bài tiểu luận công nghệ enzyme

Ngày nay, cùng vӟi mӝt sӕ loҥi enzyme khác, cellulase đã và đang đưӧc nghiên cӭu, ӭng dөng rӝng rãi trong nhiӅu lĩnh vӵc khác nhau như: trong công nghiӋp, nông nghiӋp, bҧo vӋ môi trưӡng

c

 

CÔNG NGHӊ ENZYME CELLULASE, PECTINASE VÀ ӬNG DӨNG



I. CELLULASE

Cellulase là mӝt trong nhӳng loҥi enzyme có vai trò rҩt quan trӑng trong các hoҥt đӝng đӡi sӕng, sҧn xuҩt cӫa con ngưӡi Ngày nay, cùng vӟi mӝt sӕ loҥi enzyme khác, cellulase đã và đang đưӧc nghiên cӭu, ӭng dөng rӝng rãi trong nhiӅu lĩnh vӵc khác nhau như: trong công nghiӋp, nông nghiӋp, bҧo vӋ môi trưӡng và công nghӋ sinh hӑc«.Tuy nhiên, đӇ đưӧc ӭng dөng trong các lĩnh vӵc này đòi hӓi enzyme phҧi có nhӳng tính chҩt ưu viӋt«

Œ. Giӟi thiӋu

Cellulase là mӝt phӭc hӋ enzyme có khҧ năng cҳt mӕi liên kӃt ȕ-1,4-glycoside trong phân tӱ cellulose, disaccharide, oligosaccharide và mӝt sӕ chҩt tương tӵ khác tҥo thành các phân tӱ đưӡng ȕ-glucose





 Sơ đӗ t phân mӕi li n kӃt ȕ-1,4-O-gl i cӫa cell lase

Î   i

Năm 1906, Seilliere l ngưӡi đҫu ti n quan sát đưӧc khҧ năng phân hӫy cellul se cӫa enzyme Sau đó nhi u tác giҧ đã tiӃn hành nghi n cӭu như Siu (1951), Gascoigne (1960), Reese (1963), Norkrans (1963-1967), Whitaker (1971), Emert (1974), Erikren, Goksoir (1977), Wood và Mc.Crae (1977), Erkisson K.E (1978) v.v KӃt quҧ cӫa các nghi n cӭu này đã đưӧc thӕng kê trong các công trình cӫa Rose A H và cӝng sӵ Theo kӃt quҧ nghiên cӭu cӫa các tác giҧ trên thì cellulose bӏ thӫy phân dưӟi tác dөng hi p đӗng cӫa phӭc hӋ cellulase bao gӗm 3 loҥi enzyme:

- Exocellulase hay exbiohydrolase (1,4-ȕ-D-glucan cellobiohydrolase EC 3.2.1.91) (C1): enzyme này thӫy phân chuӛi cellulose tӯ đҫu không khӱ và giҧi phóng ra chӫ yӃu các cellobiose, trong mӝt sӕ trưӡng hӧp giҧi phóng cҧ glucose Enzyme này không có khҧ năng phân giҧi cellulose dҥng kӃt tinh mà chӍ thay đәi tính chҩt hóa lý cӫa chúng, giúp cho enzyme endocellulase phân giҧi chúng

- Endocellulase hay Endoglucanase (EG) (EC.3.2.1.4) (Cx): enzyme này thӫy phân liên kӃt ȕ-1,4-glycoside mӝt cách ngүu nhiên trong phân tӱ cellulose, oligosaccharide, disaccharide và mӝt sӕ chҩt tương tӵ có cҫu nӕi /- glucan giҧi

2

phóng ra các cellodextrin, cellobiose và glucose Endo-F/-1,4-glucanase phân giҧi mҥnh mӁ cellulose vô đӏnh hình

- t-1,4-glucosidase hay cellbiase (E.C.3.2.1.21): enzyme này thӫy phân các cellobiose và các cello - oligosaccharide mҥch ngҳn tҥo thành glucose Đӕi vӟi cellulose và cellodextrin cao phân tӱ enzyme này không có tác dөng

