ĐẶT VẤN ĐÈ•Lịch sử ngành kháng sinh được hình thành từ khi Alexander Fleming tình cờ phát hiện ra Penicillin vào năm 1929. Qua một quá trình phát triển lâu dài cùng với những thành tựu lớn lao trong công cuộc đấu tranh phòng chống bệnh tật, kháng sinh đã trở thành một trong những nhóm thuốc quan trọng nhất của Y học hiện đại. Ngày nay, nhằm tăng cường hiệu quả điều trị, giảm tác dụng phụ, tránh kháng thuốc, và mở rộng phổ của kháng sinh, các nhà bào chế học đã bào chế ra nhiều chế phẩm có nhiều thành phần, trong đó các kháng sinh kết hợp với nhau hoặc kết hợp với thuốc phi kháng sinh khác, spiramycin (SP) và Metronidazol (ME) là cặp phối hợp kháng sinh hoá trị liệu nhằm mở rộng phổ tác dụng, có hiệu quả điều trị cao. Rodogyl biệt dược của hãng Dược phẩm Aventis, Pháp là một chế phẩm chứa hai thành phần hoạt chất nói trên từ lâu đã có mặt trên thị trường Việt Nam. Bên cạnh đó, hàng loạt chế phẩm nội khác có chứa hai thành phần này cũng lần lượt ra đời như Naphacogyl (Naphaco), Dophargyl (Dopharma), Dorogyne (Domesco), Rotaforte (Mediplantex), Novogyl (Mekophar), Vidorigyl (Thephaco), Hadozyl (Hataphar)...Dựa vào khả năng hấp thụ ánh sáng tử ngoại của Metronidazol, các TCCS của các nhà sản xuất trong nước đều áp dụng phương pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến (UVVis) để định lưọng hoạt chất này trong chế phẩm. Còn Spiramycin hoạt chất còn lại được định lượng bằng phương pháp vi sinh vật. Phương pháp này yêu cầu cơ sở vật chất nghiêm ngặt và thường mất nhiều thời gian.Trong quá trình khảo sát điều kiện để định lượng đồng thời hai thành phần này trong viên nén bằng phương pháp phân tích đa cấu tử, chúng tôi
BỘYTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI c«ỉo ĐÀO THỊ THANH NHÀN ĐỊNH LƯỢNG ĐÒNG THỜI METRONIDAZOL VÀ SPIRAMYCIN TRONG VIÊN NÉN BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỎ ƯV-VIS (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược SỸ KHOÁ 2001-2006) Người hướng dẫn : TS. THÁI DUY THÌN NCS. TRẦN VIỆT HÙNG Nơi thực hiện : Bộ môn Hoá Dược Thời gian thực hiện : 02/2006 đến 05/2006 Hà Nội, 05/2006 y y !■" ■ . ?■ ", ■ ■ g g ít : T 1 i Lòi cảm ơn Để hoàn thành được khoá luận tốt nghiệp nàỵ, trước tiên tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tói: Tỗ. Thái Duỵ Thìn NCỒ. Trần Việt Hùng Những ngưòi đã hướng dẫn tôi tận tình trong suốt thòi gian qua. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo và kỹ thuật viên bộ môn Hoá Dược đã tạo mọi điều kiện thuận lợi, giúp đõ tôi trong thòi gian tôi lảm thực nghiệm tại bộ môn. Tôi cũng xin gửi tói toàn thể giảng viên, cán bộ Trưòng Đại ĩìọc Dược ỉlả Nội lòi cảm ơn chân thành vì sự dìu dắt dạỵ bảo trong suốt năm năm tôi học tập tại đâỵ. Và cuối cùng, cho phép tôi được bày tỏ lòng biết ơn tối cha mẹ, bạn bè - những ngưòi luôn giành cho Lôi tình thương ỵêu, sự quan tâm, động viên giúp đõ chân tình đ ể tôi hoàn thành tốt nhất khoá luận tốt nghiệp nàỵ. ỉlà Nội, ngày 19 tháng 5 năm 2006 Dào Thi Thanh Nhàn MỘT SỐ CHỮ VIÉT TẮT UV-Vis : Ultraviolet - Visible. ME : Metronidazol. SP : Spiramycin, MS : Metronidazol và spiramycin. SDK : Số đăng ký. USP : United States Pharmacopoeia - Dược điển Mỹ DĐVNIII : Dược điển Việt Nam xuất