Đặt vấn đề • Trong những năm gần đây, tỉ lệ ngưòi mắc các bệnh lý về tim mạch ở nước ta ngày càng gia tăng. Do đó, trên thị trường đã xuất hiện nhiều chế phẩm dùng để điều trị các bệnh về tim mạch. Các chế phẩm này bao gồm những chế phẩm đofn thành phần và cả đa thành phần. Hiện nay, nhờ sự phát triển cao của công nghệ bào chế, các nhà sản xuất dược phẩm cho ra đòi nhiều loại thuốc có kết hợp nhiều dược chất khác nhau để đáp ứng nhu cầu về phòng và chữa các bệnh khác nhau về tim mạch. Tuỳ theo mục đích điều trị mà các nhà sản xuất đã phối hợp các thành phần hoạt chất khá đa dạng trong công thức bào chế. Công ty Dược phẩm Khánh Hoà đã nghiên cứu và sản xuất chế phẩm viên nén bao phim Kalmitril với công thức bào chế như sau: Almitrine bimesylat 30,0mg Raubasine 10,0mg Tá dược vừa đủ 500,Omg Biệt dược này là sản phẩm dựa trên sự phối hợp tác dụng dược lý các chất có tác dụng giãn mạch ngoại v i, hoạt hoá não bộ . Thuốc được chỉ định khi rối loạn thần kinh nhẹ liên quan đến tuổi tác, các rối loạn về thị giác do bệnh lý mạch máu, các rối loạn của tai trong do bệnh lý mạch máu (mất thmh giác, choáng váng, ù tai). Thuốc đa thành phần này là sản phẩm mới, không có trong Dược điển hiện hành. Do đó, để giúp cho nhà sản xuất tiêu chuẩn hoá sản phẩm, về hai tiêu chí quan trọng là định tính và định lượng cần phải được nghiên cứu xây dựng phương pháp. Vì vậy, chúng tôi đã tiến hành đề tài “Nghiên cứu định tính và định lượng đồng thời Almitrine bimesylat và Raubasine trong viên nén bao phim Kalmitril bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao” nhằm đóng góp cho ngành kiểm nghiệm thuốc một qui trình kỹ thuật để đánh giá chất lượng của 1
BỘYTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI ĐỖ HỒNG VÂN NGHIẺN cúu DỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG DỒNG THỜI ■ * m m ALMITRINE BIMESYLAT VÀ RAUBASINE TRONG VIÊN NÉN BAO PHIM KALMITRIL BANG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NANG CAO (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ KHOÁ 2001 - 2006) Người hướng dẫn : PGS. TS THÁI PHAN QUỲNH NHƯ TS. THÁI DUY THÌN Nơi thực hiện : Phòng Hoá Lý I - Viện kiểm nghiệm Bộ môn hoá dược Thời gian thực hiện : 9/2005 đến 5/2006 HÀ NỘI 5 - 2006 Lời cảm ơn Khoá luận này được thực hiện tại phòng hoá lý I- Viện kiểm nghiệm và Bộ môn Hoá Dược-Trường Đại học Dược Hà Nội. Trong quá trình thực hiện khoá luận, tôi đã nhận được sự giúp đỡ tận tình của các thầy cô hướng dẫn và các cán bộ phòng hoá lý I-Viện kiểm nghiệm. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo trường đại học Dược Hà Nội đã trang bị cho tôi những kiến thức cơ bản và cơ sở hoá phân tích, hoá dược để tôi áp dụng trong quá trình thực nghiệm và hoàn thành khoá luân tốt nghiệp. Đồng thời, tôi xin cảm ofn tập thể cán bộ phòng hoá lý I-Viện kiểm nghiệm đã tạo điều kiện và giúp tôi hoàn thành khoá luận này. Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết cfn sâu sắc đối với: - TS.Thái Duy Thìn (phó chủ nhiệm bộ môn Hoá Dược-Trưòfng đại học Dược Hà Nội) - PGS.TS. Thái Phan Quỳnh Như (Trưởng phòng Hoá lý I-Viện kiểm nghiệm) đã trực tiếp hướng dẫn và giúp đỡ tôi trong quá trình làm khoá luận. Hà Nội, tháng 5/2006 Sinh viên Đỗ Hồng Vân MỤC LỤC Trang Các chữ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình Đặt vấn đề 1 Phần 1: Tổng quan 3 1.1. Almitrine bimesylat 3 1.2. Raubasine 5 1.3. Phương pháp phổ tử ngoại khả kiến 8 1.4. Kỹ thuật HPLC 8 1.4.1. Khái niệm cơ bản 8 1.4.2. Các đại lượng đặc trưng 9 1A3. Hệ thống HPLC 12 1.4.4. Pha tĩnh trong HPLC 12 1.4.5. Pha động trong HPLC 13 1.4.6. Cách đánh giá pic 14 1.4.7. Phương pháp định lượng và cách tính kết quả trong HPLC 14 Phần 2: Thực nghiệm và kết quả . 