å 


Cho đӃn nay, cҩu trúc cӫa hӋ cellulase vүn chưa đưӧc hi u biӃt mӝt cách

Cbh I và Cbh II Trong đó Cbh I chiӃm đӃn 60% lưӧng protein có trong dӏch nuôi cҩy, có trӑng lưӧng phân tӱ khoҧng 65 KD, đi m đҷng điӋn là 4,4 (PI = 4,4) Enzyme này chӭa khoҧng 496 amino acid Loҥi enzyme này tác đӝng cҧ lên cellulose vô đӏnh hình và cellulose kӃt tinh Nhưng chúng lҥi không tác đӝng đӃn cellulose biӃn tính như CMC hay hydroxyethylcellulose, cellohexaose ȕ-nitrophenyl, /-glucoside hay /-glucan C n CBH II có trӑng lưӧng phân tӱ là 53

KD, PI = 5,0 và chӭa khoҧng 471 amino acid Chúng cũng không tác đӝng lên CMC, chúng có khҧ năng tác đӝng đӃn cellulose hòa tan và cellulose không hòa tan

cҫu nӕi nҵm trong trung tâm hoҥt đӝng, còn mӝt cҫu nӕi nҵm ngoài trung tâm hoҥt đӝng Enzyme này gӗm hai thành phҫn CelA và Cex CelA là

ȕ-1,4-endoglucanase có bҧn chҩt là glycoprotein Cũng giӕng như cellulase cӫa >

hoàn toàn vӅ cҩu trúc và chӭc năng: (1) vùng tương tác vӟi cơ chҩt cellulose nҵm

ӣ phía đҫu N, (2) vùng trung tâm xúc tác nҵm ӣ phía đҫu C Trung tâm xúc tác là mӝt lõi peptide gӗm 30 amino acid, lõi này có cҩu trúc cuӝn chһt trong khi đó vùng tương tác vӟi cellulose cӫa CelA lҥi có cҩu trúc l ng lҿo và dӉ bӏ protease thӫy phân Cex cũng có cҩu trúc tương tӵ CelA song trұt tӵ sҳp xӃp cӫa các vùng chӭc năng lҥi ngưӧc lҥi hoàn toàn

bglA và bglB Loҥi bglA chӭa khoҧng 448 amino acid và có trӑng lưӧng phân tӱ

là 51,482 KD Chúng hoҥt đӝng mҥnh ӣ pH 6,0 - 6,5 và nhiӋt đӝ 600C Các enzyme thuӝc loҥi này tham gia vào quá trình thӫy phân cellbiose nhưng không thӫy phân CMC

H
h 2 Mô hình cҩu trúc cellulase cӫa Ë


£  Cơ chӃ thӫy phân cӫa ceuase

Qua nhiӅu nghiên cӭu vӅ cơ chӃ xúc tác cӫa các loҥi cellulase, nhiӅu tác giҧ đã đưa ra kӃt luұn chung là các loҥi enzyme cellulase có tác dөng hiӋp đӗng thӫy phân cellulose đӇ tҥo thành sҧn phҭm cuӕi cùng là glucose Tuy nhiên cho đӃn nay, cơ chӃ thӫy phân cellulose vүn chưa hoàn toàn đưӧc thӕng nhҩt NhiӅu tác giҧ đã trình bày cơ chӃ thuӹ phân cellulose cӫa các cellulase theo nhiӅu cách khác nhau Trong đó, cơ chӃ cӫa Reese và cӝng sӵ đưa ra năm 1980 đưӧc quan tâm hơn cҧ: đҫu tiên enzyme C1 tác dөng lên cellulose kӃt tinh, phá vӥ các liên kӃt đӗng hóa trӏ và tҥo ra cellulose biӃn tính hay cellulose trương nӣ TiӃp theo enzyme Cx tác dөng lên đҫu chuӛi và giҧi phóng các cellobiose TiӃp đó, dưӟi

sӵ tác đӝng cӫa cҧ ba loҥi enzyme: C1, Cx và cellobiase, phân tӱ cellulose bӏ thӫy phân hoàn toàn tҥo thành các phân tӱ glucose

