Khảo sát một số chỉ tiêu của vacxin nhược độc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào tại xí nghiệp thuốc thú y trung ương

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  NGUYỄN THỊ THU HIỀN KHẢO SÁT MỘT SỐ CHỈ TIÊU CỦA VACXIN NHƯỢC ðỘC DỊCH TẢ VỊT SẢN XUẤT TRÊN MÔI TRƯỜNG TẾ BÀO TẠI XÍ NGHIỆP THUỐC THÚ Y TRUNG ƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI – 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  NGUYỄN THỊ THU HIỀN KHẢO SÁT MỘT SỐ CHỈ TIÊU CỦA VACXIN NHƯỢC ðỘC DỊCH TẢ VỊT SẢN XUẤT TRÊN MÔI TRƯỜNG TẾ BÀO TẠI XÍ NGHIỆP THUỐC THÚ Y TRUNG ƯƠNG CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y Mà NGÀNH : 60.62.01.05 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : TS. TRẦN THỊ LAN HƯƠNG HÀ NỘI – 2013 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác. Tôi xin cam ñoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Mọi sự giúp ñỡ ñã ñược cảm ơn. Hà Nội, ngày … tháng … năm 2013 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Thu Hiền Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ii LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành bản luận văn này, ngoài sự cố gắng, nỗ lực hết mình của bản thân còn có sự hướng dẫn tận tình của cô hướng dẫn khoa học TS. Trần Thị Lan Hương, người ñã giành nhiều thời gian quý báu tận tình giúp ñỡ, hướng dẫn tôi trong suốt quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn: - Ban giám ñốc Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương. - Tập thể cán bộ công nhân viên trong phân xưởng vacxin virus ñông khô, phòng Kiểm nghiệm Siêu trùng – Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương - Viện ñào tạo sau ñại học – Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội. ðã tận tình giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Nhân dịp này, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia ñình, người thân, bạn bè, ñồng nghiệp - Những người luôn tạo ñiều kiện, ñộng viên, giúp ñỡ tôi vượt qua mọi khó khăn trong quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày … tháng … năm 2013 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Thu Hiền Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp iii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục các chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục ñồ thị viii 1 ðẶT VẤN ðỀ 1 1.1 Tính cấp thiết của ñề tài 1 1.2 Mục ñích của ñề tài 2 1.3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ñề tài 2 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 2.1 Giới thiệu chung về bệnh dịch tả vịt 3 2.1.1 Lịch sử và phân bố bệnh trên thế giới và tại Việt Nam. 3 2.1.2 Virus dịch tả vịt 5 2.1.3 Bệnh dịch tả vịt 8 2.2 Vacxin dịch tả vịt 13 2.3 Những yêu cầu cơ bản trong sản xuất vacxin Dịch tả vịt. 16 2.3.1 Virus giống và các ñặc ñiểm của virus giống. 16 3 ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.1 ðối tượng nghiên cứu 21 3.2 Nội dung 21 3.2.1 Kiểm tra các chỉ tiêu kỹ thuật của vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào xơ phôi gà. 21 3.2.2 ðánh giá ñộ dài miễn dịch của vịt sau khi tiêm vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào xơ phôi gà 21 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp iv 3.2.3 Kiểm tra thời gian bảo quản của vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào xơ phôi gà sau thời gian lưu kho ở nhiệt ñộ 2 o -8 o C. 21 3.3 ðịa ñiểm nghiên cứu 21 3.4 Nguyên liệu 21 3.5 Phương pháp nghiên cứu 22 3.5.1 Phương pháp lấy mẫu theo 10 TCN 160 - 92 Vacxin thú y - Quy trình lấy mẫu và sử dụng mẫu trong kiểm nghiệm 22 3.5.2 Phương pháp chuẩn ñộ hiệu giá virus trên môi trường tế bào xơ phôi gà 1 lớp 22 3.5.3 Phương pháp kiểm tra chỉ tiêu thuần khiết. 