Khóa luận tốt nghiệp Hóa học: Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn J cao Chloroform của rễ cây bồng bồng, Calotropis gigantea (L., ) họ thiên lý (Asclepiadaceace)

Nghiên cứu thành phan hoá học cao chloroform của rễ cay Bằng Calotropis giganteaDES Thân ĐỄhseeoskekoeeeobiobgebbeicdieiptotGSniiitGaEsxcistieGsgirndessisre 5 R24 Bộ plidn dling ESSE 5 E

TRUONG ĐẠI HỌC SƯ PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH

KHOA HÓA CHUYEN NGÀNH HÓA HỮU CƠ

%>»cœ8

KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP

GV hướng dan: PGS TS Nguyễn Trung Nhân

SV thực hiện: Doan Thị Phuong

`

MSSV: K36.106.035

TP.HCM, tháng 5 năm 2014

Nghiên cứu thành phan hoá hoc cao chloroform của rễ cây Bong Bên,

Với tắm lòng tran trọng và biết on sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn đến:

PGS TS NGUYEN TRUNG NHÂN - người đã truyền dat cho em nhiều kiến thức chuyên môn, tận tình hướng dẫn và truyền đạt nhiều kinh nghiệm nghiên cứu quý

báu trong suốt thời gian em thực hiện và hoàn thành dé tai tốt nghiệp.

Anh Nguyễn Hữu Duy Khang, anh Đặng Hoang Phủ, chi Võ Thúy Hang đã tận tinh truyền đạt những kinh nghiệm quý báu, quan tâm nhiệt tinh hưởng dẫn tạo mọi

điều kiện giúp đỡ em trong suốt quá trình thực hiện đẻ tải tốt nghiệp.

Các anh chị nghiên cửu sinh, học viên cao học va các bạn sinh viên bộ môn

Hóa Hữu cơ trường DH Khoa Học Tự Nhién đã động viên giúp đỡ trong suốt quá

trình thực hiện đẻ tài tốt nghiệp.

Tất cá quý thầy cô Khoa Hóa, đặc biệt quý thầy cô Bộ môn Hóa hữu cơ trường

ĐH Su Phạm Thành Phé Hồ Chí Minh đã giảng dạy va tạo mọi điều kiện tốt để em

hoan thành đề tài tốt nghiệp

Gia đình đã động viên và tạo điều kiện tốt về vật chất lẫn tinh than để em hoàn

thành khoá luận của minh.

Xin chân thành cảm on.

Nghién cứu thành phân hoá học cao chloroform của rễ cây Bong Bing (Calotropis gigantea)

DANH MUC CAC CHU VIET TAT

1D/2D-NMR : phổ cộng hưởng từ hat nhân 1 chiéu/ 2 chiều (One/Two

Dimensional-Nuclear Magnetic Resonance)

đ: mũi đôi (doublet)

dd : mũi đôi-đôi (doublet- doublet)

HMBC : tương quan H-C qua 2-3 nỗi (Heteronuclear Multiple Bond Coherence)

HSQC: tương quan H-C qua một nói (Heteronuclear Single Quantum

Cohenrence)

IF Hang số ghép (Coupling constant)

m: mũi da (Multiple)

ppm: Part per million

Ry: Retardation factors

s: mũi don (Singlet)

Nghién cứu thank phan hoá học cao chloroform của rễ cấy Bằng Bằng (Calotropis gigantea)

LOI GIỚI THIEU

Ngày nay, cùng với sự phát triển vượt bậc của khoa học kỹ thuật là việc phát sinh

ra nhiêu bệnh tật nguy hiểm khác nhau Việc nghiên cứu sản xuất các loại được phẩm

dé phục vụ nhu cầu sức khỏe của con người là rat cần thiết, và ngành hóa học cũng đã

góp một phần không nhỏ vào sự phát triển ấy Các nhà hóa học đã tổng hợp được

nhiều loại hợp chất chữa trị nhiều loại bệnh khác nhau Tuy nhiên, những loại thuốc

này thường rất dat và một số có tác dụng phy, chính vì thể con người có khuynh

hướng quay về với nền y học cổ truyền, sử dụng được thao làm thuốc trị bệnh Nước ta thuộc vùng nhiệt đới gió mùa, có nguồn thực vật đa dang vả phong phú là một ưu thể rat lớn đối với các nhà nghiên cứu hóa học các hợp chất thiên nhiên.