4

Quá trình thӫy phân cellulose đưӧc thӇ hiӋn qua sơ đӗ sau:

Enzyme C1 Cellulose kӃt tinh C1

Cellulose vô đӏnh hình

Enzyme Cx

Oligomer

Enzyme C1

6

ü 


Tӕc đӝ phҧn ӭng do enzyme xúc tác chӍ tăng theo nhiӋt đӝ trong mӝt giӟi hҥn xác đӏnh mà ӣ đó phân tӱ enzyme vүn còn bӅn chưa bӏ biӃn tính Tҥi nhiӋt đӝ tӕi ưu hoҥt tính enzyme đҥt cӵc đҥi Mӛi enzyme có mӝt nhiӋt đӝ tӕi ưu riêng Đa sӕ enzyme có nhiӋt đӝ tӕi ưu vào khoҧng 40 - 500C Khi nhiӋt

đӝ tiӃp tөc tăng cao phân tӱ enzyme sӁ bӏ biӃn tính làm giҧm hoһc mҩt hoҥt tính, ít khi có khҧ năng phөc hӗi lҥi đưӧc Ngưӧc lҥi, ӣ nhiӋt đӝ dưӟi 00C hoҥt

đӝ enzyme tuy bӏ suy giҧm nhưng lҥi có thӇ tăng lên khi đưa vӅ nhiӋt đӝ bình thưӡng

Cellulase cӫa các chӫng vi khuҭn chӏu nhiӋt phân lұp tӯ bӇ ӫ rác thҧi có hoҥt tính mҥnh nhҩt ӣ 550

có hoҥt tính mҥnh nhҩt ӣ 500

0

0C

ü 

pH môi trưӡng có ҧnh hưӣng đӃn hoҥt tính cӫa cellulase vì nó ҧnh hưӣng đӃn mӭc đӝ ion hóa cӫa cơ chҩt và enzyme Tùy thuӝc vào bҧn chҩt cӫa enzyme mà pH thích hӧp đӇ enzyme hoҥt đӝng có thӇ trung tính, kiӅm hoһc acid Mӝt sӕ nghiên cӭu trưӟc đây cho thҩy pH thích hӧp đӕi vӟi

DTQ-HK1 là 4,5; cӫa cellulase tӯ â 
 Z10 LÀ 4,5 VÀ 7,5; cӫa endoglucanase III tӯ â   KBN616 là 4,0 và 5,0

Các ion kim loҥi có thӇ làm tăng hoһc giҧm hoҥt tính cӫa enzyme Các ion kim loҥi thưӡng kӃt hӧp trӵc tiӃp vӟi phân tӱ enzyme làm thay đәi cҩu hình không gian làm ҧnh hưӣng tӟi khҧ năng xúc tác cӫa enzyme Theo nghiên cӭu cӫa Trӏnh Đình Khá các ion kim loҥi như Cu2+, K+, Mg2+,

Ca2+, Ag+, Co2+, Fe3+, Zn2+, Ni2+, EDTA đӅu làm giҧm hoҥt tính cellulase cӫa

2+ ( 2Mm), 59% khi ӫ vӟi Cu2+ (2mM)

 

Cellulase đưӧc tәng hӧp tӯ nhiӅu nguӗn gӕc khác nhau như vi sinh vұt, thӵc vұt và đӝng vұt Trong đó chӫ yӃu cellulase đưӧc sinh tәng hӧp bӣi vi sinh vұt gӗm các nhóm như vi khuҭn, xҥ khuҭn và nҩm

