BÁO CÁO THỰC TẬP-Phương pháp nghiên cứu enzym protein

Tiểu luận 1. Amylase (phân loại, đặc điểm, nguồn gốc, ứng dụng) 2. Protease (phân loại, đặc điểm, nguồn gốc, ứng dụng) 3. Lipase (phân loại, đặc điểm, nguồn gốc, ứng dụng) 4. Ứng dụng enzym trong xử lý rác thải, ô nhiễm môi trường 5. Ứng dụng enzym trong chẩn đoán bệnh 6. Các phương pháp xác định hoạt tính và hoạt độ enzym (amylase, protein, lipase) 7. Ứng dụng enzym trong dược phẩm 8. Các enzym sử dụng trong công nghệ thực phẩm 9. Nguồn enzym từ vi sinh vật (loại enzym, loại vi sinh vật) 10.Các enzym, protein sử dụng trong nghiên cứu sinh học phân tử 11.Phương pháp cải biến enzym (tạo enzym chịu nhiệt, chịu chất hoạt động bề mặt, kiềm, axit ) 12.Các phương pháp tinh sạch protein, enzym 13.Protein đơn bào 14.Các chất ức chế protease (vô cơ, hữu cơ) Phương pháp nghiên cứu enzym protein 1. Thu nhận enzym protein 2. Tách chiết, tinh sạch enzym protein 3. Định lượng protein enzym 5. Xác định hoạt độ enzym 4. Xác định hoạt tính enzym 6. Nghiên cứu động học enzym 1. 1. Thu nhận enzym protein Thu nhận enzym protein Enzym nội bào: Mô, tế bào động vật, thực vật, vi sinh vật Enzym ngoại bào: Dịch enzym được tiết ra trong môi trường nuôi cấy vi sinh vật Nguồn enzym: Quy trình tách chiết protein enzym Mô động, thực vật Nuôi cấy tế bào, vi sinh vật Nội bào Phá vỡ mô, tế bào Ngoại bào Thu sinh khối Dịch enzym thô Tủa enzym, cô đặc Tinh sạch Thử hoạt tính Xác định hoạt độ Nghiên cứu động học Xác định hoạt độ Xác định đặc điểm, tính chất enzym Chế phẩm enzym tinh khiết Sơ đồ thu nhận, tinh sạch và nghiên cứu enzym ở phòng thí nghiệm Nuôi cấy VSV Tách pha Cô đặc Tách phaDịch chiết tế bào Tinh sạch enzym Làm khô Phối trộn Chế phẩm enzym Tế bào, mô (động thực vật) Phá vỡ tế bào Nội bào Ngoại bào Sơ đồ quy trình sản xuất enzym Quy trình chung Enzym ngoại bào: Enzym ngoại bào: • Dịch enzym được tiết ra trong môi trường nuôi cấy vi sinh vật, tế bào • Ly tâm thu dịch nuôi cấy, loại bỏ tế bào và cặn tạp • Sử dụng các biện pháp kết tủa, ly tâm kết hợp với màng lọc để thu nhận enzym. • Cô đặc enzym • Tinh sạch (nếu cần thiết) • Thu nhận chế phẩm enzym sạch • Nghiên cứu tính chất, thử hoạt tính, xác định hoạt độ, động học enzym Dịch chứa enzym Enzym thô Ly tâm dùng màng lọc Kết tủa Cô đặc Tinh sạch enzym Tinh sạch enzym • Xác định hoạt tính, hoạt độ Xác định hoạt tính, hoạt độ • Nghiên cứu động học Nghiên cứu động học • Thử phản ứng xúc tác Thử phản ứng xúc tác chuyển hóa cơ chất chuyển hóa cơ chất Tối ưu quy trình Sản xuất thử ở quy mô vừa Sản xuất ở quy mô công nghiệp [...]... trình chung Enzym nội bào: • Enzym được tổng hợp bên trong tế bào vi sinh vật, tế bào động, thực vật • Ly tâm thu dịch sinh khối tế bào (nếu tế bào được nuôi cấy trong môi trường lỏng) • Sử dụng các biện pháp phá tế bào, mô để giải phóng enzym • Ly tâm thu dịch chiết thô chứa enzym • Sử dụng các biện pháp kết tủa chọn lọc để thu enzym quan tâm • Cô đặc enzym • Tinh sạch enzym • Nghiên cứu tính chất,... độ, động học enzym Ly tâm thu sinh khối tế bào Phá vỡ tế bào, mô Chế phẩm enzym Sản xuất quy mô lớn Sản xuất quy mô vừa Tối ưu quy trình • Xác định hoạt tính, hoạt độ • Thử phản ứng xúc tác chuyển hóa cơ chất Dịch chiết thô chứa enzym Kết tủa chọn lọc Enzym thô Cô đặc Nghiên cứu động học • Ly tâm Tinh sạch enzym Ly tâm thu sinh khối Đối với vi sinh vật: Kiểm tra sinh khối bằng phương pháp đo mật độ... chiết enzym protein Dung dịch đệm chiết: Yếu tố pH, lực ion: pH, nồng độ muối Các chất hoạt động bề mặt: Triton, Tween Phá vỡ tế bào: Cơ học: Nghiền, siêu âm Hóa học: Enzym phân giải thành, vách, màng tế bào: lysozyme Bảo vệ protein enzym trong quá trình tách chiết Các chất chống oxy hóa, chất làm bền cấu trúc enzym: Các chất ức chế protease: EDTA, PMSF Nhiệt độ thấp (40C) Phương pháp kết tủa enzym. .. cơ sở của nguyên lý làm kết tủa protein Sử dụng các yếu tố gây kết tủa (không làm biến tính) Muối trung hòa Dung môi hữu cơ không (ít) phân cực Lưu ý: Khi làm việc với protein phải tiền hành ở nhiệt độ thấp, tốt nhất là 40C Phương pháp cô đặc Bay hơi ở áp suất và nhiệt độ thấp (chân không, lạnh) Ly tâm loại bỏ nước, dung dịch đệm chiết enzym (sử dụng màng ly tâm) Tủa protein, sau đó hòa tan lại bằng... minh và được trao giải thưởng Nobel Y học năm 1987 Sắc ký ái lực là một phương pháp dùng để tách hỗn hợp các chất dựa vào tương tác đặc hiệu cao (ái lực) Ví dụ: • Các tương tác giữa kháng nguyên, kháng thể • Enzym và cơ chất • Thụ thể và chất gắn thụ thể (receptor & ligand) Sắc ký ái lực Sắc ký ái lực trong việc tinh sạch các protein tái tổ hợp • Glutathione-S-transferase (GST) • Hexahistidine (HIS) •... đổi ion • Sắc ký trao đổi ion: là một quá trình để phân tách các ions và các phân tử phân cực dựa vào điện tích của chúng • Sắc ký trao đổi ion được sử dụng để tinh sạch protein, các nucleotide, amino acid Đánh giá độ sạch của protein enzym • Sắc ký • Điện di ... một lượng nhỏ dung dịch đệm Phương pháp tinh sạch Sắc ký (chromatography) • Sắc ký lọc gel (sắc ký loại trừ dựa vào kích thước phân tử) • Sắc ký trao đổi ion • Sắc ký ái lực Sắc ký lọc gel Gel: silicagel, sephadex Các loại gel sắc ký và kích thước phân tử được sàng lọc tương ứng Sephadex Mạng lưới phân tử của gel đã được nhồi trong cột sắc ký Sắc ký ái lực Phương pháp này được Cuatrecasas P, Wilchek . enzym protein 1. Thu nhận enzym protein 2. Tách chiết, tinh sạch enzym protein 3. Định lượng protein enzym 5. Xác định hoạt độ enzym 4. Xác định hoạt tính enzym 6. Nghiên cứu động học enzym 1. 1. Thu. enzym sử dụng trong công nghệ thực phẩm 9. Nguồn enzym từ vi sinh vật (loại enzym, loại vi sinh vật) 10.Các enzym, protein sử dụng trong nghiên cứu sinh học phân tử 11.Phương pháp cải biến enzym. enzym chịu nhiệt, chịu chất hoạt động bề mặt, kiềm, axit ) 12.Các phương pháp tinh sạch protein, enzym 13 .Protein đơn bào 14.Các chất ức chế protease (vô cơ, hữu cơ) Phương pháp nghiên cứu enzym