Luận văn : Nhân giống lan Dendrobium bằng phương pháp gieo hạt in-vitro part 3 doc

- Các quả lan đã được khử trùng từ thí nghiệm 1, sẽ được gieo vào 4 loại môi trường thử nghiệm.. - Môi trường Knudson’C bổ sung NAA với nồng độ - Môi trường Knudson’C bổ sung IAA với nồn

Trang 1

Khoá luận tốt nghiệp – 2005 Vật liệu – Phương pháp

- Sau đấy quả lan sẽ được cắt gọt 2 đầu, và dùng dao mổ xẻ dọc quả lan, tách làm 2

- Dùng dao giữ phần vỏ quả, dùng kẹp lấy hết hột ra một đĩa petri

- Gieo hạt vào môi trường

- Thí nghiệm được lặp lại 2 lần, mỗi lần một quả

d Chỉ tiêu theo dõi

Tỷ lệ hạt sống sau khi gieo

Tình trạng hạt gieo: Xanh

Trắng

Hóa nâu

Download» http://Agriviet.Com

Trang 2

SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang 19

Hình 3.1: Quy trình khử mẫu

Trang 3

3.2 Thí nghiệm 2: Tìm môi trường thích hợp để gieo hạt

a Mục đích thí nghiệm

Tìm môi trường khoáng thích hợp để gieo hạt

b Môi trường gieo hạt

c Bố trí thí nghiệm

- Các quả lan đã được khử trùng từ thí nghiệm 1, sẽ được gieo vào 4 loại môi trường thử nghiệm

- Theo dõi và ghi nhận kết quả sau 2-4 tuần

- Thí nghiệm được lặp lại 2 lần , mỗi lần 15 chai 100ml

- Thời gian hạt nẩy mầm

- Môi trường thích hợp gieo hạt Dendrobium

Trang 4

3.3 Thí nghiệm 3: Tạo Protocorm

- So sánh sự thành lập protocorm trên hai môi trường khác nhau

và bổ sung cùng nồng độ kích thích tố

- Tìm môi trường thích hợp cho các thí nghiệm về sau

b Môi trường nuôi cấy

- Những mẫu hạt đã phình to ra, có màu xanh, không nhiễm từ thí nghiệm 2

- Theo dõi và ghi nhận kết quả sau 2-4 tuần nuôi cấy

- Thí nghiệm được lặp lại 3 lần, mỗi lần 8 chai 100ml

- Thời gian tạo protocorm

- Môi trường tạo protocorm tốt nhất

- Tình trạng phát triển của prorocorm

Trang 5

3.4 Thí nghiệm 4: Nhân protocorm

So sánh sự nhân protocorm trên cùng một loại môi trường với nồng độ kích thích tố thay đổi

- Môi trường Knudson’C đối chứng không bổ sung kích thích tố ký hiệu K0

- Môi trường Knudson’C bổ sung BA với nồng độ

- Môi trường Knudson’C bổ sung 2ppm BA và IAA với nồng độ 0.1ppm:0.5ppm:1ppm, ký hiệu là K4, K5, K6

- Sử dụng các protocorm được tạo thành từ thí nghiệm 3

- Thí nghiệm được lặp lại 3 lần, mỗi lần 3 chai 500ml

- Nhận xét môi trường nhân nhanh protocorm bật chồi tốt nhất: thời gian ngắn nhất cho cây có chiều cao 2-3 cm và có 2-3 lá

- Sự tạo thành cây giữa các môi trường

- Màu sắc và chiều dài lá

- Thời gian xuất hiện rễ đầu tiên

Trang 6

3.5 Thí nghiệm 5: Ra rễ

Khảo sát môi trường thích hợp cho sự ra rễ

- Môi trường Knudson’C đối chứng không bổ sung kích thích tố ký hiệu K0

- Môi trường Knudson’C bổ sung NAA với nồng độ

- Môi trường Knudson’C bổ sung IAA với nồng độ

- Môi trường Knudson’C bổ sung IBA với nồng độ

- Những cây con có chiều cao từ 2-3 cm và có 2-3 lá được tạo thành từ thí nghiệm 4

- Thí nghiệm được lặp lại 3 lần, mỗi lần 3 chai 500 ml

- Chiều dài rễ

- Sự tăng trưởng chiều cao cây

Trang 7

Khóa luận tốt nghiệp – 2005 Kết quả – Thảo luận

PHẦN IV: KẾT QUẢ – THẢO LUẬN

Quả lan sau khi được khử trùng, gieo hạt vào môi trường nuôi cấy, sau 1 tuần

kết quả ghi nhận được như sau:

Sống và không nhiễm Chết và không nhiễm Nhiễm

NT Số lần đốt

Số lượng Tỷ lệ

(%)

2 2 10 62,5 6 37,5 0 0

Bảng 2: Kết quả khử trùng mẫu bằng phương pháp đốt, sau 1 tuần

Mẫu hạt lan được gieo vào môi trường, sau 1 tuần khử trùng, mẫu bắt đầu có những biểu hiện khác nhau:

- Đối với những mẫu sống và không nhiễm, sau 1 tuần, hạt dần dần thích nghi với môi trường, bắt đầu chuyển sang màu nâu vàng mật ong

cao, hạt chuyển sang màu trắng và nâu đục, không phát triển

Kết quả ghi nhận được ở bảng 1 cho thấy:

sống và không nhiễm là 75%, mẫu không bị chết nhưng tỷ lệ

Sống và không nhiễm Chết và không nhiễm Nhiễm N

T

Nồng độ

Ca(OCl)2

(%)

Thời gian (phút) Số lượng Tỷ lệ

(%)

1 7 15 12 75 0 0 4 25

2 7 20 15 93,75 1 6,25 0 0

3 9 15 16 100 0 0 0 0

4 9 20 10 62,5 6 37,5 0 0

Trang 8

nhiễm cao (25%) Còn với thời gian khử trùng 20 phút, tỷ lệ hạt sống khá cao (93,75%), mẫu hoàn toàn không bị nhiễm, nhưng

bị chết (6,25%)

- Khi khử trùng ở nồng độ tăng thì tỷ lệ mẫu bị chết tăng theo và số mẫu nhiễm giảm dần Ơû nồng độ 9%, thời gian khử trùng là

15 phút, tỷ lệ hạt sống rất cao (100%), mẫu hạt gieo hoàn toàn không bị nhiễm, không chết Khi kéo dài thời gian khử trùng 20 phút, thì tỷ lệ mẫu chết tăng cao (37,5%)

xúc trực tiếp với dung dịch khử trùng, còn phần hạt bên trong không

bị ảnh hưởng Khi gieo hạt vào môi trường, hạt có khả năng phục hồi nhanh và nẩy mầm Tuy nhiên, nếu tăng nồng độ và kéo dài thời gian khử trùng, dung dịch sẽ ngấm vào bên trong vỏ quả, nên sau khi gieo vào môi trường, hạt phục hồi rất chậm và có thể sẽ bị chết (hóa trắng)

nghiệm, thì nồng độ 9% trong thời gian 15 phút là thích hợp nhất Kết quả ghi nhận được ở bảng 2 cho thấy:

- Khử trùng quả lan bằng phương pháp đốt cồn thì mẫu hạt gieo hoàn toàn không bị nhiễm Nhưng nếu tiến hành đốt 2 lần thì tỷ lệ mẫu chết cao (37,5%), tương đương với phương pháp khử

- Khi đốt một lần tỷ lệ mẫu sống là 100%, tương ứng với khi khử

bị ảnh hưởng trực tiếp của nhiệt độ cao, đồng thời sẽ loại bỏ hoàn toàn các tác nhân gây nhiễm bên ngoài vỏ Nhưng nếu tiến hành đốt

2 lần, nhiệt độ cao cùng với thời gian kéo dài sẽ gây ảnh hưởng đến hạt bên trong, nên khi gieo vào môi trường, mẫu hạt phục hồi rất chậm, hoặc có thể hóa nâu, không nảy mầm được

phút và đốt cồn một lần, tỷ lệ sống, không nhiễm là như nhau Tuy nhiên, dùng phương pháp đốt cồn thì hạt gieo phục hồi và nẩy mầm nhanh hơn Ngoài ra, phương pháp này còn tiết kiệm nhiều thời gian khử trùng mẫu, thao tác đơn giản hơn, kinh tế hơn

Tóm lại: mẫu khử trùng là quả lan Dendrobium còn xanh Vì mẫu hạt gieo nằm

bên trong, nên nếu tiến hành rửa mẫu kỹ và đốt bằng cồn 1 lần thì có thể loại bỏ hoàn toàn các tác nhân gây nhiễm Hạt không bị ảnh hưởng và khi gieo vào môi trường sẽ phục hồi rất nhanh

Trang 9

Khóa luận tốt nghiệp – 2005 Kết quả – Thảo luận Download» http://Agriviet.Com

Định dạng
Số trang	9
Dung lượng	525,55 KB