Người dân trên các vùng gần bờ biển đọc theo đất nước Việt Nam đều rất quen

thuộc với loại cây có hoa màu tím mọc thành cụm lớn đọc theo bờ biển, một vài người chí biết nó cỏ tác dụng xua đuổi mạt gà, các côn trùng nhỏ nhưng ít ai biết tới công

dụng chữa bệnh thực sự của nó Loài cây nảy dân gian thường gọi bổng bồng, cây láhen, bàng bién, Tén khoa học /a Calotropis gigantea Linn thuộc họ Thiên Ly Nó cócông dụng chữa hen suyén, trị giun s4n, rắn cắn, và cả bệnh ung thư Ở trên thé giới

đã có ngươi nghiên cứu về cây này nhưng số lượng không nhiều, ở Việt Nam thì số

bài viết vẻ cây nay rất hiếm Với ly do đó, chúng tôi tiễn hành thực hiện đề tài:“Khảosát thành phần hoá học cao chloroform của rễ cây Bang bồng (Calotropis gigantea

Linn) họ Thiên lý (Asclepiadaceae)”.

Mục tiêu của dé tai này là cô lập, xác định cấu trúc hóa học các hợp chat da cô lập từ cao chloroform của rễ cây bồng bồng Hy vọng kết quả nghiên cứu sẽ mang lại

những hiểu biết mới vé mặt hóa học của cây từ đó làm tăng giá tri ứng dụng của cây

vao thực tế cuộc sống.

Nghién cứu thank phan hod học cao chloroform của ré cấy Bong Bong (Calotropis gigantea)

Nghiên cứu thành phan hoá học cao chloroform của rễ cay Bằng (Calotropis gigantea

DES Thân ĐỄhseeoskekoeeeobiobgebbeicdieiptotGSniiitGaEsxcistieGsgirndessisre 5

R24 Bộ plidn dling ESSE 5

EO a 5

1.2.6 Công dụng dân gian và hoạt tính sinh học: -. ->+ 14

vớ 12h, fC | 1 oo ceo a ra 19

2.) đi HINH seseseeoseensesoeotddeeeSeoti02244241xe460542262agi2-63-xukkax8msaaeev 19

2.2 Khao sát cấu trúc hóa học của các hợp chất: 5s +vssccsercrree 19

DSi HạnclhftHÑlaacci6ceocoiscsonocickiuoessadisassexisessseeil 19

CĐ — 5- 5ˆ: ' AMNnnlaninnwbadftitstiainstwninnfoilyBinniengiaieangl: 31BGT 1, ||| re 37

3.1 Các phương pháp sử dụng trong thực nghiệm 3?

3.2 Điều kiện thí nghiệm: 2-22 +2©CECE229Z2E2SEcEDEEASereEEEvrccrverrrrre 37

Ti (DI sstcusnndtEoaeeeoGae0866010655010028910900006s.t0asoed 37

355:TNIÊN ĐẦU: 2.202cGG0202221100201G2106006015600SG`00G862800)/0Sc0420)y8ãcs6kbi 38

3/3 “Tiên trinh thal ngÌ ÌÏ À2 i00 12 205462 Gcco 2c dAx66aSAS0iÁ666eaii 38

33:! IyttilcaothôMSORHG/((22 512 64202222066GLc66666k6ccgd6 38 3.3.2 Ly trích các loại cao: petroleum ether, chloroform, ethyÌ acetate 38

3.4 Khảo sát trên cao ChlorofOorm - S- <5 412 v24 1 2 1 12 1236 gg 39

3.4.1: Ko 4l Rahs Goma l2„exsuoskeskseeieeekdtaobeoioa2kesoueeoncd 40

PHNG: KẾT LUẬN:::c¡cc sec cGec2ESc02124602462Cn0260502EcSGiA 44

Tải liệu tham khảo

Nghiên cứu thành phan hod học cao chloroform của rễ cây Bon, Calotropis gigantea,

PHAN 1: TONG QUAN

1.1 Giới thiệu về họ Thiên lý Asclepiadaceae:

1.1.1 Mô az!!!

Hau hết đều là cây thân có hoặc cây bụi cây có mủ trắng Một số là thân leo,một số lại lả thân mọng nước vả có sự hạn chế mọc lá Lá đơn giản thường mọc đổi

xứng hoặc xoắn lại, đôi khi có lá kèm

Hoa lưỡng tỉnh hầu như đều có dạng tỏa xứng tia, thường bao gồm một cụm

phức tạp hoặc có vành dia mật giữa trang hoa và cơ quan sinh sản của cây Dai hoa

chia 5 phan khác biệt hoặc kết hợp lại với nhau ở phan đáy Bên trong bao hoa là trànghoa có 5 thay có cánh trang liền hoặc có cánh trang hợp Bộ nhị và bộ nhụy hầu như

luôn hợp lại tạo thành trục hợp nhụy với Š nhị phân ra rõ ràng và một nhụy lớn cùng

với đầu nhụy có 5 thùy Bao phan thường có | cặp túi phấn được gọi là khối phan,được vận chuyên như một đơn vị trong suốt quá trình thụ phân Bầu nhụy gồm một

nhụy kép đơn lẻ với hai lá noãn riêng biệt và nó bị tách ra tại ống nodn và vòi nhị, bau

nhị chỉ kết hợp với nhụy lớn đơn lẻ Bau nhụy có sự khác biệt hau như luôn có bau

thượng và mỗi cái đều có một ống dẫn và ở mép có nhiều non, Quả dạng nang Hạt

thường có một chùm lông ở cuối hạt

1.1.2 Phân bé: ?!

Khoảng 250 chỉ và hơn 2000 loài phổ biến ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới,

