PHẦN I ĐẶT VẤN ĐỂ Một nhà bác học Pháp đã từng nói: Trong 100 con vi sinh vật thì cố tới 99 cọn có lợi và chỉ có một con là có hại”. Thế nhưng con người cũng chỉ mới phát hiện ra mặt có lợi của một số ít vi sinh vật trong vô số vi sinh vật có trong tự nhiên. Vì vậy, việc khai thác tiềm năng sẵn có trong giới vi sinh vật nhằm phát huy mặt có lợi của vi sinh vật phục vụ sức khoẻ con người là nhiệm vụ của các nhà khoa học. Ngày nay, mặc dù với sự phát triển của khoa học, nhiều chất kháng sinh được tạo thành từ con đường tổng hợp hoặc bán tổng hợp nhưng việc tìm ra các chất kháng sinh mới có nguồn gốc vi sinh vật vẫn được thế giới quan tâm. ở Việt nam do điều kiện khí hậu nóng ẩm đã tạo nên một quần thể vi sinh vật sống trong đất rất phong phú, nhiều loại xạ khuẩn (Actinomycetes) sinh kháng sỉnh, trong số đó phải kể đến chi Micromonospora. Các nhà nghiên cứu Việt Nam đã phân lập được một số chủng Micromonospora có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh có hoạt phổ rộng. Để tiếp tục công trình này chúng tôi đã lựa chọn đề tài: Nghiên cứu cải tạo giống và phát triển công nghệ lên men kháng sinh nhờ chủng Micromonospora N°9với những mục tiêu cụ thể sau: Tiếp tục nghiên cứu cải tạo giống bằng đột biến kết hợp với sàng lọc nhằm nâng cao hiệu suất sinh tổng hợp kháng sinh của chủng Micromonospora N°9. Nghiên cứu lên men sinh tổng hợp kháng sinh trên qui mô phòng thí nghiệm với các biến chủng đã được tuyển chọn. Tìm hiểu sơ bộ về thành phần các chất kháng sinh của Micromonospora N°9 và tiếp tục hoàn thiện qui trình chiết xuất tinh chế trên qui mô phòng thí nghiệm.
BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI fix'ty sv . NGUYỄN THỊ HƯƠNG NGHIÊN CỨU CẢI TẠO GIỐNG VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ LÊN MEN KHÁNG SINH NHỜ CHỦNG MICROMONOSPORA N°9 (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ ĐẠI HỌC KHOÁ 1996 - 2001) Người hướng đẫn : TS . Cao Vần Thu Th.S.Kiều ThịTIỒng Nơi thực hiện : Bộ môn Công nghiệp dược Trường đại học Dược Hà nội Thời gian thực hiện : 1/03 - 20/05/2001 ’ I / Ằ *) c Hà nôi 5 -2001 ______________ _ _ _ _____________________ ỵ ậ M MỤC LỤC PHẦN I - ĐẶT VẤN Đ Ể . 1 PHẦN II - TỔNG QUAN 2 2.1- Đại cương về Micromonospora 2 2.1.1. Đặc điểm sinh thái của Micromonospora 2 2.1.2. Đặc điểm hình thái của Micromonospora 2 2.1.3. Đặc diểm sinh lý của Micromonospora 2 2.1.4. Sự tạo thành sắc tố của Micromonospora 3 2.1.5. Sự tạo thành kháng sinh của Micromonospora . 3 2.2- Cải tạo, chọn giống vi sinh vật 4 2.2.1. Đại cương về cải tạo chọn giống vi sinh vật sinh kháng sinh 4. 2.2.2. Đột biến bằng tia u v . 5 2.2.3. Chọn giống bậc thang . 6 2.3- Lên men sinh tổng hợp kháng sin h 7 2.3.1. Lên men bề m ặt 7 2.3.3. Lên men chìm i.' . 7 2.4. Chiết tách và tinh ch ế . 8 2.4.1. Chiết suất bằng dung môi hữu cơ . 8 2.4.2. Sử dụng nhựa trao đổi ion và sắc ký . 9 2.5.Các nghiên cứu mới nhất về kháng sinh . 