Bước đầu nghiên cứu thu nhận Bacteriocin từ vi khuẩn Lactobacillus plantarum Atcc8014 ứng dụng làm phụ gia thực phẩm

TRƢỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP Tên đề tài: BƢỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU THU NHẬN BACTERIOCIN TỪ VI KHUẨN LACTOBACILLUS PLANTARUM ATCC8014 ỨNG DỤNG LÀM PHỤ GIA THỰC PHẨM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM GVHD: Th S Nguyễn Thị Lệ Thủy Th S Nguyễn Thị Phƣơng Khanh SVTH: Trần Thị Tốn MSSV: 1053010806 Khóa: 2010-2014 Bình Dƣơng, ngày 16 tháng năm 2014 Nhớ ngày bỡ ngỡ bƣớc chân vào giảng đƣờng đại học gần bốn năm học trôi qua, biết kĩ niệm buồn vui thầy cô bạn bè phải chia tay Bốn năm khoảng thời gian vô quý báu cho thân em, khoảng thời gian giúp em tích lũy đƣợc nhiều kinh nghiệm kĩ cần thiết để bƣớc vào sống mn màu chơng gai phía trƣớc Để có đƣợc kiến thức nhờ quan tâm chăm sóc nhà trƣờng, dạy dỗ tận tình thầy cơ, chia sẽ, động viên, giúp đỡ gia đình bạn bè Lời em xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu trƣờng Đại học Mở thành phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện vật chất tinh thần để em có hội học tập phấn đấu Lời cảm ơn em xin gửi đến thầy cô khoa công nghệ sinh học đặc biệt thầy cô chuyên ngành thực phẩm Tiếp theo em xin chân thành cảm ơn Giảng viên – Th.S Nguyễn Thị Phƣơng Khanh toàn thể anh chị, bạn bè em phịng thí nghiệm sinh hóa, phịng thí nghiệm vi sinh-trƣờng Đại học Mở thành phố Hồ chí Minh tạo điều kiện giúp đỡ em hoàn thành đề tài Em xin chúc cô luôn mạnh khỏe, gặt hái nhiều thành công Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đên Nguyễn Thị Lệ Thủy tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ, động viên truyền đạt kiến thức quý báu suốt thời gian thực đề tài thực tập khóa luận tốt nghiệp Khơng truyền đạt kiến thức cần thiết mà dạy em cách làm ngƣời kinh nghiệm sống Một lần em cảm ơn cô, chúc ln vui vẻ, khỏe mạnh bên gia đình, ngƣời thân bạn bè, chúc cô gặt hái thêm nhiều thành công sống Lời cuối em xin cảm ơn đến ba mẹ, ngƣời cho em đến với đời này, ngƣời nuôi dạy tạo điều kiện tốt để em học tập, tiếp xúc với đời, với thầy cô, bạn bè, với hội chờ em tƣơng lai Con xin cảm ơn ba mẹ, chúc ba mẹ lời chúc sức khỏe, luôn cƣời cuốc sống đầy chông gai MỤC LỤC DANH MỤC NHỮNG TỪ VIẾT TẮT i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH iii ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ VI KHUẨN LACTIC 1.1.1 Đặc điểm chung vi khuẩn lactic 1.1.2 Phân loại vi khuẩn lactic 1.1.3 Nhu cầu dinh dƣỡng vi khuẩn lactic 1.1.4 Hoạt động sinh hóa, trao đổi chất vi khuẩn lactic 1.2 GIỚI THIỆU VỀ VI KHUẨN LACTOBACILLUS PLANTARUM 1.2.1 Đặc điểm 1.2.2 Vai trò 1.2.3 Cơ cấu gen 1.2.4 Sinh thái học sinh lý bệnh 1.3 TỔNG QUAN VỀ BACTERIOCIN 10 1.3.1 Định nghĩa 10 1.3.2 Bacteriocin từ LAB 11 1.3.3 Phân loại bacteriocin 12 1.3.4 Đặc tính bacteriocin 13 1.3.6 Phổ hoạt động bacteriocin 15 1.3.7 Phƣơng thức hoạt động bacteriocin 15 1.3.8 Ứng dụng bacteriocin 16 PHẦN 2: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM THỰC HIỆN