- Vi khuҭn: các chi có khҧ năng sinh tәng hӧp cellulase mҥnh như

- Xҥ khuҭn: xҥ khuҭn có khҧ năng sinh tәng hӧp cellulase mҥnh gӗm

- Nҩm: nҩm đưӧc coi là nhóm có khҧ năng sinh tәng hӧp cellulase mҥnh nhҩt Chúng có khҧ năng tiӃt ra môi trưӡng mӝt lưӧng lӟn enzyme đҫy đӫ thành phҫn Theo nghiên cӭu, cellulase đưӧc sinh bӣi các loài thuӝc chi

protozoa và đӝng vұt không xương như mӕi và đӝng vұt thân mӅm như

 i ii 

Pectin là polymer cӫa Į ± D ± galacturonic nӕi vӟi nhau nhӡ liên kӃt Į ± 1,4 ±glycoside Ngoài ra, trong thành phҫn mҥch chính cӫa pectin còn có các gӕc đưӡng rhamnose nҵm xen kӁ hay liӅn kӅ nhau Pectin cũng chӭa mӝt lưӧng nhӓ D ± galactan, aribinan (trong nhӳng đoҥn mҥch mӣ rӝng) và mӝt lưӧng ít hơn fucose và xylose ӣ nhӳng đoҥn mҥch ngҳn (thưӡng chӍ tӯ

1 -3 gӕc đưӡng) Nhӳng đoҥn mҥch ngҳn này không đưӧc coi là thành phҫn chính cӫa pectin

Các gӕc carboxyl cӫa acid galacturonic trong mҥch pectin bӏ ester hóa vӟi methanol, còn các gӕc ±OH ӣ C2 và C3 có thӇ bӏ acetyl hóa vӟi t lӋ thҩp

8

Pectin không hòa tan trong rưӧu và các dung môi hӳu cơ mà hòa tan trong nưӟc, amoniac, dung dӏch kiӅm, natricarbonate và glycerine nóng Đӝ hòa tan cӫa pectin trong nưӟc tăng lên khi mӭc đӝ ester hóa trong phân tӱ pectin tăng và khi khӕi lưӧng phân tӱ pectin giҧm

Trong thӵc vұt, pectin tӗn tҥi dưӟi 3 dҥng:

- Pectin hòa tan

- Pectinic acid

- Protopectin

Đӝ bӅn cӫa pectin cao nhҩt tҥi pH 3 ± 4 So vӟi các liên kӃt ester, liên kӃt glycoside bӏ thӫy phân trong môi trưӡng acid mҥnh hơn, còn trong môi trưӡng kiӅm, cҧ 2 dҥng liên kӃt này đӅu bӏ cҳt đӭt vӟi mӭc đӝ như nhau Tҥi pH 3 hoһc khi có mһt ion Ca2+ tҥi nhӳng giá trӏ pH cao hơn, pectin tҥo thành gel thuұn nghӏch Khҧ năng tҥo gel cӫa pectin t lӋ thuұn vӟi trӑng lưӧng phân tӱ và t lӋ nghӏch vӟi mӭc đӝ ester hóa ĐӇ tҥo thành gel, pectin có mӭc đӝ ester hóa thҩp cҫn giá trӏ pH thҩp và/hoһc phҧi thêm vào ion Ca, tuy nhiên nó có thӇ tҥo gel khi có mһt hàm lưӧng đưӡng tương đӕi thҩp Pectin có mӭc đӝ ester hóa cao đòi hӓi lưӧng đưӡng cao hơn và cҫn thӡi gian dài hơn đӇ tҥo gel

Trong tӵ nhiên, pectin phân bӕ rӝng rãi trong nhiӅu loҥi thӵc vұt Nó đưӧc sҧn xuҩt công nghiӋp tӯ vӓ các loҥi quҧ thuӝc hӑ cam quýt và tӯ bã táo (sau khi nghiӅn và ép hӃt nưӟc) Tách chiӃt pectin đưӧc thӵc hiӋn ӣ pH 1,5 ± 3 và nhiӋt đӝ 60 ± 1000C Quá trình đưӧc kiӇm soát chһt chӁ đӇ tránh hiӋn tưӧng thӫy phân các liên kӃt glycoside và liên kӃt ester Dӏch chiӃt đưӧc cô đһc đӇ thu pectin dҥng lӓng hay sҩy phun đӇ thu pectin dҥng bӝt

