Bài giảng THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP

TH M Đ NH PH NG PHÁPẨ Ị ƯƠ TH M Đ NH PH NG PHÁPẨ Ị ƯƠ Trần Cao Sơn Viện Kiểm nghiệm An toàn VSTP quốc gia Khái niệm Khái niệm  Thẩm định phương pháp       bằng chứng khách quan    ! "# $%  & $' ()*+ +, Kn tương đương Xác nhận giá trị sử dụng của phương pháp Phê duyệt phương pháp Method validation Kết quả-.$%$' ! "#chất lượng/độ tin cậy độ chắc chắn-01234 Sự cần thiết Sự cần thiết  5-6789:;<=>  5.4. Phương pháp thử và thẩm định phương pháp  5.4.5. Thẩm định phương pháp  ?22$'012! Khi nào cần thẩm định/thẩm định lại? Khi nào cần thẩm định/thẩm định lại?  @$%A.  @$%B  @$%& CDE "#-.  F& CD0/$%3 4  ?GB$%.>F Các thông số thẩm định Các thông số thẩm định 9H ?IJKLL <H F2M04 NH OBEBE$' PH ?I#(IJE/IJ, =H ?IQ(I/IR, SH TA G> 1. Độ ổn định 2. Độ vững/độ chắc của phương pháp 3. Độ không đảm bảo đo Độ đặc hiệu/chọn lọc Độ đặc hiệu/chọn lọc  U>  Khả năng xác định chính xác chất phân tích khi có mặt các chất ảnh hưởng  Liệu tín hiệu (pic) xuất hiện là một pic hay nhiều pic?  ?IJ>$V"W9  ?I L L> $V ! "#  3 4 I&H $V$' !"#XIH Độ đặc hiệu/chọn lọc Độ đặc hiệu/chọn lọc  TC>  Phân tích mẫu trắng (của nhiều nền mẫu khác nhau) So sánh khi phân tích dung dịch chuẩn ở nồng độ gần LOQ  Phân tích mẫu thêm chuẩn  Yêu cầu: mẫu trắng phải không được cho tín hiệu. Nếu có hơn 10% số mẫu trắng cho tín hiệu thì cần thay đổi phương pháp để loại trừ.  Y Z[>  Độ tinh khiết của pic  So sánh 2 pic sắc ký Độ tinh khiết của pic Độ tinh khiết của pic Độ tinh khiết của pic Độ tinh khiết của pic Khoảng tuyến tính Khoảng tuyến tính Khi tăng nồng độ tín hiệu không tăng Khoảng hoạt động Khoảng tuyến tính [...]... 0.80 0.60 0 4 8 12 16 Thời gian (ngày) 20 Độ ổn định Phân tích xu hướng Nồng độ tính được (mg/ml) 1.80 1.60 + 2 SD X 1.40 1.20 1.00 TB - 2 SD Dừng 0.80 0.60 0 4 8 12 16 Thời gian (ngày) 20 Độ vững   Khi thay đổi một số yếu tố của phương pháp phân tích mà không làm ảnh hưởng đến kết quả => phương pháp có tính vững (robustness) Các yếu tố thuộc về phương pháp (method parameters) bao gồm: pH, tốc độ dòng,... 0.000001 10-8 10 ppb 21 0.0000001 10-9 1 ppb 30 Độ ổn định    Độ ổn định các dung dịch:  Thời gian lưu và diện tích: CV < 2% Độ ổn định dài ngày: Lưu mẫu trong điều kiện nghiên cứu từ 20 ngày trở lên Độ ổn định đông – rã đông: phân tích song song 3 vòng đông – rã đông  Kết quả độ ổn định nên được theo dõi bằng bảng kiểm tra (control chart) Độ ổn định Phân tích xu hướng Nồng độ tính được (mg/ml) 1.80... tính:  Hệ  Tính  Độ số tương quan r >0,99 ngược: chệch %: < ± 15% (20% LLOQ) LOD & LOQ Ba vùng kết quả! LOD Không phát hiện LOQ Phát hiện Vùng định lượng được LOD & LOQ đối với các phương pháp sắc ký S/N=2H/h LOQ: |RSD| < 20% LOD & LOQ đối với các phương pháp khác  Tính LOD và LOQ từ độ lệch chuẩn của mẫu trắng hoặc mẫu thêm chuẩn ở nồng độ thấp gần giới hạn phát hiện: LOD, LOQ = F.SD/a  F: hệ số... vượt quá 15% (20% đối với LOQ) Độ chụm   Độ chụm trung gian  Phản ánh sự thay đổi các thông số trong quy trình phân tích (dụng cụ, dung môi, thiết bị ) mà không ảnh hưởng đến kết quả phân tích Phương pháp xác định độ chụm từ kết quả phân tích các mẫu thực:  Làm trên mẫu thực: trong nhiều tuần 7-11 mẫu làmlặp 2-3 lần (Alan Rowley) lặp 2 lần: range trung bình = 1,118 x s 3 1,693 x s Độ chụm  Độ tái... => phương pháp có độ chắc chắn (ruggedness) Các yếu tố thuộc về điều kiện phân tích (test conditions) bao gồm: phòng thử nghiệm, người phân tích, thiết bị, lô hóa chất thuốc thử, thời điểm thực hiện Độ chắc đô sự tái lặp của kết quả, trong nhiều trường hợp thường liên quan đến độ chụm trung gian Độ không đảm bảo đo  Cách 1    Phân lập từng bước trong quá trình phân tích có thể gây sai số Xác định. .. trắng hoặc mẫu thêm chuẩn; hoặc độ lệch chuẩn của hệ số chặn từ đường chuẩn  a: độ dốc của đường hồi quy tuyến tính  Số lần phân tích lặp: 10 lần trở lên Tính LOQ theo đường chuẩn + Xác định độ chụm mong muốn khi định lượng + Chuẩn bị các mẫu thêm chuẩn nồng độ khác nhau + Mỗi nồng độ làm 6 lần Độ chụm RSD% + Tính RSD % ở mỗi nồng độ + Vẽ đường cong độ chụm theo nồng độ + LOQ là nồng độ ứng với RSDmong... nhận (Ở LOQ ≤ 20%.) theo FDA Cách thực hiện?     CRM certified reference material – mẫu chuẩn được chứng nhận RM reference material – mẫu chuẩn Spike mẫu thêm chuẩn – tính độ thu hồi So sánh với phương pháp khác, với phòng thí nghiệm khác (phòng chuẩn) Độ thu hồi     Thêm chuẩn (đã biết) vào mẫu trắng (hoặc mẫu thực) Thực hiện phân tích theo quy trình Tính lượng chuẩn thu được Tính độ thu hồi . thiết  5-6789:;<=>  5.4. Phương pháp thử và thẩm định phương pháp  5.4.5. Thẩm định phương pháp  ?22$'012! Khi nào cần thẩm định /thẩm định lại? Khi nào cần thẩm định /thẩm định. TH M Đ NH PH NG PHÁPẨ Ị ƯƠ TH M Đ NH PH NG PHÁPẨ Ị ƯƠ Trần Cao Sơn Viện Kiểm nghiệm An toàn VSTP quốc gia Khái niệm Khái niệm  Thẩm định phương pháp  . Vùng định lượng được LOD LOQ LOD & LOQ LOD & LOQ đối với các phương pháp sắc ký đối với các phương pháp sắc ký LOQ: |RSD| < 20% S/N=2H/h LOD & LOQ LOD & LOQ đối với các phương