17 2.1. Hoá chất và thiết bị 17 2.2. Đối tượng, nội dung và phương pháp nghiên cứu 17 2.2.1. Đối tượng nghiên cứu 17 2.2.2. Nội dung và phương pháp nghiên cứu 18 2.3. Kết quả thực nghiệm và nhận xét 22 2.3.1. Khảo sát chọn điều kiện sắc k ý 22 2.3.2. Xây dựng phương pháp định tính Almitiine bimesylat và Raubasine trong chế phẩm Kalmitril 29 2.3.3. Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời Almitrine bimesylat và Raubasine trong chế phẩm Kalmitril 33 2.3.4. Đánh giá phương pháp 34 2.3.4. Đánh giá ưu, nhược điểm của HPLC 43 2.3.5. Bàn luận 43 Phần 3: Kết luận và đề xuất 45 3.1. Kết luận 45 3.2. Đề xuất 45 Tài liệu tham khảo CÁC CHỮ VIẾT TẮT HPLC : Sắc ký lỏng hiệu năng cao. SKĐ : Sắc ký đồ SKS : Số kiểm soát CTCP : Công ty cổ phần CIDL : Công ty dược liệu s : Diện tích c : Chuẩn T :Thử DANH MỤC CÁC BẢNG STT Ký hiệu Nội Dung Trang 1 Bảngl Hệ số match so sánh giữa phổ chuẩn và thử. 29 2 Bảng 2 Kết quả khảo sát tính thích hợp của hệ thống 34 3 Bảng 3 Các nồng độ dung dịch chuẩn. 35 4 Bảng 4 Kết quả khảo sát độ tuyến tính. 36 5 Bảng 5 Kết quả khảo sát độ lặp lại. 39 6 Bảng 6 Kết quả khảo sát độ đúng. 41 7 Bảng? Kết quả định lượng đồng thời hai chất bằng phương pháp sắc ký vừa xây dựng trên một số mẫu lưu hành. 43 DANH MỤC CÁC HÌNH STT Ký hiệu Nội Dung Trang 1 Hình 1 Sắc ký đồ của hai chất và các thông số đặc trưng. 9 2 Hình 2 Phổ hấp thụ UV- VIS trong pha động của Raubasine. 24 3 Hình 3 Phổ hấp thụ UV- VIS trong pha động của Almitrine bimesylat. 25 4 Hình 4 Chồng phổ UV- VIS của Raubasine và Almitrine bimesylat. 26 5 Hình 5 Sắc ký đồ của Almitrine bimesylat và Raubasine khảo sát tại bước sóng 230nm. 27 6 Hình 6 Sắc ký đồ của Almitrine bimesylat và Raubasine khảo sát tại bước sóng 240nm. 27 7 Hình? Sắc ký đồ của Almitrine bimesylat và Raubasine khảo sát tại bước sóng 254nm. 28 8 Hình 8 Săc ký đồ mẫu chuẩn Almitrine bimesylat và Raubasine; cột C18 (250x4nm; 5|im); tốc độ dòng l,2 ml/phút. 30 9 Hình 9 Săc ký đồ mẫu thử - cột C18 (250x4nm; 5|im); tốc độ dòng l,2 ml/phút. 30 1 0 Hình 10 So sánh phổ UV- VIS của Raubasine. 31 11 Hình 11 So sánh phổ UV- VIS của Almitrine bimesylat. 32 12 Hình 12 ĐỒ thị biểu diễn sự phụ thuộc diện tích pic của Almitrine bimesylat vào nồng độ. 37 13 Hình 13 Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc diện tích pic của Raubasine vào nồng độ. 37 Đặt vấn đề • Trong những năm gần đây, tỉ lệ ngưòi mắc các bệnh lý về tim mạch ở nước ta ngày càng gia tăng. Do đó, trên thị trường đã xuất hiện nhiều chế phẩm dùng để điều trị các bệnh về tim mạch. Các chế phẩm này bao gồm những chế phẩm đofn thành phần và cả đa thành phần. Hiện nay, nhờ sự phát triển cao của công nghệ bào chế, các nhà sản xuất dược phẩm cho ra đòi nhiều loại thuốc có kết hợp nhiều dược chất khác nhau để đáp ứng nhu cầu về phòng và chữa các bệnh khác nhau về tim mạch. Tuỳ theo mục đích điều trị mà các nhà sản xuất đã