23 3.5.4 Phương pháp kiểm tra chỉ tiêu an toàn 24 3.5.5 Phương pháp kiểm tra chỉ tiêu hiệu lực 25 3.5.6 Phương pháp xác ñịnh ñộ dài miễn dịch của vịt sau khi tiêm vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào 25 3.5.7 Phương pháp kiểm tra thời gian bảo quản của vacxin nhược ñộc dịch tả vịt ñông khô sản xuất trên môi trường tế bào sau thời gian lưu kho ở 2 – 8 0 C. 26 3.5.8 Phương pháp xử lý số liệu 26 4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 Kiểm tra các chỉ tiêu kỹ thuật của vacxin nhược ñộc dịch tả vịt ñông khô sản xuất trên môi trường tế bào xơ phôi gà một lớp. 27 4.1.1 Kết quả xác ñịnh hiệu giá virus của các lô vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sau khi nuôi cấy trên môi trường tế bào xơ phôi gà một lớp. 28 4.1.2 Kết quả kiểm nghiệm vacxin nhược ñộc dịch tả vịt ñông khô sản xuất trên môi trường tế bào. 30 4.6 Kết quả xác ñịnh ñộ dài miễn dịch của vịt sau khi tiêm vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào. 40 4.3 Kết quả kiểm tra thời gian bảo quản của vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào sau thời gian lưu kho ở nhiệt ñộ 2 – 8 o C. 44 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp v 5 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 47 5.1 Kết luận 47 5.2 ðề nghị 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CPE Cytopathic effect EID 50 50% Egg-infective dose LD 50 50 percent Lethal Dose MEM Minimal essential medium PBS Phosphate buffered saline SPF Specific pathogen free TCID 50 Tissue culture infective dose TCN Tiêu chuẩn ngành TN Thí nghiệm VN Virus Neutralization Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp vii DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 4.1 Kết quả xác ñịnh hiệu giá virus của các lô vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên tế bào xơ phôi gà. 28 4.2 Kết quả kiểm tra tạp nhiễm vi khuẩn, nấm của vacxin nhược ñộc dịch tả vịt ñông khô sản xuất trên môi trường tế bào. 31 4.3 Kết quả kiểm tra tạp nhiễm virus viêm gan vịt ở vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào. 32 4.4 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn trong phòng thí nghiệm của vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào. 34 4.5 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên tế bào tại ñịa phương (Từ Liêm, Hoài ðức, Hà Nội). 35 4.6 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu hiệu lực của vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào 38 4.7 Kết quả xác ñịnh ñộ dài miễn dịch của vịt sau khi tiêm vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào. 41 4.8 Kết quả kiểm tra thời gian bảo quản của vacxin nhược ñộc dịch tả vịt ñông khô sản xuất trên môi trường tế bào khi lưu kho ở nhiệt ñộ 2 – 8 0 C. 45 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp viii DANH MỤC ðỒ THỊ STT Tên biểu ñồ Trang 4.1 Sơ ñồ quy trình sản xuất vacxin nhược ñộc dịch tả vịt ñông khô trên môi trường tế bào xơ phôi gà. 27 4.2 Tế bào xơ phôi gà một lớp không gây nhiễm virus 30 4.3 CPE do virus dịch tả vịt chủng C gây ra 30 4.4 Vịt chết do mắc dịch tả vịt 36 4.5 Gan sưng, tụ máu, hoại tử. 36 4.6 Tỷ lệ bảo hộ của vịt sau khi dùng vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào 40 4.7 Dạ dày tuyến xuất huyết 43 4.8 ðộ dài miễn dịch của vịt sau khi tiêm vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào. 44 4.9 Tỷ lệ bảo hộ của vacxin nhược ñộc dịch tả vịt ñông khô sản xuất trên môi trường tế bào sau các thời gian lưu kho ở nhiệt ñộ 2- 8 0 C. 46 [...]... kh ng ñ nh ch t lư ng vacxin Như c ñ c d ch t v t ñông khô nuôi c y trên môi trư ng t bào nói trên, chúng tôi ñã ti n hành nghiên c u ñ tài: “Kh o sát m t s ch tiêu c a vacxin như c ñ c d ch t v t s n xu t trên môi trư ng t bào t i Xí nghi p thu c thú y Trung ương" 1.2 M c ñích c a ñ tài - Xác ñ nh ñư c m t s ch tiêu c a vacxin Như c ñ c d ch t v t khi s n xu t trên môi trư ng t bào và ñ dài mi n d ch,... NGUYÊN LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 3.1 ð i tư ng nghiên c u - Vacxin như c ñ c d ch t v t s n xu t trên môi trư ng t bào xơ phôi gà t i Xí nghi p thu c thú y Trung ương 3.2 N i dung 3.2.1 Ki m tra các ch tiêu k thu t c a vacxin như c ñ c d ch t v t s n xu t trên môi trư ng t bào xơ phôi gà - Xác