Nghiên cứu, chọn lọc cá thể f2 của một số tổ hợp lúa nếp chứa gen kháng bệnh bạc lá, gen thơm, waxy bằng chỉ thị phân tử DNA

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC    ĐỀ CƯƠNG THỰC TẬP TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: Nghiên cứu, chọn lọc cá thể F2 số tổ hợp lúa nếp chứa gen kháng bệnh bạc lá, gen thơm, waxy thị phân tử DNA Giáo viên hướng dẫn : PGS.TS Phan Hữu Tôn Ths Nguyễn Văn Hùng Bộ môn Công nghệ sinh học ứng dụng Khoa Công nghệ sinh học - Trường ĐHNN HN Sinh viên thực : Nguyễn Thanh Phong Mã sinh viên : 540341 Lớp : CNSH A- K54 HÀ NỘI - 2013 ii PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Trên giới lúa (Oryza sativa L.) lương thực quan trọng thiếu đời sống hàng ngày người Lúa loại phổ biến gieo trồng tất châu lục khoảng 100 nước, tập trung chủ yếu châu Á (chiếm 90 % diện tích) Ở Việt Nam, lúa coi lương thực quan trọng sản xuất nông nghiệp Năm 2012, theo số liệu sơ Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn, diện tích gieo trồng lúa 7.750.000 chiếm 90% tổng diện tích đất trồng lương thực có hạt, với sản lượng 43 triệu trồng tập trung chủ yếu đồng Bắc Bộ đồng sông Cửu Long Hơn nữa, lượng gạo xuất năm 2012 đạt 7,75 triệu tấn, kim ngạch xuất đạt 3,23 tỉ đô la Mỹ, tăng 15,4% lượng 21,2% giá trị so với năm 2011 ( theo số liệu Hiệp hội Lương thực Việt Nam (VFA) – tháng 10/ 2012) Trong đó, lúa nếp nhóm lúa đặc sản lâu đời nhân dân Việt Nam sử dụng vào nhiều mục đích khác như: nấu xơi, làm loại bánh cổ truyền, bánh chưng, bánh dày, bánh dẻo, làm đồ uống rượu nhiều loại đồ ăn khác Và sản phẩm từ lúa nếp góp phần làm nên hương vị độc đáo, giàu tính nhân văn văn hóa ẩm thực Việt Nam Lúa nếp chiếm khoảng 10 % diện tích sản xuất lúa khoảng 10% lượng gạo tiêu dùng người Việt Nam Lúa nếp có giá thành cao, nhiên dịng lúa nếp Việt Nam nghèo nàn, chia thành nhóm: - Giống nếp địa phương: Nếp hoa vàng, nếp cau, nếp hoa trắng… chất lượng gạo tốt, cơm thơm, dẻo ngon, suất thấp, cao dễ đổ - Giống lúa nếp chọn tạo TK90, 315, 415…năng suất khá, thấp chất lượng gạo kém,một số giống không thơm, cơm dẻo đặc biệt dễ bị nhiễm bệnh đạo ôn, bạc rầy nâu Trong đó, bệnh bạc vi khuẩn Xanthomonas oryzea loại bệnh gây hại nghiêm trọng đến suất phẩm chất lúa Có nhiều biện pháp để phịng trừ bệnh bạc ưu việt chọn giống kháng bệnh vừa cho hiệu kinh tế cao, vừa cho sản phẩm sạch, lại không gây ô nhiễm môi trường Nhiều gen nghiên cứu ứng dụng chọn tạo giống lúa kháng bệnh bạc giống lúa mang gen có mức độ kháng cao, phổ kháng rộng Như vậy, việc đánh giá nguồn gen lúa nếp đặc biệt gen thơm, gen waxy, gen kháng bạc khơng có ý nghĩa việc bảo tồn giống lúa đặc sản mà cịn có ý nghĩa quan trọng cơng tác chọn tạo giống