Thời vụ trồng nấm Linh ChiThời gian bắt đầu cấy giống từ ngày 151 đến 153 và từ 158 đến 159 dương lịch.Nguyên liệuLinh Chi sử dụng nguyên liệu chủ yếu là mùn cưa tươi, khô của các loại gỗ mềm, không có tinh dầu và độc tố. Ngoài ra còn có thể trồng Linh Chi từ nguyên liệu là thân gỗ, các cây thuốc họ thân thảo.Phương pháp xử lý nguyên liệu Chuẩn bị: Mùn cưa của các loại gỗ kể trên. Túi nilon chịu nhiệt. Bông nút, cổ nút… Các phụ gia khác (bột nhẹ,…) Nước sạch (nước sinh hoạt ăn, uống hàng ngày).Phương pháp đóng túi: Mùn cưa được tạo ẩm và ủ tương tự như phần xử lý mùn cưa trồng mộc nhĩ.Sau đó phối trộn thêm với các phụ gia đóng vào túi theo kích thước trên sao cho khối lượng túi đạt 1,11,4kg rồi đưa vào thanh trùng.Phương pháp thanh trùng:Phương pháp 1: Hấp cách thuỷ ở nhiệt độ 1000C, thời gian kéo dài 1012 giờ.Phương pháp 2: Thanh trùng bằng nồi áp suất (Autoclave) ở nhiệt độ 1191260C (áp suất đạt 1,21,5at) trong thời gian 90120 phút.Phương pháp cấy giốngChuẩn bị: Phòng cấy: Phòng cấy giống phải sạch (được thanh trùng định kỳ bằng bột lưu huỳnh). Dụng cụ cấy giống: que cấy, panh kẹp, đèn cồn, bàn cấy, cồn sát trùng… Nguyên liệu: Đã được thanh trùng, để nguội. Giống: Sử dụng hai loại giống chủ yếu là trên hạt và trên que gỗ.Giống phải đúng tuổi, không bị nhiễm nấm mốc, vi khuẩn, nấm dại…Cấy giống:Phương pháp 1: Cấy giống trên que gỗ. Với phương pháp này cần tạo lỗ ở túi nguyên liệu có đường kính 1,82cm và sâu 1517cm. Khi cấy giống phải đặt túi nguyên liệu gần đèn cồn và túi giống, sau đó gắp từng que ở túi giống cấy vào túi nguyên liệu.Phương pháp 2: Sử dụng giống Linh Chi cấy trên hạt. Ta dùng qua cấy kều nhẹ giống cho đều trên bề mặt túi nguyên liệu tránh giập nát giống. Lượng giống: 1015gam giống cho 1 túi nguyên liệu (1 túi giống 300 gam cấy đủ cho 2530 túi nguyên liệu).Chú ý:Giống cấy phải đảm bản đúng độ tuổi.Trước khi cấy giống ta phải dùng cồn lau miệng chai giống bóc tách lớp màng trên bề mặt nhưng không được để hạt giống bị nát.Trong quá trình cấy, chai giống luôn phải để nằm ngang.Sau khi cấy giống ta đậy lại nút bông, vận chuyển túi vào khu vực ươm. Phải thường xuyên vệ sinh sạch sẽ phòng cấy giống. Phương pháp ươm túiChuẩn bị khu vực ươm:Nhà ươm túi đảm bảo các yêu cầu: Sạch sẽ, thông thoáng, độ ẩm từ 75% đến 85%, ánh sáng yếu, nhiệt độ 20300C.Ươm túi: Chuyển nhẹ nhàng vào nhà ươm và đặt trên các giàn giá hoặc xếp thành luống. Khoảng cách giữa các túi 23cm. Giữa các giàn luống có lối đi để kiểm tra.Trong thời gian ươm không được tưới nước, hạn chế tối đa việc vận chuyển.Trong quá trình sợi nấm phát triển nếu thấy có túi bị nhiễm cần phải loại bỏ ngay khỏi khu vực ươm, đồng thời tìm nguyên nhân để có cách khắc phục:Túi bị nhiễm bề mặt phần lớn do thao tác cấy và phòng giống bị ô nhiễm.Túi bị nhiễm từng phần hoặc toàn bộ có thể do bị thủng hoặc hấp