nghiên cứu đa hình gen 12s rrna của thằn lằn bóng eutropis multifascisata kuhl, 1820 ở miền trung và tây nguyên

MỞ ĐẦU 1. Tính cấp thiết của đề tài Giống thằn lằn bóng Mabuya Fitzinger, 1826 thuộc họ Thằn lằn bóng (Scincidae) trong lớp Bò sát (Reptilia) là một trong số các loài thằn lằn phân bố rộng rãi ở vùng nhiệt đới [9], Một số đặc điểm sinh học, sinh thái của 2 loài thằn lằn bóng giống Mabuya Fitzinger, 1826 (M. longicaudata, M. Multifasciata) ở Thừa Thiên Huế]. Theo Miralles A. và cs (2005), giống Mabuya có khoảng hơn 110 loài phân bố khắp châu Phi, châu Á và châu Mỹ [22]. Dựa trên những nghiên cứu gần đây trên lĩnh vực sinh học phân tử, loài này được chia chính thức thành bốn giống (Mausfeld et al., 2000, 2002; Mausfeld và Schmitz, 2003). Giống Mabuya ở châu Á được thay bằng Eutropis Fitzinger, 1943. Giống Afro-Malagasy được đăng ký dưới tên Euprepis Wagler, 1830. Giống thằn lằn bóng ở đảo Cape Verde chính thức là giống Chioninia Gray, 1845 và giống ở Nam Mỹ là Mabuya Fitzinger, 1826 [19]. Ở Việt Nam thằn lằn bóng phân bố ở hầu hết các tỉnh ở nước ta từ Lai Châu đến Bạc Liêu [Nguyễn Văn Sáng (2005), Danh lục bò sát và ếch nhái Việt Nam]. Theo thống kê tại vùng Nam Bình Trị Thiên có đến 102 loài lưỡng cư và bò sát, trong đó họ thằn lằn bóng là loài có mức độ phân bố khá cao với 8 loài [3]. Thằn lằn bóng được biết đến khá lâu với các giá trị về dược học và thực phẩm. Thịt thằn lằn bóng không chỉ thơm ngon mà còn có giá trị dinh dưỡng cao, tác dụng tốt đối với một số bệnh như suy dinh dưỡng, khó thở, nhức mỏi xương khớp… Tuy nhiên ngày nay, cùng với sự đô thị hóa, mở rộng các 1 khu dân cư và sự khai thác quá mức đã làm cho số lượng thằn lằn bóng ngày càng suy giảm. Trên thế giới đã có các công trình nghiên cứu về thằn lằn bóng, tuy nhiên tại Việt Nam việc nghiên cứu chủ yếu tập trung về hình thái, sinh thái [3], [4], [9], [14], chưa thấy có công bố nào về đặc điểm di truyền của thằn lằn bóng. Xuất phát từ các lý do trên chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu đa hình gen 12S rRNA của thằn lằn bóng Eutropis multifascisata Kuhl, 1820 ở miền Trung và Tây Nguyên”. 2. Mục tiêu nghiên cứu Đánh giá đa dạng di truyền thằn lằn bóng Eutropis multifascisata Kuhl, 1820 ở miền Trung và Tây Nguyên. 3. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu Chúng tôi tiến hành nghiên cứu trên đối tượng là các mẫu đuôi của thằn lằn bóng Eutropis multifascisata Kuhl, 1820 thu được ở miền Trung và Tây Nguyên. 4. Nội dung nghiên cứu - Tách chiết và đánh giá chất lượng DNA tổng số - Tạo dòng gen 12S rRNA - Khuếch đại gen 12S rRNA - Giải trình tự gen 12S rRNA - Xác định mối quan hệ di truyền bằng phần mềm DNA star 5. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài 5.1. Ý nghĩa khoa học Nghiên cứu xác định mối quan hệ di truyền của thằn lằn bóng Eutropis multifasciata Kuhl một số tỉnh miền Trung và Tây Nguyên, làm tiền đề xác định nguồn gốc của thằn lằn bóng Việt Nam, đồng thời xác định mức độ đa dạng di truyền của loài. 5.2. Ý nghĩa thực tiễn 2 Việc nghiên cứu đa dạng di truyền loài thằn lằn bóng Eutropis multifasciata có ý nghĩa trong việc xác định mức độ đa dạng di truyền của loài dưới tác động của các điều kiện tự nhiên, nhân tố con người. Nghiên cứu cung cấp thêm dẫn liệu khoa học về mặt di truyền để từ đó đặt nền móng cho việc khai thác, sử dụng, bảo vệ và phát triển hợp lý nguồn tài nguyên thiên nhiên này. 6. Tính mới của đề tài Đây là nghiên cứu đầu tiên ở Việt Nam về đa dạng di truyền của loài thằn lằn bóng Eutropis multifasciata Kuhl, 1820. 3 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Vài nét về thằn lằn bóng Eutropis multifasciata Kuhl, 1820 1.1.1. Hình thái Loài Eutropis multifasciata là loài thằn lằn bóng phân bố rộng rãi khắp Châu Á. Về ý nghĩa tên loài “multi” nghĩa là nhiều, “fasciata” có nghĩa là dải, do đó tên loài dựa trên các dải màu hình thành dọc thân thằn lằn bóng. Mô tả: cơ thể có kích thước trung bình. Đầu phủ vảy tấm đối xứng, ít phân biệt với cổ. Mõm tù, tấm mõm rộng hơn cao. Lỗ mũi tròn, nằm giữa tấm mũi, 2 tấm trên mũi cách nhau bởi tấm trán-mũi và tấm trán. Có một cặp tấm gáy tiếp xúc nhau, đôi khi ngăn cách bởi một vảy nhỏ. Có 2 tấm má, 4 tấm trên ổ mắt, 6-7 tấm trên mí mắt.Có 1-2 vảy trước trên ổ mắt, đôi khi không có, 2 vảy trước dưới ổ mắt, 8-10 vảy sau ổ mắt, 1 vảy sau- trên ổ mắt. Có 6-7 tấm mép trên, 7-8 tấm mép dưới mỗi bên. Có 3 hàng vảy thái dương. Tấm cằm rộng hơn cao, một tấm sau cằm lẻ, rộng hơn dài, 2 cặp tấm sau cằm, cặp thứ nhất tiếp xúc nhau, cặp thứ hai thường cách nhau bởi 1 vảy nhỏ. Màng nhĩ sâu, cao hơn dài một chút. Vảy thân tương đối đồng đều, xếp theo hình ngói lợp từ trước ra sau. Vảy trên lưng có 3 gờ rõ (đôi khi có 5 gờ), vảy phía bên có gờ yếu hơn, vảy bụng nhẵn. Có 30-33 hàng vảy xung quanh giữa thân kể cả vảy bụng, 39-46 hàng vảy dọc lưng, 46-54 hàng vảy dọc bụng, 68-94 hàng vảy dưới- giữa đuôi. Vảy ở các chi nhỏ hơn vảy thân. Vảy chi trước nhẵn, vảy chi sau ở mặt trên có gờ yếu mặt dưới không có gờ. Chi trước có 6-8 bản mỏng dưới ngón I, 11-14 bản mỏng dưới ngón III, 11-15 bản mỏng dưới ngón IV. Chi sau có 6-9 bản mỏng dưới ngón I, 13-17 bản mỏng dưới ngón III, 15-19 bản mỏng dưới ngón IV. 4 Thân màu nâu hoặc nâu đen, mặt bụng và phía dưới các chi sáng màu hơn trên lưng. Trên lưng có từ 5-7 dải nhỏ màu nâu sẫm (rộng bằng 1/3 chiều rộng của 1 hàng vảy) chạy dọc từ sau tấm gáy đến gốc đuôi. Hai bên thân màu nâu sẫm. Những cá thể cái có các đốm trắng nằm dọc hai bên thân từ sau lỗ tai đến 1/3 chiều dài đuôi và ở mặt trên của đùi và cánh tay. Mỗi đốm trắng có viền đen nằm trong một vảy [14] Eutropis multifasciata