lúa chất lượng cao Đặc biệt với công tác chọn tạo giống nay, việc lai tạo nhiều dịng bố mẹ có gen mục tiêu mong muốn để tạo lai có phối trộn nhiều gen hữu ích trở nên dễ dàng Các lai hệ F2 mang phẩm chất quý: kháng sâu bệnh, chống lốp đổ…ngày phổ biến Đồng thời, với phát triển kỹ thuật thị phân tử DNA đặc biệt kỹ thuật PCR việc tìm phát đoạn DNA liên quan đến tính trạng trở nên đơn giản xác Có thể đánh giá giai đoạn non tiết kiệm nhiều thời gian công sức Xuất phát từ sở trên, để chọn tạo dòng giống lúa nếp chất lượng cao, kháng bệnh bạc lá, tiến hành đề tài : “Nghiên cứu, chọn lọc cá thể F2 số tổ hợp lúa nếp chứa gen kháng bệnh bạc lá, gen thơm, waxy thị phân tử DNA” 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích - Khảo sát đặc điểm nơng sinh học tập đoàn giống lúa nếp nghiên cứu - Khảo sát, đánh giá gen mùi thơm, gen waxy - Khảo sát khả kháng bệnh bạc khả mang gen kháng bạc Xa4, Xa5, Xa7 tập đoàn mẫu giống lúa nếp - Tuyển chọn số mẫu giống triển vọng để khảo nghiệm mẫu giống có phẩm chất tốt, khả kháng bạc suất cao 1.2.2 Yêu cầu - Sử dụng thị phân tử xác định gen quy định mùi thơm, gen waxy gen kháng bệnh bạc lúa Xa4, Xa5, Xa7 hệ F2 dòng/ giống lúa nếp - Đánh giá số đặc điểm nơng sinh học chính, suất, chất lượng khả kháng bệnh bạc dòng/giống lúa nếp PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tình hình chọn tạo giống lúa nếp chất lượng 2.1.1 Tình hình chọn tạo giống lúa nếp chất lượng giới 2.1.2 Tình hình chọn tạo giống lúa nếp chất lượng Việt Nam 2.2 Chỉ thị phân tử 2.3 Nghiên cứu ứng dụng thị gen mùi thơm 2.4 Nghiên cứu ứng dụng thị gen waxy 2.5 Nghiên cứu bệnh bạc lúa nếp 2.5.1 Nguyên nhân gây bệnh 2.5.2 Triệu chứng 2.5.3 Tác hại bệnh bạc lúa 2.5.4 Cơ sở khoa học chọn giống kháng bạc PHẦN III VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu - Địa điểm: Khu ruộng thí nghiệm phịng thí nghiệm phịng sinh học phân tử cơng nghệ sinh học ứng dụng, khoa Công nghệ sinh học, trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội - Thời gian nghiên cứu: từ 01/ 2013 đến 06/ 2013 3.2 Vật liệu phương pháp nghiên cứu 3.2.1 Vật liệu - 50 giống lúa nếp địa phương giống đối chứng TK90 - Các isolate vi khuẩn bạc phân lập bảo quản phịng thí nghiệm môn Công nghệ Sinh học Ứng dụng trường ĐHNN Hà Nội 3.2.2 Phương pháp nghiên cứu 3.2.2.1 Thí nghiệm đồng ruộng a Bố trí thí ngiệm ngồi đồng ruộng + Thời vụ: Vụ xuân năm 2013 + Thí nghiệm bố trí theo ơ, giống + Các tổ hợp bố trí khơng nhắc lại + Mỗi giống cấy m2 + Hàng cách hàng 20 cm + Cây cách 11 cm, cấy dảnh + Bón phân chăm sóc đại trà b Theo dõi số tiêu nông sinh học Tiến hành theo phương pháp IRRI * Thời kì mạ - Gieo riêng dịng, cắm thẻ dòng, che nilon chống rét chống chuột - Khi mạ bắt đầu đánh dấu số lá: thứ đánh dấu chấm sơn trắng, thứ đánh dấu chấm, thứ đánh dấu chấm, theo dõi đến địng ghi số liệu số lá/ thân - Mỗi dòng đánh dấu 20 cây, chọn cấy 10 để theo dõi - Theo dõi khả đẻ nhánh mạ dòng - Theo dõi màu sắc mạ dòng - Theo dõi tình hình nhiễm sâu bệnh ruộng mạ, ghi tên sâu bệnh, cho điểm để đánh giá mức độ gây hại - Theo dõi khả chịu rét mạ đồng ruộng - Đánh giá khả sinh trưởng phát triển mạ thông qua tiêu: chiều cao mạ, chiều rộng gân mạ * Thời kì lúa  Thời gian qua giai đoạn sinh trưởng - Tuổi mạ: tính từ gieo đến cấy - Ngày hồi xanh - Ngày bắt đầu đẻ - Ngày kết thúc đẻ - Ngày trỗ (có có bơng nhơ ngồi bẹ đòng 3-5 cm) ghi ngày bắt đầu trỗ Nếu ngày phân ly sớm hẳn ghi lại bỏ phân ly - Ngày trỗ 10%, 50%, kết thúc trỗ - Ngày chín vàng : >95% hạt chín vàng - Ngày thu hoạch  Theo dõi số lá/ thân Cây đánh dấu ruộng mạ cấy liên tục hàng Hàng tuần đến đánh dấu theo số lẻ xuất hiện, địng ghi số liệu 10 cây, cộng chia trung bình  Mơ tả đặc điểm hình thái Trong q trình sinh trưởng, mơ tả sổ theo dõi đồng ruộng hàng tuần Ở thời điểm sau phải mơ tả : - Đẻ rộ mô tả : +Khả đẻ: Khoẻ, yếu, trung bình + Kiểu đẻ: Xoè, gọn, chụm - Đứng mô tả : + Màu sắc + Kiểu - Trỗ : + Mức trỗ nhanh - chậm, trỗ - nghẹn + Bơng : To - nhỏ- trung bình + Hạt: To - nhỏ- trung bình + Màu vỏ hạt: Vàng- nâu- sọc,… + Mỏ hạt: Tím- vàng + Râu: Có - khơng- màu râu + Xếp hạt/ bơng: Thưa - sít- trung bình  Theo dõi sâu bệnh tự nhiên Hàng tuần quan sát, thấy dòng xuất sâu bệnh gây hại, ghi tên sâu, bệnh- mô tả mức độ sau ngày quan sát lại thấy mức độ tăng lên phun thuốc phòng trừ - ghi loại thuốc, nồng độ - thời gian ngừng gây hại sau phun - tiêu cho điểm ghi điểm  Đánh giá độ kiểu hình: Khi lúa trỗ xong tiến hành đánh giá: - Đếm số phân ly: + Thời gian trỗ sớm muộn, + Cao - thấp + Kiểu + Kiểu đẻ nhánh + Kiểu bông.v v - Cho điểm kiểu hình theo IRRI  Phân loại tuyển chọn dòng tốt - Phân loại theo thời gian từ gieo đến trỗ < 60 ngày 61- 70 ngày 71- 80 ngày 81- 90 ngày 91- 100 ngày 101- 110 ngày 111- 120 ngày > 120 ngày - Phân loại theo chống chịu sâu bệnh : Nhẹ - trung bình- nặng - Phân loại theo độ kiểu hình Cuối chọn khoảng 10-20 dịng tốt Các dòng lấy mẫu để theo dõi tiêu  Theo dõi dịng có triển vọng Sau đánh giá tuyển chọn, tiến hành thu mẫu dòng 10 nhổ gốc, buộc thep bó, đo đếm tiêu: * Đo tiêu : - Chiều cao : Đo từ mặt đất đến hạt đỉnh cao nhất, không kể râu - Chiều dài cổ : Đo từ cổ địng đến đốt cổ bơng + Nếu cổ bơng vươn ngồi cổ địng ký hiệu dấu + + Nếu cổ nằm bẹ ký hiệu dấu - Chiều dài đòng : Đo từ gối đến mút đầu - Chiều rộng đòng : Đo từ mép bên đến mép bên chỗ rộng - Số hữu hiệu : Đếm tất bơng có hạt lép - Số hạt /bơng trung bình : Tuốt