đặc biệt là ở Châu Phi và miền nam Nam Mỹ, với một số đại diện ớ miền Bắc và Đông

Nam A, 44 chi (bốn đặc hữu) và 270 loài (153 loài đặc hữu) ở Trung Quốc

——maaaaaaaammamaaaammmmmmmmammmmmmmammmmnmmmaanaanammmmaammmaamn

SVTH: Doan Thị Phương I GVHD: PGS TS Nguyen Trung Nhan

Hình 1-1: Matelea denticulata Hình 1-4; Leptadenia pyrotechnica

tình 1-2- Caralluma acutangula

tinh 1-3: Calotropis gigantea Linn Hình 1-6: Microloma calycimum

SVTH: Đoàn Thị Phương 2 GVHD: PGS TS Nguyen Trung Nhân

Nghién cứu thành hod học cao chloro, của réc ing (Ci

1.2 Giới thiệu về cây bồng bồng (Calotropis gigantea Linn):

1.2.1 Tên gọi:

« Tên khoa học Calotropis gigantea (Linn), thuộc họ thiên lý (Asclepiadaceae)

© Tên thông thường: nam ti ba, cây lá hen, bảng biến, cốc may (Tay).""!

« Tên nước ngoải Sanskrit (arka, alarka), Anh (Giantic swallow wort, Mudar).

Hindi (madar) Kannada (Ekkemale), Telugu (Mandaramu, Ekke, Jilledu,

Arka), Malayalam (Errikka),"! Indonesia (Koreng susu, Biduri).'”!

« Hét loai khoa cho bởi bang sau''*!

Thân: Cây nhỏ cao 5-7 m có thể cao hơn nêu dé tự nhiên Canh có lông trắng

Lá mọc đôi dai 12-20 cm, rộng 5-11 cm không có lá kèm Góc phiến lá có tuyến trắng

SVTH: Đoàn Thị Phương 3 GVHD: PGS TS Nguyễn Trung Nhân

SVTH: Đoàn Thị Phương 4 GVHD: PGS TS Nguyễn Trung Nhân

Nghién cứu thành phan hoá học cao chloroform của rễ cây Bong Bong (Calotropis gigantea)

1.2.3 Phân bố:"“!“

Phân bế khắp vùng nhiệt đới và cận nhiệt đởi ở Châu Phi và Châu A Cây

mọc hoang ở Bangladesh, Trung quốc Burma, An Độ Indonesia Malaysia, Pakistan.

Philippines, Thai Lan Sri Lanka, Singapore đảo Timor, Cuba, New Guinea, dao

Hawaii, dai đất gần day Himalayan (Kartikar va Basu), những vùng dat hoang khô ở

Anh Moc hoang va được trong khắp nơi ở nước ta, từ miễn Bắc vao mien Nam

thường mọc trên đất cỏ cát ở các tinh ven biển, nhưng cũng gặp ở vùng đồng bằng vacác vùng trung du, Cây cũng thường được tròng bang những đoạn cành Có khi được

trông làm cây cảnh, làm hang rao.

1.2.4 Bộ phận dùng:PÌ

Bao gồm: hoa lá, mủ cây, rễ vỏ rẻ.

1.2.5 Thanh phần hóa học:

Hiện nay đã có nhiều công trình nghiên cứu về cây Bồng bồng (Calorropis

gigantea Linn) về thành phần hóa học cũng như vẻ hoạt tính sinh học của nó Theo

những nghiên cứu nay thi cây có các nhóm hợp chất chính sau: flavonoid, steroid,

Nghiên cứu thành phan hoá học cao chloroform của rễ cây Bong Bằng (Cal is ea

Galactinic acid (7) Calotoxin (8)

SVTH: Đoàn Thị Phương GVHD: PGS TS Nguyễn Trung Nhân

Nehién cứu thành phan hoá học cao chloroform của rễ cây Bong Bằng (Ci tea,

2a, 158-Dihydroxycardenolide (23) 19-Nor-10-hydroxyperoxy-2a, 1

5f-dihydroxyuzarigenin (24)

RE ere

SVTH: Doan Thi Phuong 10 GVHD: PGS TS Nguyên Trung Nhân

Nghiên cứu thành phần hoá học cao chloroform của rễ cây Bằng Bằng (C LÒ ed,

* Calotroposide B (30) : R' = OH; R’=H; RÌ= OCH;