10 2.5.1. Sinh tổng hợp kháng sinh chống nấm-bafilomycin B] và C| từ Streptomyces halstedii K I2 2 1 0 2.5.2. Microcin J25 từ Escherichia coli ức chế sự phát triển của Salmonella enteritidis 11 PHẦN III - THỤC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 12 3.1- Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 12 3.1.1. Nguyên liệu 12 3.1.2. Phương pháp nghiên cứu . . . 14 3.2- Kết quả và nhận xét . 18 .3.2.1. Các kết quả cải tạo giống 18 3.2.2. Kết quả chiết xuất và tinh chế . 31 PHẦN IV- KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT r 34 4.1- Sau thòi gian thực nghiệm chúng tôi đã có một số kết luận . 35 4.2- Ý kiến đề xuất 35 Ẩ l ơ i a d m ơ n (Dối lỏn (Ị Uíttlt trong, t)(i biêí ổn ÌÁIL sẨe, tôi xỉu ĩừiụ tẻ- lổ ỉ eảiit útì tối ỉíttỈỊỊ qìáú 0 ’S'. (Qao (Văn. ^7h u , C7/t.(S 3Cit’ii CJhi 'Jôfíỉigf đầe biêt thầỊỊ ạiátì CĩcS. (Qílô ^Oãiĩ rĩliu - nại ứ'ỉ ỉtã tận tình giúp, (tở chỉ. tìtío cho tôi trong, liLÔt tfajồ'i lỊỈan .tíuủi ítiỉit, Ultoó luân này (Dềttạ. thềi tồi eũiìíỊ ddtL chân th ành cẩm ổn (£<$• \7<$. Ỡ t t ’ Jiluili 3 CúÓiỉ(ị f eắe tha ụ g ì á ú thuộc hồ rnềti (dồng, ntịiiìêp tltùíe eàtiq tíìàíi thề eáe bê íttâti eáe phòng ban ehửe nả í Kị trtìnạ toàn ità ề tìạ oà eáe han sình oìỉn đ ã Iiítỉêỉ tilth. (ỊÌúp đ&, tạo điều Uiêti Ỉỉitiùn ỉ fit (‘ho tồi hoàn th ành Ulĩúá luận đuttíL thài hạn. • • • • • nồi, ngà ụ 2 0 tíiátĩ(Ị 05 m ĩm 2001 Sinh ũ iỉb n thtừ‘ ítiêtt (ìỉạiiụễit £77* / PHẦN I - ĐẶT VẤN ĐỂ Một nhà bác học Pháp đã từng nói: " Trong 100 con vi sinh vật thì cố tới 99 cọn có lợi và chỉ có một con là có hại”. Thế nhưng con người cũng chỉ mới phát hiện ra mặt có lợi của một số ít vi sinh vật trong vô số vi sinh vật có trong tự nhiên. Vì vậy, việc khai thác tiềm năng sẵn có trong giới vi sinh vật nhằm phát huy mặt có lợi của vi sinh vật phục vụ sức khoẻ con người là nhiệm vụ của các nhà khoa học. Ngày nay, mặc dù với sự phát triển của khoa học, nhiều chất kháng sinh được tạo thành từ con đường tổng hợp hoặc bán tổng hợp nhưng việc tìm ra các chất kháng sinh mới có nguồn gốc vi sinh vật vẫn được thế giới quan tâm. ở Việt nam do điều kiện khí hậu nóng ẩm đã tạo nên một quần thể vi sinh vật sống trong đất rất phong phú, nhiều loại xạ khuẩn (Actinomycetes) sinh kháng sỉnh, trong số đó phải kể đến chi Micromonospora. Các nhà nghiên cứu Việt Nam đã phân lập được một số chủng Micromonospora có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh có hoạt phổ rộng. Để tiếp tục công trình này chúng tôi đã lựa chọn đề tài: "Nghiên cứu cải tạo giống và phát triển công nghệ lên men kháng sinh nhờ chủng Micromonospora N°9" với những mục tiêu cụ thể sau: - Tiếp tục nghiên cứu cải tạo giống bằng đột biến kết hợp với sàng lọc nhằm nâng cao hiệu suất sinh tổng hợp kháng sinh của chủng Micromonospora N°9. - Nghiên cứu lên men sinh tổng hợp kháng sinh trên qui mô phòng thí nghiệm với các biến chủng đã được tuyển chọn. - Tìm hiểu sơ bộ về thành phần các chất kháng sinh của Micromonospora N°9 và tiếp tục hoàn thiện qui trình chiết xuất - tinh chế trên qui mô phòng thí nghiệm. 