Nghiên cứu bệnh lá vàng greening hại cây ăn quả có múi ở một số tỉnh phía Bắc Việt Nam và đề xuất biện pháp phòng chống (tóm tắt + toàn văn)

asiaticus gây nh vàng lá greening trên cây có múi 4.2.. Xác nh các ch ng vi khu n L.asiaticus gây b nh trên cây có múi, s phân b các ch ng vi khu n... Theo tác gi Su et al.. Các ch ng k

VI N KHOA H C NÔNG NGHI P VI T NAM

VI N KHOA H C NÔNG NGHI P VI T NAM

U

1 Tính c p thi t c a tài

Cây n qu có múi (cam, quýt, chanh, b i…) là nhóm cây n qu quan tr ng trong s n xu t nông ngh i p n c ta N m 2011 di n tích cây n qu có múi Vi t Nam t 124.057 ha, trong ó di n tích tr ng cam quýt là 70.300 ha, b i 45.000 ha, chanh là 18.000 ha Các lo i qu có múi không ch là hàng hóa áp ng cho tiêu th

i a mà còn là m t hàng xu t kh u có giá tr kinh t cao Ngh tr ng cây n qu có múi c phát tri n m nh m nhi u n c thu c vùng nhi t i, á nhi t i và ôn

i Song s a d ng khí h u các vùng tr ng tr t là u ki n thích h p cho nhi u loà i sâu b nh phát sinh gây h i trên cây có múi, c bi t b nh vàng lá greening (VLG)

t trong nh ng nhân t tr ng i chính phát tri n cây có múi ã lan truy n gây h i

h u h t các n c tr ng cây n qu có múi

nh VLG lan truy n t các v t li u nhân gi ng nh cành chi t, m t ghép ã nhi m b nh và côn trùng môi gi i Nh ng nghiên c u b c u v b nh này Vi t Nam ã c ti n hành, song nh ng v n v b n ch t c a b nh v n ch a c tìm

hi u m t cách y Vì v y, nh ng bi n pháp phòng tr b nh v n còn ít hi u qu

Nh m gi i quy t c các yêu c u phòng ch ng b nh VLG và duy trì s n xu t cây

n qu có múi b n v ng cho các vùng tr ng cam quýt phía B c, vi c ti n hành tài

“Nghiên c u b nh vàng lá greening h i cây n qu có múi m t s t nh phía B c

Vi t Nam và xu t bi n pháp phòng ch ng” mang tính th i s c p thi t

4 i t ng và ph m vi nghiên c u

4.1 i t ng nghiên c u

- Vi khu n Liberibacter asiaticus gây b nh vàng lá greening trên cây có múi và môi

gi i truy n b nh r y ch ng cánh Diaphorina citri Kuwayama

- M t s loài cây n qu có múi b n a và nh p n i c tr ng m t s t nh phía

c Vi t Nam, các cây thu c h Rutaceae là ký ch c a vi khu n L asiaticus gây

nh vàng lá greening trên cây có múi

4.2 Ph m vi nghiên c u

tài nghiên c u ph ng th c lan truy n b nh, các y u t nh h ng t i s phát sinh gây h i c a b nh trong u ki n sinh thái các t nh phía B c Xác nh các

ch ng vi khu n L.asiaticus gây b nh trên cây có múi, s phân b các ch ng vi khu n

Nghiên c u m t s gi i pháp có hi u qu phòng ch ng b nh vàng lá greenin g trên cây n qu có múi m t s t nh phía B c

5 Nh ng óng góp m i c a lu n án

- Cung c p b sung d n li u khoa h c v m c ph bi n, tri u ch ng, ký ch c a

nh VLG trên cây n qu có múi phía B c

- L n u tiên xác nh c vi khu n gây b nh vàng lá greening thu c ch ng I và II trên các gi ng cây n qu có múi hi n ang tr ng trong s n xu t phía B c Vi t Nam