bản lần thứ 3. TCCS : Tiêu chuẩn cơ sở. HPLC : High Perfomance Liqid Chromatography - sắc ký lỏng hiệu năng cao MCA : Multi Component Analysis MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN Đ È 1 PHẦN 1: TỒNG QUAN 3 1.1. Đại cương về Metronidazol và Spiramycin 3 1.1.1. Metronidazol 3 1.1.2. Spiramycin 5 1.1.3. Các phương pháp định lượng Metronidazol và Spiramycin 8 1.2. Phương pháp quang phổ hấp thụ UV-Vis 12 1.2.1. Cơ sở lý thuyết của phương pháp định lượng bằng quang phổ UV-Vis 12 1.2.2. Các kỹ thuật định lưọng bằng phương pháp quang phổ UV-Vis. 14 1.2.3. ưu, nhược điểm của phương pháp định lượng bằng quang phổ UV-Vis 19 PHẦN 2: THựC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 21 2.1. Nội dung, đối tượng và phương pháp nghiên cứu 21 2.1.1. Nội dung nghiên cứu 21 2.1.2. Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.3. Phương pháp nghiên cứu 21 2.2. Thuốc thử, hoá chất, dụng cụ 25 2.3. Xây dựng phưotig pháp định lượng đồng thời Metronidazol và Spiramycin trong viên nén bằng phương pháp quang phổ UV-Vis 26 2.3.1. Khảo sát phổ hấp thụ u v và lựa chọn các bước sóng phân tích 26 2.3.2. Khảo sát tính tuyến tính và tính cộng phổ ở các bước sóng phân tích của dung dịch hỗn hợp 2 chất Metronidazol và Spiramycin 28 2.3.3. Phân tích chế phẩm Rodogyl 30 2.3.4. Đánh giá độ đúng và độ lặp lại của phương pháp 33 2.4. So sánh gía trị trung bình và độ lặp lại giữa phương pháp mới xây dựng và phương pháp định lượng theo các TCCS trong nước 35 2.4.1. Khảo sát sự ảnh hưỏfng của spiramycin đến kết quả định lưọTig Metronidazol của các phương pháp theo TCCS trong nước 36 2.4.2. So sánh độ lặp lại và giá trị trung bình của kết quả định lượng Metronidazol theo hai phương pháp 38 2.5. ứng dụng phương pháp định lượng vừa xây dựng để định lượng một số chế phẩm nội chứa Metronidazol và Spiramycin 41 2.6. Bàn luân 41 PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 45 3.1. Kết luận 45 3.2. Đe xuất 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO ĐẶT VẤN ĐÈ • Lịch sử ngành kháng sinh được hình thành từ khi Alexander Fleming tình cờ phát hiện ra Penicillin vào năm 1929. Qua một quá trình phát triển lâu dài cùng với những thành tựu lớn lao trong công cuộc đấu tranh phòng chống bệnh tật, kháng sinh đã trở thành một trong những nhóm thuốc quan trọng nhất của Y học hiện đại. Ngày nay, nhằm tăng cường hiệu quả điều trị, giảm tác dụng phụ, tránh kháng thuốc, và mở rộng phổ của kháng sinh, các nhà bào chế học đã bào chế ra nhiều chế phẩm có nhiều thành phần, trong đó các kháng sinh kết hợp với nhau hoặc kết hợp với thuốc phi kháng sinh khác, spiramycin (SP) và Metronidazol (ME) là cặp phối hợp kháng sinh - hoá trị liệu nhằm mở rộng phổ tác dụng, có hiệu quả điều trị cao. Rodogyl - biệt dược của hãng Dược phẩm Aventis, Pháp - là một chế phẩm chứa hai thành phần hoạt chất nói trên từ lâu đã có mặt trên thị trường Việt Nam. Bên cạnh đó, hàng loạt chế phẩm nội khác có chứa hai thành phần này cũng lần lượt ra đời như Naphacogyl (Naphaco), Dophargyl (Dopharma), Dorogyne (Domesco), Rotaforte (Mediplantex), Novogyl (Mekophar), Vidorigyl (Thephaco), Hadozyl (Hataphar) Dựa vào khả năng hấp thụ ánh sáng tử ngoại của Metronidazol, các TCCS