ĐỀ TÀI 23 2.1.1 Thời gian 23 2.1.2 Địa điểm 23 2.1.3 Môi trƣờng 23 2.2 VẬT LIỆU THÍ NGHIỆM 24 2.2.1 Chủng vi sinh vật 24 2.2.2 Hóa chất 24 2.3 NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.3.1 Phƣơng pháp nghiên cứu 25 2.3.2 Sơ đồ nghiên cứu 25 2.3.3 Sơ đồ nội dung thí nghiệm 26 2.3.4 Nội dung thực 27 2.3.4.1 Khảo sát sinh trƣởng vi khuẩn Lactobacillus plantarum ATCC8014 27 2.3.4.2 Khảo sát ảnh hƣởng nguồn carbon đến trình sinh tổng hợp bacteriocin Lactobacillus plantarum ATCC8014 29 2.3.4.3 Khảo sát ảnh hƣởng nguồn nitơ đến trình sinh tổng hợp bacteriocin 30 2.3.4.4 Khảo sát ảnh hƣởng tỷ lệ nguồn carbon nitơ đến trình sinh tổng hợp bacteriocin Lactobacillus plantarum ATCC8014 31 2.3.4.5 Khảo sát điều kiện nuôi cấy ảnh hƣởng đến trình sinh tổng hợp bacteriocin……………… 32 2.3.4.5.1 Khảo sát ảnh hƣởng pH đến trình tổng hợp bacteriocin 32 2.3.4.5.2 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian đến trình sinh tổng hợp bacteriocin 33 2.3.4.5.3 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến trình sinh tổng hợp bacteriocin 34 2.3.4.6 Khảo sát ảnh hƣởng tác nhân cồn 960 đến trình thu nhận bacteriocin… 35 PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 Khảo sát sinh trƣởng vi khuẩn Lactobacillus plantarum ATCC8014 39 3.2 Khảo sát ảnh hƣởng nguồn carbon đến trình sinh tổng hợp bacteriocin 42 3.3 Khảo sát ảnh hƣởng nguồn nitơ đến trình sinh tổng hợp bacteriocin 44 3.4 Khảo sát ảnh hƣởng tỷ lệ nguồn carbon nitơ đến trình sinh tổng hợp bacteriocin 47 3.5 Khảo sát điều kiện nuôi cấy ảnh hƣởng đến trình sinh tổng hợp bacteriocin… 51 3.5.1 Khảo sát ảnh hƣởng pH đến trình tổng hợp bacteriocin 51 3.5.2 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian đến trình sinh tổng hợp bacteriocin 54 3.6 Khảo sát ảnh hƣởng tác nhân cồn 960 đến trình thu nhận bacteriocin 59 3.7 Khảo sát ảnh hƣởng tác nhân muối (NH4)2SO4 đến trình thu nhận bacteriocin 60 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 PHỤ LỤC ii Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy DANH MỤC NHỮNG TỪ VIẾT TẮT Kí hiệu viết tắt Diễn giải CFU Colony Forming Unit h Hour LAB Lactic Acid Bacteria MRS De man, Rogosa, Sharpe MRSA De man, Rogosa, Sharpe, Agar NA Nutrient Agar NB Nutrient broth OD Optical density pH Potential Hydrogen ĐK Đƣờng kính SVTH: Trần Thị Tốn i Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Đặc tính lí học số bacteriocin đƣợc sinh tổng hợp vi khuẩn Gram dƣơng 14 Bảng 2.1: Môi trƣờng nuôi cấy giữ giống vi khuẩn Lactobacillus plantarum ATCC8014 23 Bảng 2.2: Môi trƣờng nuôi cấy giữ giống vi khuẩn gây bệnh Bacillus cereus thử hoạt tính kháng khuẩn bacteriocin 24 Bảng 2.3: Nguồn carbon nồng độ nguồn carbon 29 Bảng 2.4: Nguồn nitơ nồng độ nguồn nitơ 30 Bảng 2.5: Tỷ lệ nguồn carbon nitơ 31 Bảng 2.6: Các giá trị pH khảo sát 32 Bảng 2.7: Các giá trị thời gian khảo sát 33 Bảng 2.8: Các giá trị nhiệt độ khảo sát 34 Bảng 2.9: Tác nhân tủa tỉ lệ tủa để thu nhận bacteriocin 35 Bảng 2.10: Tác nhân tủa tỉ lệ tủa để thu nhận bacteriocin 36 Bảng 3.1: Số khuẩn lạc trung