Nghiên cứu tỉ lệ đột biến gen P53 tại vị trí 249ser và nồng độ protein P53 ở một số thể bệnh do nhiễm vi rut viêm gan B

ĐẶT VẤN ĐỀ Mặc dù đã có vaccine phòng nhiễm virut viêm gan B (HBV) an toàn và hiệu quả nhưng bệnh do nhiễm HBV vẫn đang là một vấn đề thách thức của y tế thế giới và trong nước. Ước tính hàng năm trên thế giới có khoảng 600.000 đến 1 triệu người chết do HBV. Việt Nam là một trong những nước có tỷ lệ nhiễm HBV cao nhất thế giới. Theo thống kê có 10-20% trong quần thể bình thường nhiễm HBV và có từ 20 đến 40% người nhiễm HIV có HBV (+). Ước tính đến năm 2025 nước ta có khoảng 8 triệu người nhiễm HBV, 58000 bệnh nhân xơ gan (XG), 25000 bệnh nhân ung thư gan (UTG) và có hơn 40000 người chết do nhiễm HBV. Phần lớn các bệnh nhân UTG đều được phát hiện muộn, khi khối u đã hình thành, không còn khả năng cứu chữa. Do đó, việc phát hiện sớm UTG đang là một đòi hỏi bức thiết hiện nay. Thực vậy, hiện nay chẩn đoán UTG chủ yếu dựa vào: khám xét lâm sàng, siêu âm, chụp cắt lớp vi tính và xét nghiệm AFP. Nhưng kết quả của nhiều nghiên cứu cho thấy ngay cả khi lấy giá trị ngưỡng của AFP là > 600 ng/ml thì vẫn có hơn 40% bệnh nhân UTG không được chẩn đoán. Vì vậy, các dấu ấn phân tử là một trong những mục tiêu tìm hiểu được các nhà khoa học quan tâm hiện nay. Trong đó, đột biến các gen của HBV như HBx, Precore, Pre S , hay các gen của người bệnh đã và đang là những dấu ấn được nghiên cứu nhiều nhất. UTG là một bệnh được sinh ra do biến đổi gen qua nhiều giai đoạn. Trong số các gen được nghiên cứu thì gen TP53 là được quan tâm nhất. Gen này mã hóa cho protein P53 có chức năng điều hoà kiểm soát sự phát triển tế bào và ức chế sự hình thành u bằng con đường thúc đẩy tế bào chết theo chương trình và khả năng làm dừng 1 sự phân chia của tế bào. Từ trước tới nay người ta chủ yếu quan tâm gen TP53 trong trường hợp UTG nhiễm Aflatoxin. Tuy nhiên, gần đây có nhiều bằng chứng cho thấy đột biến gen TP53 có liên quan chặt chẽ với nhiễm HBV trong sinh bệnh học UTG. Kết quả nghiên cứu cho thấy khi bệnh nhân vừa nhiễm HBV vừa mang gen TP53 đột biến điểm 249 ser thì nguy cơ tiến triển thành UTG là 399 lần. Ở Việt nam có một số tác giả đã nghiên cứu đột biến gen TP53 trên 1 số bệnh ung thư, nhưng các nghiên cứu về đột biến gen TP53 trên các bệnh do nhiễm HBV còn rất ít. Vì những lý do đó, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài "Nghiên cứu tỉ lệ đột biến gen TP53 tại vị trí 249 ser và nồng độ protein P53 ở một số thể bệnh do nhiễm vi rut viêm gan B" nhằm các mục tiêu sau: 1. Xác định tỉ lệ đột biến gen TP53 tại vị trí 249 ser và mối liên quan của nó với một số thể bệnh do nhiễm virut viêm gan B. 2. Định lượng nồng độ protein P53 và tìm hiểu mối liên quan của nó với một số thể bệnh do nhiễm virut viêm gan B Giới thiệu luận án: * Cấu trúc luận án: Luận án có 107 trang, gồm các phần: Đặt vấn đề 2 trang; chương 1: Tổng quan: 35 trang; chương 2: Đối tượng và phương pháp nghiên cứu 20 trang; chương 3: Kết quả nghiên cứu 25 trang; chương 4: Bàn luận 23 trang; Kết luận 1 trang; Kiến nghị 1 