Trang 3 Nghién cứu thành phân hoá học cao chloroform của rễ cây Bằng Bằng Calotropis gigantea DANH MUC CAC CHU VIET TAT ID/2D-NMR : dd: HMBC : HSOC: [a]p : %: phỏ cộng hưởng từ hạt nhân
Trang 1TRUONG DAI HOC SU PHAM THANH PHO HO CHi MINH
KHOA HOA
CHUYEN NGANH HOA HUU CO SCR
Se meses nen
KHOA LUAN TOT NGHIEP
NGHIEN CUU THANH PHAN HOA HOC PHAN DOAN J CAO CHLOROFORM CUA RE CAY BONG BONG, CALOTROPIS GIGANTEA (L.,) HO
THIEN LY (ASCLEPIADACEACE)
GV hướng dẫn: PGS TS Nguyễn Trung Nhân
ŠSV thực hiện: Đoàn Thị Phuong
`
MSSV: K36.106.035
TP.HCM, thang 5 nam 2014
Trang 2Neghién citu thanh phan hod hoc cao chloroform cua ré cay Bông Bằn
LOI CAM ON
Với tắm lòng trân trọng và biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn đến:
PGS TS NGUYÊN TRƯNG NHÂN - người đã truyền đạt cho em nhiều kiến
thức chuyên môn, tận tình hướng dẫn và truyền đạt nhiều kinh nghiệm nghiên cứu quý
báu trong suốt thời gian em thực hiện và hoàn thành đề tải tốt nghiệp
Anh Nguyễn Hữu Duy Khang, anh Dang Hoang Phú, chị Võ Thúy Hằng đã tận tình truyền đạt những kinh nghiệm quý báu, quan tâm, nhiệt tình hướng dẫn tạo mọi
điều kiện giúp đỡ em trong suốt quá trình thực hiện đẻ tải tốt nghiệp
Các anh chị nghiên cứu sinh học viên cao học vả các bạn sinh viên bộ môn Hóa Hữu cơ trường ĐH Khoa Học Tự Nhiên đã động viên, giúp đỡ trong suốt quá
trình thực hiện đẻ tải tốt nghiệp
Tất cả quý thầy cô Khoa Hóa, đặc biệt quý thầy cô Bộ môn Hóa hữu cơ trường ĐH Sư Phạm Thành Phố Hồ Chí Minh đã giảng đạy và tạo mọi điều kiện tốt dé em hoàn thành dé tài tốt nghiệp
Gia đình đã động viên và tạo điều kiện tốt về vật chất lẫn tinh thần để em hồn
thành khố luận của mình
Trang 3Nghién cứu thành phân hoá học cao chloroform của rễ cây Bằng Bằng (Calotropis gigantea)
DANH MUC CAC CHU VIET TAT ID/2D-NMR : dd: HMBC : HSOC: [a]p : %:
phỏ cộng hưởng từ hạt nhân l chiều/ 2 chiều (One/Two Dimensional- Nuclear Magnetic Resonance)
mii doi (doublet)
mũi đôi-đôi (doublet- doublet)
Trang 4Nghién cứu thành phân hoá học cao chloroform của rễ Cây Bằng Bằng (C alotropis gigantea)
LOI GIGI THIEU
Ngày nay, cùng với sự phát triển vượt bậc của khoa học kỹ thuật là việc phat sinh
ra nhiêu bệnh tật nguy hiểm khác nhau Việc nghiên cứu sản xuất các loại được phẩm để phục vụ nhu cầu sức khỏe của con người là rất cần thiết, và ngành hóa học cũng đã
góp một phần không nhỏ vào sự phát triển ấy Các nhà hóa học đã tông hợp được nhiều loại hợp chất chữa trị nhiều loại bệnh khác nhau Tuy nhiên, những loại thuốc này thường rất đắt và một số có tác dụng phụ, chính vì thế, con người có khuynh
hướng quay về với nên y hoc co truyền, sử dụng được thảo làm thuốc trị bệnh Nước ta
thuộc vùng nhiệt đới gió mùa, có nguồn thực vật đa dạng và phong phú là một ưu thể rất lớn đối với các nhà nghiên cứu hóa học các hợp chất thiên nhiên
Người đân trên các vùng gần bờ biển đọc theo đất nước Việt Nam đều rất quen
thuộc với loại cây có hoa màu tím mọc thành cụm lớn dọc theo bờ biển, một vài người