1 PHẦN II - TỔNG QUAN 2.1- ĐẠI CƯƠNG VỂ MICROMONOSPORA [3,9] 2.1.1. Đặc điểm sinh thái của Micromonospora Micromonospora là một chi thuộc lớp xạ khuẩn Actinomycetes phân bố khá phổ biến trong tự nhiên như đất, nước, đất bùn, bùn cát, Theo Zsuzsa, trong đất miền núi tỷ lệ Micromonospora là 2,6%, trong đất trồng lúa là 14%, trong đất than bùn là 27% - 60% so với Actinomycetes. Còn theo Tibelar và Vruggih từ mẫu đất ruộng sâu khi phân lập chỉ có khuẩn lạc Micromonospora. 2.1.2. Đặc điểm hình thái của Micromonospora Đa số các Micromonospora chỉ có khuẩn ty cơ chất phân nhánh, không hình thành khuẩn ty khí sinh. Đường kính khuẩn ty khoảng từ 0,4 - 0,8 p.m khi chưa hình thành bào tử bề mặt khuẩn lạc có màu vàng sáng đến da cam hay nâu đỏ. Khi bào tử xuất hiện bề mặt khuẩn lạc sẽ trở nên sẫm mầu có thể từ nâu tối đến sẫm đen, bào tử Micromonospora xuất hiện cả trong nuôi cấy chìm và nuôi cấy trên bề mặt môi trường thạch đặc. Bào tử có thể hình tròn, hình oval hay hình dạng khác, có thể nẩm trên cuống sinh bào tử hoặc không có cuống. Cuống bào tử có hai dạng chính: dạng đơn độc (monopođial) và dạng chùm (sympodial). Bề mặt bào tử có thể nhẵn, có gai hay xù xì. 2.1.3. Đặc diểm sinh lý của Micromonospora Tồn tại nhiều trong đất, nước Micromonospora có vai trò vô cơ hoá các nguyên liệu hữu cơ trong quá trình mùn hoá. Ngoài ra Micromonospora còn có thể phân huỷ cellulose, peptid, kitin, xylan, lignin, casein, tinh b ộ t Micromonospora phát triển ở khoảng nhiệt độ từ 6 - 45°c, trên 50°c tất cả các loài Micromonospora đều không phát triển được và khoảng nhiệt độ phát triển tốt nhất 2 là từ 20- 40°c. Bào tử Micromonospora khá bền với nhiệt độ và dung môi hữu cơ. Bào tử của trên 50% số chủng loại có thể chịu được nhiệt độ 60°c trong 20 phút. Trong dung môi hữu cơ với nồng độ không quá 80% bào tử vẫn có thể sống sót, bào tử tồn tại tốt trong pH từ 6 - 8 nhưng khi quá acid thì thường bị mẫn cảm. Là vi khuẩn Gram (+), không ưa acid Micromonospora có thành tế bào kiểu II với thành phần chính là acid meso-diaminopimelic và glycin. Thành phần đường xylose, arabinose còn glucose, maltose,galactose thì khác nhau đối với mỗi loài. 2.1.4. Sự tạo thành sắc tô của Micromonospora Ngoài sắc tố cơ chất màu vàng da cam Micromonospora còn tạo sắc tố hoà tan với các màu sắc khác nhau trên các môi trường nuôi cấy khác nhau ở những loài khác nhau. Sắc tố này gắn với một loài nhất định nên đây là một trong những tiêu chuẩn, quan trọng đùng để xác định loài Micromonospora. Ví dụ các sắc tố hoà tan màu vàng là đặc trưng của loài M.chalcea, M. fusca được đặc trưng bằng các sắc tố khuyếch tán màu nâu sẫm, còn các sắc tô' bám trên hệ sợi màu nâu sẫm thường được coi là các đơn vị nhận biết của M.purpurea và M.echimospora. 2.1.5. Sự tạo thành kháng sinh của Micromonospora Micromonospora là một chi có khả năng tạo kháng sinh khá phong phú với nhiều loại kháng sinh thuộc nhiều nhóm khác nhau: aminosid, macrolid, polipeptid, ansamycin Một số kháng sinh quan trọng tạo ra từ Micromonospora đã được phát hiện, nghiên cứu và nhiều chất được ứng dụng trong y học gồm: ♦ Kháng sinh aininosid + Gentamicin là một kháng sinh được ứng dụng rộng rãi, sản xuất từ M. echimospora và M.purpurea (Weinstein và cộng sự 1963, Lucđemen và Brodsky 1964). 