Có thӇ tinh sҥch pectin bҵng cách kӃt tӫa khi có mһt các ion như Al3+, sau

đó rӱa vӟi alcohol đӇ loҥi ion, hoһc kӃt tӫ bҵng rưӧu như isopropanol và ethanol

Pectinase là hӋ enzyme xúc tác sӵ phân hӫy cӫa các polymer pectin Sӵ phân hӫy pectin trong tӵ nhiên thưӡng xҧy ra khi trái cây chín, vì vұy mà hӋ

enzyme này có vai trò hӃt sӭc quan trӑng trong quá trình bҧo quҧn trái cây

và rau quҧ

c


không g

n cͯa pecnase

2. Phân  i

±Ӌ enzyme pectinase bao gӗm các nhóm sau:

W  ectin ± esterase

W  olygalacturonase

W  ectate lyase

W  rotopectinase

W Transeliminase

W  ectin lyase

å  Cơ chӃ tác đӝng

å ŒPectin ± esterase

nhóm carboxyl cӫa acid galacturonic trong phân tӱ pectin tҥo thành acid pectinic hoһc acid pectic và methanol Enzyme này có thӇ nhұn đưӧc t

nҩm mӕc â 
 (p±opt 4,5 ± 5,5; toopt 40 ± 50oC) và t thӵc vұt (p±opt 7,5 ± 8; toopt 55 ± 60oC) Khҧ năng hoҥt đӝng cӫa chúng tùy thuӝc vào nguӗn thu

10

nhұn, mӭc đӝ ester hóa cӫa pectin Chúng đưӧc hoҥt hóa bӣi Ca2+ và bӏ

vô hoҥt bӣi các ion hóa trӏ III, IV như Hg, Pb, Al hay Fe

å Î  

Còn có tên gӑi là poly Į ± 1,4 ± galacturoniglucanohydrolase, thӫy phân các liên kӃt Į ± 1,4 ± D ± galactoside giӳa các gӕc acid galacturonic Polygalacturonase ít gһp trong thӵc vұt mà chӍ có chӫ yӃu ӣ mӝt sӕ nҩm mӕc và vi khuҭn Đó là mӝt phӭc hӋ enzyme gӗm nhiӅu cҩu tӱ và có tính đһc hiӋu cao đӕi vӟi cơ chҩt Có 2 loҥi là:

- Polygalacturonase: tác đӝng lên acid pectic (không chӭa nhóm methyl) Enzyme này lҥi đưӧc phân thành 2 nhóm nhӓ đó là endo ± glucosidase ± polygalacturonase và exo ± glucosidase - polygalacturonase

- Polymethylgalacturonase: tác đӝng lên pectin (methyl hóa) Nó cũng đưӧc phân thành 2 nhóm nhӓ là endo ± glucosidase ± polymethyl galacturonase và exo - glucosidase ± polymethyl galacturonase

Tương tӵ như amylase, các polygalacturonase cũng có loҥi dӏch hóa hay các endo enzyme Chúng phân cҳt các liên kӃt polymer và làm giҧm nhanh chóng đӝ nhӟt cӫa dung dӏch pectin Enzyme đưӡng hóa (exo ± enzyme) thӫy phân pectin cho sҧn phҭm cuӕi cùng là các acid pente -, tetra -, di ± và trigalacturonic Polygalacturonase xuҩt hiӋn ӣ thӵc vұt và vi sinh vұt

(thưӡng thu đưӧc tӯ nҩm mӕc â
 ) Chúng có toopt 40 - 45oC, pHopt trong vùng acid yӃu và đưӧc hoҥt hóa bӣi ion Ca2+ hoһc NaCl