phối hợp các thành phần hoạt chất khá đa dạng trong công thức bào chế. Công ty Dược phẩm Khánh Hoà đã nghiên cứu và sản xuất chế phẩm viên nén bao phim Kalmitril với công thức bào chế như sau: Almitrine bimesylat 30,0mg Raubasine 10,0mg Tá dược vừa đủ 500,Omg Biệt dược này là sản phẩm dựa trên sự phối hợp tác dụng dược lý các chất có tác dụng giãn mạch ngoại v i, hoạt hoá não bộ . Thuốc được chỉ định khi rối loạn thần kinh nhẹ liên quan đến tuổi tác, các rối loạn về thị giác do bệnh lý mạch máu, các rối loạn của tai trong do bệnh lý mạch máu (mất thmh giác, choáng váng, ù tai). Thuốc đa thành phần này là sản phẩm mới, không có trong Dược điển hiện hành. Do đó, để giúp cho nhà sản xuất tiêu chuẩn hoá sản phẩm, về hai tiêu chí quan trọng là định tính và định lượng cần phải được nghiên cứu xây dựng phương pháp. Vì vậy, chúng tôi đã tiến hành đề tài “Nghiên cứu định tính và định lượng đồng thời Almitrine bimesylat và Raubasine trong viên nén bao phim Kalmitril bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao” nhằm đóng góp cho ngành kiểm nghiệm thuốc một qui trình kỹ thuật để đánh giá chất lượng của 1 thuốc trong sản xuất, lưu thông phân phối đối với các chế phẩm có thành phần tương tự. Mục tiêu của đề tài: - Xây dựng chương trình sắc ký thích hợp cho phép tách, định tính và định lượng đồng thời Almitrine bimesylat và Raubasine. - Đánh giá phương pháp đã xây dựng. - Áp dụng phương pháp để định lượng một số mẫu lưu hành. Phầnl Tổng Quan 1.1. Almỉtrine bimesylat [4],[6], [7], [8], [9] * Tên khoa hoc: 2,4-bis[allylamino]-6-[4-[bis(p-flourophenyl)methyl]-l-piperazinyl]-s-triazine dimethanesulfonate. * Cống thức phân tử: C26lỈ29F2N7.2 CH4S0 3 . * Phân tử lương: 669,6. * Cống thức cấu tao của Almitrine bimesvlat ĩ .2CH4SO3 Y F [...]... phỏt hin Almitrine bimesylat v Raubasine chỳng tụi tin hnh o ph UV- VIS ca dung dch chun trong di súng t 200-400nm vi Almitrine bimesylat nng khong 45,75|ig/ml; Raubasine nng khong 15,6|ag/ml trong pha ng, cc dy Icm, mu trng l pha ng Kt qu ghi hỡnh 2, hỡnh 3 23 Hỡnh 2 Ph hp th UV- VIS trong pha ng ca Raubasine 24 Hỡnh 3 Ph hp th UV- VIS trong pha ng ca Almitrine bimesylat Cỏc ph cho thy Raubasine. .. phng phỏp nh tớnh Almitrine bimesylat v Raubasine trong ch phm Kalmtril Pha mu chun Almitrine bimesylat v mu chun Raubasine cú nng tng ng vúi cỏc cht ny trong mu th Pha mu th ch phm Kalmitril vi nng ca cỏc thnh phn tng t mu th trong phn nh lng Dch lc ca cỏc dung dch hy c tiờm vo h thng HPLC Tin hnh sc ký theo iu kin ó la chn Trong iu kin sc ký ó la chn thỡ pic ca Almitrine bimesylat v Raubasine tỏch... hofi vng, thng khụng tan trong nc, him khi tan c trong methylen chlorid v rt ớt tan trong methanol - chy 257 - Tớnh cht quang hc: + Dung dch Raubasine 0,5M ttong chloroform cú gúc quay cc l: [a] =-60 + Dung dch Raubasine 0,5M trong pyridin cú gúc quay cc l: [a] 0 =-45 + Dung dch Raubasine 0,25M trong meianol cú gúc quay cc l; [a] =-39 -Tớnh hp th t ngoi: Dung dch Raubasine trong methanol cú cỏc cc... cht: - Bt mu trng, khụng mựi, khụng v, khụng hỳt m.Thụng thng khụng tan trong nc, tan ớt trong methanol v ethanol, tan c trong chloroform - chy 243 - Tỳih hp th t ngoi: Dung dch Almitrine bimesylat trong ethanol cú cỏc cc i hp th t ngoi bc súng: 227nm v 246nm *Tỏc dung v cng dung: Almitrine