3 + Sisómicin sản xuất từ M.inyoensis (Weinstein và cộng sự, 1970). + Neomicin - B sản xuất từ M.sp 69-683 (Wagman và cộng sự, 1973). + Fortimicin A và B sản xuất từ M.olivoasterospora (Naro và cộng sự, 1977, Kwamoto và công sự, 1983). ♦ Kháng sinh nhóm Macrolid + Magalomicin do M. megalomycea (Weinstein và cộng sự 1969). +Rososamicin do M.rosaria (Wagman và cộng sự, 1972)- +Erythomycin B do M.sp 1225 (Marquiez 1976). ♦ Kháng sinh nhóm polipepíid + Chalcidin do M.chaltea H85 (Gause và cộng sự 1970). ♦ Kháng sinh nhóm Ansamycin + Halomycin do M. halophytica (Weinstein và cộng sự 1968, Lucdeman và cộng sự 1970). + Rifamicin sản xuất từ M.ellipsospora. 2.2- CẢI TẠO, CHỌN GIỐNG VI SINH VẬT [1,2,3,9,11,13] 2.2.1. Đại cương về cải tạo chọn giống vi sinh vật sinh kháng sinh Trong thực tế hiếm khi có thể phân lập từ tự nhiên một chủng vi sinh vật có khả năng tạo kháng sinh với hàm lượng cao nhằm đưa vào công nghiệp sản xuất. Do đó cần phải cải tạo, sàng lọc những chủng mới có sản lượng cao thuận lợi trong quá trình sản xuất từ khâu lên men đến chiết tách, tinh chế sản phẩm. 4 Chọn giống dựa vào hai cơ chế làm thay đổi thông tin di truyền: - Một cơ chế liên quan đến sự phát sinh đột biến, ứng dụng tiến hành chọn giống bằng đột biến gây tạo kết hợp với sàng lọc. - Một cơ chế liên quan đến tái tổ hợp di truyền ứng dụng tiến hành chọn giống bằng phương pháp lai tạo tái tổ hợp. Dạng đột biến quan trọng nhất trong cải tạo giống vi sinh vật là biến đổi trình tự sắp xếp các base trong ADN hay thêm bớt các cặp base trong ADN. Có hai loại đột biến: - Đột biến tự phát: Là những thể đột biến phát sinh không có sự can thiệp của các tác nhân đột biến. - Đột biến gây tạo: Là những đột biến được tạo ra bởi các tác nhân đột biến. Tác nhân đột biến có thể là vật lý, hoá học hay sinh học. + Tác nhân vật lý như: Tia y , tia rơngen , tia ƯV + Tác nhân hoá học: N - mustar, etylenimin, HN02, Nitroguanidin + Tác nhân sinh học: đột biến do hiện tượng thiếu các base ĩíitơ hay do tác động của các gen gây đột biến. 2.2.2. Đột biến bằng tia UY , Tia u v là những bức xạ nhìn thấy được có bựớc sóng >.=3900A° - 13ỐA0, khả năng đâm xuyên kém, tuy nhiên với những tế bào vi sinh vật có kích thước nhỏ (0,3 - 3|im) thì nó có thể đâm xuyên tới nhân nên được dùng rộng rãi trong đột biến. Tác dụng của tia u v chủ yếu trên acid nucleic và mạnh nhất ở bước sóng 260nm. 5 Cơ chế gây đột biến của tia tử ngoại ở mức độ phân tử: Khi chiếu tia u v với liều lượng cao làm đứt các liên kết hydro trong mạch kép DNA của tế bào vi sinh vật dẫn đến hiện tượng dime hoá thymin. Ở đây hai thymin gần nhau được liên kết cộng hoá trị với nhau ở nguyên tử c 5 và c 6. Hậu quả là sao chép bị sai lầm vì DNA - polymerase dễ lắp một nucleotid vào vị trí trên. Do tác dụng của tia u v trên sợi DNA cũng xuất hiện một dimepyrimidin khác