Calotroposide C (31) : R' = OH; R”=OCH;; RÌ=H

Calotroposide D (32): R' = H; RÌ=OCH;; RỶ=H

a

SVTH: Doan Thị Phương 11 GVHD: PGS TS Nguyen Trung Nhan

Nghiên cứu thành phần hoá học cao chloroform của rễ cây Bằng Bong (Cal: is gigantea

ole

9 Calotroposide F (34)

Oo CHy

Nghiên cứu thành phan hod học cao chloroform của rễ cây Bon Cali is gủ ea,

OH

OH OH

Acid 9.12.13-trihydroxyoctadeca- 10(£), 15(Z)-dienoic (7)

1.2.5.4 Những chất khac:?48"4"5)

Calotropain-FI (1), calotropain-FII (2) calotropins DI (3), calotropins DH

(4) calotropbenzofuranone (Š) giganticine (6), R-(-)-mevalonolactone (7)

a-calotropenol (8) đ-a-calotropenol (9), mudarol (10) (bị tach ra thành 2 đồng phân là

1.2.6 Công dụng dân gian va hoạt tính sinh học:

1.2.6.1 Công dung dân gian:

>» Lá (theo y học Án Độ) được sử dụng để chữa chứng liệt từng phan, dautrong lá chữa chứng liệt từng phan Lá cũng được dùng dé trị dau khớp nhiễm trùng

va sốt liên tục, vết thương Trong y học Án Độ cổ đại dùng làm thuốc long dom, chat

tay uẻ, bệnh giun san, diệt nam, diệt côn tring."! Chữa chất độc do rắn cắn, chữa ung

nhot.!*! Ở nước ta, dùng lá cây này làm thuốc chữa hen Cách dùng: hải lá vẻ, lay khanướt lau sạch lông, thái nhỏ, sao qua cho héo Ngảy dùng 10 lá sắc với I bát rưỡi nước,

cô còn | bát Thêm đường vao chia 3-4 lần trong một ngày Nước hơi đẳng va tanh,uống nhiều cùng lúc có thể gây nôn Nên uống xa bữa cơm hoặc sau bữa cơm ống

_>mmmmmmmmmammmmmmmmmmmaaơơ nn

SVTH: Đoàn Thị Phương l4 GVHD: PGS TS Nguyen Trung Nhân

(Nghiên cứu thành phan hod hoc cao chloroform của rễ Cây Bằng Bong (Calotropis gigan tea)

vào cỏ the thay mệt mỏi chan, tay, minh may di ia lỏng (rat hiếm) Kết qua sau 2-3ngày, có khi sau 7-8 ngày Có trường hợp có kết quả sau 10 phat.!"!

> Hoa (theo y học An Độ cô đại) có vị đắng làm thuốc tiêu hóa, chất làm

se, thuốc làm dé tiêu, thuốc trị giun san, thuốc bổ và làm thuốc giảm đau, thường dùng

chữa sưng viêm hen suyén, u bướu, bệnh kapha (một trong ba thể dịch theo quan niệm

y học Án Độ cổ đại, phát sinh từ đất và nước) chán ăn, cô trướng, viêm vả sốt Theo yhọc Án Độ thi hoa là thuốc làm dễ tiêu, tốt cho gan, hoa khô lượng nhỏ uông vớiđường trị bệnh phong cùi, giang mai giai đoạn hai và bệnh lậu Hoa còn được dùng

dé chữa hen phé quan,”

> Mai cây có vị đẳng nóng, có dau, là thuốc xô chữa bệnh bạch bi, u

bướu, cô trướng, và các bệnh đường ruột (y học An Độ cô đại) Theo cách chữa bệnhcủa An Độ thi mủ cây có tính ăn mòn cay hãng làm thuốc long đờm, thuốc làm rụnglông, trị giun sán, hữu dụng trong chữa bệnh phong, ghẻ, nắm da đầu, bệnh trĩ, phátban trên cơ thể suyễn phủ lá lách và gan, bệnh phủ thing, sưng va đau khớp.Ì Chữacác vấn dé vẻ răng, chuột cắn, sưng tay, viêm khớp va các triệu chứng khác do thấp

khép."! Dân gian còn dùng nỏ như một loại thuốc pha thai.'”Ì

> Vỏ rễ dùng làm thuốc toát mô hôi, chữa hen suyén, phù voi, ho, bệnh

giang mai (y học An Độ cô đại) Vỏ rễ khô dùng thay thé thuốc gây nôn, nếu dùng

lượng nhỏ có thé trị bệnh kiết Ij, nhưng dùng nhiều thi gây nôn Vỏ rễ là thuốc bổ,

thuốc trị co thắt, long đờm, trị giun sán, nhuận trang, chữa bệnh giang mai Tron bột

vỏ rễ với tiêu den dùng 2 lan | ngày cũng dùng chữa bệnh vàng da,'*!, Vỏ rễ còn trị các

bệnh nhiễm trùng da, ho, cô trướng Bột rễ chữa hen suyễn, viêm phế quan, khó tiêu,tăng sự tiết dịch da day,”