ñ nh hi u giá virus c a lô vacxin sau khi nuôi c y trên môi trư ng t bào xơ phôi gà - Ki m nghi m vacxin. .. Nguy n ð c Hi n (1999) nghiên c u và k t lu n phương pháp nh m t ho c tiêm b p ho c k t h p c hai ñ u cho ñáp ng mi n d ch tương ñ i gi ng nhau và ñ t t l b o h hơn 70% Nguy n Ng c Huân (2006) khuy n cáo s d ng vacxin d ch t v t ñông khô c a Navetco trong quy trình thú y an toàn d ch b nh áp d ng cho v t nuôi nông h Vacxin D ch t v t do Xí nghi p thu c thú y Trung ương s n xu t b ng công ngh c y chuy... ñư c ti n hành trên phôi tr ng v t, phôi tr ng gà và môi trư ng nuôi c y t bào *Ki m tra thu n khi t M i lô vacxin dich t v t như c ñ c ph i ñư c ki m tra t p nhi m vi khu n, n m hay virus viêm gan v t *Ki m tra an toàn Ti n hành ki m tra an toàn c a vacxin d ch t v t trên môi trư ng nuôi c y t bào theo TCN 183 – 93 Vacxin thú y – Quy trình ki m nghi m vacxin Như c ñ c d ch t v t» Tiêm vacxin vào dư... c y virus D ch t v t ch ng C trên môi trư ng t bào xơ phôi gà 1 l p ñ s n xu t vacxin Như c ñ c d ch t v t ñông khô”, ñã bư c ñ u thành công và x y d ng ñư c quy trình s n xu t vacxin D ch t v t b ng virus D ch t v t ch ng C g y nhi m trên t bào xơ phôi gà 1 l p Công ngh s n xu t vacxin b ng phương pháp nuôi c y t bào là công ngh tiên ti n hi n ñang ñư c nhi u nư c, cũng như nhi u công ty s n xu t vacxin. .. n 100%, g y t n th t l n v kinh t cho ngư i chăn nuôi ð phòng b nh D ch t v t, bi n pháp an toàn, hi u qu và kinh t nh t là tiêm phòng vacxin Vacxin như c ñ c d ch t v t ch ng C là vacxin truy n th ng c a Xí nghi p thu c thú y Trung ương ñư c s n xu t b ng cách g y nhi m virus như c ñ c d ch t v t ch ng C trên phôi v t M i năm xí nghi p s n xu t và cung ng kho ng trên 20 tri u li u vacxin Vacxin có... y virus vào 36 gi , t bào b t ñ u có bi n ñ i, co tròn và ph ng lên ð n 48 gi trên m t l p t bào ñã có nh ng thoái hóa, t bào r ng ra kh i thành bình Theo Nguy n Như Thanh (2001), có th nuôi c y virus d ch t v t trên môi trư ng t bào xơ phôi gà và phôi v t m t l p Virus g y h y ho i t bào sau 48 gi g y nhi m Quan sát Plague c a virus d ch t v t, ngư i ta nh n th y: sau 48 gi g y nhi m các Plague b t... – Truy n nhi m – B nh lý, trư ng ðHNNHN nh n th y virus r t thích ng trên môi trư ng nuôi t bào xơ phôi gà Ch sau 24 gi c y virus, t bào ñã b t ñ u có hi n tư ng h y ho i, b nh tích t bào ch y u th hi n là hi n tư ng t bào b bi n d ng, co tròn, phình to ra, t p trung thành t ng ñám, có th nhìn rõ dư i kính hi n vi quang h c + Nuôi c y trên ñ ng v t c m th Có th dùng v t con 1 ng y tu i ñ nuôi c y virus... nh ph m vào các chai t bào ñã ñư c nuôi c y Quan sát b nh tích t bào (CPE) sau khi g y nhi m: Hình thành các ñám t bào to, tròn và tr nên ho i t sau 2 – 4 ng y ð giám ñ nh virus, b ng phương pháp trung hòa trên tr ng v t có phôi sau ñó tính toán ch s trung hòa NI (Neutralization index) N u k t qu phân l p và giám ñ nh dương tính v i kháng huy t thanh chu n (b ng phương pháp trung hòa VN), k t lu n... truy n nhi m c p tính, l y lan m nh c a loài thu c m do m t lo i Herpesvirus thu c h Herpesvirideae g y ra v i tri u ch ng ch y u: s t cao, ch y nư c m t, sưng ñ u, li t chân, a ch y phân xanh B nh tích ñ c trưng thư ng th y ñư ng tiêu hóa: th c qu n, nh p xu t huy t, d d y tuy n, cơ xu t huy t, gan sưng ho i t (Nguy n Như Thanh và Cs, 2001) 2.1.1 L ch s và phân b b nh trên th gi i và t i Vi t Nam * Trên . nuôi c y trên môi trường tế bào nói trên, chúng tôi ñã tiến hành nghiên cứu ñề tài: Khảo sát một số chỉ tiêu của vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào tại Xí nghiệp thuốc. thí nghiệm của vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào. 34 4.5 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin nhược ñộc dịch tả vịt sản xuất trên tế bào tại ñịa phương (Từ. TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  NGUYỄN THỊ THU HIỀN KHẢO SÁT MỘT SỐ CHỈ TIÊU CỦA VACXIN NHƯỢC ðỘC DỊCH TẢ VỊT SẢN XUẤT TRÊN MÔI TRƯỜNG TẾ BÀO TẠI XÍ NGHIỆP THUỐC THÚ Y