gọi là quang sản phẩm 6-4. ở đây c 6 của pyrimidin 5' ( timin hoặc cytozin) được liên kết với c 4 của pyrimidin 3' ( thường là cytozin). Các sản phẩm này là nguyên nhân chủ yếu của đột biến gây nên bởi tia u v. Các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả gây chết và đột biến của tia ƯV. s&ng - Ánh sáng thường: Khi dịch bào tử đã chiếu tia ƯV để nơi ấntí'thường thì độ sống sót của bào tử sẽ tăng lên so với khi để trong bóng tối. Hiện tượng này gọi là sửa chữa hoạt quang. - Liều lượng chiếu được đặc trưng bởi: Thời gian chiếu-, khoảng cách chiếu và độ pha loãng bào tử/có ảnh hưỏng tới chiều hướng của đột biến âm hay dương, ở liều lượng chiếu cho độ sống sót từ 0 , 1 - 1 % thường xuất hiện đột biến dương, đột biến âm thường xuất hiện ở những liều lượng chiếu cao hơn. - Ngoài ra pH, nhiệt độ, thành phần môi trường, trạng thái sinh lý của bào tử cũng ảnh hưởng tới hiệu quả của việc chiếu tia u v . 2.2.3. Chọn giống bậc thang Đây là phương pháp chọn giống bằng sử dụng các tác nhân đột biến kết hợp với sàng lọc. Trong thực tế dể thu được một đột biến gen thực thụ trong chốc lát là khó khăn, đo vậy việc nâng cao các hoạt tính của các chủng thường được thực hiện bằng cách tích luỹ các đột biến nhỏ qua từng bậc chọn lọc. 6 [...]... MT4 các biến chủng sinh tổng hợp kháng sinh một cách mạnh mẽ hơn trong MT3 Vì vậy, ta chọn các biến chủng P14; P38; P45; P510 làm kết quả của cải tạo giống và mồi trường tối ưu lên men kháng sinh là MT4 trong nghiên cưú này và cho các nghiên cứu về sau 31 3.2.2 Kết quả chiết xuất và tinh chê ♦ Kết quả chiết kháng sinh từ dịch lên men sang dung môi hữít cơ Dung môi phù hợp với các nghiên cứu trước đây... 1,21 20,50 0,53 19, 37 0,85 18 ,97 5,46 18,13 1, 19 18 ,93 1,10 19, 47 0,37 21,80 0,26 1,25 20,53 0,65 1,03 20 ,90 0,72 M ils m !16 m 117 M118 m 1 19 M120 M 121 20,27 20,35 , 19 18,20 1, 49 20,81 0 ,92 19, 93 1,02 22,03 0,81 19, 98 0,83 22,03 0,73 18 ,93 0, 79 19, 84 1,41 10,31 3,18 0 0 20,75 0 ,91 21,75 0,31 17,75 0,28 19, 10 0,14 20,33 0,34 23,50 1,08 22,18 0 ,94 21,32 1,56 19, 63 0,65 21,07 1,76 21,87 1 ,92 22,50 0,83... 1,71 19, 43 0,51 19, 17 0,65 22,13 0 ,97 21,22 0,41 22,10 0 ,95 18 ,90 1,08 21 ,90 0,66 18,36 0,64 19, 76 1, 29 18,56 0,68 20,60 0,75 18,05 1,34 20,24 0,77 20,25 0,35 19, 50 2,12 20,15 0, 49 20,65 0 ,92 18,66 0,21 21,20 0,28 19, 40 1,27 21,55 0,78 19, 60 0 ,98 ■ 22,25 0,35 19, 10 0,72 21,8 1,13 19, 90 0,56 20,10 0,28 £ tó to ò o 19, 30 0,41 22,55 0, 19 m 22 9 20,15 1,20 22,25 19, 75 0,36 20,76 0,28 % 0,77 19, 15 0,72 20,10... hành thử hoạt tính kháng sinh bằng phương pháp đục lỗ thạch trên hai vi sinh vật kiểm định là B pumillus và E.coli Kết quả trình bày ở bảng 2 22 Bảng 2 cho ta thấy khả năng sinh tổng hợp kháng sinh trong lên men chìm của các chủng đột biến là rất mạnh Trong những lần lên men sau khi thử hoạt lực kháng sinh của dịch lên men ta đều pha loãng 5 lần ♦ Kết quả cải tạo giống lần 2 + Đột biến và sàng lọc lần... học cao, có khả năng sinh tổng hợp khánh sinh, có hoạt phổ rộng, phát