vô trùng chưa đạt yêu cầu.Phương pháp chăm sóc, thu háiChuẩn bị các điều kiện: Nhà trồng nấm phải đảm bảo sạch sẽ thông thoáng, có mái chống mưa dột và chủ động được các điều kiện sinh thái như sau: Nhiệt độ thích hợp cho nấm mọc dao động từ 220C đến 280C. Độ ẩm không khí đạt 8090%. Ánh sáng khuếch tán (mức độ đọc sách được) và chiếu đều từ mọi phía. Kín gió. Trong nhà có hệ thống giàn giá để tăng diện tích sử dụng.Trong quá trình chăm sóc, thu hái linh chi có 2 phương pháp sau:Phương pháp không phủ đấtRạch túi và tưới nước. Kể từ ngày cấy giống đến khi rạch túi (khoảng 2530 ngày) sợi nấm đã ăn kín ¾ túi. Tiến hành rạch 2 vết rạch sâu vào trong túi 0,20,5cm, đối xứng trên bề mặt túi nấm. Đặt túi nấm trên giàn cách nhau 23cm để nấm ra không chạm vào nhau.Từ 7 đến 10 ngày đầu chủ yếu tiến hành tưới nước trên nền nhà, đảm bảo độ ẩm 8090%, thông thoáng vừa phải.Khi quả thể nấm bắt đầu mọc từ các vết rạch hoặc qua nút bông thì ngoài việc tạo ẩm không khí, có thể tưới phun sương nhẹ vào túi nấm mỗi ngày từ 13 lần (tuỳ theo điều kiện thời tiết). Chế độ chăm sóc như trên được duy trì liên tục cho đến khi viền trắng trên vành mũ quả thể không còn nữa là hái được.Thu hái: Dùng dao hoặc kéo sắc cắt chân nấm sát bề mặt túi. Quả thể nấm sau khi thu hái được vệ sinh sạch sẽ, phơi khô hoặc sấy ở nhiệt độ 400C450C. Độ ẩm của nấm khô dưới 13%, tỷ lệ khoảng 3kg tươi được 1 kg khô. Khi thu hái hết đợt 1, tiến hành chăm sóc như lúc ban đầu để tận thu đợt 2. Năng suất thu hoạch đạt 69% tươi, tương đương 1,83% khô (1 tấn nguyên liệu thu được từ 18 đến 30kg nấm Linh Chi khô). Khi kết thúc đợt nuôi trồng cần phải vệ sinh và thanh trùng nhà xưởng bằng foócmôn với nông độ 0,51%.Phương pháp phủ đấtChuẩn bị đất phủ (tương tự như đất phủ nấm mỡ).Cách phủ đất: Khi sợi nấm đã ăn kín khoảng ¾ túi, gỡ bỏ nút bông, mở miệng túi, phủ lên trên bề mặt một lớp đất có chiều dày 23cm.Chăm sóc sau khi phủ đất: Nếu đất phủ khô cần phải tưới rất cẩn thận (tưới phun sương) để đất ẩm trở lại. Tuyệt đối không tưới nhiều, nước thấm xuống nền cơ chất sẽ gây nhiễm bệnh, ảnh hưởng đến quá trình hình thành quả thể nấm. Trong thời gian 710 ngày đầu (kể từ lúc phủ đất) cần duy trì độ ẩm không khí trong nhà đạt 8090% bằng cách tưới nước thường xuyên trên nền nhà. Khi quả thể bắt đầu hình thành và nhô lên trên mặt lớp đất phủ cần duy trì độ ẩm liên tục như trên cho đến thời điểm thu hái được. Thời gian từ khi nấm lên đến lúc thu hoạch kéo dài khoảng 6570 ngày.Khi đó ngoài việc duy trì độ ẩm trong phòng thì ta còn phải tưới phun sương nhẹ trực tiếp trên bề mặt đất phủ 13 lần trong ngày (tuỳ theo điều kiện thời tiết) mục đích để giúp đất phủ luôn duy trì độ ẩm (tương tự độ ẩm của đất trồng rau). Việc chăm sóc như trên kéo dài liên tục cho tới khi viền màu trắng trên mũ nấm không còn nữa, lúc đó nấm đến tuổi thu hái.
