3. đỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.5.2. Phương pháp chuẩn ựộ hiệu giá virus trên môi trường tế bào xơ phôi gà 1 lớp
- Vịt nuôi thắ nghiệm từ 1-7ngày tuổi, sinh ra từ ựàn vịt bố mẹ khoẻ mạnh, chưa tiêm phòng vacxin dịch tả vịt.
- Vịt nuôi thắ nghiệm từ 0,7-1kg, khoẻ mạnh, không nằm trong ổ dịch, chưa tiêm phòng vacxin dịch tả vịt.
- Dụng cụ và hoá chất phòng thắ nghiệm
3.5. Phương pháp nghiên cứu
3.5.1. Phương pháp lấy mẫu theo 10 TCN 160 - 92 Vacxin thú y - Quy trình lấy mẫu và sử dụng mẫu trong kiểm nghiệm mẫu và sử dụng mẫu trong kiểm nghiệm
Mẫu kiểm nghiệm là các ựơn vị sản phẩm ựược lấy ra từ các lô vacxin ựể tiến hành kiểm nghiệm trước khi xuất sử dụng và lưu giữ trong thời hạn bảo quản của vacxin ựể giải quyết các tranh chấp nếu có.
- Mẫu ựược lấy theo lô vacxin. Lô vacxin là toàn bộ các sản phẩm ựược chia vào vật chứa cuối cùng, từ cùng một khối lượng vacxin ựồng nhất, trong cùng một ca sản xuất.
- Mẫu lấy theo phương pháp ngẫu nhiên theo tỷ lệ sau:
Mỗi lô vacxin lấy 1% số thành phẩm (tối thiểu 3 mẫu, tối ựa 20 mẫu)
3.5.2. Phương pháp chuẩn ựộ hiệu giá virus trên môi trường tế bào xơ phôi gà 1 lớp lớp
Ớ Chuẩn ựộ trên tấm nhựa 96 giếng
- Dùng môi trường Eagle MEM pha loãng virus nhược ựộc dich tả vịt theo cơ số 10 ựể có dãy nồng ựộ từ 10-1 ựến 10-8.
- Tấm nhựa 96 giếng, ựáy phẳng, có tế bào xơ phôi gà phát triển tốt, tế bào mịn, phủ kắn diện tắch nuôi, tế bào ựã bám chắc, sau ựó ựổ môi trường cũ ựị
- Gây nhiễm virus ở các nồng ựộ ựã pha loãng vào các giếng của tấm nhựa, mỗi nồng ựộ gây nhiễm vào một dãy 5 giếng, liều 0,1 ml cho 1 giếng.
- để trong tủ ấm 370C, hàng ngày quan sát bệnh tắch tế bào do virus gây ra bằng kắnh hiển vi soi ngược.
- Ghi kết quả các giếng các nồng ựộ pha loãng có hay không có bệnh tắch tế bàọ - Tắnh toán liều gây nhiễm 50% TCID50 theo phương pháp Reed -Muench. Theo công thức Reed Muench, liều gây hủy hoại 50% hay liều gây nhiễm 50% tế bào ựược tắnh như sau:
Log TCID50 = Log A + X1log f = log B + X2log f X1 = B - A 50 - A ′ ′ ′ X2 = B - A 50 ' B ′ ′ − Trong ựó:
− A: Số mũ nồng ựộ gây CPE cận trên 50% − B: Số mũ nồng ựộ gây CPE cận dưới 50% − A/: Tỷ lệ % CPE > 50%
− B/: Tỷ lệ % CPE < 50% − f: Bậc pha loãng virus 1/10