trưởng thành có những đặc điểm sau: - Kích thước lớn nhất có thể đạt là 36cm. - Phần đầu phát triển mạnh mẽ, chân sau gồm có 5 ngón giúp thằn lằn bóng di chuyển nhanh nhẹn. - Phần đầu bao phủ bởi lớp vẩy lớn, sắp xếp đối xứng. - Mí mắt dưới gắn liền với mi mắt và không có mí mắt trên. - Mở nhĩ tương đối lớn và màng nhĩ bị chìm sâu. - Thường có từ 3-5 đường vảy chạy dọc sống lưng và bụng [31]. Hình 1.1. Hình thái Thằn lằn bóng Eutropis multifasciata (Photo by Kenny Heng, 2011) 1.1.2. Ảnh hưởng của các điều kiện sinh thái đến thằn lằn bóng Thằn lằn bóng là động vật máu lạnh và là động vật biến nhiệt, nhiệt độ trong cơ thể có thể thay đổi trong một phạm vi rộng. Theo Laurie J. Vitt và 5 Daniel G. B. (1991), loài Mabuya bistriata hoạt động ở nhiệt độ khoảng 32,9 ± 0,98°C [35]. Do đó chu kỳ hoạt động ngày đêm của thằn lằn bóng như sau: thời gian hoạt động trong ngày của thằn lằn bóng thường bắt đầu từ 8h đến 16h hàng ngày. Tần số bắt gặp cao nhất là từ 9h-11h. Buổi sáng, sau khi ra khỏi chổ ở, chúng leo lên thân, lá cây hoặc bãi cát, bãi đất trống, nơi có nhiều ánh nắng để sưởi nắng khoảng 10-20 phút. Sau đó, chúng đi kiếm ăn, đến 11h30’-12h00’ đến các chổ râm mát dưới bóng cây tránh nắng, khoảng 13h00’-13h30’ chúng tiếp tục đi kiếm mồi [9]. Ảnh hưởng của ánh sáng, nhiệt độ, độ ẩm: hoạt động sống của M. multifasciata mạnh nhất trong điều kiện nắng ấm, nhiệt độ 30-35°C, độ ẩm 70-80%. E. multifasciata phân bố hầu hết các vị trí trong địa điểm nghiên cứu. Tuy nhiên, gặp phổ biến nhất ở cây bụi, hang đá - bê tông, bờ sông, bụi tre, bờ mương, đống gạch, ngói vỡ. Môi trường sống của loài này thường ở khu vực dân cư, các công viên, khuôn viên trường học và cơ quan, bãi cát ven biển, đầm phá, khu vực ven sông, hồ, bãi cỏ. Eutropis multifasciata chủ yếu ăn ấu trùng của côn trùng (13,77 %), bộ Cánh thẳng (13,17 %), bộ Cánh màng (11,68 %), bộ Cánh phấn (8,68 %). Bảy loại chiếm ưu thế trong thành phần thức ăn của E. multifasciata: ấu trùng côn trùng, Kiến, Nhện, Mọt ẩm, Cào cào, Mối, Bướm cải. Xiang & cs. (2006) cho biết loài Mabuya multifascisata cái sinh sản lúc thân dài 90 mm. Cá thể đực trưởng thành có thân dài 117 mm và cá thể cái thân dài là 116 mm. Sự sinh con bắt đầu vào tháng 5, không thấy có sự liên quan giữa kích thước cơ thể và số con đẻ [24]. Nhiệt độ môi trường thời kỳ thai nghén tác động đến ngày sinh nhưng không tác động đến kích thước ổ đẻ và 6 khối lượng ổ đẻ. Mabuya bistriata đạt đến độ chín sinh dục gần hết năm thứ nhất của đời sống, con cái sinh sản lứa đầu tiên lúc một năm tuổi [35]. 