hạt khóm, đếm tổng số hạt (chắc lép), tính tỷ lệ lép, chia tổng số hạt cho số * Tỷ lệ hạt lép (%) * Tính khối lượng 1000 hạt : Phơi khô đến độ ẩm 13% , cân lần, lần 500 hạt Nếu độ sai số lần cân khơng q 0,5% cộng lần cân chia cho tính khối lượng trung bình 500 hạt Đem kết nhân với để tính khối lượng 1000 hạt Nếu độ sai số lần cân vượt 0,5% tiến hành đếm cân lại * Mô tả mầu hạt : màu sắc vỏ trấu, mỏ hạt, râu * Tính tỉ lệ gạo lật, gạo sát, gạo nguyên * Đo chiều dài, chiều rộng hạt gạo lật  Các công thức sử dụng - Năng suất tiềm năng: Tính theo cơng thức NSTN= (AxBxCxD) x 10-4 (tạ /ha) Trong đó: A: số bơng hữu hiệu/ khóm B: Số hạt chắc/ bơng C: Khối lượng 1000 hạt D: Mật độ cấy (số khóm/m2) Với giai đoạn quan sát, tiến hành lập bảng - Cơng thức tính giá trị trung bình: X n - Cơng thức tính phương sai: S ∑ = = Xi n ( Xi − X ) i =1 n −1 - Hệ số biến động: CV(%) = S x100 X Trong đó: n: số mẫu quan sát X : giá trị trung bình tính trạng quan sát S2 : phương sai mẫu Xi: giá trị thực tính trạng quan sát tính trạng thứ i c Đánh giá tiêu mùi thơm Theo Sood Siddiq (1978), mùi thơm đánh giá cảm quan sau: Mùi thơm Thu 10 mẫu giống giai đoạn lúa đẻ nhánh rộ Lấy 1g lá, cắt thành đoạn dài mm, bỏ vào ống nghiệm, ngâm với 5ml dung dịch KOH 1,7%, đậy nắp lại để nhiệt độ phòng 10 phút Mức độ thơm chấm điểm người cho theo mức lấy trung bình Điểm 1: không thơm, Điểm 2: thơm, Điểm 3: thơm Mùi thơm gạo Lấy 10 hạt giống, vừa thu hoạch, bóc vỏ, làm trắng nghiền nhỏ Bột gạo giống cho vào ống chứa 500µl KOH 1,7%, đậy nắp để nhiệt độ phòng 10 phút Đánh giá mùi thơm phương pháp ngửi người cho điểm d Đánh giá hàm lượng amylose, độ dẻo cơm giống lúa * Nhiệt hoá hồ Lấy hạt gạo xát trắng, khơng có vết nứt, gãy, vào đĩa petri Cho vào đĩa 10 ml dung dịch KOH 1.7%, đậy nắp để 23 nhiệt độ 30oC Nhiệt trở hồ xác định mức lan rộng độ suốt gạo sau xử lý (theo phương pháp Little cs) Đánh giá nhiệt hoá hồ độ phân huỷ theo thang điểm IRRI (1996) *Phân tích hàm lượng amylase Định lượng amylose theo phương pháp H Seko, 2003: hạt lúa bóc vỏ, xát trắng, nghiền nhỏ Lấy 100 mg bột nghiền, bổ sung vào 1ml Ethanol 95%, ml NaOH 1N Đun sôi 100 oC 10 phút định mức cho đủ 100 ml Lấy ml dung dịch hoà tan, cho thêm ml CH3COOH 1M, ml dung dịch iodine Định mức cho đủ 100 ml, giữ ấm 30 oC thời gian 20 phút đo OD bước sóng 620 nm máy đo quang phổ đọc giá trị Đối chiếu bảng quy đổi tìm hàm lượng amylose Phân nhóm hàm lượng amylose theo tiêu chuẩn IRRI (1988) e Đánh giá khả kháng bệnh bạc lây nhiễm nhân tạo * Môi trường nuôi cấy vi khuẩn 10 Vi khuẩn Xanthomonas oryzae nuôi cấy môi trường Wakimoto Thành phần môi trường gồm: + Khoai tây: 300g + Đường saccarose: 15g + Pepton: 5g + Agar: 17g + Na2HPO4.12H2O: 