Trang 1SEMINAR QUY TRÌNH TRỒNG NẤM LINH CHI
Môn : Nấm và Vi nấm
1.Giới thiệu chung về giới Nấm :
Theo quan niệm cũ, nấm là thực vật, nhưng là thực vật không có diệp lục ( Chlorophyl) Tuy nhiên, những nghiên cứu sau này về sinh lý và dinh dưỡng cho thấy nấm khác biệt với thực vật.
- Nấm không có diệp lục, không có khả năng quang hợp, nghĩa là không thể tự tổng hợp các chất hữu cơ cho cơ thể từ nước và CO2, sống dị dưỡng nhờ chất hữu cơ có sãn trong môi trường.
- Vách tế bào chủ yếu là chitin và glucan.
- Cơ thể nấm là đơn bào, đa bào, tế bào thuộc sinh vật có nhân thực.
- Đường dự trữ trong tế bào là glycogen, thay vì tinh bột.
- Có nhiều đặc điểm của thực vật như thành tế bào có xenlulose, kitin, có nhiều không bào chứa dịch tế bào; không có khả năng di động.
Tuy nhiên, nấm cũng không phải là thực vật, bởi :
- Nấm sinh sản bằng nhiếu hình thức, chủ yếu bằng bào tử ( vô tính hoặc hữu tính ).
- Sự dinh dưỡng của nấm lại liên quan đến hệ sợi nấm Chất dinh dưỡng được hấp thụ qua màng tế bào của hệ sợi nấm tương tự như rễ của thực vật.
Vì vậy, nấm đã được tách ra khỏi giới thực vật và thành lập một giới riêng, gọi là giới nấm ( hiện nay đã mô tả được hơn 65.000 loài).
Có nên thêm sự phân loại của nấm, giá trị dinh dưỡng, giá trị dược liệu hay như ri là đủ rùi mọi người???
2.Tổng quan về nấm linh chi :
Trang 2Linh chi là vị thuốc quý đã được loài người nghiên cứu sử dụng từ lâu đời Trongsách “Thần nông bản thảo” – một dược thư cổ của Trung Quốc cách đây hơn 2.000năm cũng ghi lại khá nhiều tác dụng chữa bệnh của linh chi Linh chi còn có nhiềutên khác như thuốc Thần tiên, nấm Trường thọ, cỏ Trường sinh v.v… Xưa kia linhchi chỉ được khai thác trong thiên nhiên nên nó là loại thuốc quý, hiếm và rất đắttiền Giá một lạng linh chi còn đắt hơn một lạng vàng ròng nên chỉ dành để tiến vua,chúa hoặc bán cho những người giàu có.
Linh chi (Ganoderma) có chu trình sống giống các loại nấm đảm khác, vị trí phân
loại như sau:
Ngành: Eumycote
Bộ: Polyporales
Chi: Ganoderma
Trang 3 Nấm Linh Chi (quả thể) cây nấm gồm 2 phần cuống nấm và mũ nấm (phầnphiến đối điện với mũ nấm).
