thực hành di truyen

Kỳ giữa Metaphase: Màng nhân tan biến hoàn toàn các sợi thoi đính vào tâm động của nhiễm sắc thể và đẩy chúng về mặt phẳng xích đạo của tế bào và xếp thành một vòng.. Nguyên phân là phươ

- Dùng đầu ngón trỏ ấn nhẹ sao cho tiêu bản dàn mỏng thành một lớp tế bào, sau đó dùng mẫu giấy thấm thấm hết phần thuốc nhuộm và dùng dịch axit 45% thừa

2.2.5 Quan sát tiêu bản:

- Đưa tiêu bản quan sát dưới KHV lần lượt ở vật kính có bội giác 5x, 10x và 40x

2.3 Tường trình:

- Hình ảnh của các kỳ của chu kỳ tế bào:

Kỳ đầu (prophase): Hạch nhân thường

biến mất và màng nhân bắt đầu tan vỡ

Trung thể phân chia và hình thành quanh

nó một cấu trúc mới gồm rất nhiều sợi

thoi trải dài tới các cực của tế bào Một

số thoi đính trực tiếp vào tâm động (cụ

thể là kinetochore) của nhiễm sắc thể.

Kỳ giữa (Metaphase): Màng nhân tan

biến hoàn toàn các sợi thoi đính vào tâm

động của nhiễm sắc thể và đẩy chúng về

mặt phẳng xích đạo của tế bào và xếp

thành một vòng Nói chung lúc này

nhiễm sắc thể đóng xoắn cực đại Nhiễm sắc thể sắp xếp ở mặt phẳng thoi

vô sắc Các kinetochore giúp nhiễm sắc thể di chuyển về mặt phẳng của thoi

vô sắc Các nhiễm sắc thể kép di chuyển tới mặt phẳng xích đạo của thoi vô sắc, các nhiễm sắc thể lần lượt xếp thành 1 hàng dọc Bởi vì các nhiễm sắc

thể đòi hỏi tất cả kinetochore phải bám vào những sợi thoi vô sắc đây chính

là bước kiểm tra cho việc xảy ra kỳ sau, tránh việc sai lệch cho việc phân chia nhiễm sắc thể khiến cho việc đột biến số lượng nhiễm sắc thể rất khó xảy ra

Kỳ sau (anaphase): Kinetochore bám vào sợi siêu vi, các nhiễm sắc thể

tách ra đi về hai phía cực thoi vô sắc, các sợi siêu vi ngắn dần Hai nhiễm sắc thể chị em bây giờ rời nhau gọi là 2 NST chị em

Kỳ cuối (Telophase): Hai nhiễm sắc thể con đã về tới các cực đối diện và

bắt đầu mở xoắn Lúc này màng nhân bắt đầu xuất hiện trở lại và bao bọc các bộ nhiễm sắc thể, các sợi thoi tan biến màng nhân và nhân con được hình thành trở lại Quá trình phân bào bắt đầu, nếp gấp bắt đầu xuất hiện

Ý nghĩa của nguyên phân

Nguyên phân là phương thức sinh sản của tế bào và ở những sinh vật đơn bào nhân thực Cơ thể đa bào lớn lên nhờ quá trình nguyên phân Nguyên phân là phương thức truyền đạt và ổn định bộ nhiễm sắc thể đặc trưng của loài qua các thế hệ tế bào trong quá trình phát sinh cá thể và qua các thế hệ cơ thể ở những loài sinh sản sinh dưỡng Sinh trưởng của các mô,

cơ quan trong cơ thể nhờ chủ yếu vào sự tăng số lượng tế bào qua nguyên phân Nguyên phân tạo điều kiện cho sự thay thế các tế bào, tạo nên sự sinh trưởng và phát triển của cơ thể

- Sự nhân đôi và phân li của NST trong nguyên phân cho các tế bào con

là cơ chế để duy trì sự ổn định của bộ NST đặc trưng của tế bào qua các thế

hệ tế bào của cơ thể và qua các thế hệ cá thể của loài sinh sản vô tính

- Nguyên phân là cơ chế làm cho có thể lớn lên từ hợp tử, đồng thời là

cơ chế tái sinh của các tế bào, mô và cơ quan trong cơ thể

- Nguyên phân còn là cơ chế sinh sản của sinh vật đơn bào

Các kỳ nguyên phân

Bài 3

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH SẢN CỦA RUỒI GIẤM

I Mục đích yêu cầu

- Kỹ thuật nuôi cấy ruồi giấm trong điều kiện phòng thí nghiệm

- Nắm được các giai đoạn vòng đời của ruổi giấm

- Quan sát các đặc điểm hình thái, cấu tạo của các cơ quan bộ phận: mắt, cánh, chân (3 đôi), thân, đầu, ăng ten và phân biệt được rồi giấm đực và ruồi giấm cái