1.1.3. Vai trò +Về sinh thái: Thằn lằn bóng tham gia vào nhiều chuỗi thức ăn và lưới thức ăn của các hệ sinh thái ở cạn. Chúng là mắt xích quan trọng góp phần chuyển hóa vật chất và năng lượng, đảm bảo cân bằng trong các hệ sinh thái. + Về nông, lâm nghiệp: Thằn lằn bóng là một thiên địch có lợi, chúng ăn nhiều loài động vật gây hại như: Châu chấu, rầy, bọ Cánh cứng, sâu, mối gián, Góp phần bảo vệ vật nuôi, cây trồng. + Về dược liệu: Thằn lằn bóng là một vị thuốc có tác dụng chữa được một số bệnh. Người dân vẫn hay dùng Thằn lằn bóng để chữa bệnh hen suyễn, biếng ăn ở trẻ em [11]. +Về thực phẩm: Thằn lằn bóng là nguồn cung cấp protein tự nhiên, có thể làm thức ăn cho con người, vật nuôi hoặc làm nguyên liệu sản xuất thức ăn chăn nuôi. + Về giáo dục: Do có mặt phổ biến ở nhiều nơi và con người có thể bắt gặp hàng ngày nên Thằn lằn bóng được chọn làm đối tượng đại diện cho lớp Bò sát, đưa vào chương trình giảng dạy sinh học ở bậc Trung học cơ sở (Sinh học 7) hoặc làm mẫu vật thí nghiệm về bò sát trong các môn học thực hành ở cao đẳng, đại học (Thực hành sinh học đại cương, Giải phẫu so sánh động vật). 2.1. Ứng dụng chỉ thị phân tử trong nghiên cứu đa dạng di truyền động vật 2.1.1. Kỹ thuật RADP (Random Amplified Polymorphic DNA) RAPD (Ramdon Amplified Polymorphism DNA) là các phân đoạn DNA đa hình được khuếch đại ngẫu nhiên. Phương pháp này do William (1990), Welsh và cộng sự (1991) phát triển từ phương pháp PCR chuẩn 7 nhưng với một mồi duy nhất có kích trước từ 5 đến 12 nucleotide. Do kích thước bộ gen của một cá thể là rất lớn từ vài trăm triệu với vài tỉ base, là những chuỗi được hình thành từ bốn base duy nhất là adenine, guanine, cytosine, và thymine cho nên sẽ tồn tại nhiều trình tự 5 đến 12 base bắt cặp với trình tự mồi ngẫu nhiên. Sản phẩm PCR với một mồi có trình tự ngẫu nhiên như vậy, ở những điều kiện PCR nhất định sẽ cho một (hoặc vài) phân đoạn DNA (khác nhau) trên điện di đồ. Các cá thể sinh vật cùng loài, giống, họ có bộ gene giống nhau hoàn toàn do đó kết quả điện di trên điện di đồ sẽ gồm những băng vạch DNA có kích thước như nhau. Khi bộ gen của chúng có nhiều trình tự khác nhau, với một mồi ngẫu nhiên nào đó, các sản phẩm PCR của chúng sẽ cho một số băng vạch DNA có kích thước khác nhau trên điện di đồ. Phương pháp RAPD cho phép phát hiện tính đa hình giữa các cá thể trong một quần đàn, giữa các quần đàn trong cùng một loài hoặc giữa các loài trong một giống, mà không cần biết trình tự sắp xếp của các nucleotide. Mặt khác mồi RAPD sẽ chỉ ra một đa hình thường xuất hiện nhất [17]. Mồi ngẫu nhiên được thiết kế là những oligonucleotide có kích thước từ 5 đến 12 nucleotide, và được tổng hợp hóa học. Tuỳ theo hãng sản xuất, các mồi có kí hiệu, tên gọi cũng như trình tự rất khác nhau. Yêu cầu cơ bản là mồi phải bắt cặp và bám vào hai đầu của đoạn khuôn, để phân đoạn DNA nằm giữa có kích thước khoảng 50 đến 5000 nucleotide được nhân lên. Mồi càng ngắn thì khả năng bắt cặp càng cao, và do đó số sản phẩm PCR càng nhiều. Ngược lại mồi càng dài thì thì độ bắt cặp chính xác càng