- Hoàn thi n c k thu t vi ghép nh sinh tr ng làm s ch b nh greening và các

nh vi rút khác, góp ph n hoàn thi n quy trình s n xu t cây gi ng s ch b nh

- ánh giá tính ch ng ch u c a m t s lo i g c ghép b n a , nh p n i v i b nh vàng

lá greening và xu t các gi i pháp ch ng tái nhi m b nh vàng lá greening

6 C u trúc lu n án

Lu n án g m 146 trang, g m ph n m u 4 trang; Ch ng 1 C s khoa h c và

ng quan tài li u (36 trang); Ch ng 2 V t li u, n i dung và ph ng pháp nghiên c u (19 trang); Ch ng 3 K t qu nghiên c u và th o lu n (85 trang); K t lu n và ki n ngh

2 trang v i 41 b ng s li u, 39 hình Tham kh o 164 tài li u, trong ó có 34 tài li u ti ng

gi i truy n b nh v.v… c ng nh các bi n pháp canh tác, b o v v n cây

Nhi u nhà khoa h c ã kh ng nh phòng ch ng b nh VLG có hi u qu , tr c

t ph i i sâu nghiên c u d ch t h c c a tác nhân gây b nh, các y u t môi tr ng

nh h ng n kh n ng phát tri n, lan truy n b nh trên ng ru ng (Matsumoto et al., 1961; Aubert et al., 1988; Su et al., 1998; Bové et al., 2006)

Các nghiên c u trong n c và trên th gi i ch rõ b nh VLG có kh n ng lan truy n nhanh và m c tàn phá r t cao n u s d ng cây gi ng ã nhi m b nh, k

thu t canh tác không c quan tâm Theo tác gi Su et al (1998); Bové et al (2006);

Hà Minh Trung và c ng s (2008) thì k thu t s n xu t và s d ng cây gi ng s ch

nh, phát hi n s m nh ng cây gi ng b nh i m b nh lo i b khi tr ng c coi là khâu u tiên và h t s c quan tr ng trong vi c xu t gi i pháp phòng ch ng b nh

t hi u qu

Nh v y, vi c nghiên c u xác nh tác nhân gây b nh, ph ng pháp nh n bi t s m cây b b nh, ph ng th c lan truy n và s thay i c tính c a các ch ng vi khu n gây b nh trên t ng ch ng lo i cây n qu có múi là nh ng v n quan tr ng T ó, làm c s xây d ng h th ng các gi i pháp phòng ch ng t ng h p b nh VLG có

hi u qu kinh t , k thu t cao và b n v ng

1.2 Tình hình nghiên c u ngoài n c

1.2.1 Tri u ch ng, ch s phát hi n, phân b c a b nh vàng lá greening

nh vàng lá greening ã c ghi nh n t n m 1929 Trung Qu c, v i nhi u tên

i khác nhau nh Huanglongbing hay ch i vàng (yellow shoot) Nam Trung Qu c

và c tài li u hóa n m 1943, Greening Nam Phi (n m 1947), Likubin ( ài Loan,

m 1951), Leaf mottle ye llows Philippines, huanglongb ing Thái Lan (n m 1960), Dieback n , greening Myanmar (n m 1970), Vein Phloem degeneration Indonesia (n m 1980), greening Vi t Nam, Lào, C m Pu Chia (n m 1980), Huanglongbing Iriomote, Ok inawa (n m 1994), o Okinawa, Nh t b n (n m 2003), Tokunoshima, Kagosh ima, Japan (n m 2003), Huanglongb ing Braz il (N m 2004) và Florida, Hoa k (n m 2005) n nay ch a ghi nh n c Ôt-xtrây-li-a

1.2.2 Ch n oán và giám nh b nh vàng lá greening

Xác nh tác nhân gây b nh b ng kính hi n vi n t : i kính h i n vi n t quan sát c vi khu n gây b nh VLG Hình d ng c a vi khu n th ng có hình g y, thon dài và c thay i t t bào non cho n lúc thành th c (Huang, 1987)

Xác nh tác nhân gây b nh b ng ph ng pháp sinh h c phân t : Ph ng pháp này ã dùng các c p m i c hi u ch n oán b nh VLG t m u b nh t i và côn trùng mô i gi i (Hung et a l., 1999, Jagoueix et al., 1996; A Hocquellet 1997;

Subandiyah et al., 2000)

Nghiên c u v các ch ng gây b nh vàng lá greening: Su, (2008) ã xác nh c các ch ng vi khu n gây b nh VLG ài Loan b ng ph ng pháp s d ng cây ch th

và m t s gi ng cây n qu khác k t h p v i công ngh sinh h c Cho n nay ã xác

nh c 4 ch ng vi khu n gây b nh khác nhau Các ch ng khác nhau cho tri u

ch ng khác nhau trên các gi ng

1.2.3 Nghiên c u v d ch t và sinh thái h c c a b nh vàng lá greening

nh lây lan r t nhanh t t l trên 95% trong kho ng th i gian t 3 n 9

m sau khi xu t hi n tri u ch ng u tiên (Matsumoto et a l., 1961; Aubert et al.,

1988, Bové et al., 2000b; và Gottwald, 2005)

nh vàng lá greenin g c lan truy n qua con ng nhân gi ng và lan

truy n b i côn trùng môi gi i (Diaphorina citri Kuwayama) theo ki u b n v ng

(Halbert và Manjunath, 2004; Pluke et al., 2008)

Skelley & Hoy (2004) ã s d ng ph ng pháp nhân nuôi r y ch ng cánh trên

cây nguy t qu (Murraya paniculata L.), cây không b nhi m b nh do môi gi i ho c ghép lây b nh M t s loài là ký ch t t cho D citri bao g m: Citrus reticulata Blanco, Bergera koenigii L., Citrus maxima (Burm.) Merr., Citrus medica L., Citrus taiwanica Tanaka & Y Shimada, and Citrus aurantiifolia (Christm.) Swingle

1.2.4 Nghiên c u các gi i pháp qu n lý b nh

Vi ghép nh sinh tr ng là ph ng pháp t t nh t ph c tráng l i cây gi ng ngu n gen quý ã và ang phát tri n nh ch i hay mô phân sinh th ng không mang tác nhân gây b nh VLG, cây phát tri n t vi ghép th ng là s ch b nh

P h ng pháp vi ghép nh sinh tr ng c ghép theo ki u ch T ng c (Murashige

et a l., 1972) M i ây nh t ph ng pháp vi ghép ã c c i ti n b ng hình tam giác

ng c (Su & Chu, 1984; Chen, 2012; Jae-Wook Hyun et al., 2012)

cs, 2012)

ình c (1991), Hà Minh Trung (1995), Nguy n Minh Châu (2001), Lê

T h T hu H ng (2009) ã mô t và ghi nh n tri u ch ng b nh vàng lá greening trên cây có múi

1.3.2 C n oán và giám nh b nh vàng lá greening

Th i gian u t i Vi t Nam c ng t n t i hai tr ng phái khác nhau v nguyên nhân gây b nh Tr ng phái th nh t cho r ng b nh greening do y u t sinh lý gây ra,

tr ng phái th hai l i cho r ng b nh VLG là b nh truy n nhi m do vi sinh v t gây

ra Ngày nay s d ng k thu t sinh h c phân t ã kh ng nh b nh vàng lá cây có múi n c ta là b nh VLG do r y ch ng cánh (D citri Kuwayama) là mô i gi i

truy n b nh (Hà Minh Trung và cs., 1996)

1.3.3 Nghiên c u v d ch t h c c a b nh

Hà Minh Trung và cs, (1995) ã nghiên c u s lan truy n b nh qua ghép và qua côn trùng môi gi i và m t ghép

Ngô V nh Vi n và cs., (2009), Nguy n V n Hoà và cs., (2012) ã thu th p và

nghiên c u ánh giá s b tính ch ng ch u c a m t s loài cây thu c h Rutaceae

1.3.4 Nghiên c u các gi i pháp qu n lý b nh

Cho t i nay quy trình k thu t vi ghép nh sinh tr ng luôn c hoàn thi n

t ng kh n ng s ng và s ch b nh i v i cây vi ghép T ó thi t l p h th ng nhà

i l u gi cây u dòng và s n xu t cây gi ng s ch b nh Bi n pháp qu n lý b nh

c ng b t công n ch n t o c i thi n b gi n g, gi i pháp k thu t tr ng

tr t k t h p v i bi n pháp sinh h c và hóa h c trong phòng tr môi gi i truy n b nh

Ch ng 2

T LI U, N I DUNG VÀ PH NG PHÁP NGHIÊN C U 2.1 a m và th i gian nghiên c u

a m nghiên c u

- B môn B nh cây, Vi n B o th c v t, ông Ng c, T Liêm, Hà N i

- Phòng Thí nghi m tr ng i h c t ng h p ài Loan

- Ngh i Diên, Nghi L c, Ngh An và m t s a ph ng thu c phía B c

Th i gian nghiên c u: T tháng 1/2010 – 10/2013

2.2 V t li u nghiên c u

Môi tr ng MS (Mu rash ige and Skoog), BAP, ch t u ti t sinh tr ng dùng trong vi ghép nh sinh tr ng H t g c ghép (cam ba lá, b i chua, ch p, cam Sành, quýt Cleopatra) Các hóa ch t s d ng trong xác nh tác nhân gây b nh VLG

Cây có múi s ch b nh (Cam Canh, Xã oài, b i Di n, chanh Eureka, Thanh Yên); cây g c ghép (b i chua, ch p) và m t s loài cây có múi thu c chi Citrus và cây d i thu c h Rutacea

Khung nhà màn nh 1m × 1m × 1m, túi b u và h th ng nhà l i 3 c p; giá th

tr ng cây (cát vàng, mùn c a g t p và phân mùn vi sinh) Kháng sinh (Streptomic ine) và thu c hóa h c Confidor 100SL (Im idacloprid)

2.3 N i dung nghiên c u

2.3.1 Nghiên c u m c ph bi n và tri u ch ng c a b nh vàng lá greenin g

2.3.2 Nghiên c u giám nh tác nhân gây b nh và s lan truy n b nh vàng lá green ing

2.3.3 Nghiên c u xác nh ký ch và s phân b c a các ch ng vi khu n gây b nh vàng lá greening trên cây n qu có múi m t s t nh phía B c Vi t Nam

2.3.4 Nghiên c u m t s gi i pháp khoa h c công ngh phòng ch ng b nh vàng lá green ing trên cây n qu có múi

2 4 Ph ng pháp nghiên c u

2.4.1 Ph ng pháp nghiên c u m c ph bi n và tri u ch ng c a b nh vàng lá greening

Ph ng pháp u tra t l b nh và m c ph bi n trên ng ru ng theo

ph ng pháp nghiên c u B o v th c v t T p 1 ( ng V T h Thanh và Hà Minh

T rung, 1997)

Ph ng pháp xác nh các d ng tri u ch ng b nh vàng lá greening trên cây n

qu có múi m t s t nh mi n B c Vi t Nam theo Matsumoto et al., 1961, Su et al.,

Ph ng pháp ch n oán b nh vàng lá greening b ng sinh h c phân t : Theo

ph ng pháp ch n oán b nh vàng lá green ing c a Hung et al., 1999; Hocquellet et

al., 1999 và Jagouex et al., 1996

Ph ng pháp nghiên c u lan truy n qua h t gi ng, qua m t ghép và môi gi i:

T heo ph ng pháp th ng qui trong nghiên c u b o v th c v t

2.4.3 Ph ng pháp nghiên c u xác nh ký ch và s phân b c a các ch ng vi khu n gây b nh vàng lá greening trên cây n qu có múi m t s t nh phía B c

n 1, nuôi cây trong u ki n inv itro Sau ó, vi ghép l n 2 và chuy n cây ra v n

m T rong nghiên ã hoàn thi n và c i ti n m t s b c quan tr ng nh m làm t ng

l s ng và s ch b nh trong vi ghép nh sinh tr ng t o cây gi ng s ch b nh

Ph ng pháp s n xu t cây gi ng s ch b nh: c th c hi n theo quy trình khép kín trong h th ng nhà l i 3 c p bao g m: Giá th làm b u và gieo h t; K thu t s n xu t cây gi ng trong nhà l i b ng h n h p b u không t; K thu t và

ph ng pháp ghép m t

Ph ng pháp ánh giá tính ch ng ch u c a g c ghép hi n ang s d ng trong

n xu t cây gi ng i v i b nh vàng lá greening: Theo ph ng pháp c a Kranz (1988) và Bowen (2004)