bimesylat cú tỏc dng lm tng ỏp lc O2 trong khi ú nú s lm gim ỏp lc CO2 ng mch i vi nhng bnh nhõn mc chng tc... rừ Thng phõn tớch trong iu kin a trong khong 1,5 n 2 * S a lý thuyt v chiu cao a Iv thuyt: Hiu lc ct thng c biu th qua hai thụng s: s a lý thuyt (N) hoc chiu cao a lý thuyt (H) S a lý thuyt N c tớnh theo cỏc cụng thc ; N=16x ^ hoc 5,54 ớ 'ằ ỡ Trong ú W: l chiu rng pic ỏy pic Wi/2- l chiu rng pic o na chiu cao pic Chiu cao ca a lý thuyt tmh theo cụng thc: H =N ộ Trong ú L: chiu cao ca ct sc ký Vi... n Trong ú: x,y l cỏc hp th o c trong cỏc ph mu th v mu chun tng ng cựng bc súng n: l s s liu E: Tng cỏc s liu, Khi h s match xp x 1,000 ch ra mt ph nh tớnh ging nhau hon ton H s match > 0,900 thỡ ch ra 2 ph tng t H s match cng gn 1,000 thỡ s tng t ca ph cng cao H s match< 0,900 ch ra 2 ph khỏc nhau 19 ỏnh giỏ phng phỏp nh lng ng thi hai thnh phn Almitrine bimesylat v Raubasine trong viờn nộn Kalmitril. .. thy Raubasine cú cỏc cc i hp th ti cỏc bc súng 227nm v 284 nm Almitrine bimesylat cho cc i hp th ti bc súng 230 nm Tuy nhiờn, la chn c chớnh xỏc bc súng cú th tỏch hai cht tt, chỳng tụi tin hnh chng ph hai cht Raubasine v Almitrine bimesylat v c ghi li hỡnh 4 25 Ph trờn cho thy : khong bc súng t 235 n 255nm hp th ca Raubasine v Almitrine bimesylat gn nhau nht v s bin thiờn gia nng v hp th ln, kh... thuc gia nng Almitrine bimesylat v Raubasine vi din tớch pic trờn sc ký + Kho sỏt lp li ca phng phỏp + Kho sỏt ỳng bng phng phỏp thờm Trờn c s ú, chn nng nh lng ca mu chun v th nm trong khong tuyn tớnh ó kho sỏt, Sau ú tin hnh nh lng bng phng phỏp ngoi chun, cú ngha l so sỏnh din tớch pic mu chun v mu th c thc hin trờn cựng iu kin sc ký T ú tớnh ra hm lng Almitrine bimesylat v Raubasine trong ch phm... gian lu ca Raubasine khong 2,7 phỳt; Almitrine bimesylat khong 8 ,6 phỳt Ti im tng ng vi thi gian lu ca Raubasine v Almitrine trờn sc ký ca mu th v mu chun chỳng tụi ly ph hp th V-VIS i chiu vi nhau trong tng cht Kt qu cho thy cỏc ph ti cỏc im ú l trựng khớt lờn nhau vi h s Match so sỏnh gia ph ca mu chun v mu th c nờu trong bng 1 Bng 1 H s match so sỏnh gia ph chun v th Hot cht Mu Kamitril Raubasine. .. trớ v kớch thc - Nhit núng chy ca Almitrine bimesylat: 243c * Cỏc phng phỏp inh lucfng: + Phng phỏp chun trong mụi trng khan Chun Almitrine bimesylat trong mụi trng acid acetic khan bng dung dch acid percloric 0,1M Xỏc nh im kt thỳc bng ch th tớm tinh th 1ml acid percloric 0,1M tng ng vi 33,48mg C26H29F2N7.2 CH4SO3 + Phng phỏp HPLC [6 ]: - Mỏy sc ký lng hiu nng cao - Ct Lichrosorb RP 18 (250x4mm, . tôi đã tiến hành đề tài Nghiên cứu định tính và định lượng đồng thời Almitrine bimesylat và Raubasine trong viên nén bao phim Kalmitril bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao nhằm đóng góp cho ngành. NỘI ĐỖ HỒNG VÂN NGHIẺN cúu DỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG DỒNG THỜI ■ * m m ALMITRINE BIMESYLAT VÀ RAUBASINE TRONG VIÊN NÉN BAO PHIM KALMITRIL BANG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NANG CAO (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược. phương pháp định tính Almitiine bimesylat và Raubasine trong chế phẩm Kalmitril 29 2.3.3. Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời Almitrine bimesylat và Raubasine trong chế phẩm Kalmitril 33 2.3.4.