Cuống nấm dài hoặc ngắn hay không cuống, đính bên có hình trụ đường kính0,5-3cm Cuống nấm cứng, ít phân nhánh, đôi khi có uốn khúc cong queo Lớp vỏcuống màu đỏ, nâu đỏ, nâu đen, bóng, không có lông, phủ suốt lên mặt tán nấm
Mũ nấm (tai nấm) hoá gỗ, xoè tròn, khi non có hình trứng, lớn dần có hìnhquạt, hình bầu dục hoặc thận Trên mặt mũ có vân gạch đồng tâm màu sắc từ vàngchanh- vàng nghệ- vàng nâu – vàng cam – đỏ nâu – nâu tím, nhẵn, được phủ bởi lớpsắc tố bóng như láng vecni Mũ nấm có đường kính 2-15cm, dày 0,8-1,2cm, phầnđính cuống thường gồ lên hoặc hơi lõm Mặt dưới phẳng, màu trắng hoặc vàng, cónhiều lỗ li ti, là nơi hình thành và phóng thích bào tử nấm Bào tử nấm dạng trứngcụt với hai lớp vỏ, giữa hai lớp vỏ có nhiều gai nhọn nối từ trong ra ngoài
Trang 4Chu trình phát triển của nấm linh chi
Khi nấm đến tuổi trưởng thành thì phát tán bào tử từ phiến có màu nâu sẫm
Cấu tạo nấm linh chi
2. Công dụng của nấm linh chi
Theo cách diễn đạt truyền thống của người phương Đông, các tác dụng cụ thể củanấm Linh Chi được tập hợp vào những mặt tác dụng lớn như sau:
Kiện não (làm sáng suốt, minh mẫn)
Bảo can (bảo vệ gan)
Trang 5 Cường tâm (thêm sức cho tim)
Kiện vị (củng cố dạ dày và hệ tiêu hoá)
Cường phế (thêm sức cho phổi, hệ hô hấp)
Giải độc (giải toả trạng thái nhiễm độc)
Giải cảm (giải toả trạng thái dị cảm)
Trường sinh (sống lâu tăng tuổi thọ)
Qua phân tích các hoạt chất về mặt dược tính, dược lý và sử dụng nấm Linh Chi,người ta thấy Linh Chi có tác dụng rất tốt với các bệnh:
Nấm Linh Chi có tác dụng điều hoà, ổn định huyết áp Khi dùng cho người huyết ápcao, nấm Linh Chi không làm tăng mà làm giảm bớt, dùng nhiều thì huyết áp ổnđịnh Đối với những người suy nhược cơ thể, huyết áp thấp thì nấm Linh Chi có tácdụng nâng huyết áp lên gần mức dễ chịu nhờ cải thiện, chuyển hoá dinh dưỡng Đốivới bệnh nhiễm mỡ, xơ mạch, dùng nấm Linh Chi có tác dụng giảm cholesterol toànphần, làm tăng nhóm lipoprotein tỷ trọng cao trong máu, làm giảm hệ số sinh bệnh.Nấm Linh Chi làm giảm xu thế kết bờ của tiểu cầu, giảm nồng độ mỡ trong máu,giảm co tắc mạch, giải toả cơn đau thắt tim
Nấm Linh Chi đem lại kết quả tốt, nhất là với những ca điều trị viêm phế quản dịứng, hen phế quản tới 80% có tác dụng giảm và làm nhẹ bệnh theo hướng khỏi hẳn
Trang 6Ổn định huyết áp, lọc sạch máu tăng cường tuần hoàn máu, giảm mệt mỏi, hỗ trợthần kinh, chống đau đầu và tứ chi, điều hoà kinh nguyệt, làm da dẻ hồng hào chốngcác bênh ngoài da như dị ứng, trứng cá
Ngoài ra nấm Linh Chi còn có tác dụng tốt tới các bệnh gan mãn tính mới phát, nâng cao chức năng gan, ổn định đường huyết ở những người bị bệnh đái tháo đường Các tác giả ở Đài Loan dùng Linh Chi trồng trên gỗ long não điều trị
ung thư cho kết quả rất tốt – khối u tiêu biến hoàn toàn Trên cơ sở nguyên lý hiệu
dụng là do nấm Linh Chi làm tăng và khôi phục hệ miễn dịch Hàng năm doanh thucủa các chế phẩm chống ung thư điều chế từ các loài nấm Linh Chi ở Đài Loan đạttrên 35 triệu USD
3.Sơ đồ quy trình trồng nấm Linh Chi :
Làm ẩm Nguyên liệu
Phối trộn phụ gia Đảo
Trang 74.Công đoạn phân lập giống và nhân giống :
Tinh chế sản phẩm
Nhân giống cấp 2
Nhân giống cấp 3
Thu hái Chăm sóc Nuôi sợi Cấy giống Khử trùng
Trang 8Giống gốc phải ổn định về các đặc tính di truyền, đảm bảo năng suất và hiệu quả kinh tế Thực hiện cấy chuyền nấm gốc sang môi trường thạch cấp I, hệ sợi nấm
sẽ sinh trưởng tạo thành các ống giống cấp I Ta tiến hành lựa chọn các ống giống cấp I đạt tiêu chuấn đế sử dụng nhân giống cấp II hoặc đưa vào bảo quản
để tạo nguồn giống, sử dụng dần.