bình 1ml dung dịch mẫu theo thời gian 39 Bảng 3.2: Ảnh hƣởng nguồn carbon đến trình tổng hợp bacteriocin 42 Bảng 3.3: Ảnh hƣởng nguồn nitơ đến trình sinh tổng hợp bacteriocin 45 Bảng 3.4: Ảnh hƣởng tỷ lệ nguồn carbon nitơ đến trình sinh tổng hợp bacteriocin 48 Bảng 3.5: Ảnh hƣởng pH đến trình sinh tổng hợp bacteriocin vi khuẩn Lactobacillus plantarum ATCC8014 51 Bảng 3.6: Ảnh hƣởng thời gian đến trình sinh tổng hợp bacteriocin 55 Bảng 3.7: Ảnh hƣởng thời gian đến trình sinh tổng hợp bacteriocin vi khuẩn Lactobacillus plantarum ATCC8014 58 Bảng 3.8: Ảnh hƣởng cồn 960 đến trình thu nhận bacteriocin 59 Bảng 3.9: Ảnh hƣởng muối (NH4)2SO4 đến trình thu nhận bacteriocin 61 SVTH: Trần Thị Toán ii Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Khuẩn lạc vi khuẩn Lactobacillus plantarum Hình 1.2: Hình thái vi khuẩn Lactobacillus plantarum… Hình 1.3: Cấu trúc nisin 11 Hình 2.1: Sơ đồ nội dung thí nghiệm 26 Hình 3.1: Đƣờng cong tăng trƣởng vi khuẩn Lactobacillus plantarum ATCC8014 40 Hình 3.2: Hình thái khuẩn lạc vi khuẩn L.plantarum ATCC8014 41 Hình 3.3: Khả kháng khuẩn bacteriocin nguồn carbon khác 44 Hình 3.4: Khả kháng khuẩn bacteriocin sử dụng nguồn nitơ khác 47 Hình 3.5: Khả kháng khuẩn bacteriocin sử dụng tỷ lệ nguồn carbon nitơ khác 51 Hình 3.6: Ảnh hƣởng pH đến khả kháng kháng khuẩn bacteriocin 54 Hình 3.7: Ảnh hƣởng thời gian đến khả kháng kháng khuẩn bacteriocin chủng Lactobacillus plantarum ATCC8014 57 Hình 3.8: Ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả kháng khuẩn bacteriocin 59 Hình 3.9: Ảnh hƣởng cồn 960 đến khả kháng khuẩn bacteriocin 60 Hình 3.10: Ảnh hƣởng tác nhân tủa muối (NH4)2SO4 đến hoạt tính kháng khuẩn bacteriocin 62 SVTH: Trần Thị Tốn iii Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy ĐẶT VẤN ĐỀ Bacteriocin loại protein đƣợc tổng hợp vi khuẩn Nó có khả ức chế phát triển loại vi khuẩn có cấu trúc tƣơng tự Bacteriocin đƣợc A.Gratia tìm thấy năm 1925 Ơng thực cơng trình nghiên cứu tìm cách tiêu diệt vi khuẩn, kết cơng trình tác động mạnh đến phát triển chất kháng sinh chất kháng khuẩn đƣợc sinh từ vi khuẩn Bacteriocin đa dạng cấu trúc, chức năng, sinh thái Bacteriocin có khả tiêu diệt vi khuẩn khác tạo thành kênh làm thay đổi tính thấm màng tế bào, nhiều loại bacteriocin cịn có khả phân giải ADN, ARN công vào peptidoglycan để làm suy yếu thành tế bào Vì bacteriocin đƣợc dùng nhiều bảo quản thực phẩm, xử lý môi trƣờng, chế biến thức ăn chăn nuôi Vi khuẩn lactic đƣợc quan tâm nhiều chúng có khả sinh tổng hợp nên bacteriocin Vì việc nghiên cứu vi khuẩn lactic bacteriocin vấn đề thiết thực có ý nghĩa to lớn sống ngƣời Vi khuẩn lactic đƣợc ứng dụng nhiều ngành sản xuất, đặc biệt công nghiệp thực phẩm số ngành chế biến khác chúng có khả sinh axit, tạo hƣơng kháng số vi khuẩn nhờ khả sinh tổng hợp bacteriocin Trong công nghiệp thực phẩm, việc nghiên cứu tuyển chọn nhƣ tạo chủng vi khuẩn lactic có khả tổng hợp bacteriocin cao để sử dụng trình lên men lactic khơng nhằm mục đích bảo quản mà cịn nhằm đƣa thị trƣờng loại sản phẩm có tính chất hƣơng vị mong muốn Các hƣớng ứng dụng bacteriocin chủ yếu gồm: - Bảo quản thực phẩm - Bảo quản sản phẩm sữa - Bổ sung vào thức ăn gia súc - Muối chua rau SVTH: Trần Thị Tốn Trang Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy Những năm gần nghiên cứu giới xác định đƣợc chất bacteriocin đồng thời xác định đƣợc số loại bacteriocin vi khuẩn lactic sinh khả ứng dụng Những cơng trình có đóng góp tích cực , nâng cao chất lƣợng sống ngƣời Đã có nghiên cứu nƣớc quan tâm đến việc sử dụng bacteriocin vi khuẩn lactic tổng hợp để bảo quản thực phẩm, thay loại hoá chất bảo quản độc hại đồng thời tạo sản phẩm có chất lƣợng cao Tuy nhiên để thu nhận đƣợc lƣợng bacteriocin cao cần phải tối ƣu hóa mơi trƣờng ni cấy vi khuẩn Từ vấn đề cấp thiết nên đề tài đƣợc đề xuất “Bƣớc đầu nghiên cứu thu nhận bacteriocin từ vi khuẩn Lactobacillus plantarum ATCC8014 ứng dụng làm phụ gia thực phẩm” Mục tiêu : Tìm đƣợc điều kiện tối ƣu để thu đƣợc lƣợng chế phẩm bacteriocin cao SVTH: Trần Thị Tốn Trang Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy Bảng 4.27: ANOVA Table for DK khang khuan by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 624.885 25 24.9954 5.43 0.0000 Within groups 239.333 52 4.60256 Total (Corr.) 864.218 77 Bảng 4.28: Table of Means for DK khang khuan by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -A1 13.3333 1.23862 11.5758 15.0908 A2 9.33333 1.23862 7.57583 11.0908 A3 15.3333 1.23862 13.5758 17.0908 A4 17.3333 1.23862 15.5758 19.0908 A5 15.6667 1.23862 13.9092 17.4242 B1 21.6667 1.23862 19.9092 23.4242 B2 14.3333 1.23862 12.5758 16.0908 B3 16.3333 1.23862 14.5758 18.0908 B4 13.6667 1.23862 11.9092 15.4242 B5 14.0 1.23862 12.2425 15.7575 C1 14.6667 1.23862 12.9092 16.4242 C2 14.3333 1.23862 12.5758 16.0908 C3 20.6667 1.23862 18.9092 22.4242 C4 14.3333 1.23862 12.5758 16.0908 C5 12.6667 1.23862 10.9092 14.4242 D1 15.6667 1.23862 13.9092 17.4242 D2 18.6667 1.23862 16.9092 20.4242 D3 17.6667 1.23862 15.9092 19.4242 D4 18.3333 1.23862 16.5758 20.0908 D5 13.6667 1.23862 11.9092 15.4242 DC 10.3333 1.23862 8.57583 12.0908 E1 18.6667 1.23862 16.9092 20.4242 E2 18.3333 1.23862 16.5758 20.0908 E3 18.3333 1.23862 16.5758 20.0908 E4 16.0 1.23862 14.2425 17.7575 E5 15.0 1.23862 13.2425 16.7575 -Total 78 15.7051 SVTH: Trần Thị Toán xxii Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy Bảng 4.29: Multiple Range Tests for DK khang khuan by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -A2 9.33333 X DC 10.3333 XX C5 12.6667 XXX A1 13.3333 XXX D5 13.6667 XXXX B4 13.6667 XXXX B5 14.0 XXXX B2 14.3333 XXXXX C4 14.3333 XXXXX C2 14.3333 XXXXX C1 14.6667 XXXXX E5 15.0 XXXXX A3 15.3333 XXXXX A5 15.6667 XXXXX D1 15.6667 XXXXX E4 16.0 XXXXX B3 16.3333 XXXXX A4 17.3333 XXXXX D3 17.6667 XXXXX E3 18.3333 XXXX E2 18.3333 XXXX D4 18.3333 XXXX E1 18.6667 XXX D2 18.6667 XXX C3 20.6667 XX B1 21.6667 X Phụ lục 5: Ảnh hƣởng pH đến khả sinh bacteriocin vi khuẩn Lactobacillus plantarum ATCC8014 Bảng 5.30: Ảnh hƣởng pH đến khả kháng khuẩn bacteriocin Đƣờng kính vịng kháng (mm) Nghiệm thức Lần Lần Lần Trung bình P1 26 24 27 25,67 P2 25 26 28 26,33 P3 27 29 25 27 P4 29 30 29 29,33 P5 31.5 32 32 31,83 SVTH: Trần Thị Tốn xxiii Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy P6 29 27 27 27,67 P7 21 19 16 18,67 P8 20 17 15 17,33 P9 17 19 16 17,33 ĐC 30 29 31 30 Bảng 5.31: ANOVA Table for DK khang khuan by nghiem thuc Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 954.075 106.008 31.10 0.0000 Within groups 68.1667 20 3.40833 Total (Corr.) 1022.24 29 Bảng 5.32: Table of Means for DK khang khuan by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -DC 30.0 1.06589 28.4278 31.5722 P1 19.0 1.06589 17.4278 20.5722 P2 18.6667 1.06589 17.0945 20.2388 P3 27.0 1.06589 25.4278 28.5722 P4 29.3333 1.06589 27.7612 30.9055 P5 31.8333 1.06589 30.2612 33.4055 P6 27.6667 1.06589 26.0945 29.2388 P7 18.6667 1.06589 17.0945 20.2388 P8 17.3333 1.06589 15.7612 18.9055 P9 17.3333 1.06589 15.7612 18.9055 -Total 30 23.6833 Bảng 5.33: Multiple Range Tests for DK khang khuan by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -P9 17.3333 X P8 17.3333 X P2 18.6667 X P7 18.6667 X P1 19.0 X P3 27.0 X P6 27.6667 X P4 29.3333 XX DC 30.0 XX P5 31.8333 X SVTH: Trần Thị Tốn xxiv Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy Bảng 5.34: Ảnh hƣởng pH đến hàm lƣợng protein tổng OD Nghiệm thức Lần Lần Lần Trung bình Hệ số pha lỗng Thể tích (ml) Hàm lƣợng protein tổng (µg) P1 0.125 0.125 0.126 0.1253 100 6596,491 P2 0.126 0.126 0.128 0.1267 100 6666,667 P3 0.132 0.132 0.133 0.1323 100 6964,912 P4 0.134 0.134 0.135 0.1343 100 7070,175 P5 0.156 0.156 0.155 0.1557 100 8192,982 P6 0.155 0.155 0.153 0.1543 100 8122,807 P7 0.146 0.146 0.142 0.1447 100 7614,035 P8 0.142 0.142 0.139 0.141 100 7421,053 P9 0.14 0.141 0.139 0.14 100 7368,421 ĐC 0.141 0.141 0.14 0.1407 100 7403,509 Bảng 5.35: ANOVA Table for ham luong protein tong by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 7.93952E6 882169.0 233.02 0.0000 Within groups 75715.6 20 3785.78 Total (Corr.) 8.01524E6 29 Bảng 3.36: Table of Means for protein tong by nghiem thucwith 95.0 percent LSD intervals SVTH: Trần Thị Tốn xxv Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -DC 7403.51 35.5236 7351.11 7455.91 P1 6596.49 35.5236 6544.09 6648.89 P2 6666.67 35.5236 6614.27 6719.06 P3 6964.91 35.5236 6912.51 7017.31 P4 7070.18 35.5236 7017.78 7122.57 P5 8192.98 35.5236 8140.59 8245.38 P6 8122.81 35.5236 8070.41 8175.2 P7 7614.04 35.5236 7561.64 7666.43 P8 7421.05 35.5236 7368.66 7473.45 P9 7368.42 35.5236 7316.02 7420.82 -Total 30 7342.11 Bảng 3.37: Multiple Range Tests for protein tong by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -P1 6596.49 X P2 6666.67 X P3 6964.91 X P4 7070.18 X P9 7368.42 X DC 7403.51 X P8 7421.05 X P7 7614.04 X P6 8122.81 X P5 8192.98 X Phụ lục 6: Ảnh hƣởng thời gian đến khả sinh bacteriocin vi khuẩn Lactobacillus plantarum ATCC8014 Bảng 6.38: Ảnh hƣởng thời gian đến khả kháng khuẩn bacteriocin Đƣờng kính kháng khuẩn Thời gian (h) Lần Lần Lần Trung bình 20 23 22 21 22 25 24 26 25 25 30 