2g +Ca2(NO3)2.4H2O: 0.5g + Nước cất: 100ml, pH= 6.8-7.0 Môi trường Wakimoto hấp khử trùng nhiệt độ 121 0C ống nghiệm thời gian 20 phút, tạo mặt phẳng nghiêng Trước lây nhiễm nguồn vi khuẩn cấy bảo quản môi trường sữa -300C, cấy truyền sang mơi trường Wakimoto 28 0C sau 48-72h, sau pha lỗng dung dịch vi khuẩn nước cất vơ trùng đạt nồng độ 108CPU/ml để gây bệnh * Phương pháp lây nhiễm Lây nhiễm theo phương pháp cắt đầu lá: dùng kéo khử trùng nhúng vào dung dịch chứa vi khuẩn gây bệnh bạc ( chủng vi khuẩn dùng kéo vô trùng) cắt lên đầu lúa đoạn dài khoảng 2-5 cm lây nhiễm vào giai đoạn lúa làm đòng-trỗ, chủng cây, cắt toàn xanh Trước lây nhiễm, tiến hành làm thí nghiệm để xác định khả trì độc tính chủng vi khuẩn q trình bảo quản cách lây thử dòng mẫn cảm IR24 Sau ngày thấy đầu héo xanh tái chứng tỏ chủng vi khuẩn có độc tính dùng để lây nhiễm * Đánh giá khả kháng bệnh bạc 11 Sau lây nhiễm 20 ngày tiến hành đo chiều dài vết bệnh theo phương pháp giáo sư Satoru Taura đề xuất Dựa vào chiều dài vết bệnh để đánh giá tính kháng giống sau: + Chiều dài vết bệnh < 8cm: kháng bạc (R) + Chiều dài vết bệnh từ 8-12cm: nhiễm vừa (M) + Chiều dài vết bệnh >12cm: nhiễm nặng (S) 3.2.2.2 Thí nghiệm phịng a Chiết tách DNA Quy trình chiết tách DNA tổng số theo Zheng cs (1995) có cải tiến + Bước 1: thu ngắt mẫu khoẻ dài khoảng cm bỏ vào ống nghiệm có dung tích 1.5 ml, đánh dấu tên giống bỏ vào tủ lạnh + Bước 2: mẫu cắt nhỏ 0.5 cm bổ vào cối sứ + Bước 3: nhỏ 400 µl dung dịch chiết xuất DNA vào cối lấy chày nghiền nhỏ mẫu + Bước 4: nghiền nhỏ mẫu dung dịch chuyển sang màu xanh đen chứng tỏ tế bào vỡ diệp lục giải phóng + Bước 5: đổ thêm 400 µl dung dịch chiết xuất DNA vào trộn lẫn chuyển dung dịch vào ống nghiệm đánh số + Bước 6: đổ ống nghiệm 400µl dung dịch hỗn hợp Phenol: chlorofom: isoaminalchohol (25:24:1) Sau li tâm 13000 vịng/ phút phút + Bước 7: đổ vào ống nghiệm 400 µl (2 chlorofom: isoaminalchohol) + Bước 8: cho 800 µl ethanol (96%) trộn sau ly tâm phút với tốc độ 13000 vòng/ phút Đổ phần dung dịch phía trên, giữ lại phần kết tủa đáy ống nghiệm + Bước 9: rửa kết tủa ethanol 70%, làm khô tự nhiên nhiệt độ phòng cách úp ngược ống nghiệm lên giấy thấm 12 + Bước 10: hồ tan kết tủa 50µl dung dịch TE bảo quản nhiệt độ -200C 40C Bảng 3.1 Thành phần dung dịch chiết tách Thành phần Nồng độ dd mẹ Nồng độ dd Hỗn hợp 50ml dd 1M 0.5M 5M 10% làm việc 50mM 0.25mM 300mM 1% chiết tách 2.5ml 2.5ml 3.0ml 5.0ml 37.0ml Tris-HCl pH=8 EDTA pH=8 NaCl SDS H2O Bảng 3.2 Thành phần dung dịch TE Thành phần Nồng độ dd mẹ Nồng độ dd làm 1M 0.5M việc 10Mm 1Mm Tris-HCl EDTA H2O Thể tích 50ml 0.5ml 0.1ml 49.9ml b Tiến hành nhân PCR Quy trình phản ứng PCR: sau cho đủ thành phần