trang; có 19 bảng; 24 biểu đồ; 21 hình. Có 149 tài liệu tham khảo; Tiếng Việt 38, Tiếng Anh 111; phần phụ lục có danh sách bệnh nhân và mẫu phiếu theo dõi bệnh nhân. 2 Đóng góp mới của luận án: 1. Là công trình đầu tiên nghiên cứu về đột biến gen TP53 trên các nhóm bệnh do nhiễm HBV (NMVR, VGM, XG, UTG) bằng phương pháp PCR - RFLP và khẳng định lại kết quả bằng giải trình tự gen. 2. Kết quả nghiên cứu cho thấy tỷ lệ đột biến gen TP53 tương đối thấp ở các nhóm, nhưng có thể liên quan đến tiến triển ung thư gan trên bệnh nhân nhiễm HBV. 3. Nồng độ protein P53 trong huyết tương khác nhau ở các thể bệnh do nhiễm HBV, và thấp nhất ở nhóm UTG và VGC. Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cấu trúc của vi rut viêm gan B Trên sợi DNA có bốn đoạn gen tương ứng với bốn khung đọc mở (KĐM - Open reading frame). Đây là các vùng được mã hóa để tổng hợp ra các protein của vi rut. - KĐM S: KĐM S gồm vùng S và pre-S. Vùng pre-s được chia hai phần là pre-S1 và pre-S2. Đây là đoạn gen mã hóa tổng hợp các protein bề mặt (HBsAg). - KĐM C mã hóa tổng hợp protein lõi (HBcAg) và HBeAg. - KĐM P mã hóa tổng hợp enzym DNA polymerase. Sản phẩm của gen này là một enzym vừa có hoạt tính DNA polymerase phụ thuộc RNA lại xem như một enzym sao chép ngược (reverse transcriptase) mã hóa tổng hợp chuỗi DNA mới từ sợi RNA tiến bộ gen (pregenome). - KĐM X: KĐM X mã hóa tổng hợp protein HBx. Protein HBx có vai trò chuyển hóa (transactivation) trong quá trình sao chép của vi rut. Vì vậy, protein HBx có vai trò quan trọng trong cơ chế sinh ung thư ở các tế bào gan bị nhiễm. HBx có thể truyền đạt thông tin trực tiếp hoặc gián tiếp cho nhiều gen đích của tế bào, làm trung gian hay đối lập cho nhiều chức 3 năng khác nhau của tế bào như điều hòa chu trình tế bào, mã hóa tổng hợp các phân tử kết dính, hoạt hóa các gen sinh ung thư hoặc các gen ức chế ung thư của tế bào 1.2. Gen TP53 và đột biến gen TP53 1.2.1. Cấu trúc và chức năng của gen TP53 Gen TP53 nằm trên nhiễm sắc thể 17 ở đoạn cánh tay ngắn 17p13, đây là khu vực thường có các đột biến mất đoạn trên các bệnh nhân ung thư. Gen TP53 có kích thước 22000 bp, gồm 11 exon mã hoá cho một RNA thông tin có kích thước 2.2 Kb. Quá trình dịch mã được bắt đầu từ exon 2. Gen TP53 đã được nghiên cứu hơn 30 năm qua, nó là một protein có trọng lượng phân tử khoảng 53 kDa, TP53 thường được tìm thấy với nồng độ cao trong các tế bào ung thư. Khoảng một thập kỷ đầu, TP53 được xem là một kháng nguyên ung thư với khả năng biến đổi mạnh. Mãi tới những năm cuối của thập kỷ 80 của thế kỷ trước người ta mới chứng minh được nó thực chất là một chất ức chế khối u. Gen TP53 mã hóa tổng hợp protein P53 có nhiều chức năng sinh học quan trọng: Điều hòa kiểm soát sự phát triển của tế bào, cảm ứng cho quá trình chết theo chương trình của tế bào (apoptosis), tham gia sửa chữa các thương tổn ADN bằng cách làm ngừng chu kỳ phân bào ở G1/S và G2/M, do đó các tế bào có thời gian sửa chữa thương tổn, các tế bào con sau khi phân bào sẽ bình thường như tế bào mẹ trước khi bị thương tổn. Do các chức năng