1.2.6.2 Hoạt tính sinh học:

Cây bông bồng được biết đến với khả năng chữa được nhiều bệnh khác nhau

với đặc tính nỗi trội là có tính độc với vi khuẩn và nắm Ngoài ra nó còn nhiều đặc tính

khác:

> Chống oxi hóa: La cây Calotropis gigantea có hoạt tinh chong oxi hóa.

Nghiên cứu cho thay dich trích từ hỗn hợp alcol nước của lá có hoạt tính phân hủy triệt

—_——_masrïrmmmmmmmmmmmmmmaammamaaaaanaaakaơkrnrrraaaaaaam

SVTH: Đoàn Thị Phương 15 GVHD: PGS TS Nguyen Trung Nhan

Nghiên cứu thành phần hoá học cao chloroform của rễ cây Bon C is gigantea

dé DPPH, hoạt tính khử va hoạt tinh phân hủy góc tự do NO’ Dịch trích cho thay

hoạt tinh phân hủy DPPH tôi đa (85,17 %) ở nông độ 400 jưml, cỏn đối với gốc tự do NO’ cho thấy sự phân hủy tối đa (54,55 %) ở nồng độ 100 wml Khả nang khử của dich trích này được phát hiện là tăng lên khi tăng nồng độ dịch trich,!”!.

> Chống tiêu chảy: dich trích (50:50) nước và alcol của những bộ phận

khác nhau của cây này được nghiên cứu là có hoạt tính chống tiêu chảy ở chuột Dịch trích cho thấy sự giảm đáng kể việc đi ngoài và đường như là đừng hẳn khi dùng với

liễu 200-400 mg/kg trọng lượng cơ thể, Ì,

> Cam máu: Ma của cây C alotropis gigantea có hoạt tính đông máu Dịch trích từ mủ cây thủy phân protein ở người: casein, fibrinogen và gây đông máu theo

cách thức sẵn có Dịch trích này thủy phân các tiểu đơn vị của fibrinogen, tiểu đơn vị

Aa thủy phân dau tiên sau đó là Bb và tiểu đơn vị g Hoạt tính cam máu này của mủ

cây là do có enzyme thủy phân protein là Calotropin DI, DiI và Calotropain Fl,

Fu PU),

> Ngừa thai: Dịch trích ethanol và chloroform từ rễ của cây này có hoạt

tính ngừa thai ở chuột Dịch trích này cho thấy khả năng ngừa thai 100 % khi dùng ở

liễu 100 mg/kg, nó cũng cho thấy hiệu quả 100 % ở liều 12,5 mg/kg khi dùng trong

những ngày từ 1 đến 5 hoặc | đến 7 sau khi giao phói.!°#*),

> Chống viêm, giảm đau và hạ sốt:

¥ Dịch trích ethanol của Calotropis gigantea cho thấy hoạt tính

chống viêm, chống lại chất carrageenan gây ra phù thủng ở chân chuộtbạch !°Ì

¥ Dịch trích alcol của hoa cây này có hoạt tính giảm đau khi tiến

hành thí nghiệm lên chuột Uống dịch trích etanol từ hoa giảm cơn đau đáng ké và giảm sự mở rộng vết thương Dịch trích alcol từ vỏ rễ cũng cho thấy hoạt tính giảm đau khi thí nghiệm trên chuột bạch, cũng làm giảm số

cơn đau quan va làm chậm sự loét vết thương Ì,

# Dịch trích nước: ethanol (50:50) từ rễ cay có hoạt tinh hạ sốt.

Hoạt tính nay được thi nghiệm bằng việc sử dụng men và vắc-xin thương

han dé gây sốt ở chuột bạch Swiss và thé,!?!

kiên cứu thành phần hoá học cao chloroform của rễ cây Bê Ci ed

>» Tri ung thư và gây độc tế bào: các chất cardenolide glycoside (đại diện la

Calotropin (1), frugoside (2), 4°-O-f-D-glucopyransy frugoside (3)) trong cây mang

hoạt tính gây độc tế bào đối với vài dòng tế bao ung thư ở người va chuột Theo

nghiên cứu thì chat (1) và (2) trích từ dich ethanol của rễ cỏ tác dụng ức chế hoạt độngcủa dong tế bào K562 (gây bệnh bạch cdu man tính ở người) và dòng tế bào SGC-