phản ứng DNA cần nhân vào ống PCR (các ống đánh số thứ tự theo giống lúa) sau cho vào máy nhân gen để chạy phản ứng PCR Đặt chu kỳ nhiệt cho phản ứng * Gen mùi thơm - Sử dụng cặp mồi (theo Bradbury cs., 2005) ESP: 5’-TTG TTT GGA GTC TGC TGA TG-3’ IFAP: 5’-CAT AGG AGC AGC TGA AAT ATA TACC-3’ Bảng: Chu kỳ nhiệt cho gen thơm Bước Nhiệt độ (0C) 94 94 13 Thời gian giây giây 58 72 Lặp lại 30 lần từ bước 72 giây giây phút * Gen waxy Sử dụng cặp mồi (Ayres et al., 1997) F 484: 5’-CTT TGT CTA TCT CAA GAC AC-3’ R 485: 5’ TTG CAG ATG TTC TTC CTG ATG-3’ Bảng: Chu kỳ nhiệt cho gen Waxy Bước Nhiệt độ (0C) 94 94 55 72 Lặp lại 35 lần từ bước 72 Thời gian phút 45 giây phút phút phút *Gen kháng bạc Xa4, Xa5, Xa7 Quy trình PCR xác định gen kháng bệnh bạc GS.TS.S Taura cộng đề xuất Thành phần nhân PCR: Bảng 3.Thành phần phản ứng PCR cho gen Xa4, xa5, Xa7 Thành phần Nồng độ gốc H2O PCR buffer (có chứa Mg2+) dNTP 10X 2,5mM 14 Thể tích cần lấy(µl) 13,3 2,0 1,6 Primer Forward Primer Reverse DNA taq polymerase Tổng thể tích cocktail DNA mẫu Tổng thể tích 10 pmol/µl 10 pmol/µl 5unit/µl µl 1,0 1,0 0,1 19,0 1,0 20 L Nếu PCR không chứa Mg2+ phải bổ sung thêm Mg nồng độ cuối 0.5- 1.5 mM Các Primer dùng PCR: Gen Chỉ thị NS Trình tự mồi Tài liệu T Npb F5'- ATC GAT CGA TCT TCA CGA Xa4 181 Npb 78 11 xa5 RG556 Yoshida et GG-3' R5'- GTG CTA TAA AAG GAC TTC al.1992 GGG-3' F5’-TAG CTG CTG CCG TGC TGT GC-3’ R5’-AAT ATT TCA GTG TGC ATC TC-3’ F5'- CAG CAA TTC ACT GGA GAT Xa7 P3 GTG GTT-3' R5'-CAT CAC GGT CAC CGC CAT Taura al.2003 ATC GGA- 3' Chu kỳ nhiệt Bảng: Chu kỳ nhiệt cho gen Xa4, Xa7 Bước Nhiệt độ (0C) 94 94 56 72 Lặp lại 34 lần từ bước 15 Thời gian phút phút phút phút et 72 phút Bảng: Chu kỳ nhiệt cho gen xa5 Bước Nhiệt độ (0C) 94 94 60 72 Lặp lại 34 lần từ bước 72 Thời gian phút phút phút phút 50 giây phút c Chạy điện di - Chuẩn bị gel chạy điện di: cân 1.5g agarose cho vào 50ml dung dịch TAE 50ml nước cất đem đun sơi lị vi sóng, sau lấy đem khuấy từ từ dung dịch suốt - Đổ dung dịch agarose 1.5% vào khuôn gel đông đặc rút lược Đổ đầy dung dịch TAE vào bể điện di cho ngập giếng - Trải màng parafin, nhỏ µl loading dye, trộn với µl dung dịch PCR, sau trộn nhỏ hỗn hợp vào giếng Nhỏ theo thứ tự giống DNA giống đánh số - Cắm nguồn điện chiều (75V) chạy điện di khoảng 25 đến 50 phút DNA mang điện tích âm chạy cực dương nguồn điện - Sau chạy điện di xong, nhuộm điện di ethilium bromide nồng độ 10mg/ml 10 phút - Quan sát vệt băng đèn chiếu tia UV chụp ảnh điện di 16 PHẦN IV KẾ HOẠCH, DỰ KIẾN 4.1 Dự kiến kết nghiên cứu - Tuyển chọn số dòng giống chất lượng từ nguồn vật liệu địa phương - Trong nguồn vật liệu đánh giá 4.2 Tiến trình thực đề tài STT Thời gian thực 2012 12/1/2013 