PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ NGHIÊN CỨU CÁC ĐẶC TÍNH TĂNG TRƯỞNG, CỐ ĐỊNH ĐẠM CỦA VI KHUẨN AZOTOBACTER
Trang 1BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐH CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM
TP HCM KHOA CNSH & KTMT
PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ NGHIÊN CỨU CÁC ĐẶC TÍNH TĂNG TRƯỞNG, CỐ ĐỊNH ĐẠM CỦA VI KHUẨN
AZOTOBACTER
GVHD: NGUYỄN THÀNH LUÂN
Trang 3MỞ ĐẦU
Trang 4MỞ ĐẦU
N 2 NH 4 +
VK CĐ Nitơ
Khí quyển, 80% v/v
(Azotobacter)
MỞ ĐẦU
PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ NGHIÊN CỨU CÁC ĐẶC TÍNH
TĂNG TRƯỞNG, CỐ ĐỊNH ĐẠM CỦA VI KHUẨN
AZOTOBACTER
N 2 NH 3
t O, P cao Xúc tác
Trang 51 Phân lập chủng Azotobacter từ các mẫu đất ở Hà Nội,
Lâm Đồng, Đông Nai, Long An, Tiền Giang, Bến Tre
2 Nghiên cứu các đặc điểm hình thái, sinh lý và sinh hóa của các chủng phân lập
3 Tuyển chọn chủng có hoạt tính cố định đạm cao
4 Nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng lên khả năng tăng trưởng và cố định nitơ của chủng chọn lọc
MỞ ĐẦU
NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
Trang 6TỔNG QUAN TÀI LIỆU
Trang 71.1 CHU TRÌNH NITƠ
TỔNG QUAN TÀI LIỆU
Trang 81.2 VI KHUẨN CỐ ĐỊNH NITƠ
TỔNG QUAN TÀI LIỆU
Dựa vào mối liên hệ của vi khuẩn cố định nitơ với thực vật, người ta chia thành 3 nhóm nhỏ:
a Vi khuẩn cố định nitơ sống cộng sinh
(Rhizobium, Sinorhizobium, Mesorhizobium, Bradyrhizobium…)
b Vi khuẩn cố định nitơ tự do
(Azotobacter, Clostridium, Pseudomonas…)
c Vi khuẩn cố định nitơ tương tác
(Azospirillum, Herbasspirillum, Gluconoacetobacter, Klebsiella…)
Trang 91.3 VAI TRÒ CỦA VI KHUẨN CỐ ĐỊNH NITƠ
TỔNG QUAN TÀI LIỆU
Cố định nitơ phân tử thành dạng NH4+ giúp cây trồng hấp thu một cách hiệu quả
Kích thích sự tăng trưởng của thực vật bằng cách tạo ra
các phytohormon (auxin, cytokinin và gibberillin)
Giảm tác động có hại của mần bệnh
Giúp cây trồng hấp thu hiệu quả các ion như sắt, kẽm và các nguyên tố vi lượng khác
Trang 101.4 ĐẶC ĐIỂM VI KHUẨN AZOTOBACTER
TỔNG QUAN TÀI LIỆU
Gram âm
Không sinh bào tử
Tạo bao nhầy
Tạo bào xác
Hình cầu hay hình que
Khuẩn lạc nhầy, bóng, lồi, đôi
khi nhăn nheo, có màu trắng đục,
vàng hoặc màu nâu đen
Nhiệt độ tối ưu: 30oC
pH tối ưu: 7,2 - 8,2
Ẩm độ tối ưu: 75 - 80 %
Trang 11VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP
Trang 12VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP
Khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến khả
năng cố định đạm và tăng sinh khối Fedorow
2.1 VẬT LIỆU
Các mẫu đất thu thập ở Hà Nội, Lâm Đồng, Đồng
Nai, Long An, Tiền Giang, Bến Tre
Các môi trường dùng cho thí nghiệm
Trang 13VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP
Phân lập, làm thuần trên môi trường chọn lọc Ashby
Tăng sinh vi khuẩn
Phương pháp định lượng vi sinh vật bằng phương
pháp đo độ đục
Định lượng nitơ tổng số bằng phương pháp Kjeldahl
Các phương pháp nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh
lý và sinh hóa
Phương pháp nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng lên sự
tăng trưởng và cố định đạm của chủng vi khuẩn
2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Trang 14NGUỒN PHÂN LẬP
N/C ĐĐ HÌNH THÁI, SINH LÝ, SINH HÓA CỦA CÁC CHỦNG PHÂN LẬP
Phân lập và làm thuần NHỮNG CHỦNG THUẦN
TUYỂN CHỌN CHỦNG CÓ KHẢ NĂNG CỐ ĐỊNH NITƠ CAO
N/C A/H CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ LÊN K/N TĂNG TRƯỞNG VÀ CỐ ĐỊNH NITƠ
SƠ ĐỒ THÍ NGHIỆM
Trang 15KẾT QUẢ
Trang 16KẾT QUẢ
