Kiểm nghiệm lương thực thực phẩm chuyên đề: tiêu chuẩn hiện hành trong kiểm nghiệm coliform và e coli

 I. Tổng quan về coliforms và E.coli 1. Coliforms 2. E.coli II. Các phương pháp định tính, định lượng 1. Định tính 2. Định lượng a. Phương pháp MPN b. Phương pháp đếm khuẩn lạc c. Phân tích nhanh III. Các tiêu chuẩn hiện hành 1. Đối với nước 2. Đối với thực phẩm 3. Một số tiêu chuẩn quốc tế  1. Coliforms - Thuộc họ Enterobacteriaceae - Vi khuẩn hình que - Gram âm - Không sinh bào tử - Hiếu khí hoặc kỵ khí tuỳ nghi - Sinh acid, sinh hơi do lên men lactose ở 37 0 C trong vòng 24 giờ - Không sinh bào tử - Chứa β-galactosidase  [...]... nghiệm Indol Cấy vào ống canh Trypton, MR-VP, thạch SC Citrate Đếm số ống mt EC(+)& Indol(+), tính tỉ lệ khẳng định Coliform phân Thử nghiệm IMViC Mật độ Coliforms Đếm số ống mt EC(+)&IMViC ++ , tính tỉ lệ khẳng định E. coli Mật độ Coliforms phân Mật độ E. coli Quy trình định lượng Coliforms, Coliforms phân, E. coli bằng pp đếm khuẩn lạc Cách tính kết quả: Dựa vào số khuẩn lạc đếm được và tỉ lệ khẳng định,... trên môi trường EC sang môi trường EMB ủ 37oC trong 24h  khuẩn lạc tròn, dẹt hình đĩa và có ánh kim tím là khuẩn lạc của Colifoms phân (E coli giả định) c/ Định lượng Coliforms phân: - Chọn khuẩn lạc đường kính lớn hơn 1ml cấy vào canh Tryptone, ủ ở 44,5 ± 0,2oC, trong 24h.Nhỏ thuốc thử Kovac’s vào các ống nghiệm: ống có xuất hiện màu đỏ trong môi trường trong vài phút là ống (+) - Thực hiện cho tất... (+) trên môi trường EC Ghi nhận các ống (+) trên môi trường tryptone tương ứng với mỗi độ pha loãng d/ Định lượng E coli • Thực hiện tương tự như trường hợp coliforms phân để tìm các khuẩn lạc E coli giả định • Chọn các khuẩn lạc có đường kính lớn hơn 1mm và cấy vào môi trường MRVP, Simmon Citrate Agar để thực thử nghiệm IMViC (-) (+) •Khuẩn lạc E Coli giả định cho kết quả thử nghiệm IMViC tuần tự... 1oC trong 48h Quy trình định lượng Coliforms, Coliforms chịu nhiệt, Coliforms phân Và E. coli bằng pp MPN Ghi nhận số ống (+) có sinh hơi với mỗi độ pha loãng b/ Định lượng Coliforms chịu nhiệt: • Dùng que cấy vòng, chuyển một vòng dịch từ ống LSB (+) sang môi trường EC • Ủ trong 44.5 ± 0,2oC trong 24h  Đếm các ống có sinh hơi (+), ở mỗi độ pha loãng c/ Định lượng Coliforms phân: • Cấy ria dịch dịch... giản để phân tích định tích và định lượng Coliform và Ecoli bằng Colilert: 1- Pha thuốc thử vào 100mL mẫu 2- Đổ mẫu vào khay nhựa định lượng 3- Dán khay bằng máy dán và ủ mẫu ở thời gian và nhiệt độ thích hợp 4- Định tính: Quan sát kết quả định tính dễ dàng bằng mắt thường: Giếng màu vàng dương tính với Coliform, soi đèn UV giếng phát huỳnh quang cho kết quả dương tính