Một cặp lai trong ống nghiệm:

- Số lượng con trong ống nghiệm

- Vòng đời

- Tỉ lệ đực và cái

- Đột biến tự nhiên

II Đối tượng thiết bị và bản chất

1 Đối tượng: Ruồi giấm (Drosolophila melanogaster , 2n = 8, ruồi giấm

Việt Nam)

2 Dụng cụ - thiết bị:

- Kính lúp, kính hiển vi( xem bội giác 5x ), lam

- Frice, bông, giấy thấm, chậu, ống nghiệm, bocan, gạc màn

3 Hóa chất:

- Gây mê: chlorofooc, hoặc ether (gây mê)

- Môi trường nuôi cấy: Chuối chính, lòng đỏ trứng gà, thạch

* Kỹ thuật nuôi cấy: Thạch

* Vòng đời: 14 đến 15 ngày, t0: 27 – 30 0 C trong phòng thí nghiệm

III Quan sát và làm tường trình:

1 Quan sát, nhận xét một số điểm hình thái, cấu tạo, cơ quan – bộ phận.

- Mắt ( đỏ, 768 mắt đơn )

- Ngực : lông cứng, 3 đôi chân, 2 đôi cánh ( kích thước , gần cánh )

- Bụng: hình dạng chỏm bụng, vạch đen

2 Quan sát và phân biệt ruồi đực và ruồi cái:

Hình

thái

Vân/vạch màu đen 3 vạch 5 vạch Chi trước Tấm lược sinh dục Không có

3 Tường trình:

Môi trường gồm aga

và chuối

Môi trường nuôi cấy ruồi giấm

Vòng đời ruồi giấm:

Phân biệt ruồi giấm đực với cái:

Bài 4

PHƯƠNG PHÁP LÀM TIÊU BẢN QUAN SÁT NHIỄM SẮC THỂ KHỔNG LỒ CỦA TUYẾN NƯỚC BỌT Ở ẤU TRÙNG RUỒI GIẤM

I Mục đích – yêu cầu:

- Kỹ thuật nuôi ruồi giấm sao cho có nhiều ấu trùng giai đoạn 2 – 3 ngày tuổi có kích thước lớn

- Phương pháp tách đôi tuyến nước bọt

- Làm tiêu bản, quan sát đặc điểm hình thái và cấu tạo nhiểm sắc thể của

tế bào khổng lồ và tế bào tuyến nước bọt

II Đối tượng:

1 Đối tượng: ruồi giấm

2 Dụng cụ - thiết bị: Kính hiển vi, lamen, lam, kim phân tích, prince, đĩa

đồng hồ, ống nghiệm, chậu thủy tinh, ống hút nhỏ giọt, bông, giấy thấm

- nước cất, dung dịch sinh lý, Nacl 0,6 – 0,75 %

- Thuốc nhuộm : Carmin axetic 3- 5 %

- Dug dịch axetic 45%

III Phương pháp tiến hành:

1 Mổ dòi và tách tuyến nước bọt:

- Dùng frince lấy 1 – 2 dòi (lớn) đĩa đồng hồ (+ dung dịch sinh lý)

- Đưa lên lam kính đạt ở trung tâm

+ Xác định phần đầu có kitin đen, cứng

+ 2 tay cầm 2 kim phân tích

+ Tách mô mỡ - tuyến nước bọt

+ Dùng kim phân tích tách ra

2 Nhuộm tiêu bản:

- Lau sạch tiêu bản, thấm sạch tiêu bản và dung mủi kim phân tích chuyển đổi tuyến nước bọt sang lam kính mới (1/2 dung dịch sinh lý) đến thấm khô

- 2 -3 giọt a.carmin/ 20 phút ( điều kiện bổ sung : hơ nóng)

- Đậy lại bằng đĩa đồng hồ

3 Làm tiêu bản:

- Dùng giấy thấm thấm hết thuốc nhộm

- Nhỏ 1 giọt a.acetic 45 % và đậy l men

- Ấn nhẹ thành một lớp tế bào quan trọng có các nhiễm sắc thể bung ra

VI Quan sát và tường trình:

1 Quan sát, vẻ, cấu tạo một tế bào nguyên vẹn và một nhân chứa nhiễm sắc thể khổng lồ:

2 Quan sát hình thái, cấu tạo của nhiểm sắc thể khổng lồ:

- Nhiểm sắc thể ở trạng thái đơn bội, kỹ thước gấp nhiểm sắc thể bình thường 150 lần, đường kính xấp xỉ 1024 sợi nhiểm sắc, do bộ nhiễm sắc thể

tự nhân đôi liên tục 10 lần (không phân chia tế bào)