Môi trường cấp II là môi trường rắn, có thể dạng hạt (như hạt thóc, bo bo, ) hoặc dạng que
(như thân cây sắn, ) cấy chuyền giống cấp I đã lựa chọn sang môi trường cấp II,
hệ sợi sinh trưởng và mọc lan trên các hạt, que dến khi ăn kín đáy chai, hình thành các chai giống cấp II Tiến hành lựa chọn các chai giống đạt tiêu chuẩn để
sử dụng nhân giống cấp III hay đưa vào bảo quản để tạo nguồn giống, sử dụng dần.
Trang 9Môi trường cấp III có thành phần hoàn toàn giống như môi trường cấp II, nhưng được đóng vào các túi nilon cấy chuyền giống cấp II đã được lựa chọn sang môi trường cấp III, hệ sợi sinh trưởng và mọc lan trên các hạt, que đến khi ăn kín đáy túi, hình thành các túi giống cấp III Tiến hành lựa chọn các chai giống đạt tiêu chuẩn để sử dụng nuôi trồng nấm Mục đích của việc nhân giống cấp III là làm tăng số lượng giống nấm.
Phân lập giống : ( chuẩn bị giống gốc )
mô thịt nấm cho đến khi phủ kín các bề mặt thạch.
Giống được dùng làm giống gốc phải đạt các yêu cầu sau:
-Là giống thuần, không lẫn tạp.
-Tơ mọc khỏe chia nhánh đều.
-Tơ nấm bò sát mặt thạch hoặc ăn vòng thành ống nghiệm, ít tơ khí sinh, tơ rối bông.
Trang 10Giống gốc là khâu quyết định trong sản xuất và nuôi trồng nấm vì nó được nhân
ra với số lượng lớn và chỉ biết kết quả sau một vài tháng, nghĩa là sau khi thu hoặc nấm Do đó sơ suất khi chọn giống gốc sẽ dẫn đến thiệt hại rất lớn.
Tóm lại, giống gốc là khâu quyết định trong sản xuất và nuôi trồng nấm, nên rất cần sự cẩn thận khi thực hiện.
1.2. Chuấn bị môi trường dinh dưỡng
1.2.1. Môi trường PDA.
Công thức:
Đường glucose: 20g
Ngoài những thành phần trên một số môi trường thường bổ sung thêm một số
nguyên tố khoáng: K, p, Mg dưới dạng muối vô cơ, các thành phần này bố sung
với liều lượng khoảng l-3g/ lít môi trường, cũng có khi bố sung thêm vào môi trường tỉ lệ nhỏ các loại vitamin, kháng sinh
1.2.2. Các bước tiến hành
Chuẩn bị nguyên liệu
- Nồi Autoclave, tủ ấm, tủ cấy vô trùng
- Bep gas ( hoặc bếp tù’, lò vi sóng)
- Nồi nấu môi trường
Trang 11- Cốc thủy tinh, ống đong, ống nghiệm, chai thủy tinh, đũa thủy tinh
- Cân kỹ thuật
- Máy đo pH, giấy đo pH
- Phễu, giá rót môi trường, rổ, vợt, vải lọc, dao cắt
- Bông không thấm nước, giấy báo, nilon, dây cao su.