trên nên gen TP53 được cho là gen ức chế quan trọng nhất trong hàng chục gen ức chế ung thư khác nhau. Gen TP53 đột biến có thể làm giảm tổng hợp protein P53 có chức năng sinh học bình thường. Như vậy, khi gen TP53 đột biến sẽ kích hoạt sự hình thành các khối u. 1.2.2. Mối liên quan giữa TP53 với HBV HBx là một gen nhỏ nhất của HBV, nhưng có vai trò rất quan trọng trong sinh bệnh học nhiễm HBV, đặc biệt là trong cơ chế gây ung thư gan. Nhiều nghiên cứu cho thấy gen HBx có khả năng liên kết với TP53 dẫn đến làm mất chức năng của TP53, gây rối loạn chết có chương trình và mất kiểm soát tăng sinh tế bào, cuối cùng là hình thành các khối u. 4 Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Đối tượng nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu là các bệnh nhân được chẩn đoán viêm gan B cấp tính, viêm gan B mạn hoạt động, xơ gan và UTG có HBsAg(+) được đến khám và điều trị tại Bệnh viện Trung ương Quân đội 108 và 16 bệnh nhân viêm gan B cấp được điều trị tại Bệnh viện Bạch Mai, trong thời gian từ tháng 11 năm 2007 đến tháng 4 năm 2010, và nhóm người mang virut viêm gan B mạn tính không triệu chứng. - Gồm 263 bệnh nhân chia thành 5 nhóm (5 thể bệnh) và 1 nhóm chứng + Nhóm 1 (NMVR): 53 người mang vi rut viêm gan B mạn tính không triệu chứng. + Nhóm 2 (VGC): 31 bệnh nhân viêm gan B cấp tính + Nhóm 3 (VGM): 53 bệnh nhân viêm gan B mạn tính + Nhóm 4 (XG): 32 bệnh nhân xơ gan có HBsAg (+) + Nhóm 5 (UTG): 94 bệnh nhân UTG có HBsAg (+) + Nhóm chứng: 100 người khỏe mạnh 2.1.1. Tiêu chuẩn lựa chọn: Theo Dienstag J.L, (Harrison's 2007) 2.1.1.1 Viêm gan B cấp tính: + Lâm sàng khởi phát từ từ và diễn biến thành 2 giai đoạn rõ rệt là giai đoạn tiền hoàng đản và giai đoạn hoàng đản. + Tiền sử: - Chưa có vàng da, vàng mắt trước khi mắc bệnh + Xét nghiệm: - HBsAg (+), Anti HBc IgM (+) và Anti HBc IgG (-) - Enzyme gan (AST, ALT) tăng cao, từ 400 - 4000UI/ml hoặc hơn. 2.1.1.2 Viêm gan B mạn tính + LS: Bệnh nhân mệt mỏi, đau vùng gan… + HBsAg (+) > 6 tháng hoặc HBsAg (+) và anti HBcIgG(+) 5 + HBV – DNA huyết thanh ≥ 10 5 copies/ml ở nhóm HBeAg(+) hoặc HBV – DNA ≥ 10 4 copies/ml ở nhóm HBeAg (-) + Enzyme gan (AST, ALT) tăng liên tục hoặc từng đợt, ít nhất ≥ 2 lần giá trị bình thường, có thể từ 100 - 1000UI/ml. + Mô bệnh học: có hình ảnh viêm gan mạn hoạt động 2.1.1.3. Xơ gan có HBsAg (+) Bệnh nhân xơ gan có đầy đủ hội chứng: + Hội chứng tăng áp lực tĩnh mạch cửa: + Hội chứng suy chức năng gan: + Thay đổi ở gan: gan to chắc hoặc gan teo… + Xét nghiệm: HBsAg (+), Enzyme gan (AST, ALT) tăng nhẹ ít khi đến 300UI/ml, Protein máu giảm, Albumin giảm, A/G <1, tỷ lệ Prothrombin giảm, 2.1.1.4. UTG có HBsAg (+) + Lâm sàng: Mệt mỏi ăn uống kém, gầy sút cân nhanh + Xét nghiệm: Xét nghiệm huyết thanh học HBsAg (+), AFP tăng cao, Bilirubin trực tiếp và gián tiếp có thể tăng, Enzyme gan (AST, ALT) hoặc phosphataza kiềm tăng. + Siêu âm gan có khối khu trú hoặc tổn thương lan toả. + Chụp CT Scanner hoặc MRI xác định được vị trí, kích thước của khối u. + Tế bào bệnh học: xác định có UTG và mức độ biệt hóa kèm theo. 2.1.1.5. Người mang HBV mạn tính không triệu chứng + Lâm sàng: Hoàn toàn khoẻ mạnh, không có bất kỳ các triệu chứng lâm sàng nào, tình cờ phát hiện có HBsAg (+), tiền sử chưa bị viêm gan + Các xét nghiệm về chức năng gan trong giới hạn bình thường. 2.1.1.6. Nhóm chứng: Hoàn toàn khỏe mạnh không có triệu chứng viêm gan, không mắc bệnh mạn tính. Xét nghiệm HBsAg(-), Anti HCV(-), Anti HIV (-), tiền sử chưa bị viêm gan. 6 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ Loại trừ các bệnh nhân sau: + Trẻ em và phụ nữ có thai + Bệnh nhân có anti HIV (+), anti HCV (+). + Bênh nhân đã được điều trị bằng các thuốc kháng vi rut và các thuốc điều biến miễn dịch, người nghiện rượu và ma túy. + Bệnh kết hợp: Viêm gan do thuốc, do hóa chất, viêm gan tự miễn, Đái tháo đường, viêm đường mật… 2.2. Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu tiến cứu, mô tả cắt ngang có so sánh. 2.2.1. Thiết kế nghiên cứu - Khám lâm sàng và xét nghiệm chọn các bệnh nhân đủ tiêu chuẩn của các nhóm nghiên cứu 2.2.2.Phương pháp nghiên cứu lâm sàng - Mỗi bệnh nhân được đăng ký theo dõi vào phiếu theo dõi đã được xây dựng có đầy đủ các chỉ tiêu về dịch tễ, lâm sàng và xét nghiệm. 2.2.3. Phương pháp nghiên cứu cận lâm sàng - Tất cả bệnh nhân đều được lấy máu ngay trong tuần đầu nhập viện. Các số liệu về huyết học, sinh hóa, miễn dịch được tiến hành ngay trong ngày. Các mẫu máu để làm xét nghiệm HBV DNA, giải trình tự gen TP53 được tách lấy huyết tương ngay sau khi mẫu đến Khoa Sinh học phân tử, Bệnh viện TWQĐ 108. Sau đó được lưu giữ trong tủ lạnh sâu âm 80 0 C. Các bệnh nhân VGC được chẩn đoán và điều trị ở Bệnh viện Bạch Mai được lấy máu chuyển đến khoa sinh học phân tử Bệnh viện 108 làm xét nghiệm sinh học phân tử.  Xét nghiệm sinh học phân tử: Thực hiện tại khoa Sinh học phân tử Bệnh viện TƯQĐ 108: + HBV – DNA: Phương pháp Real time - PCR + Xác định đột biến gen TP53: 1. PCR – RFLP: Dùng Enzyme Hae III 2. Giải trình tự gen trên hệ thống phân tích trình tự tự động CEQ 8800 (Beckman Coulter, Mỹ). 7 Trình tự mồi khuếch đại gen TP53 như sau: P53 F1: 5’-CTTGCCACAGGTCTCCCCAA-3’, P53 R1: 5’-AGGGGTCAGCGGCAAGCAGA-3’. + Phương pháp định lượng nồng độ protein P53: Protein P53 được định lượng bằng bộ Kit ELISA (P53 Human ELISA Kit) của hãng Abcam. Mã code ELISA: AB 46067, ngưỡng phát hiện ≥ 1,5U/ml. + Xác định đột biến gen HBx: Giải trình tự gen trên hệ thống phân tích trình tự tự động CEQ 8800 (Beckman Coulter, Mỹ). Trình tự mồi được sử dụng giải trình tự gen HBx là: HBV-1369 F: 5’-TTTCCATGGCTGCTAGGCTGTACT-3’ HBV-1961 R: 5’-AAGGCAAAAACGAGAGTAACTCC-3'  Xét nghiệm miễn dịch: Tại khoa miễn dịch  Xét nghiệm huyết học: Tại khoa huyết học  Xét nghiệm sinh hóa: Tại khoa sinh hóa  Siêu âm gan, CT Scanner gan, MRI: Tại khoa chẩn đoán hình ảnh  Mô bệnh học: Tại khoa giải phẫu bệnh 2.2.4. Nội dung nghiên cứu 2.2.4.1. Đặc điểm chung của 5 nhóm nghiên cứu 2.2.4.2. Xác định tỷ lệ đột biến gen TP53 ở 5 nhóm nghiên cứu 2.2.4.3. Định lượng nồng độ P53 trên các nhóm nghiên cứu 2.2.4.4. Đánh giá mối liên quan của đột biến gen TP53, nồng độ protein P53 với các thể bệnh 2.3. Xử lý thống kê- Các số liệu được phân tích bằng thuật toán non - parametric Mann - Whitney U-test, khi bình phương (χ 2 test), so sánh không đối xứng T-test, so sánh 2 tỷ lệ, 2 số trung bình, tỷ suất chênh (OR), mối tương quan (RR) bằng các phần mềm Statview version 4.5, chương trình STATA. 