slide Sắc ký lớp mỏng trong hóa thực vật

slide Sắc ký lớp mỏng trong hóa thực vật tài liệu, giáo án, bài giảng , luận văn, luận án, đồ án, bài tập lớn về tất cả...

SẮC KÝ LỚP MỎNG SẮC KÝ LỚP MỎNG GVHD: GVHD: NGUYỄN THỊ DiỆP CHI NGUYỄN THỊ DiỆP CHI SVTH: SVTH: NGUYỄN TRỊNH BẢN NGUYỄN TRỊNH BẢN DIỆP THỊ KIM CƯƠNG DIỆP THỊ KIM CƯƠNG HUỲNH TiẾN SĨ HUỲNH TiẾN SĨ SẮC KÝ LỚP MỎNG SẮC KÝ LỚP MỎNG   Khái quát + cơ chế chính trong SKLM Khái quát + cơ chế chính trong SKLM Trang thiết bị trong SKLM Trang thiết bị trong SKLM Các bước tiến hành SKLM Các bước tiến hành SKLM Phạm vi ứng dụng của SKLM Phạm vi ứng dụng của SKLM Ứng dụng SKLM trong hóa thực vật Ứng dụng SKLM trong hóa thực vật KHÁI QUÁT CHUNG KHÁI QUÁT CHUNG Sắc ký lớp mỏng (Thin layer chromatograpy) Sắc ký lớp mỏng (Thin layer chromatograpy) Nhanh, gọn, tiện lợi, nhận biết biết nhanh số Nhanh, gọn, tiện lợi, nhận biết biết nhanh số lượng thành phần có trong hỗn hợp thông lượng thành phần có trong hỗn hợp thông qua hệ số lưu, dựa trên tính phân cực. qua hệ số lưu, dựa trên tính phân cực. => TLC dùng chất hấp phụ làm pha tĩnh trải => TLC dùng chất hấp phụ làm pha tĩnh trải thành lớp mỏng. Quá trình tách khi cho pha thành lớp mỏng. Quá trình tách khi cho pha động di chuyển qua pha tĩnh đã có mẫu. động di chuyển qua pha tĩnh đã có mẫu. CƠ CHẾ SẮC KÝ LỚP MỎNG CƠ CHẾ SẮC KÝ LỚP MỎNG Pha tĩnh: Pha tĩnh: chất hấp phụ trải thành lớp mỏng, mịn, chất hấp phụ trải thành lớp mỏng, mịn, đồng nhất được cố định trên phiến kính, kim loại hay đồng nhất được cố định trên phiến kính, kim loại hay nhựa; thường là silicagel, aluminium oxide, hoặc nhựa; thường là silicagel, aluminium oxide, hoặc cellulose phủ trên mặt phẳng chất trơ. cellulose phủ trên mặt phẳng chất trơ. Pha động: Pha động: hệ đơn thuần một dung môi hay hỗn hệ đơn thuần một dung môi hay hỗn hợp nhiều dung môi phối hợp với nhau theo tỷ lệ quy hợp nhiều dung môi phối hợp với nhau theo tỷ lệ quy định. định. Trong quá trình sắc ký các cấu tử trong mẫu thử di Trong quá trình sắc ký các cấu tử trong mẫu thử di chuyển trên lớp mỏng theo hướng pha động với những chuyển trên lớp mỏng theo hướng pha động với những tốc độ khác nhau dẫn đến việc tách – phân bố vị trí tốc độ khác nhau dẫn đến việc tách – phân bố vị trí khác nhau trên lớp mỏng => Sắc ký đồ khác nhau trên lớp mỏng => Sắc ký đồ Dựa vào cơ chế, TLC thành 4 loại Dựa vào cơ chế, TLC thành 4 loại Sắc ký hấp phụ Sắc ký hấp phụ Sắc ký phân bố Sắc ký phân bố Sắc ký trao đổi ion Sắc ký trao đổi ion Sắc ký rây phân tử Sắc ký rây phân tử Sắc ký hấp phụ Sắc ký hấp phụ Sự khác nhau ái lực hấp phụ của các chất đối Sự khác nhau ái lực hấp phụ của các chất đối với pha tĩnh và được biểu thị qua hằng số hấp phụ. với pha tĩnh và được biểu