- Nước cất
- Khoai tây: loại tốt, không bị hư hỏng, không nảy mầm
- Chuẩn bị hóa chất
- Agar
- Đường Glucose ( hoặc Sachrose)
- Muối khoáng, vitamin, kháng sinh (nếu cần bổ sung)
2.2.2. Pha chế môi trường cấp I
Tạo môi trường dinh dưỡng nhân giống nấm cấp I từ hỗn hợp các thành phần theo công thức hỗn hợp trên
Sau khi tạo hỗn hợp môi trường xong, phần môi trường vào các ống nghiệm và đậy bằng nút bông không thấm nước
*Thao tác thực hiện:
Bước 1: Kiểm tra lại các dụng cụ, nguyên liệu cần thiết
Bước 2: Chiết chất dinh dưỡng từ khoai tây
- Khoai tây gọt vỏ, rửa sạch, cắt thành khối có kích thước 1 -2cm 2
Trang 12- Cân chính xác 200g khoai tây đã cắt thành hình khối cho vào nồi nấu môi trường
- Đố 600ml nước cất vào nồi và đun sôi trên bếp ga (hoặc bếp từ)
Đun cho đến khi khoai tây hơi mềm: dùng dũa bẻ đôi khối khoai tây, đến khi khối khoai tây gãy đôi là được
Bước 3: Chuẩn bị dung dịch nước đường
Đặt cân về vị trí cân bằng, đầy dủ ánh sáng
Điều chỉnh cân về vị trí cân bằng
Cân chính xác 20g đường glucose cho vào cốc thủy tinh
Đong 100ml nước cất cho vào cốc đã có đường
- Khay tan đường Bước 5: Nấu môi trường
- Cân 20g agar cho vào dung dịch khoai tây
- Khay cho agar hòa tan
- Thêm nước cất cho đến khi thể tích đúng1 OOOml
- Đun sôi môi trường 3-5 phút (lưuý: khi nấu agar phải khuấy đều, để agar không bị lắng dưới đáy, dễ bị khét)
- Thêm dung dịch nước đường vào, ta thu được môi trường cấp I
- Bắt xuống, để nguội
Bước 6: Phân phối môi trường vào ống nghiệm hoăc chai thủy tinh
Đổ môi trường cấp I vào các cốc có miệng để dễ rót vào ống nghiệm, chai
Trang 13Dùng phễu phân nhanh môi trường vào các ống nghiệm hoặc chai thủy tinh: đối với ống nghiệm lượng môi trường chiếm khoảng 1/5 ống nghiệm (6-7 ml/1 ống nghiệm), đối với chai thủy tinh từ 5-10 ml, nấu đổ vào ống nghiệm thì phễuđược
cố định trên một giá đỡ.
Bước 7: Làm nút bông cho ống nghiệm, chai thủy tinh đã có môi trường
Lấy một lượng bông vừa đủ: sao cho nút bông sau khi làm xong không quá chắt hay quá lỏng, phần nút bông trong ống nghiệm tròn đều, phần ngoài không bị xơ Bước 8: Chuyển các ống nghiệm, chai thủy tinh có môi trường vào nồi khử trùng
2.2.3. Khử trùng môi trường cấp I
Mục đích khử trùng là đế tiêu diêt hoàn toàn các nguồn tạp nhiễm trong môi trường, môi trường sau khi hấp khử trùng xong phải đảm bảo vô trùng tuyệt đối
và không làm giảm chất lượng môi trường
Thiết bị thường áp dụng là nồi hấp Autoclave 121°C/25 phút Sau khi hấp thanh trùng kết thúc môi trường đang còn ở trạng thái lỏng ta tiến hành làm thạch nghiêng ngay.
-Bước 3: xếp môi trường vào các dụng cụ đưa vào nôi Autoclave hấp khử trùng
121°C/25 phút.
-Bước 4: Lấy môi trường ra khỏi nồi và tiến hành làm thạch nghiên.