chí biết nó có tác dụng xua đuổi mạt gà, các côn trùng nhỏ nhưng ít ai biết tới công
dụng chữa bệnh thực sự của nó Loài cây nảy dân gian thường gọi bông bồng, cây lá
hen, bàng biên, Tên khoa học /a Calotropis gigamtea Linn thuộc họ Thiên Lý Nó có công dụng chữa hen suyễn trị giun sán, rắn cắn, và cả bệnh ung thư Ở trên thế giới đã có ngươi nghiên cứu về cây này nhưng số lượng không nhiều, ở Việt Nam thì số bài viết vẻ cây này rất hiểm Với lý do đó, chúng tôi tiễn hành thực hiện đề tài:*“Khảo
sát thành phần hoá học cao chloroform của rễ cây Bong bong (Calotropis gigantea Linn) ho Thién ly (Asclepiadaceae)”
Mục tiêu của để tài này là cô lập, xác định cấu trúc hóa học các hợp chất đã cô
Trang 5Nghién cửu thành phân hoá hoc cao chloroform của rỄ cay Bong Bằng (C alotropis gigantea)
Trang 6Nghién cứu thành chân hoá học cao chloroform của rễ cây Bong Bong (Calotropis gigantea)
MUC LUC
PHAN 1: TONG QUAN ooccccccescccsesssscssessssesssussesrsussnsessnsonssnsnsearsarsavseneensensnanserenrearseneenes i
1.1 Gidi thiéu vé ho Thién ly Asclepiadaceae® cccccccccesssssssesesessessesecseseeneeneenees 1
131M BF since casscceveevassnsiizeiccea sie iuss ante ean eps siceueis saw prac Sowpasecapanacnati 1
Ì:12 ĐRÊn lỗ: 005äG0GG1G012G0 11408104 0603340062016060608160310/0A800/0016 1
1.2 Giới thiệu vẻ cây bỏng bồng (Calotropis gigantea Linn): - 3
BREF TÊN eseessseesseeseesessnsesseeeesseeeeapazsseoosvsoeaopesesgesegmmnseorfDpsossaonsvpn ae peszee 3 L2⁄2 : MÔ À CÊV?(ceoviaessakeoeeioieoeoceneraaieeehraeseioebsoidessrsidpvfEyieSrEeSGt6600)043.056c 3
223: Phân BỖs:ccocaiicicoibio2giocsdcctoidlissadtstGvssbidloasekG02.-e 5
DA Bồ phận: z5 66666 00622208006 LGÿ-ies >
1.2.5 Thanh phan héa hoe! .cccsssssesessesneseseeesvessessonesoveravsneessnvsnanssoeesereneenveeennses 5
1.2.6 Céng dung dan gian va hoạt tính sinh học: . s55 52 l4
mã cố —ẽẰ—~<ŠF=ằ-Ằ-=—=—=-== e.e ———~ 19
4.1 (GHI HIệN CN xecasxesdroaorseesnaokiorociiireg6290012043696224626024/4202 280835064 19
2.2 Khảo sát cau triic héa hoc ctba cac hop Chats .ceccececeesoesssesecessvecsnssnneenecsenees 19 331 Tạp chất HH:cccicscccciiiLkioilcccii0cacaddieccosklsesbivda 19
222 Hon chit BB3 iis aaa 25
P.1 31 PHAN 3: THUC NGHIEM .ccccccccsccsesseseserseseseseeretsveerssesssssnsnssnnsensennsnessaceuesneenenneens 37
3.1 Các phương pháp sử dụng trong thực nghiệm .:.scsccceseeseessesesrerensteneenees 37
3.2 Điều kiện thí nghiệm: -¿- 2c 26t St v2 112223721 212111311317217722222e xe 37
11 Ù AT rendeeceseaeeeoeoeaeesseoeessas<exesessasẻ 37
320 THÊ ĐẦI 2x02 26222000 02002GLG0404000030010040200)/02404L0362-xx8 38 34 “TlÊa th HữnGI ÂNGk ¿02260220066 0121G00G4c0G2040002/2206a% 38
21 | TY MT cae (MEN 46200242226) ¿ va 38
3.3.2 Ly trích các loại cao: petroleum ether, chloroform, ethyl acetate 38 4 CRIME NG URNS IED :': t0 t4 «xe msdiieeeeekeeanssereeeasasosessi 39 3,41; Khảo sGpRfN đc co ck6ditaaeoGouidooiescoodsoaaaess-e 40
Trang 7Nghién cứu thành phan hoá học cao chloroform của rễ cây Bong Bong (Calotropis gigantea)