thị qua hằng số hấp phụ. Chất tan bị giữ lại trên bề mặt rắn (hấp phụ) và Chất tan bị giữ lại trên bề mặt rắn (hấp phụ) và bị dung môi động đẩy ra (phản hấp phụ) bị dung môi động đẩy ra (phản hấp phụ) Chất có ái lực mạnh sẽ đẩy chất yếu hơn về Chất có ái lực mạnh sẽ đẩy chất yếu hơn về phía trước làm cho bề mặt không có khoảng trống và phía trước làm cho bề mặt không có khoảng trống và sắc ký đồ tạo thành vệt dài. sắc ký đồ tạo thành vệt dài. Tốc độ di chuyển và khả năng tách phụ thuộc Tốc độ di chuyển và khả năng tách phụ thuộc vào sự có mặt của tạp chất và bề mặt riêng. vào sự có mặt của tạp chất và bề mặt riêng. Sự cân bằng phụ thuộc nồng độ, nhiệt độ, áp Sự cân bằng phụ thuộc nồng độ, nhiệt độ, áp suất. suất. Sắc ký phân bố Sắc ký phân bố Pha tĩnh Pha tĩnh : chất lỏng không tan với pha động và : chất lỏng không tan với pha động và được gắn vào một chất mang thích hợp. được gắn vào một chất mang thích hợp. Pha động: Pha động: chuyển dịch trên pha tĩnh kéo theo chuyển dịch trên pha tĩnh kéo theo những chất cần tách và những chất nầy được phân bố những chất cần tách và những chất nầy được phân bố giữa hai pha cho tới khi hình thành trạng thái cân giữa hai pha cho tới khi hình thành trạng thái cân bằng. bằng. Hệ số phân bố khác nhau của mỗi chất với pha Hệ số phân bố khác nhau của mỗi chất với pha động, tĩnh. động, tĩnh. Chú ý: Chú ý: SKLM tẩm những chất ưa dầu (pha tĩnh không phân SKLM tẩm những chất ưa dầu (pha tĩnh không phân cực) và pha động phân cực => Sắc ký phân bố cực) và pha động phân cực => Sắc ký phân bố pha đảo dùng tách chất kỵ nước. pha đảo dùng tách chất kỵ nước. Pha tĩnh thường H Pha tĩnh thường H 2 2 O, pha động chất hữu cơ không O, pha động chất hữu cơ không hòa tan trong H hòa tan trong H 2 2 O nhưng có cho thêm H O nhưng có cho thêm H 2 2 O hay đã O hay đã được làm bão hòa nước. được làm bão hòa nước. Tách chất có độ phân cực TB, pha tĩnh là dung môi Tách chất có độ phân cực TB, pha tĩnh là dung môi phân cực không bay hơi: formamid, PEG. Pha phân cực không bay hơi: formamid, PEG. Pha động là chất lỏng không phân cực như động là chất lỏng không phân cực như cloroform… cloroform… Sắc ký trao đổi ion: Sắc ký trao đổi ion: Pha tĩnh Pha tĩnh : Chất có khả năng trao đổi ion với ion chất : Chất có khả năng trao đổi ion với ion chất cần phân tích (nhựa, dẫn chất cellulose) cần phân tích (nhựa, dẫn chất cellulose) Ái lực khác nhau của các ion trong mẫu và pha tĩnh Ái lực khác nhau của các ion trong mẫu và pha tĩnh Nhựa trao đổi ion chứa nhóm hóa học thích hợp: Nhựa trao đổi ion chứa nhóm hóa học thích hợp: Cationit: Cationit: R-H R-H + + + Na + Na + +   R-Na R-Na + + + H + H + + Anionit: Anionit: R-OH R-OH - - + Cl + Cl - -   R-Cl R-Cl - - + OH + OH - - Sắc ký rây phân tử Sắc ký rây phân tử Sự tách dựa trên kích thước phân tử khác nhau của Sự tách dựa trên kích thước phân tử khác nhau của chất tan để lọt sâu vào trong các hốc của pha tĩnh. chất tan để lọt sâu vào trong các hốc của pha tĩnh. Các chất có kích thước phân tử nhỏ thì lọt vào Các chất có kích thước phân tử nhỏ thì lọt vào trong các hốc của pha tĩnh và bị giữ lại đó sẽ ra trong các hốc của pha tĩnh và bị giữ lại đó sẽ ra sau. Chất có kích thước phân tử lớn nằm ngoài các sau. Chất có kích thước phân tử lớn nằm ngoài các hốc này sẽ ra trước. hốc này sẽ ra trước. Pha tĩnh: Gel (thường là gel Sephadex) dùng để tách Pha tĩnh: Gel (thường là gel Sephadex) dùng để tách các chất có phân tử lượng khác nhau. Một số loại các chất có phân tử lượng khác nhau. Một số loại Gel sephadex: G-50, G-75, G- 100, G-150 Gel sephadex: G-50, G-75, G- 100, G-150 [...]... vòng” Quá trình và kỹ thuật sắc ký Chuẩn bị bản mỏng Bản mỏng, bình sắc ký thích hợp Chuẩn bị dung môi Chấm dung dịch lên bản mỏng Khai triển sắc ký Giải ly để dung môi giải ly di chuyển xuống Giải ly để dung môi giải ly di chuyển lên Giải ly nhiều lần liên tiếp Giải ly hai chiều Phát hiện vết Phương pháp vật lý: Đèn chiếu tia UV 254nm Đèn chiếu tia UV 366nm Phương pháp hóa học: Thuốc thử đặc trưng... Loại bản mỏng • Hoạt độ của bản mỏng lúc sử dụng • Độ dầy của lớp hấp phụ • Thành phần của dung môi • Kỹ thuật sắc ký • Lượng mẫu chấm lên bản mỏng Ứng dụng Công bố đặc điểm hợp chất vừa chiết, tách, cô lập Định luợng và bán định lượng Kiểm tra hai chất có giống nhau hay không, định tính và thử độ tinh khiết Tìm hiểu sơ bộ về mẫu chất khảo sát Chuẩn bị cho việc sắc ký cột Ứng dụng vào hóa thực vật • Sự... mẫu chất khảo sát Chuẩn bị cho việc sắc ký cột Ứng dụng vào hóa thực vật • Sự tách sắc tố thực vật (Separating of plant Pigment) • Sự tách hỗn hợp nhuộm Lipophilic (Separating of Lipophilic Dye Mixture) Sự tách sắc tố thực vật Hóa chất và nguyên liệu Ether dầu mỏ, acetone, isopropanol, NaCl, CaCO3, Na2SO4,, lá thực vật tươi (fresh leaves) Thiết bị và dụng cụ Máy sấy quay, bình TLC 22 x 22 x10 bản silicagel... sự phân lớp và độ tetrecloride tinh khiết của hỗn Ete Isopropylic hợp dung môi Toluene Benzene €0 0.01 Dung môi Ete etylic €0 0.38 0.01 0.01 Chloroform 0.40 Metylen 0.42 chcloride 0.04 0.18 Dicloetan Acetone 0.49 0.56 0.28 Dioxin 0.56 0.29 0.32 Butanol Etylacetat 0.56 0.58 Bình sắc ký • Đáy tròn, vuông hoặc chữ nhật Lựa chọn điều kiện sắc ký Chọn pha tĩnh: Bản chất chất cần tách Chọn bản mỏng, chất... dầu hỏa, 11ml isopropanol Chuẩn bị bình sắc ký: Dm khai triển cho vào bình bao trùm đáy một độ sâu 0.5cm Đậy nắp, chờ dm bão hòa hơi nước Chiết sắc tố lá (extraction of the leaf pigment): Lá tươi nghiền với 22ml acetol, 3ml dầu hỏa và một thìa CaCO3, dd sau lọc cho vào phễu tách cùng 20ml ete dầu hỏa và 20 ml NaCl 10% Chờ dd tách lớp, lớp dưới cho vào becker, lớp trên đem rửa 3-4 lần với 5ml nước Rồi... không khí trong bình khai triển phải bảo hòa với dung môi, thành phần của pha động và nhiệt độ phải không thay đổi Kết luận SKLM là phương pháp phân tích cơ bản không thể thiếu được đối với các nhà hóa học cũng như các nhà phân tích và trở thành một phương pháp chính thức trong nghiên cứu phân tích và kiểm tra chất lượng sản phẩm ở Việt Nam và các nước khác Tính linh động trong quá trình sắc ký Chi phí,... Việt Nam và các nước khác Tính linh động trong quá trình sắc ký Chi phí, thời gian phân tích tiết kiệm Thiết bị gọn, đơn giản Ứng dụng trong nhiều lĩnh vực Tự động hóa một vài bước, tăng độ dung giãi và cho số liệu chính xác hơn, cần cải tiến vài bước => Sắc ký lớp mỏng hiệu năng CHÂN THÀNH CẢM ƠN CÔ VÀ CÁC BẠN ĐÃ CHÚ Ý THEO DÕI! ... Silicagel không có chất dính, có chất chỉ thị: HF254 (Merek), DF-O (Camag) Silicagel đã silan hóa dùng cho TLC pha đảo: PF254 silanized RP-2… • 2 Nhôm oxyd • 3 Cellulose • 4 Kieselgur hay cát biển • 5 Thạch cao • 6 Các chất khác: Polyamide ionit vô cơ – hữu cơ Sephadex Bản mỏng 10*20cm 20*30cm 5*20cm Bản mỏng dính chắc Bản mỏng không dính chắc Dung môi Dung môi Ete dầu hỏa  N.Tắc lựa chọn: Tính chất hỗn hợp... chiết lên bản mỏng: Vẽ 1 đường thẳng cách đáy bản 1.5 cm bằng viết chì, dùng ống pasteur chấm dịch chiết lên bản, lặp lại nhiều lần đến khi có màu xanh đậm, vết chấm kế tiếp được thực hiện sau khi được sấy khô vết chấm trước, hàng chấm được mỏng và thẳng là tốt Thí nghiệm: Bản được đặt cẩn thận vào bình với hàng kẽ mẫu ở đáy, giử thẳng không cho chạm vào thành bình, đậy bình, giử bản mỏng đứng yên,... violaxanthin yellow neoxanthin yellow Sự tách hổn hợp nhuộm Lipophilic Hóa chất: Dung môi thử nghiệm: Hỗn hợp nhuộm (Butter Yellow, Sudan Blue II, Sudan Red G and Indophenol in toluene) Dung môi tham khảo: (Sudan Red G and Sudan Blue II each dissolved in toluene Dung môi khai triển: Toluene Glass wares and materials:  Bình sắc ký: (jam glass with a screw cover, h = 11 cm d = 5 cm)  DC plate POLYGRAM® . của SKLM Ứng dụng SKLM trong hóa thực vật Ứng dụng SKLM trong hóa thực vật KHÁI QUÁT CHUNG KHÁI QUÁT CHUNG Sắc ký lớp mỏng (Thin layer chromatograpy) Sắc ký lớp mỏng (Thin layer chromatograpy). lớp mỏng => Sắc ký đồ khác nhau trên lớp mỏng => Sắc ký đồ Dựa vào cơ chế, TLC thành 4 loại Dựa vào cơ chế, TLC thành 4 loại Sắc ký hấp phụ Sắc ký hấp phụ Sắc ký phân bố Sắc ký. định. định. Trong quá trình sắc ký các cấu tử trong mẫu thử di Trong quá trình sắc ký các cấu tử trong mẫu thử di chuyển trên lớp mỏng theo hướng pha động với những chuyển trên lớp mỏng theo