Dùng que gỗ mỏng đặt lên trên một mặt phang có thể dùng giá nghiêng đã được thiết kế cho tạo môi trường thạch nghiêng.
Trang 14Lấy tòng ống môi trường sau khi đẫ khử trùng còn nóng đặt nghiêng trên que gỗ nghiêng 1 góc 40-45°
Cứ tiến hành cho đến hết các ống môi trường còn
lại
-Bước 5: Đê nguội môi trường trong khoảng thời gian 1-2 giờ
-Bước 6: Kiếm tra vô trùng môi trường trước khi sử dungj trong nhân giống:các ống, chai môi trường sau khi đông rắn ta tiến hành chyến vào tủ ấm ở nhiệt độ 35- 37°c ít nhất sau 7 ngày, kiểm tra nếu môi trường không thấy có mặt các vi sinh vật mọc trong môi trường, màu môi trường không thay đối thì môi trường đạt yêu cầu Các ống nghiệm, chai môi trường được đặt vào tủ lạnh, nhiệt độ 2- 10°C để dùng dần.
1.3. Cấy chyền giống nấm cấp I
Cấy chuyền giống nấm cấp I là quá trình chuyển giống nấm từ các ống giống gốc sang các ống nghiệm, chai thủy tinh chứa môi trường cấp I đã được vô trùng và thao tác cấy chuyền được thực hiện trong điều kiện vô trùng.
1.3.1. Kiếm tra phòng cấy, tủ cấy và dụng cụ cấy giống
Trước khi tiến hành thao tác cấy chuyền giống yêu cầu: phòng cấy phải được khử trùng nhằm hạn chế sự xâm nhập nguồn tạp nhiễm vào giống nấm trong quá trình cấy chuyền.
-Phòng cấy', phải luôn sạch sẽ, vì vậy cần phải:
• Quét dọn lau sạch sàn, xung quanh tường bằng nước sạch trước và sau mỗi lần cấy giống
• Bậc quạt thông gió
-Tủ cấy:
Trang 15• Dùng bông thấm cồn lau sạch tủ bên trong, ngoài tủ
• Phủ màn tối kín tủ
• Bật đèn tủ’ ngoại, quạt trong thờigian 15-30 phút
• Lấy màn che khỏi tủ
Tắt đèn tử ngoại sau thời gian 15-30 phút để đẩy hết khí ozon ra khỏi tủ
Bật đèn sáng
Tiến hành cấy giong:
Dụng cụ cấy: các dụng cụ sử dụng trong phòng cấy giống (bình tam giác, que cấy,panh cấy, kéo ) được bao gói và hấp khử trùng ở nhiệt độ 160- 170°c,saukhikhử trùng
xong phải để vào vị trí sạch sẽ nếu chưa sử dụng ngay.
Cấy chuyền từ ống gốc sang môi trường cấp I
Cách cấy chuyền giống được thực hiện theo các bước sau:
-Bước 1: Mang bảo hộ: áo bluse, khẩu trang
-Bước 2: Khử trùng tay: dùng bông thấm cồn lau từ khủy tay đến các ngón tay, kẽ tay
-Bước 3: Kiếm tra lại các ống (chai) giống gốc và các ống (chai) môi trường cấp I
và dùng bông thấm lau cồn xung quanh các ống ( chai) giống và ống (chai) môi trường trước khi đưa vào tủ.
-Bước 4: Chuyển bộ dụng cụ cấy giống, đèn cồn,bình tam giác có chứa cồn, khay đựng dụng cụ Khử trùng que cấycấy vào tủ cấy và bố trí sao cho tiện trong quá trình thao tác trong tủ.
Trang 16-Bước 5:Ngồi vào vị trí và vệ sinh tay lại một lần nữa bằng cồn và đợi cho tay khô hết cồn.
-Bước 6: Đốt đèn cồn để đèn cồn cháy tự do trong thời gian2-3 phút,ngọnlửađèncồn không nên đế quá lớn hoặc quá nhỏ, nên cao từ 3-4cm.