Tác động của 4 nhiểm sắc thể dính chung với nhau đến Chromoanter

Nhiễm sắc thể khổng lồ

Tuyến nước bọt

Bài 5

PHƯƠNG PHÁP LÀM TIÊU BẢN QUAN SÁT CHẤT NHIỄM SẮC

GIỚI TÍNH (VẬT THỂ BARR)

1 Giới thiệu:

1.1 Vật thể Barr:

Động vật có vú và con người, cái bình thường trong quá trình phát triển phôi đặc biệt giai đoạn phôi thai 1000 – 2000 tế bào trở lên Có hiện tượng bất hoạt ngẫu nhiên của một nhiễm sắc thể X

Nhiễm sắc thể cô đặc lại và bắt màu đậm của thuốc nhuộm kiềm tính

Có hình dạng thấu kính lồi hoặc hình nón (màu đỏ đậm)

Kích thước 0,7 – 1,2 µm

Bám vào mặt trong của rìa màng nhân (điều kiện rìa màng nhân trơn

và phẳng)

Trong mỗi tế bào chỉ có duy nhất 1 NST X hoặt động nên chất nhiễm sắc bắt màu đồng đều Số lượng thể Barr = số NST X – 1

1.2 Chỉ định xét nghiệm thể (Barr):

- Đối với trường hợp người ta nghi ngờ những cá thể đó mắc hội chứng dị bội

+ Những người đó có những biểu hiện mà người ta nghi ngờ:

Nữ: Vô sinh, rối loạn chu kỳ kinh nguyệt

+ Những người đó có những dị dạng ở cơ quan sinh dục, thậm chí ngoại hình

+ Chậm phát triển trí tuệ và tinh thần

- Xác định giới tính ở giai đoạn phôi thai (thai sớm) bằng phương pháp chọc ối Trong dịch ối có những tế bào niêm mạc của con bong ra sử dụng để kiểm tra giới tính

- Xác định giới tính của phạm nhân trên hiện trường dựa trên những giọt máu mà anh ta để lại, hay long tóc móng

2 Mục đích yêu cầu:

- Nắm được phương pháp làm tiêu bản quan sát chất nhiễm sắc thể giới tính

- Nhận diện thể barr và úng dụng của nó

3 Vật liệu.dụng cụ và hóa chất:

- Vật liệu: Tế bào niêm mạc miệng ở nữ (có thể tế bào niêm mạc âm đạo, dịch ối)

- Dụng cụ: Kính hiển vi, lamen, lam, kim phân tích hoặc kim mũi mác, thìa nhựa, giấy thấm, công tơ hút, nạo/ gạt,( tre, inox, thìa nhựa)

- Hóa chất:

+Methanol (cố định mẫu), cồn 960 (sát trùng)

+Nhuộm bằng aceto carmine 5%

+Nước cất, acetic 45%.

4 Phương pháp tiến hành:

4.1 Lấy mẫu:

Dùng thìa nhựa, gạt/nạo bằng inox được sát trùng, lấy một ít tế bào niêm mạc miệng và phết lên lam kính ở vị trí ở giữa lam kính

4.2 Cố định mẫu:

- Nhỏ vào tiêu bản 1-2 giọt Methanol

- Đậy tiêu bản bằng đĩa đồng hồ để tránh sự bay hơi

- Thời gian cố định: 15-20 phút

4.3 Nhuộm mẫu:

- Thấm nhẹ Methanol còn thừa

- Nhỏ 1-2 giọt aceto Carmin 3-5% lên tiêu bản

- Thời gian: 5 phút

4.4 Làm tiêu bản:

- Đậy lamen trực tiếp lên tiêu bản

- Dàn nhẹ thành một lớp trên tiêu bản đòng thời thấm thuốc nhuộm còn thừa

- Quan sát trên kính hiển vi vật kính có độ bội giác 60

5 Tường trình:

Ở động vật có vú kể cả con người nhiễm sắc thể X khác biệt với các nhiểm sắc thể khác ở chổ chỉ có một chiếc hoạt động trong một tế bào Ở con cái có hai nhiễm sắc thể X, bình thường chỉ một chiếc là hoạt động còn một chiếc là bất hoạt, nhiễm sắc thể X bất hoạt kết vón thành cấu trúc bắt màu tối sẫm thường có dạng thấu kính lồi bám vào mặt trong màng nhân, gọi là thể barr

Các bất thường về nhiễm sắc thể X

- Thể Barr có ở con cái: