Bromelin doc

GVHD:Ts VŨ NGỌC BỘI NHÓM 3 SEMINAR ỨNG DỤNG CỦA ENZYME PROTEASE NỘI DUNG CHÍNH A. ENZYME PROTEASE: I. TỔNG QUAN VỀ ENZYME PROTEASE II. NGUỒN THU NHẬN ENZYME PROTEASE III. CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN HOẠT ĐỘ ENZYME IV. ỨNG DỤNG CHUNG CỦA ENZYME PROTEASE B. ỨNG DỤNG CỤ THỂ (BROMELIN) I.TỔNG QUAN VỀ ENZYME PROTEASE: - Nhóm enzyme protease xúc tác quá trình thủy phân liên kết peptide (-CO-NH)n trong phân tử protein, polypeptide đến sản phẩm thủy phân cuối cùng là các acid amin. Ngoài ra, nhiều protease cũng có khả năng thủy phân liên kết este và vận chuyển amine MÔ HÌNH ENZYME PROTEASE THỦY PHÂN PHÂN TỬ PROTEIN Phân loại protease Căn cứ vào các tiêu chí: • Dựa vào cơ chế phản ứng của enzyme tham gia. • Dựa vào pH tối thích cho hoạt động của enzyme như: protease acid, protease kiềm, protease trung tính. • Tính đặc hiệu cơ chất của enzyme : endopeptidase và exopeptidase… • Nguồn thu nhận enzyme:enzyme từ động vật,enzyme từ thực vật,enzyme từ vi sinh vật. Phân loại protease: Peptidase (Protease) (E.C.3.4) Exopeptidase (E.C. 3.4.11-17) Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) Aminopeptidase Carboxypeptidase Serine proteinase Cystein proteinase Aspartic proteinase Metallo proteinase  Dựa vào vị trí tác động trên mạch polypeptide, exopeptidase được phân chia thành 2 loại: • Aminopeptidase: xúc tác thủy phân liên kết peptide ở đầu N tự do của chuỗi polypeptide để giải phóng ra một amino acid, các polypeptide. • Carboxypeptidase: xúc tác thủy phân liên kết peptide ở đầu C của chuỗi polypeptide giải phóng ra một amino acid hoặc các polypeptide.  Dựa vào động học của cơ chế xúc tác, endopeptidase được chia thành 4 nhóm: • Serin proteinase: là những proteinase chứa nhóm –OH của gốc Serine trong trung tâm hoạt động (TTHĐ) và có vai trò đặc biệt quan trọng đối với hoạt động xúc tác của enzyme. Gồm 2 nhóm nhỏ là chymotrypsin và subtilicin . • Cystein proteinase: các proteinase chứa nhóm –SH trong TTHĐ bao gồm: protease thực vật (papain, bromelin,ficin), một vài protease động vật. Các enzyme này thường hoạt động ở vùng pH trung tính. • Aspartic protease: là 1 loại protease có chứa carboxyl trong TTHĐ, thường hoạt động ở pH acid. • Metallo protease: là nhóm proteinase được tìm thấy ở vi khuẩn, các vi sinh vật bậc cao, hoạt động vùng pH trung tính và hoạt độ giảm mạnh dưới tác dụng của EDTA Ngoài ra, protease được phân loại một cách đơn giản thành 3 nhóm: - Protease acid: pH 2-4 - Protease trung tính: pH 7-8 - Protease kiềm: pH 9-11 II.NGUỒN THU NHẬN ENZYME PROTEASE: - Nguồn động vật Tụy tạng (nguồn lâu đời): Tripsin Dạ dày bê: Renin biến đổi casein thành paracasein có khả năng kết tủa trong môi trường sữa có đủ nồng độ Ca2+ -Nguồn thực vật: + Bromelain: thu từ quả, chồi dứa, vỏ dứa (Pineapple plant) +Papain: thu từ nhựa của lá, thân, quả đu đủ ( Carica papaya) +Ficin: thu từ nhựa thân cây cọ ( Ficus carica ) [...]... 1,26 Điểm đẳng điện pI 9,55 Sự hấp thu A1% cm ở 280nm 20,1 Trọng lượng phân tử 33.200* 32.100** 35.500*** II Phương pháp thu nhận bromelin: Quy trình công nghệ Chồi, thân, lá dứa Xay nhuyễn Lọc bã Ly tâm 1 Kết tủa Hấp phụ Ly tâm 2 Sấy bromelin bã Siêu lọc Dịch 1.Thu nhận Bromelin từ dứa: a Phá vỡ tế bào: •Quả thân dứa được xay nhuyễn để phá vỡ tế bào mô dứa •Ta có thể dùng phương pháp đồng hóa để vừa... 1µm, trên bề mặt có chứa nhiều ion OH- và O2Tiến hành: kaolin khô ( hoặc đã ngâm cho trương nở) + dd nước dứa, tỉ kệ 25mg kaolin/ ml dd nước dứa Khuấy đều bằng máy khuấy từ, rồi ly tâm để thu tủa ( là bromelin- kaolin) 2.Tinh sạch bromelain bằng sắc ký lọc gel: a Nguyên tắc: - Kỹ thuật sắc ký lọc gel dùng để tách những phân tử có kích thước , trọng lượng phân tử khác nhau bằng cách cho chúng đi qua cột . TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN HOẠT ĐỘ ENZYME IV. ỨNG DỤNG CHUNG CỦA ENZYME PROTEASE B. ỨNG DỤNG CỤ THỂ (BROMELIN) I.TỔNG QUAN VỀ ENZYME PROTEASE: - Nhóm enzyme protease xúc tác quá trình thủy phân liên. Cystein proteinase: các proteinase chứa nhóm –SH trong TTHĐ bao gồm: protease thực vật (papain, bromelin, ficin), một vài protease động vật. Các enzyme này thường hoạt động ở vùng pH trung tính. •