của các nhà sản xuất trong nước đều áp dụng phương pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến (UV-Vis) để định lưọng hoạt chất này trong chế phẩm. Còn Spiramycin - hoạt chất còn lại - được định lượng bằng phương pháp vi sinh vật. Phương pháp này yêu cầu cơ sở vật chất nghiêm ngặt và thường mất nhiều thời gian. Trong quá trình khảo sát điều kiện để định lượng đồng thời hai thành phần này trong viên nén bằng phương pháp phân tích đa cấu tử, chúng tôi nhận thấy rằng Spiramycin trong môi trường NaOH cũng có khả năng hấp thụ ánh sáng tử ngoại và đạt hấp thụ cực đại tại bước sóng 232nm. Xuất phát từ những lý do trên, chúng tôi tiến hành đề tài: “Định lượng đồng thời Metronidazol và Spiramycìn trong viên nén bằng phương pháp quang phổ UV-Vis” với những mục tiêu sau; i~ Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời Metronidazol và Spiramycin trong viên nén Rodogyl bằng phưong pháp đo quang phổ hấp thụ UV-Vis. i- So sánh độ lặp lại và độ đúng của kết quả định lượng Metronidazol giữa phương pháp vừa xây dựng với phương pháp theo các TCCS trong nước. i- ứng dụng phương pháp mới xây dựng để định lượng một số chế phẩm nội khác chứa Metronidazol và spiramycin. Với mục tiêu như vậy, chúng tôi mong muốn giới thiệu một phương pháp định lượng mới đơn giản và dễ thực hiện hơn, có thể áp dụng được cho những cơ sở sản xuất, kiểm nghiệm không có đủ điều kiện cơ sở vật chất để định lượng Spiramycin bằng phương pháp vi sinh vật. PHÀN I TỐNG QUAN 1.1. ĐẠI CƯƠNG VỀ METRONIDAZOL VÀ SPIRAMYCIN 1.1.1. Metronidazol [1][2][7][8][9][21][24][25][26] i- Nguồn gốc: Metronidazol được sản xuất bằng phương pháp tổng hợp hoá học i- Công thức phân tử : C6H9N3O3 4- Phân tử lượng : 171,16 4- Công thức cấu tạo : CH 2 CH 2 OH 02Nk^N./CH3 N 4- Tên chung : Metronidazol Tên khoa học : l-(ß-hydroxyletyl )-2-methlyl-5-nitroimidazol ể- Tên khác; ■ USP 27, USP 28 ; lH-imidazol-1-ethanol, 2 -methyl-5-nitro. 2-methyl-5-nitroimidazol-1 -ethanol. - DĐVNIII, Martidale: 2-(-2-methyl-5-nitroimidazol- 1 -yl) ethanol ề- Tính chất vật lý: ■ Bột kết tinh hoặc tinh thể màu trắng hoặc ánh vàng, không mùi. ■ Tan ít trong nước, aceton, alcol và methylen clorid, rất ít tan trong ether. ■ sẫm màu dần khi tiếp xúc với ánh sáng. ■ Nóng chảy ở 159°c đến 163°c. 4^ Tính chất hoá học: ■ Tính chất của dị vòng imidazol; ► Do có 2N nên mang lại tính base, tuy nhiên IN cạnh nhóm nitro có tính base yếu. Vì vậy, khi tác dụng với các acid, chỉ có IN tham gia phản ứng tạo muối. ► Dung dịch chế phẩm tác dụng với acid picric tạo tủa vàng của muối picrat, nóng chảy ở 150°c. ► Dị vòng imidazol hấp thụ mạnh bức xạ tử ngoại. Dung dịch chế phẩm 0 ,0 0 2 % trong HCl 0 ,1M trong vùng sóng 230-350nm chỉ có một cực đại hấp thụ ở 277nm. ■ Tính chất của nhóm nitro thơm: khử hoá bằng hydro mới sinh tạo amin thơm. 4 Cơ chế tác dụng; Cơ chế tác dụng của Metronidazol còn chưa thật rõ. Trong ký sinh trùng, nhóm 5-nitro của thuốc bị khử thành các chất trung gian độc với tế bào. Các chất này liên kết với cấu trúc xoắn của phân tử ADN làm vỡ các sợi này và cuối cùng làm cho tế bào chết đi. Tác dụng: Metronidazol có tác dụng diệt khuẩn trên Bacteroides, Fusobacterium và các vi khuẩn kỵ khí bắt buộc