12/1 – 29/1/2013 29/1 – 9/2/2013 9/2 – 25/2 Nội dung cơng việc Tìm tài liệu liên quan đến vấn đề nghiên cứu Nhận đề tài thực khóa luận tốt nghiệp Làm đề cương, hoàn chỉnh nộp đề cương + Soạn giống, gieo mạ, theo dõi chăm sóc mạ + Chuẩn bị đất bố trí thí nghiệm + Bố trí cấy, định theo dõi, dặm lúa, chăm sóc lúa thí nghiệm 17 25/2 – 25/4 25/4 – 5/5 5/5 – 5/6 5/6 – 20/6 + Đọc tài liệu viết tổng quan + Theo dõi thí nghiệm định kỳ tiêu + Đọc tài liệu, viết xong tổng quan nộp thầy hướng dẫn Theo dõi lúa trỗ + Theo dõi chín lấy mẫu, thu hoạch + Tổng kết số liệu sinh trưởng, sâu bệnh, đặc điểm hình thái, suất, ưu lai, Viết xong báo cáo nộp thầy hướng dẫn PHẦN V TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Đức Thành, Đặng Thị Minh Lụa, Nguyễn Minh Phương, Lê Thị Bích Thủy, Phân tích đa dạng di truyền dịng lúa tú lệ số giống nếp đặc sản dựa vào gen thị liên quan đến chất lượng hạt gạo Tạp chí Sinh học, T9/2008 Phan Hữu Tôn, Tống Văn Hải, Sàng lọc giống lúa có gen mùi thơm thị phân tử Tạp chí Khoa học & Phát triển, tập 8,số 4, 2010 J S Bao Ỉ H Corke Ỉ M Sun, 2006, Microsatellites, single nucleotide polymorphisms and a sequence tagged site in starchsynthesizing genes in relation to starch physicochemical properties in nonwaxy rice (Oryza sativa L.) Theor Appl Genet (2006) 113:1185–1196 18 Bùi Trọng Thuỷ, Phan Hữu Tôn (2004), Khả kháng bệnh bạc dòng lúa thị (Tester) chứa đa gen kháng với số chủng vi khuẩn Xanthomonas oyzae pv oyzae gây bệnh bạc lúa phổ biến miền Bắc Việt Nam, tài liệu online Bùi Trọng Thuỷ, Phan Hữu Tôn, A Yoshimura, N.Furuya, S Taura (2004), Đánh giá khả kháng nhiễm bệnh bạc dòng, giống lúa lai Trung Quốc với chủng vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv Oryzae phổ biến miền Bắc Việt Nam, tài liệu online Phan Hữu Tôn (2004), Chiến lược chọn tạo giống lúa chống bệnh bạc miền Bắc Việt Nam, tài liệu online Phan Hữu Tôn (2005), Phân bố, đặc điểm gây bệnh chủng vi khuẩn bạc lúa phát nguồn gen kháng kỹ thuật PCR, tạp chí Khoa học cơng nghệ phát triển nông thôn 20 năm đổi mới, tập 1, tr.311-325 19 ... chọn lọc cá thể F2 số tổ hợp lúa nếp chứa gen kháng bệnh bạc lá, gen thơm, waxy thị phân tử DNA? ?? 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích - Khảo sát đặc điểm nơng sinh học tập đồn giống lúa nếp nghiên. .. giống lúa nếp chất lượng Việt Nam 2.2 Chỉ thị phân tử 2.3 Nghiên cứu ứng dụng thị gen mùi thơm 2.4 Nghiên cứu ứng dụng thị gen waxy 2.5 Nghiên cứu bệnh bạc lúa nếp 2.5.1 Nguyên nhân gây bệnh 2.5.2... chất tốt, khả kháng bạc suất cao 1.2.2 Yêu cầu - Sử dụng thị phân tử xác định gen quy định mùi thơm, gen waxy gen kháng bệnh bạc lúa Xa4, Xa5, Xa7 hệ F2 dòng/ giống lúa nếp - Đánh giá số đặc điểm