Mục tiêu• Biết được hóa mô miễn dịch là gì.• Biết được các ứng dụng trong chẩn đoán• Biết được các ứng dụng trong tiên lượngmột số bệnh ung thư• Biết được các ứng dụng trong điều trị mộtsố bệnh ung thư• Biết được các điều kiện đánh giá kết quảnhuộm và các hạn chế của phương pháp
PGS. TS. HỨA THỊ NGỌC HÀ HÓA MÔ MIỄN DỊCH Bài giảng chứng chỉ sinh học phân tử Đối tượng: NCS, CKII, CH, CKI, BSNT Mục tiêu • Biết được hóa mô miễn dịch là gì. • Biết được các ứng dụng trong chẩn đoán • Biết được các ứng dụng trong tiên lượng một số bệnh ung thư • Biết được các ứng dụng trong điều trị một số bệnh ung thư • Biết được các điều kiện đánh giá kết quả nhuộm và các hạn chế của phương pháp HÓA MÔ MIỄN DỊCH (IMMUNOHISTOCHEMISTRY ‟ IHC) LÀ GÌ? • Là phương pháp xác đònh vò trí kháng nguyên đặc hiệu hiện diện trong mô hoặc tế bào (bào tương, màng tế bào, nhân) dựa trên phản ứng miễn dòch (kháng nguyên – kháng thể) kết hợp với hóa chất. 1. ÑAÏI CÖÔNG HÓA MÔ MIỄN DỊCH ‟ LỊCH SỬ PHÁT TRIỂN 1940s: Coons (miễn dòch hùynh quang) Kháng nguyên Kháng thể Chất phát huỳnh quang - mô đông lạnh, - cần trang bò kính hiển vi hùynh quang - Kết quả không lưu trữ được lâu HÓA MÔ MIỄN DỊCH ‟ LỊCH SỬ PHÁT TRIỂN 1974: Taylor et al: xác đònh một số kháng nguyên trong tế bào ở mô đã được xử lý thường quy tại các phòng xét nghiệm GPB. - kết quả lưu trữ được lâu - có thể sử dụng trên các khối nến lưu trữ từ trước - Không cần KHV hùynh quang 1990s: áp dụng rộng rãi trên toàn thế giới. Hiện nay: xét nghiệm thường quy ở các phòng XN GPB Kháng nguyên Antigens từ ngoài cơ thể: protein hay polysaccharide của vi khuẩn, độc tố, virus, flagella, Kháng Nguyên • từ trong cơ thể: KN gồm: - các sợi trung gian (intermediate filaments), • - thụ thể hormon (ER, PR, AR ), • - các protein là sản phẩm của đột biến gen: c-kit, p53, Her2, EGFR Antigen - Epitope: Là một phần nhỏ của kháng nguyên, nơi tiếp xúc với kháng thể. Một kháng nguyên có thể có vài epitope. Mỗi epitope được nhận biết bởi một kháng thể riêng biệt. Cần bộc lộ epitope trước khi cho tiếp xúc với kháng thể (trong quy trình nhuộm HMMD). [...]... tắc của kỹ thuật hóa mô miễn dòch Hệ thống phát hiện Hệ thống phát hiện „ Men + Chất màu (DAB : màu vàng nâu) „ (EAC : màu đỏ) CÁC KỸ THUẬT MIỄN DỊCH MEN • 1 Miễn dòch men trực tiếp: „Kháng nguyên (mô) + kháng thể thứ nhất + men men Kháng thể I „ đơn giản, nhanh, có tính đặc hiệu ít nhạy cảm do thiếu hệ thống phóng đại dấu hiệu nhận biết Kháng nguyên (mô) CÁC KỸ THUẬT MIỄN DỊCH MEN • 2 Miễn dòch men... DỊCH MEN • 2 Miễn dòch men gián tiếp men