lớn, số phân đoạn PCR càng ít đi. Các bước thực hiện: gồm bốn bước cơ bản sau - Bước 1: Tách chiết, tinh sạch và đánh giá độ tinh sạch của DNA tổng số - Bước 2: Thực hiện phản ứng PCR với primer ngẫu nhiên 8 - Bước 3: Điện di trên gel agarose hoặc gel polyacrylamide - Bước 4: Phân tích và đánh giá kết quả đa dạng di truyền bằng các phần mềm thông dụng (NTSYSpc, UPGMA cluster) các số liệu thu được cho thấy sự gần gũi hoặc tách biệt di truyền của các mẫu nghiên cứu. Ưu và nhược điểm của phương pháp Ưu điểm của phương pháp RAPD là thời gian thực hiện nhanh, dễ làm và ít tốn kém, giúp cho xác định tính đa dạng sinh học, nguồn gốc các giống động vật, thực vật và vi sinh vật [17]. Kỹ thuật chỉ cần một lượng DNA nhỏ làm khuôn, không đòi hỏi phân lập và đọc trình tự, có thể phát hiện nhiều locus cùng lúc do đó phân tích được lượng mẫu lớn. Đồng thời RAPD không dùng chất phóng xạ để phát hiện đa hình. Do đó RAPD thường dùng trong phân tích và xác định mối quan hệ thân thuộc giữa các thứ (variety) cây trồng hay giữa các cá thể để phục vụ công tác lai tạo hoặc phân loại. RAPD cũng có một số hạn chế như sau: có tính trội (dominant) do đó khó phân biệt được những gen lặn hay cá thể dị hợp tử. Có tính chất ngẫu nhiên nên sản phẩm PCR thường không thống nhất nếu được lặp lại thí nghiệm (không ổn định). Độ tin cậy còn tùy thuộc vào kỹ thuật của cá nhân. Kỹ thuật RAPD có độ chính xác không cao do đó khả năng nhận diện chỉ thị phân tử thấp. 2.1.2. RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) Ngay từ khi ra đời, RFLP là một chỉ thị phân tử rất hữu dụng trong việc đánh giá đa dạng di truyền. RFLP (Restrition Fragment Length Polymorphism DNA) là DNA đa hình chiều dài các phân đoạn DNA được cắt giới hạn, biểu hiện sự khác nhau về kích thước các phân đoạn được tạo ra khi cắt DNA bằng các enzyme cắt giới hạn khi có sự thay đổi trình tự trên DNA bộ nhân hoặc trong các bào quan khác. 9 Ngày nay, RFLP là kỹ thuật phân tích đa dạng di truyền được sử dụng phổ biến nhất. Nguyên tắc của kỹ thuật này dựa trên độ đặc hiệu của các enzyme cắt hạn chế đối với vị trí nhận biết của chúng trên DNA bộ gene. DNA bộ gene sẽ được cắt bởi các enzyme cắt hạn chế, chạy điện di qua gel agarose, thấm qua màng lai và lai với một mẫu dò DNA (được đánh dấu phóng xạ) liên kết với một locus đặc biệt. Sự khác biệt vị trí cắt giữa hai cá thể sẽ tạo ra những phân đoạn cắt khác nhau. Ưu và nhược điểm của phương pháp RFLP có ưu điểm là marker đồng trội cho phép phân biệt được cá thể đồng hợp và dị hợp. Do kích thước DNA khảo sát trong RFLP lớn vì vậy số lượng marker tạo ra nhiều đủ đáp ứng nhu cầu nghiên cứu. Tuy nhiên do quy trình thực hiện phức tạp, nguy hiểm do sử dụng đánh dấu phóng xạ, DNA yêu cầu chất lượng cao đã làm hạn chế việc sử dụng kỹ thuật này [1]. Cùng với sự phát triển của kỹ thuật PCR, kỹ thuật RFLP trở nên đơn giản hơn. Một cặp mồi oligonucleotide có thể dùng khuếch đại một vùng DNA cần khảo sát, sau đó đoạn DNA được khuếch đại được cắt bằng enzyme cắt hạn chế, điện di và phân tích trên gel nhuộm ethidium bromide hoặc bạc. PCR-RFLP bỏ qua bước lai phóng xạ nên giá thành rẻ hơn và ít nguy hiểm hơn phương pháp RFLP. 2.1.3. AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) AFLP được định nghĩa là sự đa hình các đoạn cắt khuếch đại, là kỹ thuật kết hợp giữa RFLP và PCR. AFLP sử dụng enzyme cắt giới hạn cắt DNA bộ gene, sử dụng những phân đoạn DNA làm khuôn cho phản ứng khuếch đại PCR. AFLP có thể dùng để phân biệt các cá thể rất gần nhau. Sự khác nhau trong chiều dài các đoạn khuếch đại có thể do những thay đổi của các base trong vùng trình tự mồi, hoặc thêm, mất đoạn ở giữa hai vị trí cắt. 10 [...]... multifasciata Kuhl, 1820 thu được ở miền Trung và Tây Nguyên Phân loại: Thằn lằn bóng Eutropis multifasciata Kuhl, 1820 Giới: Animalia Ngành: Chordata Lớp: Reptilia Bộ: Squamata Phân bộ: Lacertilia Họ: Scincidae Giống: Eutropis Loài: Eutropis multifasciata Kuhl, 1820 Bảng 2.1 Cặp primer đặc hiệu cho đoạn gen 12S rRNA của hệ gen ty thể thằn lằn bóng Eutropis multifasciata Kuhl, 1820 dNTP- 12S EMF CTTAGCCCTTAACACAGACA... vùng peptide hoàn chỉnh của gen 12S rRNA (mã số Genebank AY159059) Kết quả phân lập gene 12S rRNA của chúng tôi có kích thước tương tự như một số tác giả đã nghiên cứu trước đó Chẳng hạn như, Patrick Mausfeld và Andreas Schmitz (2003) khi tiến hành nghiên cứu đã nghiên cứu sự đa dạng chủng loại và hình thành loài của thằn lằn bóng châu Á Eutropis Fitzinger, 1843 đã thu được gen 12S rRNA kích thước khoảng... Schmitz (2003) đã nghiên cứu sự đa dạng chủng loại và hình thành loài của thằn lằn bóng châu Á Eutropis Fitzinger, 1843 Nghiên cứu sử dụng 2 phân đoạn 16S rRNA gồm 564 bp và 12S rRNA gồm 408 bp Kết quả cho thấy loài Trung Đông chắc chắn không thuộc Eutropis, thay vào đó các loài Eutropis auratus (L.) và Eutropis septemtaeniatus có thể đại diện cho các loài riêng biệt Thêm vào đó, nghiên cứu làm sáng tỏ... 16S rRNA của các cá thể L guentherpetersi và L reevesii trên ngân hàng GenBank [5] Nói chung, các nghiên cứu đã công bố về thằn lằn bóng ở Việt Nam chỉ mới tập trung về mặt sinh học, sinh thái, khu hệ và định loại 20 Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng, vật liệu, hoá chất và thiết bị nghiên cứu 2.1.1 Đối tượng và vật liệu Các mẫu đuôi của thằn lằn bóng Eutropis multifasciata Kuhl,. .. Carranza và Arnold (2003) nghiên cứu nguồn gốc xuyên đại dương của thằn lằn bóng Mabuya bằng chỉ thị phân tử mtDNA phân lập được gen 12S rRNA có kích thước 379 bp [20] Hình 3.2 Kết quả phân lập gene 12S rRNA trên gel agarose 1% H1-H10: các mẫu thu ở Huế, HT: mẫu thu ở Hà Tĩnh, QT: mẫu thu ở