7901 (gây ung thư dạ dày ở người) Dịch trích từ ethy! acetate của hoa có kha năng ức

chế ung thư biểu mô cỏ trướng của Ehrlich ở chudt,”!,

> Chống co giật: dich trích alcol từ vỏ rễ cây này với liều dùng nhất định

cho thấy hoạt tính chống co giật chống lại pentylenetetrazole (PTZ) một chất gây ra chứng co giật ở chuột Dịch trích này cũng cho thấy hoạt tinh lam ngủ ngon do có hoạt

tinh an thân, 1

> Kháng khuẩn:

Y Dịch trích nước, methanol, ethanol, petroleum ether của lá cây

Calotropis gigantea Linn có hoạt tính chống lại nắm gây bệnh Candida, cô

lập lâm sàng đối với Candida albican, C parapsilosis, C tropicalis và C krusei”!.

¥ Dịch trích nước từ lá cây này có hoạt tỉnh chống khuẩn

Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus ceceus, Pseudomonas aeruginosa, Micrococcus luteus, Klebsiella pneumonia Dịch trích nước từ

mủ cây này han chế hoạt động đối với Staphylococcus aureus, Bacillus

ceceus, Escherichia coli và C krurei Ngoài ra dịch trích này còn có hoạt

tính kháng nắm gây bệnh trên cây như Fusarium mangiferae (gây bệnh trên

cây xoải),Ì?!,

* Dịch trích methanol, petroleum ether, chloroform, ethyÌ acetate từ

vỏ rễ của cây cho thấy hoạt tính chống lại Sarcina lướa, Bacillus

megaterium Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Shigella sonnei,

Escherichia col,"!,

SVTH: Doan Thị Phương 17 GVHD: PGS TS Nguyễn Trung Nhân

hiên cứu thành phân hoá học cao chloroform của rễ Bằng (Calo ivantea,

> Bao vệ gan: Vỏ thân cây gồm mủ va sáp Phan sắp gồm f-amyrin va

đồng phan của nó a va Ø-calotropeol hỗn hợp tetracyclic triterpene dạng vết của các

sterol, acid béo, giganteol, hidrocacbon Cy, Cạ; Phan mủ gồm các cardiac glycoside,

calotropin, uscharin, calotoxin uscharidin và gigantine Mu cây gom calotropin DI and

DIL va calotropain FI va FIL (có hoạt tính thúy phân protein) Nó là chat day hứa hen

trong việc trị bệnh gan Dich trích từ thân cây Calotropis gigantea có tác dung chữa trị

nhất định đối với gan bị tôn thương cũng như tế bảo bị suy yếu do có nhiều nguyên tửoxi trong ching khi tiến hành thí nghiệm trên chuột, Ì, Dịch trích etanol từ hoa của

cây cho thấy hoạt tính bảo vệ gan khi thí nghiệm lên chuột Paracetamol gây nhiễm độc gan, cho biết gan bị tốn thương Khi điều trị cho chuột bằng địch trích ethanol tir

hoa cây Calotropis gigantea sẽ giàm lượng paracetamol làm gan trở lại bình thường.

Hoạt tính mà dịch trích này có được là do trong đó có các chất thuộc nhóm terpenoid

va flavonoid, !*!

* Diệt côn trùng: dịch trích methanol petroleum ether va dịch trích

chloroform từ vỏ rễ có hiệu quả trong việc xua đuổi côn trùng như ấu trủng và con

trưởng thành của loài Tribolium castanewm.!”Ì Chất Giganticine từ dịch trích

methanol của vỏ rễ cỏ hoạt tính tiểu điệt ấu trùng của loài châu chấu sa mạc Schistocerca gregaria,”

SVTH: Doan Thi Phuong 18 GVHD: PGS TS Nguyễn Trung Nhân

Nehién cứu thành phan hod học cao chloroform của rễ cây Bén, Calotropis tea

PHAN 2:NGHIEN CUU

2.1 Giới thiệu chung:

Trong bai khoá luận nảy chúng tôi tiến hành nghiên cửu thành phan hóa học của

rễ cây bong bong được thu hai tại Tp Phan Thiết, tinh Bình Thuận 06/2011 được

nhận danh bởi Tiến Sĩ Võ Văn Chi (phụ luc }).

Sau khi thu hái, rễ cây được rửa sạch, phơi khô và xay nhỏ thành bột Bột rễ cây

bỏng bồng được chia làm nhiều phan trích nóng với methanol Toàn bộ dịch trích saukhi cô quay thu hồi dung môi đưới áp suất kém thu được cao methanol thô Cao thô

methanol được hòa tan với nước sau đó trích lỏng-lỏng với đơn dung môi có độ phản

cực tăng dan: petroleum ether, chloroform, ethyl acetate, butanol Thu hồi dung môi

dưới cất áp suất kém thu được cao tương ứng và địch nước.