Kháng thể II „Kháng nguyên (mô) + kháng thể thứ nhất + kháng thể thứ hai có gắn men đồng thời kháng Ig loài Kháng thể I Kháng ngên (mô) của kháng thể thứ nhất CÁC KỸ THUẬT MIỄN DỊCH MEN • 3 KT men – chống men (peroxidaseantiperoxidase : PAP) men KT III Kháng thể II Kháng thể I Kháng ngên (mô) „ đặc hiệu và nhạy cảm hơn 2 phương pháp trên 4 Cầu nối Biotin –... Streptavidin (LSAB) Streptavidin Màu (DAB, AEC) Kháng thể II Biotin Kháng thể II Peroxidase Kháng thể I Kháng nguyên CÁC KỸ THUẬT MIỄN DỊCH MEN • 4 Cầu nối Biotin – Streptavidin „ tính nhạy cảm cao và đặc hiệu cao hệ thống nhận biết được phóng đại lên 4 lần CÁC KỸ THUẬT MIỄN DỊCH MEN • 5 Chuỗi dextran hệ thống nhận biết được phóng đại lên rất nhiều lần Đánh giá kết quả nhuộm • ÂM TÍNH KẾT QUẢ NHUỘM... nối kháng nguyên Cấu trúc của kháng thể Một phân tử hình chữ Y với 4 chuỗi protein: 2 chuỗi nhẹ 2 chuỗi nặng Vùng thay đổi (Fab): hai phần đầu của nhánh chữ Y, chứa vò trí kết nối kháng nguyên Vùng ổn đònh (vùng Fc): phần gốc của chữ Y, quan trọng vì có thể kết nối với bổ thể hay các tế bào Cấu trúc của kháng thể Kháng Thể (KT) „ Kháng thể đa dòng: gây miễn dòch ở động vật với kháng nguyên đặc hiệu... 2.2 Tiên lượng 2 ỨNG DỤNG CỦA HMMD 2.3 Điều trò 1 Xác đònh nguồn gốc u Ứng dụng 3 Xác đònh tác nhân nhiễm khuẩn trong CHẨN ĐOÁN 2 Phân biệt u lành và ung thư • 2.1.1 Xác đònh nguồn gốc u, đặc biệt là ung thư di căn Vì sao cần ? - U hốc mũi - Sarcom mỡ ? - Carcinom tuyến biệt hóa HE kém ? Hình ảnh vi thể không đặc hiệu Có nhiều chẩn đóan trên cùng tiêu bản • 2.1.1 Xác đònh nguồn gốc u, đặc biệt là ung... cần ? -Cách điều trò khác nhau tùy lọai ung thư U chưa rõ nguồn gốc Vimentin Cytokeratin EMA LCA (-) (+) (-) (-) (+) Sarcôm (+) (-) Carcinôm (+) Lymphôm U khác HMB45 (+) Melanoma S100 (+) NSE (+) (+) Mô bào Thần kinh Sarcôm (Vimentin +) Actin (+) Desmin CD 31, CD34, Factor VIII/ (+) (+) Sar Cơ trơn Myogenin, MyoD1, Myosin Sar cơ trơn/cơ vân Sar mạch máu (+) Sar cơ vân Carcinom (EMA/CK +) Thyroglobulin . PGS. TS. HỨA THỊ NGỌC HÀ HÓA MÔ MIỄN DỊCH Bài giảng chứng chỉ sinh học phân tử Đối tượng: NCS, CKII, CH, CKI, BSNT Mục tiêu • Biết được hóa mô miễn dịch là gì. • Biết được các ứng. bào, nhân) dựa trên phản ứng miễn dòch (kháng nguyên – kháng thể) kết hợp với hóa chất. 1. ÑAÏI CÖÔNG HÓA MÔ MIỄN DỊCH ‟ LỊCH SỬ PHÁT TRIỂN 1940s: Coons (miễn dòch hùynh quang) Kháng. hóa mô miễn dòch Hệ thống phát hiện Hệ thống phát hiện „ Men + Chất màu (DAB : màu vàng nâu) „ (EAC : màu đỏ) CÁC KỸ THUẬT MIỄN DỊCH MEN • 1. Miễn dòch men trực tiếp: „Kháng nguyên (mô)