Ph ng pháp nghiên c u ch ng tái nhi m b nh trên ng ru ng: T heo ph ng pháp nghiên c u th ng qui v b o v th c v t i v i cây n qu có múi

2.5 Ph ng pháp x lý s li u thí nghi m: S li u thí ngh i m c x lý th ng kê

ng ph n m m MS.Exel, 2007 và ch ng trình IRRISTAT VERSION 5.0

Ch ng 3

T QU NGHIÊN C U VÀ TH O LU N 3.1 M c ph bi n và tri u ch ng c a b nh vàng lá greening

3.1.1 Hi n tr ng s d ng gi ng cây n qu có múi t i Hà N i và Hòa Bình

Nh ng n m qua, di n tích cây n qu có múi c phát tri n khá nhanh, nh ng

u h t các h s n xu t v n ch a xác nh c s nguy hi m c a ngu n b nh ti m

n trong cây K t qu u tra v ngu n g c và ch t l ng cây gi ng Hà N i cho

th y ng i dân t s n xu t gi ng ch i m 46,67%, gi ng không rõ ngu n g c chi m 40,0%, cây gi n g mua t c s s n xu t ch chi m 13,33%; t ng t Hòa Bình t l

n l t là 20%; 33,33%; 53,33%

3.1.2 M c ph bi n c a b nh vàng lá greening t i các vùng u tra

t qu u tra ánh giá h i n tr ng và m c ph bi n c a b nh t i các vùng sinh thái, b nh vàng lá greening xu t hi n và gây h i trên cây n qu có múi t t c các vùng, v i t l cây b nh t 10,49 – 50,93% T rong s ó, các v n cây n qu có múi

i vùng Tây B c có t l cây b b nh th p nh t (10,43%), vùng ng b ng sông H ng 13,95- 16,34%, còn vùng B c Trung b là 14,97- 39,2% và vùng ông B c b n ng

nh t t 21,18- 50,93% B nh VLG trên gi ng b i Thanh Trà Th y Bi u và H ng

Vân (Th a Thiên Hu ) v i t l b nh ghi nh n c là 14,97%

Trong s 9 t nh ã ti n hành u tra thì các v n cây n qu có múi có t l cây b

nh vàng lá greening th p nh t là t nh Hoà Bình (10,49%) và t nh b h i n ng nh t là

Qu ng Ninh (50,93%) Có s khác bi t khá rõ r t v t l cây b b nh và m c m c

b nh gi a các a ph ng do trình canh tác và k thu t qu n lý b nh không u

gi a các vùng (Hà Minh Trung, 2003; Ngô V nh Vi n và cs., 2012)

3.1.3 M c nhi m b nh vàng lá greening trên các ch ng lo i cây có múi và

các vùng sinh thái

T rong 3 n m (2010- 2012) ã ti n hành u tra, thu th p và phân tích v i t ng

175 m u, trong s ó có t i 81 m u ch nhi m v i b nh vàng lá greening, chi m

46,28% s m u thu th p và ánh giá S m u còn l i c xác nh ã b nhi m m t

trong ba b nh (tristeza, tatter leaf và exocortis) và các b nh lý khác u ó cho th y

c nhi m b nh VLG t i các v n cây n qu có múi các t nh phía B c là khá

ph bi n, th hi n m c tr m tr ng áng quan tâm c a th c ti n s n xu t hi n nay

u thu th p trên cây cam và quýt cho t l b nhi m b nh cao nh t, t t i

81,81% trên cam và 86,00% trên quýt Còn trên chanh và b i có t l m u nhi m

nh g n ngang nhau (68,57 và 66,67%) Riêng m u thu th p t cây qu t cho t l b

nhi m b nh là th p nh t, ch có 60% s m u b nhi m b nh

3.1.4 M c nhi m b nh vàng lá greeining h n h p v i các b nh vi rút, viroid

trên cây n qu có múi

Các b nh vi rút khác ã góp ph n làm cho quá trình suy thoái v n cây n qu có

múi ngày càng tr m tr ng h n B nh vàng lá greening và tristeza ã ã gây h i n ng

trên t t c các loài cây có múi u tra T l m u b nhi m b nh vàng lá green ing

trong s m u u tra t 60,0 n 86,0%; b nh tristeza t 27,91 n 37,78% c bi t,

trong quá trình u tra, l n u tiên ã xác nh c b nh exocortis gây h i trên cây

cam, v i t n su t b t g p chi m 14,28% trong t ng s m u thu th p và b nh tatter

leaf gây h i trên cây quýt, chi m t i 9,68% trong t n g s m u thu th p (b ng 3.5)

ng s m u phân tích

l (%) m u b b nh

VLG CTV CTLV CEVd Cam Citrus sinensis 55 81,81 37,78 0 14,28

Quýt Citrus reticulata 50 86,00 27,91 9,68 0

t h p ph ng pháp truy n th ng v i công ngh sinh h c ã chia tri u ch ng

nh vàng lá greening là m 5 nhóm tri u ch ng chính (Lá vàng l m m; Vàng lá c c trên t ng cành/cây; Lá vàng l m m và vàng lá c c b ; Khô cành, ch t cây, lá vàng và qu b chín ng c), và 3 nhóm tri u ch ng nhi m h n h p v i b nh tristeza (Lá vàng, gân trong; Gân lá b s ng và n ; Th p lùn cây) tài l n u tiên ã thu

c tri u ch ng n hình v i b nh vàng lá greenin g trên qu (hình 3.2 ; 3.5 và 3.6)

Hình 3.2 Lá vàng c c b Hình 3.5 Tri u ch ng qu cam

b nh greening

H ình 3.6 Tri u ch ng lá vàng,

gân trong Ngu n (hình 3.2; 3.5 và 3.6): Lê Mai N h t, 2012

Nh v y, khi cây b nhi m b nh VLG ng th i nhi m b nh tristeza ã làm cho cây b tàn l i nhanh, gây t n th t l n n n ng su t và ch t l ng qu khi thu ho ch

3.1.6 Ki m ch ng kh n ng nhi m b nh vàng lá greening trên ng ru ng d a trên tri u ch ng ã xác nh

Cùng v i các m u u tra và ã thu th p, tài ã ng d ng công ngh sinh h c giám nh s hi n d i n b nh do vi rút và viro id trên cây n qu (b ng 3.9) K t qu giám nh b nh b ng sinh h c phân t cho th y, b nh tristeza ã xu t hi n t t c các

m thu th p m u T i Hà N i, ã xác nh c s hi n di n c a c ba b nh (tristeza, tatter leaf và exocortis) cây có múi Ngh An ã xác nh c b nh exocortis b ng RT-PCR và ghép trên cây ch th (Etrog citron 861) T i B c Quang,

Hà Giang ã thu c b nh tristeza và b nh tatter leaf (ghép trên cây ch th Rusk citrange)

ng 3.9 S phân b c a m t s loài vi rút và viroid trên cây n qu có múi thu nh n m t s t nh phía B c Vi t Nam (Vi n B o v th c v t, 2011)

T atter leaf (RT-PCR)

Exocortis (RT-PCR)

l ng m u xác nh b nh tatter leaf và exocortis ch a nhi u do công n giám nh m u, nh ng m u không b b nh vàng lá greening ho c b b nh tristeza

c lo i b và không ti n hành giám nh các b nh ti p theo

3.1.7 C i ti n ph ng pháp tách chi t thô DNA trong ch n oán b nh vàng lá greening trên cây n qu có múi

Giám nh b nh vàng lá greening b ng m t th ng hay s d ng ph ng pháp

ch n oán b ng I- t là r t khó trong vi c xác nh chính xác tác nhân gây b nh S

ng các bi n pháp tách chi t DNA theo quy trình chung nh dung d ch chi t (bao

m Tris-HCl; EDTA, NaCl); hóa ch t tinh s ch DNA g m các hóa ch t (Sarkosyl, CT AB, chloro form, isoamyl alcohol và phenol) trong ó có nhi u hóa ch t