27 26 29 27,33 35 29 28 29 28,67 SVTH: Trần Thị Tốn xxvi Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy 40 32 32 33 32,33 45 33 33 32 32,67 50 29 28 28 28,33 55 27 28 25 26,67 60 26 25 24 25 Bảng 6.39: ANOVA Table for DK khang khuan by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 286.667 35.8333 35.83 0.0000 Within groups 18.0 18 1.0 Total (Corr.) 304.667 26 Bảng 6.40: Table of Means for DK khang khuan by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -20 22.0 0.57735 21.1423 22.8577 25 25.0 0.57735 24.1423 25.8577 30 27.3333 0.57735 26.4756 28.191 35 28.6667 0.57735 27.809 29.5244 40 32.3333 0.57735 31.4756 33.191 45 32.6667 0.57735 31.809 33.5244 50 28.3333 0.57735 27.4756 29.191 55 26.6667 0.57735 25.809 27.5244 60 25.0 0.57735 24.1423 25.8577 -Total 27 27.5556 Bảng 6.41: Multiple Range Tests for DK khang khuan by nghiem thuc SVTH: Trần Thị Tốn xxvii Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -20 22.0 X 25 25.0 X 60 25.0 X 55 26.6667 XX 30 27.3333 XX 50 28.3333 XX 35 28.6667 X 40 32.3333 X 45 32.6667 X Bảng 6.42: Ảnh hƣởng thời gian đến hàm lƣợng protein tổng Thời gian (h) OD Hệ số pha loãng Thể tích Hàm lƣợng (ml) protein tổng (µg) Lần Lần Lần Trung bình 20 0.144 0.143 0.146 0.1443 100 7596,491 25 0.146 0.144 0.143 0.1443 100 7596,491 30 0.144 0.146 0.144 0.1447 100 7614,035 35 0.145 0.146 0.147 0.146 100 7684,211 40 0.146 0.146 0.149 0.147 100 7736,842 45 0.144 0.146 0.147 0.1457 100 7666,667 50 0.143 0.144 0.145 0.144 100 7578,947 55 0.141 0.142 0.144 0.1423 100 7491,228 60 0.14 0.141 0.143 0.1413 100 7438,596 SVTH: Trần Thị Tốn xxviii Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy Bảng 6.42: ANOVA Table for protein tong by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 206422.0 25802.8 4.66 0.0032 Within groups 99723.0 18 5540.17 Total (Corr.) 306145.0 26 Bảng 6.42: Table of Means for protein tong by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -T1 7596.49 42.9735 7532.65 7660.33 T2 7596.49 42.9735 7532.65 7660.33 T3 7614.04 42.9735 7550.19 7677.88 T4 7684.21 42.9735 7620.37 7748.05 T5 7736.84 42.9735 7673.0 7800.68 T6 7666.67 42.9735 7602.83 7730.51 T7 7578.95 42.9735 7515.11 7642.79 T8 7491.23 42.9735 7427.39 7555.07 T9 7438.6 42.9735 7374.76 7502.44 -Total 27 7600.39 Bảng 6.43: Multiple Range Tests for protein tong by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -T9 7438.6 X T8 7491.23 XX T7 7578.95 XX T2 7596.49 XXX T1 7596.49 XXX T3 7614.04 XXX T6 7666.67 XX T4 7684.21 XX T5 7736.84 X Phụ lục 7: Ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả sinh bacteriocin vi khuẩn Lactobacillus plantarum ATCC8014 SVTH: Trần Thị Toán xxix Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy Bảng 6.46: Ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả kháng khuẩn bacteriocin Đƣờng kính kháng khuẩn Nhiệt độ ( C) Lần Lần Lần Trung bình 5 20 31 32 32 31,67 30 33 33 33 33 37 30 31 30 30,33 Bảng 7.47: ANOVA Table for DK khang khuan by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1732.92 577.639 1386.33 