å å  

Là enzyme phân cҳt các đơn vӏ galacturonate không bӏ ester hóa Cҧ 2 enzyme exo ± pectate lyase và endo - pectate lyase đӅu tӗn tҥi Pectate và pectin có lưӧng methoxyl thҩp là các cơ chҩt thích hӧp nhҩt cho các enzyme này Pectate lyase không đưӧc tìm thҩy trong cây xanh nhưng lҥi có

ӣ vi khuҭn và nҩm Các enzyme vi sinh vұt ngoҥi bào này đóng mӝt vai trò rҩt quan trӑng trong quá trình gây bӋnh ӣ thӵc vұt, gây ra sӵ phân hӫy mô cӫa thành tӃ bào, làm mӅm và làm mөc mô thӵc vұt

å   

Là enzyme phân tách các thành phҫn như araban và galactan khӓi protopectin đӇ tҥo thành pectin hòa tan Đây là mӝt trong nhӳng enzyme có vai trò quan trӑng trong quá trình chín cӫa quҧ

å ü  Tii

Là enzyme phân hӫy pectin không theo con đưӡng thӫy phân Chúng có khҧ năng làm đӭt các liên kӃt Į ± 1,4 ± galactoside đӇ tҥo ra các đơn phân là acid galacturonic có chӭa nӕi đôi (4 ± deoxy ± 5 ± ketogalacturonicacid) Transeliminase nhұn đưӧc tӯ nhӳng nguӗn khác nhau có cơ chӃ tác dөng và các tính chҩt khác nhau Enzyme tӯ nҩm mӕc có pHopt trong vùng acid yӃu (5,2), ngưӧc lҥi enzyme tӯ vi khuҭn (như B.polymyxa) lҥi có pHopt trong vùng trung tính (7 ± 8,5) Có 2 loҥi là:

- Pectin ± transeliminase hay còn gӑi là poly Į -1,4 ± galaturonite ± methylesteglucanoliase: tác dөng trên pectin và pectinic acid

- Polygalactorunate ± transeliminase hay còn gӑi là poly Į -1,4 D ± galacturonite ± glucanoliase: tác dөng trên pectic acid và pectinic acid

å  

Là enzyme xúc tác sӵ phân cҳt các đơn vӏ galacturonate đҥ bӏ ester hóa Tҩt

cҧ các pectin lyase đӅu là endo ± enzyme

Pectin trong thӵc phҭm có nguӗn gӕc thӵc vұt bӏ tҩn công bӣi các enzyme:

- Pectin ± esterase

- Polygalacturonase

- Protopectinase

- Transeliminase

theo các cơ chӃ đã nêu trên

  T

Nguӗn giàu enzyme pectinase là nҩm mӕc, nҩm men và vi khuҭn

Các loài VSV này thưӡng có trong bӅ mһt tҩt cҧ các loҥi quҧ, các bӝ phұn khác cӫa thӵc vұt Khi quҧ bӏ hư hӓng hoһc thӵc vұt bӏ chӃt, chúng sӁ cùng các loài VSV khác phá hӫy rҩt nhanh quҧ và các bӝ phұn cӫa thӵc vұt HiӋn nay, ngưӡi ta thu nhұn pectinase chӫ yӃu tӯ vi sinh vұt Có 2 phương pháp thu nhұn pectinase:

12

Môi trưӡng sӱ dөng nuôi cҩy VSV đӇ thu nhұn pectinase thưӡng

là cám gҥo, hay cám mì, bã cӫ cҧi hoһc thóc mҫm Nguӗn dinh dưӥng bә sung thưӡng là muӕi amonium, phosphoric Đӝ ҭm môi trưӡng phҧi nҵm trong khoҧng 60% Nҩm mӕc A.awamori thưӡng đưӧc nuôi cҩy ӣ 300C trong thӡi gian 40h, sau đó giҧm xuӕng 24oC

và nuôi trong 48 ± 52h Sҧn phҭm sau lên men đưӧc sҩy khô thành chӃ phҭm enzyme thô và đem tinh chӃ