Sử dung sắc kí cột silica gel pha thuận, sắc kí điều chế kết hợp với kỹ thuật sắc

ký lớp mỏng với nhiều hệ dung môi khác nhau từ cao chloroform chúng tôi đã cô lập

« Sắc ký bản mỏng với hệ dung môi chloroform: methanol (95:5), hiện mau

bằng dung dịch H;SO, 20% ho nóng cho vet tròn màu đỏ có R¿= 0.40.

Biên luân cấu trúc:

Pho 'H-NMR (500MHz, methanol_d,) (phu lục 2) của hợp chất BB2 xuất hiện

các tin hiệu cộng hướng như sau: 2 proton methylene [5, 4.90 (1H d J=18.4 Hz)

H-21a:§.02 (1H d J=18.4) H-2Ib| một proton olefin [54 5.89 (1H s) H-22] một

proton methine [5 2.82 (1H, dd, J=10.5 Hz; 5.7 Hz) H-17?].

—mmmmmmmmmmmmaaaaamaamaaaammmmaammamammmaammmmmmammaaanm

SVTH: Đoàn Thị Phương + 19 GVHD: PGS TS Nguyen Trung Nhân

Pho C-NMR (phy luc 3) kết hợp với phổ HSQC (phụ luc 4) cho thấy hợpchất BB3 có 29 tín hiệu carbon gồm các tín hiệu của một phân tử đường va tín hiệu

của aglycon có khung cardenolide.

e Các tín hiệu cộng hưởng của aglycon bao gồm: 1 carbon oximethylene của

vòng lactone C-21 (8¢ 75.3), 8 carbon methylene có tín hiệu cộng hưởng từ (25-45

ppm), một carbon olefin C-22 (S¢ 117.9), 2 carbon carboxy! C-23 (ôc 177.2) va C-19

(5¢209.4), 1 carbon olefin hoan toàn trí hoán (5¢ 178.2) của vòng lactone, 3 tin hiệu

carbon tử cap 6 tin hiệu carbon methine Các tin hiệu trén 1a đặc trưng của khung

cardenolide.

Pho HMBC (phu /uc 5) cho thấy proton H-I cho tương quan với 2 carbon

oximethine C-2 (&¢ 70.4), C-3 (&¢ 73.1) và carbon carboxy! C-19 (&¢ 209.4).

Các dit liệu trên cho thay phan aglycon của hợp chat BB2 có cấu trúc như sau:

SVTH: Đoàn Thị Phương 20 GVHD: PGS TS Nguyễn Trung Nhân

Nghién cứu thành chân hoá học cao chloroform của rễ cây Bằng Bằng (Calotropis gigantea)

e Các tin hiệu cộng hưởng của phân tử đường bao gồm: | carbon anome C-I' (ỗc

95.5), một carbon tứ cắp mang oxigene 2 carbon oximethine C-5' (6¢ 91.8) và C-3'` (&¢

71.9) 1 carbon methylene C-4' (6¢ 38.2), 1 carbon methyl! C-6" (õc 21.2).

Proton oximethine H-5' [1.65 (2H, m)] cho tương quan carbon methylene

C-4', carbon C-1", carbon C-4', carbon C-6'.

Proton methyl H-6" [1.2 (3H m)] cho tương quan với carbon oximethine C-6`

va carbon oximethine C-5’.

Các dữ liệu trên cho thấy phan đường của hợp chat BB2 có cau trúc như sau:

Proton oximethine H-3 [8 3.93 (1H, m)] cho tương quan với carbon anome C-1" (8¢ 95.5); ngược lại proton anome H-l' cũng cho tương quan với carbon C-3

(ôc 73.1) Đồng thời proton oximethine H-2 [5 3.84 (1H, m)] cho tương quan với

carbon tử cấp C-2' (8¢ 91.8) như vậy phần đường sẽ gắn vào phan aglycon tại carbon

C-3 và C-2.

————orrhrcằẽằẽa' m.mmmnmmmmmmammmmmmœœmm

SVTH: Đoàn Thị Phương 21 GVHD: PGS TS Nguyen Trung Nhân

Từ các dit liệu phổ 'H-NMR, "C-NMR HMBC của hợp chất BB2 kết hợp so sánh với tài liệu tham khao,!""!, cầu trúc của BB2 được đẻ nghị là calotropin.