0.0000 Within groups 3.33333 0.416667 Total (Corr.) 1736.25 11 Bảng 7.48: Table of Means for DK khang khuan by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -5 4.0 0.372678 3.39231 4.60769 20 31.6667 0.372678 31.059 32.2744 30 33.0 0.372678 32.3923 33.6077 37 30.3333 0.372678 29.7256 30.941 -Total 12 24.75 Bảng 7.49: Multiple Range Tests for DK khang khuan by nghiem thuc SVTH: Trần Thị Tốn xxx Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -5 4.0 X 37 30.3333 X 20 31.6667 X 30 33.0 X Bảng 7.50: Ảnh hƣởng nhiệt độ đến hàm lƣợng protein tổng Nhiệt độ Hệ số pha (0C) Thể tích Hàm lƣợng lỗng OD (ml) protein tổng Lần Lần Lần Trung bình 0.077 0.065 0.072 0,071 100 3754,386 20 0.147 0.146 0.149 0,147 100 7754,386 30 0.149 0.146 0.148 0,147 100 7771,930 37 0.144 0.148 0.147 0,146 100 7701,754 Bảng 7.51: ANOVA Table for protein tong by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 3.57978E7 1.19326E7 380.09 0.0000 Within groups 251154.0 31394.3 Total (Corr.) 3.60489E7 11 Bảng 7.52: Table of Means for protein tong by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -N1 3754.39 102.297 3587.58 3921.19 N2 7754.39 102.297 7587.58 7921.19 N3 7771.93 102.297 7605.12 7938.74 N4 7701.75 102.297 7534.95 7868.56 SVTH: Trần Thị Tốn xxxi Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy Bảng 7.53: Multiple Range Tests for protein tong by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -N1 3754.39 X N4 7701.75 X N2 7754.39 X N3 7771.93 X Phụ lục 8: Ảnh hƣởng cồn 960 đến trình thu nhận bacteriocin Bảng 8.54: Ảnh hƣởng cồn 960 đến hàm lƣợng protein tổng thu đƣợc Thể tích (ml) Hàm lƣợng protein tổng 150 5131,579 0.069 150 5289,474 0.073 0.071 150 5763,158 0.07 0.071 150 5526,316 OD Nghiệm thức L1 L2 L3 TB C1 0.066 0.068 0.065 0.066 C2 0.07 0.069 0.067 C3 0.071 0.069 C4 0.07 0.072 HSPL (µg) Bảng 8.55: ANOVA Table for protein tong by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 496018.0 165339.0 22.74 0.0003 Within groups 58171.7 7271.47 Total (Corr.) 554190.0 11 Bảng 8.56: Table of Means for protein tong by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals SVTH: Trần Thị Tốn xxxii Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -C1 5157.89 49.2323 5077.62 5238.17 C2 5368.42 49.2323 5288.14 5448.7 C3 5710.53 49.2323 5630.25 5790.8 C4 5526.32 49.2323 5446.04 5606.59 -Total 12 5440.79 Bảng 8.57: Multiple Range Tests for protein tong by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -C1 5157.89 X C2 5368.42 X C4 5526.32 X C3 5710.53 X Bảng 8.58: Ảnh hƣởng cồn 960 đến đƣờng kính kháng khuẩn Nghiệm thức Lần1 Lần Lần Trung bình (mm) C1 13 13 13 13 C2 12.5 13 13 12,83 C3 13 13 13 13 C4 12 12 12 12 ĐC 11.5 12 12 11,83 Bảng 8.59: ANOVA Table for DK khang khuan by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 3.9 0.975 29.25 0.0000 Within groups 0.333333 10 0.0333333 Total (Corr.) 4.23333 14 SVTH: Trần Thị Tốn xxxiii Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy Bảng 8.60: Table of Means for DK khang khuan by nghiem thucwith 