3.1 PHÂN LẬP VÀ LÀM THUẦN
Từ 16 mẫu đất thu được ở Hà Nội, Lâm Đồng, Đồng Nai, Long An, Tiền Giang, Bến Tre, sau khi phân lập và làm thuần trên môi trường Ashby agar, chúng tôi thu được 20 chủng vi khuẩn có đặc điểm khuẩn lạc đặc trưng của chi
Azotobacter được ký hiệu Az 01 - Az 20 (theo mô tả
trong cuốn phân loại Bergey, 2005: Khuẩn lạc tròn, nhầy, lồi, có màu trắng đục, vàng hoặc nâu đen)
Trang 17+ + + + + + + - + + + - + + + +
-cầu
+ - + + + + + - + + - + + + - +
-cầu
+ + + + + + + - + + + + + + + +
-cầu
+ - + + + + + + + + + - - - + +
-cầu
+ + + + + + + - + - - + - - + +
-cầu
+ + + + + + + - + + - + + + + +
-cầu
+ - + + + + + - + + + + + + + +
-cầu
+ - + + + + + - + + + + + + + +
-cầu
+ + + + + + + - + + + - - + + +
-cầu
+ - + + + + + - + + + - - - - +
-cầu
+ + + + + + + + + + + - - - + +
-cầu
+ + + + + + + + + + - + - - + +
-cầu
+ + + + + + + - + + - + + + + +
-cầu
+ + + + + + + - + + + + - + + +
-cầu
+ - + + + + + + + + - - - - + +
-cầu
+ + + + + + + + + + + + + + + +
-cầu
+ - + + + + + - + + - + + + - +
-cầu
+ + + + + + + + + + - + + + + +
-cầu
+ + + + + + + + + + + + + + + +
-Bảng 3.1 Một số đặc điểm hình thái, sinh lý và sinh hóa của 20 chủng phân lập
Ghi chú: (+): dương tính (-): âm tính
Trang 18Az 02
Az 03
Az 04
Az 05
Az 06
Az 07
Az 08
Az 09
Az 10
Az 11
Az 12
Az 13
Az 14
Az 15
Az 16
Az 17
Az 18
Az 19
Az 20
Biểu đồ 3.1 Hàm lượng nitơ tổng của 20 chủng Azotobacter
cố định được trên môi trường Ashby MT: Ashby lỏng, tốc độ lắc 150v/p, tgian: 5 ngày
Trang 19KẾT QUẢ
3.5 ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ LÊN KHẢ NĂNG TĂNG TRƯỞNG VÀ CỐ ĐỊNH NITƠ CỦA Az 03 VÀ Az 07
3.5.1 CHỌN MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY THÍCH HỢP
3.5.2 ẢNH HƯỞNG NGUỒN ĐƯỜNG
3.5.3 ẢNH HƯỞNG NGUỒN ĐẠM
Trang 20trường nuôi cấy khác nhau
Biểu đồ 3.3 Khả năng cố định nitơ của
chủng Az 03 và Az 07 trên các môi
trường nuôi cấy khác nhau
Nuôi Az 03 và Az 07 trên các MT khác nhau, tg nuôi cấy: 5 ngày,
tốc độ lắc 150v/p
181.29
Trang 21Đồ thị 3.3 Ảnh hưởng của nguồn đường
và nồng độ đường lên khả năng tăng
trưởng của chủng Az 03
MT: MT2; pH: 7.5; tốc độ lắc: 150v/p; tgian nuôi cấy: 5 ngày,
với các nguồn đường ở các nồng độ khác nhau:
Az 03
41.40
50 100 150 200
189.96
Đồ thị 3.4 Ảnh hưởng của nguồn đường
và nồng độ đường lên khả năng cố định nitơ
của chủng Az 03
Trang 22KẾT QUẢ
Az 07
3.5.3 ẢNH HƯỞNG NGUỒN ĐƯỜNG
Đồ thị 3.6 Ảnh hưởng của nguồn đường
và nồng độ đường lên khả năng cố định nitơ
42.11
50 100 150 200 250
Đồ thị 3.5 Ảnh hưởng của nguồn đường
và nồng độ đường lên khả năng tăng
trưởng của chủng Az 07
208.99
Trang 23KẾT QUẢ
3.5.6 ẢNH HƯỞNG NGUỒN ĐẠM
Az 03
MT: MT2; pH: 7.5; nguồn đường: sucrose; tgian nuôi cấy: 5 ngày,
ion Mn 2+ : 0.015% (Az 07); với tốc độ lắc: 250v/p
Đồ thị 3.13 Ảnh hưởng nồng độ của
mỗi loại đạm lên khả năng tăng trưởng
của chủng Az 03
62.61
Đồ thị 3.14 Ảnh hưởng nồng độ của mỗi
loại đạm lên khả năng cố định nitơ
của chủng Az 03
0 50 100 150 200 250
233.21
0 20
Trang 24KẾT QUẢ
3.5.6 ẢNH HƯỞNG NGUỒN ĐẠM
Đồ thị 3.16 Ảnh hưởng nồng độ của mỗi
loại đạm lên khả năng cố định nitơ
Trang 26KẾT LUẬN - ĐỀ NGHỊ
Trang 27KẾT LUẬN
Azotobacter.
Az 03 và Az 07 là MT2.
Điều kiện nuôi cấy
Tăng sinh Cố định nitơ Tăng sinh Cố định nitơ
4.1 KẾT LUẬN
Trang 28KẾT LUẬN
tăng trưởng của Az 03 và Az 07, nhưng gây ức chế khả năng cố định nitơ.
03
Az 07.
Trang 30XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN QUÝ THẦY CÔ VÀ CÁC BẠN
ĐÃ CHÚ Ý LẮNG NGHE!