Neghién cứu thành phan hoá học cao chỉ của rễ cây Bỏ Ci

[1 |>»CH | 470QHdJZ729H) | 956 | 3š —_ CBE 1 Dee ee eee

Nghiên cứu thành phan hoá học cao chloroform của rễ Bằng (Cal tea

Bang 2: So sánh số liệu phỏ 'H -NMR, "C-NMR của BB2 va Calotripin

ghiên cứu thành hoá học cao chloroform của rễ cây Bong Bong (Calotropis a,

2.2.2 Hợp chat BB3:

+ Nhân xét chung:

e Hợp chat BB3 thu được dang bột, mau trang, tan trong aceton, hap thu UV

e Sắc ký bản móng với hệ dung môi chloroform: acetone (95:5), hiện mau bằngdung dịch H;SO, 20% hơ nóng cho vết tron mau đỏ, cỏ R,= 0,45

4$ Biện luân cấu trúc:

Pho 'H-NMR (500MHz, acetone_đ¿) (phu lục 6) và phô C-NMR (125 MHz,acetone_ds) (phụ iục 7) của hợp chất BB3 cho các tin hiệu tương tự như phé 'H và

"C-NMR của hợp chat BB2

Pho 'H-NMR (phự lựe 6) cho các mũi cộng hưởng ứng với sự hiện diện của 2

proton methylene [5, 4.84 (1H, dd, J=l82Hz: 1.3Hz) H-2la}; 4.98 (1H dd, J=18.2Hz; 1.3Hz) H-2lb], một proton olefin [5 5.85 (1H, s) H-22], một proton

methine [ô; 2.82 (1H, dd, J=10.5 Hz; 5.7Hz) H-17] Ngoài ra còn có tín hiệu cộng hưởng của | proton anome [5, 4.67 (1H, d, J=7.9Hz), H-1"] cùng với tín hiệu của một nhóm methyl [ô„ 1.17 (3H, d, J=6.3Hz) H-6'].

Phổ "C-NMR (phụ luc 7) kết hợp với phd HSQC (phu luc 8) cho thấy hợp

chất BB3 có 30 tín hiệu carbon gồm các tín hiệu của một phan tử đường va tín hiệu

của aglycon có khung cardenolide.

e Các tin hiệu cộng hưởng của aglycon bao gồm: | carbon oximethylene của

vòng lactone C-21 (ôc 73.3), 8 carbon methylene có tín hiệu cộng hưởng từ (25-45 ppm), 2 carbon oximethine C-2 (6¢ 72.3) và C-3 (ôc 78.1), một carbon olefin C-22

(8c 117.8), 2 carbon carboxy! C-23 (8¢ 176.3), C-19 (S¢ 174.5), va 1 carbon olefin

hoan toàn trí hoán C-20 (5- 175.6) của vòng lactone, 3 tín hiệu carbon tứ cấp, 4 tín

hiệu carbon methine Các tín hiệu trên là đặc trưng của khung cardenolide.

Phổ HMBC (phu uc 9) cho thấy proton H-1 cho tương quan với 2 carbon

oximethine C-2 (8¢ 30.7) C-3 (8¢ 78.1) va carbon carboxy! C-19 (S¢ 174.5),

eee eee

SVTH: Doan Thi Phuong 25 GVHD: PGS TS Nguyen Trung Nhan

Nghiên cứu thành phan hoá học cao chloroform của rễ cây Bon Ci is fe:

Các dữ liệu trên cho thay phần aglycon của hợp chất BB3 cỏ cau trúc như sau:

e Các tin hiệu cộng hưởng của phân tử đường bao gồm: | carbon anome C-l"

(ôc 109.2) 1 carbon oximethine C-4' (8¢ 74.0), 1 carbon tử cấp mang oxigene C-2'

(8c 85.4), 1 carbon methylene C-3' (&¢ 41.1), 1 carbon carboxyl C-6' (Sc 171.6), |

carbon methyl! C-5’ va ] carbon của nhóm methoxy! (8¢ 52.2).

Pho HMBC (phy luc 9 ) cho thấy:

Proton anome H-I' [4.94 (1H, d, J=7.9Hz)] cho tương quan với carbon

oximethine C-3` và carbon methylene C-2'.

Proton methylene H-3' [1.43 (2H m)] cho tương quan carbon C-1* và C-2".

Proton methyl H-Š' [1.32 (3H d J©6.3Hz)] cho tương quan carbon C-3" và

Nghiên cứu thành phan hoa học cao chloroform của rễ Cây Bong Bằng (Calotropis gigantea)

Các dữ liệu trên cho thay phan đường của hợp chất BB3 có cau trúc như sau:

Proton oximethine H-3 [8y 3.30 (1H, m)] cho tương quan với carbon anome C-]'

(ôc 109.2); ngược lại, proton anome H-l' cũng cho tương quan với carbon C-3 (ä¿ 86.1).

như vậy phần đường sẽ gắn vào phan aglycon tai carbon C-3.

_- mmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmammaann

SVTH: Đoàn Thị Phương 27 GVHD: PGS TS Nguyên Trung Nhân