triển tốt trên môi trường Gauze 1, đã qua một số lần đột biến do phòng thí nghiệm Vi sinhv Kháng sinh, bộ môn Công nghiệp dược và Tổ môn Vi nấm kháng sinh Trường đại học Dược Hà Nội cung cấp ♦ Chủng vi sinh vật kỉểin định Hai chủng vi sinh vật có độ mẫn cảm cao với kháng sinh từ Micromonospora N 9 được dùng làm vi sinh vật kiểm định... Phương pháp lên men: ứng dụng phương pháp lên men gián đoạn Các bước tiến hành: - Tạo giôhg cấp ĩ Chủng Micromonospora N 9 sau khi đã cấy vào ống thạch nghiêng và phát triển đủ 6 ngày tuổi được cấy vào bình nón 500ml chứa 100ml môi trường Gauze llỏng qua 10ml nước cất vô trùng và đem lắc trên máy lắc tròn ở nhiệt độ 30 32°c tốc độ 250 - 300 vòng /phút trong 48giờ - Lên men: Giống cấp I được cấy vào bình... 3.2-KẾT QUẢ VÀ NHẬN XÉT 3.2.1 Các kết quả cải tạo giống Từ hai biến chủng đã được lựa chọn trong nghiên cứu trước ký hiệu là Mj và M 2 tiếp tục tiến hành cải tạo giống bằng đột biến kết hợp với sàng lọc Mỗi biến chủng được chọn qua mỗi bậc chọn lọc đều được lên men thử trên máy lắc tròn với mục đích kiểm tra lại tính đúng đắn của kết quả sàng lọc ♦ Kết quả cải tạo giống lần 1 + Đột biến và sàng lọc...2.3- LÊN MEN SINH TổNG HỢP KHÁNG SINH [9, 11,14] Trong công nghiệp sản xuất kháng sinh quá trình lên men có ảnh hưỏng quyết định đến hiệu quả của quá trình sản xuất Nếu đạt được các điều kiện tối ưu hiệu suất của chủng có thể tăng từ 2-3ỉần C(3 hai kiểu lên men chính: 2.3.1 Lên men bề mặt Vi sinh vật được nuôi cấy trên bề mặt của môi trường rắn hay lỏng và chúng hấp thụ các chất... cần chiết tách* Trong công nghiệp sản xuất kháng sinh thường áp dụng một số phương pháp tách như: lọc, chiết, hấp phụ, sắc ký, kết tủ a 2.4.1 Chiết xuất bằng dung môi hữu cơ Sau khi đã lọc loại sinh khối khỏi dịch lên men nếu sản phẩm là kháng sinh ngoại bào hoặc loại bỏ dịch nếu là kháng sinh nội bào Khi chiết xuất kháng sinh từ dịch lên men người ta dựa vào sự phân bố chất kháng sinh giữa hai pha lỏng/lỏng... rộng và lớp môi trường không quá sâu (5-10cm) * Lên men bề mặt có ưu điểm là dễ thực hiện, đơn giản, đầu tư thấp, tuy nhiên có nhược điểm là: hiệu suất thấp, đòi hỏi diện tích rộng, khó tự động và cơ giới hoá nên ngày nay chỉ áp dụng cho nghiên cứu cải tạo giống trong phòng thí nghiệm 2.3.3 Lên men chìm Vi sinh vật được nuôi cấy trong môi trường lỏng và phát triển trong không gian ba chiều Giống cho lên . sv . NGUYỄN THỊ HƯƠNG NGHIÊN CỨU CẢI TẠO GIỐNG VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ LÊN MEN KHÁNG SINH NHỜ CHỦNG MICROMONOSPORA N 9 (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ ĐẠI HỌC KHOÁ 199 6 - 2001) Người hướng đẫn. phổ rộng. Để tiếp tục công trình này chúng tôi đã lựa chọn đề tài: " ;Nghiên cứu cải tạo giống và phát triển công nghệ lên men kháng sinh nhờ chủng Micromonospora N 9& quot; với những mục. Tiếp tục nghiên cứu cải tạo giống bằng đột biến kết hợp với sàng lọc nhằm nâng cao hiệu suất sinh tổng hợp kháng sinh của chủng Micromonospora N 9. - Nghiên cứu lên men sinh tổng hợp kháng sinh