c h i Tách chi t và tinh s ch DNA theo Hung et al., 1999 là r t phù h p cho

nh ng nghiên c u chuyên sâu, gi i trình t gen

T uy nhiên, th i gian tách chi t DNA theo ph ng pháp nói trên th ng m t nhi u th i gian, v i s l ng 10 m u cùng các thao tác t r a lá cho n khi thu c DNA ph i tiêu t n th i gian t 5 n 6 gi d n n giá thành giám nh m u t g p nhi u l n, các y u t t o nên giá thành cao ó là chi phí nhân công làm m u, n

c, hóa ch t, c bi t quan tâm là s d ng nhi u hóa ch t c làm nh h ng n

c kh e con ng i, gây ô nhi m môi tr ng

Xu t phát t yêu c u c a th c ti n nói trên, tài ã nghiên c u c i ti n

ph ng pháp tách chi t DNA b ng NaOH (b ng 3.10), ph ng pháp này c th c

hi n t i Phòng thí nghi m tr ng i h c t ng h p ài Loan ng th i ã c ng

ng th nghi m thành công t i phòng thí ngh i m c a Vi n B o v th c v t

d ng NaOH tách chi t DNA ã ti t ki m c th i gian t 5 n 6 gi

xu ng còn t 45 phút n 1 gi , tùy thu c vào tay ngh , k thu t khi th c hi n c

bi t h n, vi c thu c DNA ch ph i s d ng d ng NaOH và acetic a-xít, nh v y ã

gi m c chi phí và nhân công cho các công n tách chi t nh ng v n thu c DNA và cho k t qu t t trong giám nh b nh VLG

ng 3.10 C i ti n ph ng pháp tách chi t thô DNA trong ch n oán b nh vàng lá greening (Phòng thí nghi m tr ng i h c t ng h p ài Loan, 11/2011)

Ngh i n trong Eppendorf

ng NaOH

ch chi t thông

th ng (Hung et al 1999)

3.2 Xác nh tác nhân gây b nh và s lan truy n b nh vàng lá greening

3.2.1 Xác nh tác nhân gây b nh vàng lá greening b ng hi n vi n t

u b nh thu th p t i các a ph ng thu c các ch ng lo i cam, quýt, b i và

chanh, c s d ng ph ng pháp c t m u siêu m ng và quan sát d i kính hi n vi

n t ã phát hi n c trong m ch d n b tích t tinh b t gây thoái hóa m ch d n,

c l p trong lá b nh h ng nghiêm tr ng M u b nh t các ch ng lo i cây n qu

có múi u cho k t qu nh nhau, ây là m t d ng tri u ch ng ch ng minh khi cây

b nh s nhanh b tàn l i, cây b suy ki t; m t kh n ng quang h p, h p thu và không v n chuy n dinh d ng theo m ch d n nuôi cây

3.2.2 Xác nh tác nhân gây b nh vàng lá greening b ng sinh h c phân t

tài ã s d ng ba c p m i [16S c a Sandrine Jagoue ix (1996), A2J5 a A Hocquellet và Hung et al (1999)] giám nh b nh vàng lá greenin g K t qu ph n

ng t các c p m i u cho k t qu chính xác trong giám nh tác nhân gây b nh VLG V i cây n qu có múi thì u ki n công nh n cây u dòng và cây gi ng

ch b nh ph i c th c hi n b ng ph ng pháp này

3.2.3 Kh n ng lan truy n c a b nh vàng lá greening trên cây n qu có múi

3.2.3.1 Nghiên c u s lan truy n b nh vàng lá greening qua h t gi ng

t gi ng thu c t qu trên cây b b nh c ti n hành gieo s h t thu c cây b nh xác nh kh n ng m c m m c a h t Ti p t c theo dõi và thu m u lá xác nh kh n ng lan truy n c a b nh qua h t gi ng K t qu phân tích b ng P CR thu c là âm tính, nh v y b nh vàng lá green ing không lan truy n qua h t gi ng