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -1 13.0 0.105409 12.8339 13.1661 12.8333 0.105409 12.6673 12.9994 3 13.0 0.105409 12.8339 13.1661 12.0 0.105409 11.8339 12.1661 DC 11.8333 0.105409 11.6673 11.9994 -Total 15 12.5333 Bảng 8.61: Multiple Range Tests for DK khang khuan by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -DC 11.8333 X 12.0 X 12.8333 X 3 13.0 X 13.0 X Phụ lục 9: Ảnh hƣởng muối (NH4)2SO4 đến trình thu nhận bacteriocin Bảng 9.62: Ảnh hƣởng muối (NH4)2SO4 đến đƣờng kính kháng khuẩn Nghiệm thức (%) Lần Lần Lần TB 30 16 15 16 15.67 50 17 18 17 17.33 70 22 21 22 21.67 90 19 20 19 19.33 ĐC 12 11 12 11.67 Bảng 9.63: ANOVA Table for DK khang khuan by nghiem thuc SVTH: Trần Thị Toán xxxiv Báo cáo khóa luận tốt nghiệp GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 144.333 36.0833 102.55 0.0000 Within groups 3.16667 0.351852 Total (Corr.) 147.5 13 Bảng 9.64: Table of Means for DK khang khuan by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -30 15.6667 0.342467 15.1189 16.2145 50 17.3333 0.342467 16.7855 17.8811 70 21.6667 0.342467 21.1189 22.2145 90 19.3333 0.342467 18.7855 19.8811 DC 11.5 0.419435 10.8291 12.1709 -Total 14 17.5 Bảng 9.65: Multiple Range Tests for DK khang khuan by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -DC 11.5 X 30 15.6667 X 50 17.3333 X 90 19.3333 X 70 21.6667 X Bảng 9.62: Ảnh hƣởng muối (NH4)2SO4 đến hàm lƣợng protein tổng HSPL Thể tích (ml) Hàm lƣợng protein tổng (mg) 0,091 200 35921,052 0,105 0,102 200 40394,736 0,16 0,159 0,159 200 62763,157 0,163 0,163 0,163 200 64342,105 OD Nghiệm thức L1 L2 L3 TB 30 0,091 0,091 0,091 50 0,1 0,1 70 0,159 90 0,163 SVTH: Trần Thị Toán xxxv Báo cáo khóa luận tốt nghiệp ĐC 0 GVHD: Th.S Nguyễn Thị Lệ Thủy 0 1 Bảng 9.63: ANOVA Table for Protein tong by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 8.17546E9 2.04386E9 10355.58 0.0000 Within groups 1.97368E6 10 197368.0 Total (Corr.) 8.17743E9 14 Bảng 9.64: Table of Means for Protein tong by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -DC 0.0 256.495 -404.116 404.116 M1 35921.1 256.495 35516.9 36325.2 M2 40394.7 256.495 39990.6 40798.9 M3 62763.2 256.495 62359.0 63167.3 M4 64342.1 256.495 63938.0 64746.2 -Total 15 40684.2 Bảng 9.65: Multiple Range Tests for Protein tong by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -DC 0.0 X M1 35921.1 X M2 40394.7 X M3 62763.2 X M4 64342.1 X SVTH: Trần Thị Toán xxxvi ... tính Bacteriocin sản xuất vi khuẩn Lactobacillus acidophilus, Vi? ??n Sinh học Nhiệt Ðới, Vi? ??n Khoa học Cơng nghệ Vi? ??t Nam Ngồi cịn nhiều nghiên cứu ứng dụng vi khuẩn lactic vào sản phẩm thực phẩm làm. .. nhiên để thu nhận đƣợc lƣợng bacteriocin cao cần phải tối ƣu hóa mơi trƣờng nuôi cấy vi khuẩn Từ vấn đề cấp thiết nên đề tài đƣợc đề xuất “Bƣớc đầu nghiên cứu thu nhận bacteriocin từ vi khuẩn Lactobacillus. .. quản thực phẩm 1.4.2 Nƣớc Hiện vi? ??c nghiên cứu , ứng dụng bacteriocin vi khuẩn lactic sinh tổng hợp nên hƣớng nghiên cứu đƣợc nhiều nhà khoa học quan tâm Và có cơng trình nghiên cứu ứng dụng