ĐӇ thu đưӧc chӃ phҭm pectinase tinh khiӃt thì chӃ phҭm enzyme thô phҧi đưӧc trích ly bҵng phương pháp kӃt tӫa nhӡ dung môi hӳu

cơ hay muӕi amonium sulfat Dung môi hӳu cơ sӱ dөng đӇ kӃt tӫa enzyme pectinase có thӇ là rưӧu ethanol (72,5 ± 75%) hoһc isopropanol (55 ± 57%) Muӕi amonium sulfat sӱ dөng có đӝ bão hòa 0,79 Khi kӃt tӫa bҵng rưӧu ethanol, chӃ phҭm enzyme thu đưӧc

có đӝ tinh khiӃt khoҧng 90%, còn nӃu bҵng muӕi thì đӝ tinh khiӃt đҥt khoҧng 75% NhiӋt đӝ kӃt tӫa tӕi ưu đӕi vӟi rưӧu là 2 -5oC, thӡi gian tiӃp xúc vӟi rưӧu càng ngҳn càng tӕt Sau đó, ly tâm đӇ tách kӃt tӫa khӓi dung dӏch, sҩy kӃt tӫa trong thiӃt bӏ sҩy chân không hay sҩy thăng hoa rӗi nghiӅn nhӓ và đem bҧo quҧn



-   !
":

pH cӫa môi trưӡng nuôi cҩy thưӡng đҥt tӯ 6 ± 7,2 là thích hӧp Vұt liӋu gieo cҩy có thӇ là sӧi nҩm 24, 32 và 48h tuәi, hàm lưӧng tӯ 2 -10% Trong quá trình nuôi cҩy, hàm lưӧng các chҩt hòa tan trong môi trưӡng thưӡng giҧm tӯ 6% xuӕng còn 1,5 ± 1,8%

ĐӇ thu chӃ phҭm khô, cҫn tách sӧi nҩm ra khӓi canh trưӡng lӓng

Cô đһc chân không canh trưӡng lӓng đӃn khi hàm lưӧng chҩt khô đҥt 5

± 8% rӗi sҩy khô trên thiӃt bӏ sҩy phun ĐiӅu kiӋn sҩy phun là nhiӋt đӝ chҩt tҧi nhiӋt đi vào phҧi đҥt 165 ± 180oC và đi ra phҧi đҥt 60 ± 70oC

Thӡi gian lưu chӃ phҭm enzyme trong thiӃt bӏ sҩy phun không quá 7 giây và nhiӋt đӝ chӃ phҭm sau khi sҩy không đưӧc quá 40oC ChӃ phҭm thu đưӧc cҫn phҧi đóng gói kín đӇ tránh hút ҭm Ngoài ra, có thӇ thu chӃ phҭm pectinase tinh khiӃt bҵng cách kӃt tӫa enzyme trong dӏch lӑc canh trưӡng vӟi ethanol theo t lӋ 4 : 1, vӟi aceton theo t lӋ 2:1, vӟi isopropanol theo t lӋ 1,3:1 hoһc vӟi muӕi amonium sulfat (50 ± 80% trong muӕi kӃt tӫa)

...

Tӕc đӝ phҧn ӭng enzyme xúc tác chӍ tăng theo nhiӋt đӝ mӝt giӟi hҥn xác đӏnh mà ӣ phân tӱ enzyme vүn cịn bӅn chưa bӏ biӃn tính Tҥi nhiӋt đӝ tӕi ưu hoҥt tính enzyme đҥt cӵc đҥi Mӛi enzyme có mӝt... thӇ hiӋn qua sơ đӗ sau:

Enzyme C1 Cellulose kӃt tinh C1

Cellulose vơ đӏnh hình

Enzyme Cx

Oligomer

Enzyme C1