-Bước 7: Khử trùng lại các dụng cụ cấy bằng cách nhung vaòcồn vàđốt trựctiếptrên ngọn lửa đèn cồn, thao tác lặp lại 2-3 lần, sau đó để nguội
-Bước 8: Mở nút bông và giữ nút bông của ống gốc và ống môi trường bằng kẽ tay
út và áp út, hơ miệng ống nghiệm trên ngọn lửa đèn cồn, chỉ mở quanh ngọn lửa đèn cồn và ở tư thế nằm ngang, quay miệng về hướng ngọn lửa.
-Bước 9: Dùng que cấy chuyển một mẫu giống từ ống giống gốc sang ống (chai) môi trường cap
a) Lấy giống gốc
b)Chuyển mẫu giống gốc
-Bước 10: Hơ miệng ống nghiệm trên ngọn lửa đèn cồn và hơ nhanh nút bông của ống môi trường và đậy nút bông lại.
-Bước 11: Thao tác cứ tiến hành cho đến khi hết lượng giống trong ống giống gốc Trung bình một ống giống gốc như vậy ta cấy được khoảng 30-40 ống giống cấp I -Bước 12: Dùng giấy báo bọc đầu nút bông củaống giốnglại.
-Bước 13: Ghi tên loại giống, ngàygiờ cấy.
-Bước 14: xếp các ống giống cấp I trên các giá và chuyển toàn bộ vào phòng nuôi sợi để trên các giàn kệ nuôi sợi giống.
-Bước 15: Vệ sinh tủ cấy và phòngcấy sau khicấygiống xong
1.4. Nuôi sọi giống nấm cấp I
Trang 17Kiếm tra điều kiện phòng nuôi
- Phòng sạch sẽ không có bụi bẩn, rác thải, không bị ẩm mốc
- Phòng càng ít ánh sáng càng tốt,khô thoáng, có đầy đủ hệ thống điện
- Có hệ thống điều chỉnh nhiệt độ khi cần, thường nhiệt độ thích hợp cho việc nuôi sợi ở nấm Linh Chi là 26°c +_2 và thời gian ăn kín ống nghiệm là 10+_1 Chọn nhiễm và phân lập giống nấm cấp I
Tốc độ sinh trưởng và phát triển hệ sợi nấm cấp I của nấm Linh Chi sẽ phụ thuộc vào trạng thái sinh lý, chất lượng, độ tuổi giống đem nhân giống cũng như thành phần môi trường và điều kiện nuôi sợi Sau thời gian nhất định có những ống giống sợi nấm phát triển mạnh, ăn kín toàn bộ bề mắt thạch, sợi nấm ăn khỏe và có một màu đồng nhất, với những ống như vậy ta sử dụng trực tiếp hoặc chuyển sang bảo quản Tuy nhiên cũng có những ống giống không đạt yêu cầu:
- Bị nhiễm vi sinh vật khác
- Sợi nấm bị thoái hóa hay lão hóa
- Sợi sinh trưởng kém Giống cấp I thường nhiễm các loại:
- Nhiễm khuẩn: Trên môi trường thạch có những vết trắng đụcnhư sữa
- Nhiễm mốc: Trên môi trường xuất hiện những chấm nhỏ nhiều màu, sợigiống nấm không phát triển được.
Nguyên nhân giống nấm bị nhiễm:
+ Hấp khử trùng môi trường không tốt: Môi trường đã khử trùng, để ở nhiệt độ bình thường trong khoảng 3-4 ngày có hiện tượng nhiễm khuấn là do nồi hấp bị hỏng hoặc chế độ khử trùng không đảm bảo.
+ Ống gốc bị nhiễm: Tất cả các ống cấp I được cấy từ ống giống này đều bịnhiễm
+ Do thao tác cấy: Trong khi cấy các ống nghiệm để gần ngọn lửa đèn cồn sẽ làm cho giống chết, thạch bị chảy ra và rất dễ nhiễm khuẩn.
+ Có thể do tủ cấy không đảm bảo vô trùng hoặc phòng cấy không thường xuyên khử trùng