khác, nhưng không có tác dụng lên vi khuẩn ái khí. Khi bị nhiễm cả vi khuẩn ái khí và kỵ khí, Metronidazol phải được phối họp với các thuốc kháng khuẩn khác. 4- Chỉ định: ■ Điều trị các trường hợp nhiễm khuẩn do Trichomonas vaginalis, Entamoeba histolytica, Dientamoeba fragilis ở trẻ em, Giardia lamblia và Dracunculis. ■ Điều trị nhiễm khuẩn nặng do vi khuẩn kỵ khí nhạy cảm như nhiễm khuẩn ổ bụng, nhiễm khuẩn phụ khoa, nhiễm khuẩn da và các cấu trúc da, nhiễm khuẩn hệ thần kinh trung ương, nhiễm khuẩn huyết và viêm màng trong tim. ■ Viêm lợi hoại tử loét cấp, viêm lợi quanh thân răng và các nhiễm khuẩn khác do vi khuẩn kỵ khí. i- Liều dùng: ■ Uống : 500mg/lần x31ần/ngày xlOngày. ■ Tiêm tĩnh mạch : 500-750mg, 8 h truyền một lần, dùng 5-7ngày ■ Trẻ em : 30mg/kg cân nặng/ngày X lOngày. ■ Điều trị T.vaginalis : 250mg/lần X 31ần/ngày X 7ngày. 4- Chống chỉ định: Có tiền sử quá mẫn với Metronidazol hoặc các dẫn chất nitro-imidazol khác 4- Dạng bào chế: ■ Viên nén 250mg, 500mg; kem bôi âm đạo 10%; thuốc trứng 500mg; dung dịch tiêm truyền 500mg/100ml 1.1.2. Spiramycin [1][2][7][8][9][22][23][24] 4- Nguồn gốc: Spiramycin là kháng sinh nhóm Macrolid được sinh tổng hợp từ loài vi khuẩn Streptomyces ambofaciens. 4- Chế phẩm dược dụng là một hỗn hợp của spiramycin I, II, III Spiramycin I : C43H74N2O14 Spiramycin II : C46H76N2O15 Spiramycin III : C46H78N2O15 4- Công thức cấu tạo: ■ Spiramycin I : Rf. H ■ Spiramycin II : R] : CH3 -CO- ■ Spiramycin III : R i: C2 H5 -CO- [...]... xác định được hàm lượng chlorocresol, đo ở 257 nm, tính hiệu, được hàm lượng Pethidin * Phương pháp định lượng đồng thời Metronidazol và Spiramycin trong viên nén mà chúng tôi xây dựng cũng sử dụng kỹ thuật định lượng này 1.2.3 ưu nhược điểm của phương pháp định lượng bằng quang phổ hấp thụ UV- Vis 1.2.3.1 ưu điểm ị- Độ chính xác của phương pháp khá cao 4- Sai số tưong đối của phương pháp nhỏ, thưcmg vào... Metronidazol trong một chế phẩm [10][11][12][13][20] 4- Với các chế phẩm chứa đồng thời Metronidazol và Spiramycin, các TCCS trong nước đều tiến hành định lượng Metronidazol bằng phương pháp đo quang phổ ƯV -Vis ở bước sóng hấp thụ cực đại của Metronidazol trong môi trường acid là 277nm spiramycin được định lượng bằng phương pháp vi sinh vật Cả hai phương pháp này đều đã được trình bày ở mục 1.1.3.1 và 1.13.2... ở mục 1.1.3.1 và 1.13.2 i- Phương pháp định lượng bằng đo quang phổ hấp thụ UV- Vis [13 Phưong pháp này dựa trên nguyên tắc “độ hấp thụ quang của một dung dịch hỗn họp bằng tổng độ hấp thụ quang của các thành phần trong hỗn hợp đó” ME và SP trong môi trưòng HCl 0,1N đều có khả năng hấp thụ quang, và có bước sóng cực đại lần lượt là 277nm và 232nm Lần lượt đo mật độ quang của các dung dịch thử hỗn hợp... àu[l][25][26] Hòa tan một lượng chính xác Metronidazol bằng anhydrid acetic, đun nóng nhẹ để hoà tan chất tan, làm lạnh và thêm 1 giọt thuốc thử xanh malachite TS Định lượng bằng acid HCIO4 0,1N, kết thúc định lượng khi dung dịch có màu vàng xanh Mỗi ml HCIO4 0,1N ứng với 17,12mg C6H 9N 3O 3 1.1.3.2 Phương pháp định lượng Spiramycin [10][11][12][13][20][23] Spiramycin được định lượng bằng phương pháp vi sinh vật... hại và yêu cầu người tiến hành có tay nghề ổn