3.2.3.2 Nghiên c u s lan truy n b nh vàng lá greening qua nhân gi ng vô tính

t qu lây nhi m nhân t o cho th y sau ghép 45 ngày trên gi ng cam Xã oài, cam canh ã bi u hi n tri u ch ng ch i vàng, ng th i k t qu giám nh b ng

Cam Canh i

di n

Cam Xã oài

Cam Canh

Ghi chú: -: K t qu âm tính; +: K t qu d ng tính

Bên c nh b nh vàng lá greening thì b nh tristeza luôn là m i nguy h i m trong

n xu t Công trình nghiên c u c c p n s lan truy n b nh nh m ánh giá nguy c gây h i trong s n xu t K t qu này có tác ng tr c ti p n công tác phòng

ch ng b nh trên cây n qu có múi

3.2.3.3 Nghiên c u s lan truy n b nh vàng lá greening qua r y ch ng cánh Diaphorina citri Kuwayama

m t 1 và 3 r y ch ng cánh (RCC) sau 9 tháng ch a có tri u ch ng b nh trên

3 gi ng thí ngh i m V i m t 6 RCC sau 9 tháng lây nhi m ã ghi nh n c s lan truy n b nh qua môi gi i trên gi ng cam Canh và Xã oài chi m 8,33%, gi ng

i ti p t c không nghi nh n c tri u ch ng Tuy nhiên v i m t 9 RCC/cây ã ghi nh n c s truy n b nh sau 6 tháng lây nhi m trên gi n g cam Xã oài, sau 9 tháng lây nhi m ã gh i nh n c trên gi n g cam Canh và cam Xã oài (b ng 3.14)

i m t 10 RCC b nh ã bi u hi n tri u ch ng trên gi n g cam Xã oài sau 9 tháng công th c 6 gi lây nhi m, 12 gi và 36 gi b nh ã bi u hi n sau 6 tháng, t cây b b nh t t 8,33 n 41,67% Gi ng cam Canh sau 9 tháng lây nhi m t l

Sau 6 tháng

Sau 9 tháng

Sau 6 tháng

Sau 9 tháng

Sau 6 tháng

Sau 9 tháng Cam Canh - - - 8,33 - 16,67 Cam Xã oài - - - 8,33 8,33 16,67

Ghi chú: Các công th c thí nghi m c nhi m RCC trong 24h; - : K t qu âm tính

i b nh vàng lá greening; ±: Không c ó tri u c h ng và P CR không rõ ràng; i

ch ng: Th r y ch ng cánh s ch b nh trên cây gi ng s ch b nh

3.2 3 M t r y ch ng cá nh Diaphorina citri Kuw ayama trên cây n qu có múi

Cây n qu có múi n u c tr ng b ng gi ng s ch b nh thì s lan truy n b nh

VLG trong t nhiên là do môi gi i D citri Kuwayama a d ng v ch ng lo i cây

n qu có múi c ng nh ch ch m sóc khác nhau ã làm cho d ch h i bùng phát nhanh h n và h u nh chúng có tính thích nghi v i u ki n kh c nghi t cao h n.RCC luôn xu t hi n c 12 tháng trong n m nh ng v i m t khác nhau M t môi gi i trên v n cây n qu ph thu c vào ngu n th c n, quy trình ch m sóc và

qu n lý d ch h i, c bi t liên quan n các t l c chính trong n m và nhi t các mùa M t RCC cao nh t t l c hè, xuân, và gi m d n l c Thu và ông Ngh An trên v n cây n qu không c ch m sóc m t RCC trung bình 25,15 con/cây Trên các v n c ch m sóc thì m t RCC th p h n h n (hình 3.18)

Hình 3.18 M t r y ch ng cánh trên v n cam Xã oài Ngh An

4 t l c chính trong n m, l c hè cho m t r y ch ng cánh cao nh t, ti p

n là l c xuân, l c thu; t l c ông m t r y ch ng cánh r t th p T i v n cam không thâm canh, m t trung bình c a r y ch ng cánh t 25,15 con/cây, trong khi

ó v n cam thâm canh ch thu c 4,05 con/cây T ng t l c xuân (21,5 và 3,7