8 CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1. Đặc điểm chung các nhóm nghiên cứu 3.1.1. Đặc điểm về tuổi và giới Bảng 3.1: Đặc điểm về giới và tuổi của các nhóm bệnh nhân nghiên cứu Chỉ số Nhóm Nam (n,%) Nữ (n,%) Tuổi (năm) SDX ± NMVR (n=53) (1) 37(69,8) 16(30,2) 29,6±11,1 VGC (n=31) (2) 23(74,2) 8(25,8) 27,5±8,3 VGM (n=53) (3) 45(84,9) 8(15,1) 41,8±12,3 XG (n=32) (4) 24(75) 8(25) 54,5±14,6 UTG (n=94) (5) 83(88,3) 11(11,7) 55,1±13 Tổng (n =263) 212 (80,6) 51 (19,4) p P1-5<0,05 4,5-1,2,3<0,05 Nhận xét: Tổng số có 212/263 bệnh nhân nam chiếm 80,6%, 51/263 bệnh nhân nữ chiếm 19,4%. Tuổi ở các nhóm có sự khác biệt, trong đó tuổi cao nhất là nhóm UTG và xơ gan. Sự khác biệt về tuổi của 2 nhóm này với các nhóm còn lại là có ý nghĩa thống kê (p<0,01). Giữa 2 nhóm xơ gan và UTG không có sự khác biệt về tuổi. Tuổi thấp nhất ở nhóm VGC. 9 3.1.2. Đặc điểm một số triệu chứng lâm sàng của các nhóm nghiên cứu Bảng 3.2: Đặc điểm một số triệu chứng lâm sàng của các nhóm nghiên cứu Triệu chứng VGC n=31 VGM n=53 XG n=32 UTG n=94 Mệt mỏi (n,%) 31 (100) 30 (56,6) 32 (100) 82 (87,2) Đau vùng gan (n,%) 8 (26,6) 2 (3,7) 5 (15,6) 76 (80,8) Sốt (n,%) 3 (9,67) 0 (0) 1 (3,1) 5 (5,3) Sút cân (n,%) 1 (3,22) 1 (1,9) 6 (18,75) 65 (69,14) RLTH (n,%) 5 (16,1) 5 (9,4) 10 (31,25) 25 (26,59) Gan to (n,%) 25 (80,6) 35 (66,03) 2 (6,25) 32 (34,04) Vàng da (n,%) 20 (64,5) 6 (11,32) 28 (87,5) 23 (14,8) Sao mạch (n,%) 0 (0) 9 (17) 20 (62,5) 29 (30,8) Không triệu chứng (n,%) 0 (0) 7 (13,2) 0 (0) 3 (3,19) Nhận xét: Các triệu chứng lâm sàng thường gặp của viêm gan cấp tính là mệt mỏi, gan to, vàng da, đau tức vùng gan, rối loạn tiêu hóa; trong khi đó các triệu chứng thường gặp của viêm gan mạn là gan to, mệt mỏi, sao mạch; của xơ gan là mệt mỏi, sao mạch, vàng da, rối loạn tiêu hóa; của UTG là mệt mỏi, đau vùng gan, sút cân, gan to và sao mạch. Có 7 bệnh nhân VGM (13,2%) và 3 bệnh nhân UTG (3,19%) không có triệu chứng lâm sàng, tình cờ phát hiện khi kiểm tra sức khỏe. 10 [...]... nhiễm < /b> và < /b> b nh < /b> sinh UTG Hơn nữa gen < /b> HBx có đoạn liên kết với gen < /b> TP53 của người b nh < /b> Trong nghiên < /b> cứu < /b> chung của chúng tôi có một < /b> nghiên < /b> cứu < /b> về đột < /b> biến < /b> gen < /b> HBx, kết quả cho thấy trên 60% b nh < /b> nhân UTG có đột < /b> biến < /b> gen < /b> HBx ở < /b> 2 vị < /b> trí < /b> A1762T và < /b> G1764A Đột biến < /b> gen < /b> HBx còn liên quan đến mức độ < /b> biệt hóa tế b o trên các b nh < /b> nhân UTG Qua nghiên < /b> cứu < /b> so sánh, chúng tôi thấy 100% b nh < /b> nhân có đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53... tỷ lệ < /b> % b nh < /b> nhân định lượng được protein < /b> P53 < /b> thì nồng < /b> độ < /b> protein < /b> P53 < /b> cũng thấp nhất ở < /b> nhóm UTG và < /b> VGC, cao nhất ở < /b> nhóm người khỏe mạnh Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê 20 3.3.3 So sánh nồng < /b> độ < /b> protein < /b> P53 < /b> ở < /b> nhóm có gen < /b> TP53 đột < /b> biến < /b> và < /b> gen < /b> TP53 b nh thường B ng 3.16: So sánh nồng < /b> độ < /b> protein < /b> P53 < /b> ở < /b> nhóm có gen < /b> TP53 đột < /b> biến < /b> và < /b> gen < /b> TP53 b nh thường Gen < /b> TP53 Protein < /b> Protein P53 < /b> (U/ml) X ± SD Đột biến < /b> (n... quan giữa đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53 với ung thư gan < /b> Trong nghiên < /b> cứu < /b> này, tỉ < /b> lệ < /b> đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53 ở < /b> nhóm không UT tương đối thấp (2,56%) còn tỉ < /b> lệ < /b> đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53 ỏ nhóm UTG cao hơn hẳn (12,7%) Qua các thuật toán thống kê so sánh, chúng tôi thấy nguy cơ UTG ở < /b> b nh < /b> nhân mang gen < /b> TP53 đột < /b> biến < /b> cao hơn b nh < /b> nhân mang gen < /b> TP53 không đột < /b> biến < /b> là 5,5 lần (p < 0,001) 4.2.3 Mối liên quan giữa đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53 với... biến < /b> gen < /b> TP53 và < /b> protein < /b> P53 < /b> trên 5 nhóm b nh < /b> nhân nhiễm < /b> HBV (NMVR, VGC, VGM, XG, UTG) và < /b> nhóm chứng khỏe mạnh b ớc đầu chúng tôi xin rút ra một < /b> số < /b> kết luận sau: 1 Tỷ lệ < /b> đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53 tại < /b> điểm 249ser < /b> tương đối thấp và < /b> b ớc đầu cho thấy có thể < /b> liên quan đến ung thư gan < /b> trên b nh < /b> nhân nhiễm < /b> HBV - Tổng số < /b> có 18/328 (5,48%) mẫu mang gen < /b> TP53 đột < /b> biến < /b> tại < /b> vị < /b> trí < /b> 249ser < /b> Tỷ lệ < /b> đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53 ở < /b> các nhóm... với mức độ < /b> biệt hóa tế b o gan < /b> 3.2.9 Mối liên quan giữa đột < /b> biến < /b> TP53 với đột < /b> biến < /b> gen < /b> HBx tại < /b> 2 vị < /b> trí < /b> A1762T và < /b> G1764A B ng 3.13: Mối liên quan giữa đột < /b> biến < /b> TP53 với đột < /b> biến < /b> gen < /b> HBx tại < /b> 2 vị < /b> trí < /b> A1762T và < /b> G1764A Gen < /b> HBx A1762T G1764A B (n=78) BT (n=16) B (n=77) BT (n=17) B (n,%) 12 (100) 0 (0) 12 (100) 0 (0) BT (n,%) 66 (84,6) 16 (25,4) 65 (84,4) 17 (25,6) p > 0,05 > 0,05 Nhận xét: 100% b nh < /b> nhân... chức năng hoạt hóa của gen < /b> kiểm soát phát triển đặc hiệu Chính HBV có một < /b> đoạn trình tự gen < /b> của HBx có thể < /b> liên kết với P53 < /b> qua đoạn gen < /b> này 4.3.3 So sánh nồng < /b> độ < /b> protein < /b> P53 < /b> ở < /b> nhóm có gen < /b> TP53 đột < /b> biến < /b> và < /b> gen < /b> TP53 b nh thường Kết quả nghiên < /b> cứu < /b> cho thấy ở < /b> nhóm b nh < /b> nhân có gen < /b> P53 < /b> đột < /b> biến < /b> tại < /b> điểm 249 ser nồng < /b> độ < /b> protein < /b> P53 < /b> thấp hơn có ý nghĩa so với nhóm b nh < /b> nhân có gen < /b> P53 < /b> b nh thường (6,7 ± 2,6... quả b ớc đầu chúng tôi ghi nhận ở < /b> nghiên < /b> cứu < /b> này Tuy nhiên, mức độ < /b> ảnh hưởng của đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53 tới nồng < /b> độ < /b> protein < /b> P53 < /b> còn phụ thuộc vào nhiều yếu tố khác nữa, ở < /b> đây chúng tôi chỉ nghiên < /b> cứu < /b> đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53 tại < /b> điểm 249ser < /b> Ngoài ra, không có mối liên quan nào giữa nồng < /b> độ < /b> protein < /b> P53 < /b> với các chỉ số < /b> sinh hóa, huyết học, miễn dịch ở < /b> các nhóm nghiên < /b> cứu < /b> 24 KẾT LUẬN Qua nghiên < /b> cứu < /b> đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53... giữa đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53 với nồng < /b> độ < /b> AFP và < /b> nồng < /b> độ < /b> HBV DNA trong huyết tương 3.2.8 Mối liên quan giữa đột < /b> biến < /b> TP53 với mức độ < /b> biệt hóa tế b o gan < /b> B ng 3.12: Mối liên quan giữa đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53 với mức độ < /b> biệt hóa tế b o gan < /b> Mức độ < /b> biệt hóa Cao Kém Vừa p Gen < /b> TP53 n=20 n=14 n=60 B (n,%) 4 (20) 2 (14,3) 6 (10) >0,05 BT (n,%) 16 (80) 12 (85,7) 54 (90) Nhận xét: Không có mối liên quan giữa đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53... So sánh với tác giả Lê Thị Thúy và < /b> cộng sự, thấy tỉ < /b> lệ < /b> đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53 trên UTG là 11,7%, khá phù hợp với kết quả của chúng tôi Còn so sánh với nghiên < /b> cứu < /b> ở < /b> Gambia, nơi mà tỉ < /b> lệ < /b> nhiễm < /b> và < /b> mang HBV cao (11 - 16%) tương tự ở < /b> Vi< /b> t Nam, Kirk và < /b> cộng sự thấy tỉ < /b> lệ < /b> đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53 ở < /b> XG là 15%, UTG 45%; kết quả tỉ < /b> lệ < /b> đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53 ở < /b> Gambia cao hơn hẳn của chúng tôi, có thể < /b> liên quan đến yếu tố địa lý... nhân có đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53 đều có đột < /b> biến < /b> gen < /b> HBx 18 Ngoài ra, không có mối liên quan nào được ghi nhận giữa đột < /b> biến < /b> gen < /b> TP53 với các chỉ số < /b> khác như tuổi, giới 3.3 Protein < /b> P53 < /b> trong huyết tương 3.3.1 So sánh tỷ lệ < /b> b nh < /b> nhân định lượng được nồng < /b> độ < /b> protein < /b> P53 < /b> trong huyết tương B ng 3.14: So sánh tỷ lệ < /b> b nh < /b> nhân định lượng được nồng < /b> độ < /b> protein < /b> P53 < /b> trong huyết tương Chỉ số < /b> Protein < /b> P53(< /b> +) Protein < /b> P53 . sánh nồng độ protein P53 ở nhóm có gen TP53 đột biến và gen TP53 b nh thường B ng 3.16: So sánh nồng độ protein P53 ở nhóm có gen TP53 đột biến và gen TP53 b nh thường Gen TP53 Protein Đột biến (n. nghiên cứu đề tài " ;Nghiên cứu tỉ lệ đột biến gen TP53 tại vị trí 249 ser và nồng độ protein P53 ở một số thể b nh do nhiễm vi rut vi m gan B& quot; nhằm các mục tiêu sau: 1. Xác định tỉ. đột biến gen TP53 với mức độ biệt hóa tế b o gan 3.2.9. Mối liên quan giữa đột biến TP53 với đột biến gen HBx tại 2 vị trí A1762T và G1764A B ng 3.13: Mối liên quan giữa đột biến TP53 với đột