Quảng Trị, M: marker HyperLadder TM 100bp , DCA: đối chứng âm 34 3.2 Tạo dòng gene 12S rRNA 3.2.1 Tạo dòng gene 12S rRNA. .. hệ gen ty thể 16S rRNA và 12S rRNA của 44 loài thuộc Đông Nam Á và Nam Á, Afro-Malagasy, Neotropical và Cape Verdean Kết quả nghiên cứu chỉ ra nguồn gốc ban đầu của Eutropis Đông Nam Á vào Ấn Độ khoảng 5,5 đến 17 triệu năm trước khi châu Á và châu phi nối liền nhau [21] 3.1.2 Ở Việt Nam Năm 1979, Đào Văn Tiến thống kê thành phần và khóa định loại thằn lằn Việt Nam đã nêu lên 4 loài Thằn lằn bóng ở nước... học của giống thằn lằn bóng Mabuya Neotropical, đặc biệt nhấn mạnh giống Mabuya 18 nigropunctata Nghiên cứu sử dụng 1532 bp của hệ gen ty thể để phân tích sự hình thành loài của 106 giống Mabuya Neotropical Kết quả nghiên cứu chỉ ra được 3 sự khác nhau lớn của các nhóm thằn lằn bóng Tây, Nam và Đông Amazonia Kết quả cho thấy mối quan hệ phát sinh loài của Mabuya Neotropical được công bố bởi Whiting và. .. phân tử thằn lằn bóng trên thế giới và Việt Nam 3.1.1 Trên thế giới Masanao Honda, Hidetoshi Ota, Mari Kobayashi, Jaruijinn Nabhitabhata, Hoi- Sen Yong và Tsutomu Hikida (1999) đã nghiên cứu sự 15 tiến hóa của họ thằn lằn bóng Mabuya, đánh giá trên lĩnh vực phân tử Mối quan hệ phát sinh loài giữa thằn lằn bóng châu Á và châu Phi (họ Mabuya) được suy ra bằng chỉ thị phân tử hệ gen ty thể 12S và 16S rRNA. .. cất và cho vào hệ thống máy đọc gel Chụp ảnh và phân tích kết quả 25 2.2.4 Tạo dòng gen 2.2.4.1 Nhân đoạn gen 12S rRNA Chúng tôi tiến hành phân lập gene 12S rRNA dựa trên kỹ thuật PCR, các cặp primer sử dụng để phân lập được thiết kế dựa vào trình tự được đăng ký trên Genebank với mã số ….bằng phần mềm Primer 3 Bảng 2.1: Cặp primer sử dụng trong phân lập gen 12S rRNA Gene Primer dNTP 12S rRNA (12S. .. thái của 2 loài thằn lằn bóng giống Mabuya Fitzinger, 1826 (M logicaudata, M multifasciata) ở Thừa Thiên Huế Công trình đã nghiên cứu về các đặc điểm sinh thái của thằn lằn bóng về phân bố, thành phần thức ăn, các đặc điểm về sinh sản Nghiên cứu đã bổ sung một số hiểu biết về thằn lằn bóng tại Thừa Thiên Huế mà các tài liệu có được cho đến nay chưa đề cập hoặc đề cập còn ít, cung cấp một số cơ sở khoa . thằn lằn bóng. Xuất phát từ các lý do trên chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài Nghiên cứu đa hình gen 12S rRNA của thằn lằn bóng Eutropis multifascisata Kuhl, 1820 ở miền Trung và Tây Nguyên . 2 Mục tiêu nghiên cứu Đánh giá đa dạng di truyền thằn lằn bóng Eutropis multifascisata Kuhl, 1820 ở miền Trung và Tây Nguyên. 3. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu Chúng tôi tiến hành nghiên cứu trên. đuôi của thằn lằn bóng Eutropis multifascisata Kuhl, 1820 thu được ở miền Trung và Tây Nguyên. 4. Nội dung nghiên cứu - Tách chiết và đánh giá chất lượng DNA tổng số - Tạo dòng gen 12S rRNA -