng u SV: NGÔ HOÀNG VƯƠNG Page 29 TỔNG QUAN LUẬN VĂN GVHD: TS HOÀNG THỊ KIM DUNG 1.5.4 Tính kháng ung thư của Luteolin [ 35,36] Luteolin có tác dụng kháng u đối với một loạt các khối u của ung thư phổi, vú, đại tràng và gan Sự kết hợp của Luteolin và tác nhân gây gây hại DNA cisplatin có thể làm giảm sự tăng trưởng của xenografts khối u gây ra bởi các tế bào ung thư tuyến tiền liệt LNCaP, các tế bào. .. đế bào ung thư phát triển và gia tăng số lượng tế bào thông qua quá trình phân bào Chính vì vậy trong điều trị ung thư dùng phương pháp thông thường là dùng các tác nhân hóa học để giết chết tế bào ung thư hoặc dùng các tác nhân chống tăng sinh (antiproliferative) để làm cho tế bào ung thư không phát triển được nữa 1.5.2 Tính kháng ung thư của flavonoid [30, 31, 32, 33] Tính kháng ung thư của các Flavonoid. .. mặt kính đồng hồ, ống đong 50 mL, 25 mL Bình định mức 100 mL, 500 mL Phương pháp phân tích và xác định hoạt tính sinh học của sản phẩm Các phương pháp phân tích sản phẩm Phương pháp sắc ký bản mỏng, đo điểm chảy, phổ UV, phổ IR, phổ LC-MS, phổ - 3 1 NMR xác định cấu trúc các dẫn xuất thu được 2 Xác định hoạt tính gây độc tế bào Trong tương lai chúng sẽ tiến hành các thí nghiệm tổng hợp các dẫn suất . Quercetin và Luteolin chúng tôi tiến hành tổng hợp một vài dẫn xuất của chúng và xét nghiệm hoạt tính gây độc tế bào đối với tế bào ung thư. Từ đó làm nền tảng để thực hiện những bước tổng hợp các dẫn. KHOA Độc lập - Tự do - Hạnh phúc Số: _______ /BKĐT TỒNG QUAN LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC BỘ M 1. Đầu đề luận án: Tổng Hợp Một Số Dẫn Xuất Flavonoid Và Khảo Sát Hoạt Tính Gây. cao. Hoạt tính này có được một phần là docác thành phần flavonoid trong những bộ phận của cây cỏ. Không những vậy, nhiều nghiên cứu phát hiện rằng các dẫn xuất tổng hợp từcác flavonoid cho hoạt