với Ecoli 5 Định lượng: Đếm số... trên đĩa • 2- Ủ ở nhiệt độ thích hợp • 3- Đếm số khuẩn lạc sau 24h – 48h E. coli = 49 (khuẩn lạc màu xanh có khí) – Coliform tổng = 87 (khuẩn lạc xanh và đỏ có khí) 2.4 Phân tích nhanh bằng bộ Colilert - Là bộ phân tích nhanh chỉ tiêu vi sinh mẫu nước của hãng Idexx – Mỹ - Định tính và định lượng cả hai chỉ tiêu Coliform và Ecoli chỉ sau 24 giờ hoặc 18 giờ - Không cần đếm khuẩn lạc Ưu điểm • Dễ sử... lượng Ecoli và Coliform III CÁC TIÊU CHUẨN HIÊN HÀNH 1 Đối với nước Theo TCVN 5942 – 1995 qui định hai mức sau: •- Loại A dùng làm nguồn cấp nước sinh hoạt nhưng phải qua quá trình xử lý, giới hạn tối đa số Coliforms cho phép là 5000 MPN/100ml •- Loại B dùng cho các mục đích khác, giới hạn tối đa số Coliforms cho phép là 10 000 MPN/100ml •Đối với nước ngầm, tiêu chuẩn chất lượng về vi sinh vật theo TCVN... thử nghiệm IMViC tuần tự là (+ + - -) chính là E coli  -Thực hiện tương tự các ống (+) trong môi trường EC và tạo được được khuẩn lạc E coli gỉa định trên môi trường EMB - Ghi nhận số ống nghiệm có E coli (+) ở mỗi độ pha loãng của mẫu Cách đọc kết quả: Từ kết quả thu được ở các trường hợp trên, dùng bảng MPN thích hợp để tính ra mật độ VSV trong mẫu và biểu diễn dưới dạng trị số MPN/g hay MPN/ml mẫu... Kích thước lỗ lọc 0,47µm hay 0,22µm Đường kính và hình dạng màng lọc phụ thuộc vào đường kính phễu lọc Đường kính màng thường là 45mm Khuẩn lạc vsv mọc trên màng 1A 1B 2A 2B 1C 1D 2C 2C E coli trên môi trường ID Coli agar Coliforms trên môi trường ID Coli agar Đĩa Petrifilm E. coli /Coliform Count  • Nhanh chóng, chính xác Chỉ qua 3 bước đơn giản: • 1- Cấy và trải đều 1 ml mẫu trên đĩa • 2- Ủ ở nhiệt độ... trình định tính E. coli Qui trình định tính E. coli 2.1 PHƯƠNG PHÁP MNP a/ Định lượng Coliforms: - Cấy 1ml dich đã pha loãng 10-1 vào 3 ống nghiệm giống nhau, mỗi ống chứa 10ml canh LSB - Thực hiện tương tự với mẫu pha loãng 10-2 và 10-3 - Ủ các ống nghiệm ở 37oC trong 48h Ghi nhận ống có sinh hơi (+) - Cấy dịch mẫu từ các ống LSB dương tính (+) sang các ống chứa canh BGBL - Ủ 37oC ± 1oC trong 48h Quy . huyết ở ruột. - EPEC (Enteropathogenic E. coli) , E. coli gây bệnh đường ruột. - ETEC (Enterotoxigenic E. coli) , E. coli sinh độc tố ruột. - EIEC (Enteroinvasive E. coli) , E. coli xâm lấn niêm. quả thử nghiệm IMViC là ++  E. coli Các dòng E. coli có khả năng gây bệnh: - EAEC (Enteroaggregative E. coli) , E. coli kết tập ở ruột. - EHEC (Enterohemorrhagic E. coli) , E. coli gây. Escherichia coli (E. coli) thuộc:  Lớp: Schgzomycetes  Bộ: Eubacteriales  Họ: Enterobacteriaceae  Giống: Escherichia  Loài: Escherichia coli - Là một phân nhóm của nhóm coliforms phân -