định 20 PHÀN 2 THựC NGHIỆM VÀ KÉT QUẢ 2 1 NỘI DUNG, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 2.1.1 Nội dung nghiên cứu Tiến hành nghiên cứu, khảo sát các điều kiện để xây dựng phương pháp định lượng đồng thời Metronidazol và Spiramycin trong hỗn họp thuốc bằng phương pháp đo độ hấp thụ tử ngoại trên máy quang phổ thông thường So sánh kết quả của phưong pháp. .. Metronidazol và Spiramycin chuẩn (do Viện kiểm « I nghiệm - Bộ Y tế cung cấp) 4- Thiết bị: Máy quang phổ tử ngoại khả kiến Lambda EZ210, cân phân tích, máy siêu âm (Bộ môn Hoá Dược, Trưòng Đại học Dược Hà Nội) 4 Dụng cụ: bình định mức các loại 50ml, lOOml; pipet Iml, 2ml, 5ml, * lOml 25 2 3 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG METRONIDAZOL VÀ SPIRAMYCIN TRONG HỖN HỢP BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG PHỒ UV- VIS. .. lập dựa vào các điểm thực nghiệm, bằng phương pháp bình phưong tối thiểu; tìm phưong trình hồi quy tuyến tính và hệ số tương quan r Trong định lượng, nếu khảo sát được một đoạn đường chuẩn có hệ số tưong quan r > 0,9995 là tốt 1.2.2.5 Phương pháp thêm đường chuẩn Đo mật độ quang của dung dịch cần định lượng, rồi thêm vào những lượng khác nhau và chính xác của chất chuẩn vào dung dịch cần định lượng, ... phương pháp định lượng của các TCCS trong nước 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu ề- Viên nén Rodogyl của Aventis - Pháp, SDK; VN-6470-02 4- Viên nén Dophargryl của Dopharma- Việt Nam, SDK: VNB-3615-00 4 Viên nén Novogyl của Mekophar - Việt Nam, SDK; VNB-3535-05 i- Viên nén Dorogyne của Domesco - Việt Nam, SDK: VNA-3 580-00 i- Viên nén Rotaforte của Mediplantex - Việt Nam,SDK: VNA-3935-01 Metronidazol 125mg Spiramycin. .. phương pháp định lượng Metronidazol 4- Phương pháp đo quang phổ hấp thụ UV- Vis trong môi trường acid [1] [7][10][11][12][13][20] Dựa vào khả năng hấp thụ u v của Metronidazol: đo độ hấp thụ của dung dịch Metronidazol trong HCl 0,1N ở bước sóng hấp thụ cực đại 277nm Mầu trắng là dung dịch HCl 0,1N A(l%, Icm) ở 277nm là 377 Tiến hành song song với chuẩn cùng điều kiện i- Phương pháp đo quang phổ hấp... ngoại, có cực đại hấp thụ khác nhau và thành phần này không hấp thụ quang ở bước sóng hấp thụ cực đại của thành phần kia, ta có thể dùng phương pháp quang phổ hấp thụ UV- Vis để định lượng đồng thời hai thành phần mà không cần chiết tách 1.3.2.2 Nhược điểm 4 Với trường hợp hỗn họp nhiều thành phần không thể định lượng đồng thời, cần quá trình chiết tách phức tạp mới đo quang từng thành phần riêng rẽ, quá . cấu tạo Spiramycin. 4- Tênhoáhọc: ■ Spiramycin I : (4R,5S,6S,7R,9R,Ỉ0R,Ỉ6R) - (ỉỉ£,ỉ3E )-6 -[ 0-2 , 6- dideoxy-3-C-methyl-a-L-nốơ-hexopyranosyl-(l->4 )-( 3,6-dideoxy- 3- dimethylamino-P-D-glucopyranosyl)oxy ]-7 -formylmethyl- 4-. dimethylamino-P-D-glucopyranosyl)oxy ]-7 -formylmethyl- 4- hydroxy-5-methoxy-9,16-dimethyl-1 0-[ (2,3,4,6-tetradeoxy- 4- dimethylamino-D-e^//2rơ-hexopyranosyl)oxy]oxacyclohexadeca- 1 l,13-dien-2-on. ■ Spiramycin I I : 4-0 -acetylspiramycin. quang phổ UV- Vis với những mục tiêu sau; i~ Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời Metronidazol và Spiramycin trong viên nén Rodogyl bằng phưong pháp đo quang phổ hấp thụ UV- Vis. i- So sánh