PHAN 1: TONG QUAN
1.1 Giới thiệu về họ Thiên lý Asclepiadaceae: 1.1.1 Mô tả:!"!P!
Hầu hết đều là cây thân có hoặc cây bụi, cây có mủ trắng Một số là thân leo,
một số lại là thân mọng nước vả có sự hạn chế mọc lá Lá đơn giản thường mọc đổi
xứng hoặc xoắn lại, đôi khi có lá kèm
Hoa lưỡng tính, hầu như đều có đạng tỏa xứng tỉa, thường bao gồm một cụm
phức tạp hoặc cỏ vành đĩa mật giữa trảng hoa và cơ quan sinh san cua cây Đài hoa
chia 5 phân khác biệt hoặc kết hợp lại với nhau ở phân đáy Bên trong bao hoa là tràng hoa có 5 thùy có cánh tràng liền hoặc có cánh tràng hợp Bộ nhị và bộ nhụy hầu như
luôn hợp lại tạo thành trục hợp nhụy với Š nhị phan ra rõ ràng và một nhụy lớn cùng
với đầu nhụy có 5 thùy Bao phấn thường có 1 cặp túi phấn được gọi là khói phấn,
được vận chuyên như một đơn vị trong suốt quá trình thụ phan Bau nhuy gom một
nhụy kép đơn lẻ với hai lá noãn riêng biệt và nó bị tách ra tại ơng nỗn và vịi nhị, bầu nhị chỉ kết hợp với nhụy lớn đơn lẻ Bầu nhụy có sự khác biệt hằu như luôn có bầu thượng và mỗi cái đều có một ông dẫn và ở mép có nhiễu noãn Quả dạng nang Hạt thường có một chùm lông ở cuối hạt
1.1.2 Phân bá:
Khoảng 250 chỉ và hơn 2000 loài phổ biến ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới,
đặc biệt là ở Châu Phi và miền nam Nam Mỹ, với một số đại điện ớ miền Bắc và Đông Nam Á 44 chỉ (bốn đặc hữu) và 270 loài (153 loài đặc hữu) ở Trung Quốc
—mmmmmmmmmmờơmmm _=“TÐF".mmmmmmmmmmmmmm.mh.m.mn.mmnmm
Trang 8Hinh 1-1: Matelea denticulata Hinh 1-4: Leptadenia pyrotechnica
Hink 1-3: Calotropis gigantea Linn Hình 1-6: Microloma calycinum
Ƒ—_—_mmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmammmmmmmmmmmmmmmm
Trang 9Nghién citu thank phan hod học cao chioroform của rễ cây Bông Bông (Calotropis gigantea)
1.2 Giới thiệu về cây bồng bồng (Calotropis gigantea Linn):
1.2.1 Tên gọi:
« lên khoa học: CaÍotropis gigamiea (Lìnn), thuộc họ thiên lý (Asclepiadaceae)
e Tên thông thường: nam tì bả, cây lá hen, bảng biến, cốc may (Tảy) Ì'Ì
e lên nước ngoải Sanskrrt (arka, alarka), Anh (Grantic swallow wort, Mudar),
Hindi (madar), Kannada (Ekkemale), Telugu (Mandaramu, Ekke, Jilledu, Arka), Malayalam (Errikka),"! Indonesia (Koreng susu, Biduri)."!
« Hệ ân loại khoa học được cho bởi bảng sau !"Ì Giới: PÍantae Ngành: Magnoltophyta Lop: Lamudae Phan lop: Asteridie Bo: Gentianales Họ: Asclepiadaccac
Chị: Calotropis Loài: (igarmea
Hình 1-7: Thân, hoa, lá cây bằng bằng
1.2.2 Mô tả cây:!
Thân: Cây nhó cao 5-7 m có thể cao hơn nêu đẻ tự nhiên Cành có lông trắng La moc doi dai 12-20 cm, rong 5-11 cm không có lá kèm Góc phiến lá có tuyến trắng Hoa Hoa mọc thành xim gồm nhiều tan đơn hay kép, Hoa lớn, đều, đẹp, đường kính 5 em, màu trắng xám hoặc tím hồng Đải 5, tràng hợp hình bánh xe, Š nhị liên nhau thành ông có phần phụ như 5 con rồng Mùa hoa gần như quanh năm, chủ yêu từ tháng 12 đến tháng | Bao phan hàn liền với đầu nhị Hạt phân ở mỗi ô hợp thành một khối phần có chuôi vả gót đính 2 lá noãn rời nhau, bảu thượng, đầu nhụy dinh liên với các bao phần
Trang 10Hình 1-9: Oua navn, qua khố và rẻ cây bông bông
Trang 11Nghién cửu thành phan hod hgc cao chloroform ciia ré cây Bông Bong (Calotropis gigantea)
1.2.3 Phan bo:!'*'*!
Phân bố khắp vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới ở Châu Phi và Châu Á Cây
mọc hoang & Bangladesh, Trung quéc, Burma, An D6, Indonesia, Malaysia, Pakistan, Philippines, Thai Lan, Sri Lanka, Singapore, dao Timor, Cuba, New Guinea, dao Hawaii, dai dat gan day Himalayan (Kartikar va Basu), nhimg vùng đất hoang khô ở
Anh Moc hoang và được trồng khắp nơi ở nước ta, từ miễn Bắc vào miền Nam thưởng mọc trên đất cỏ cát ở các tỉnh ven biển, nhưng cũng gặp ở vùng đồng bằng vả
các vùng trung du Cây cũng thường được trồng bằng những đoạn cành Có khi được
tròng làm cây cảnh, làm hàng rao 1.2.4 Bộ phận dùng:
Bao gồm: hoa, lá, mủ cây, rễ, vỏ rễ 1.2.5 Thanh phan hóa học:
Hiện nay đã có nhiều công trình nghiên cửu vẻ cây Bông bồng (Calotropis
Trang 12Nghiên cứu thành phân hoá học cao chioroform cia ré cay Bong Béng (Calotropis gigantea Cyanidin 3-O-rutinoside (5) 1.2.5.2 Steroid:?*"*""-""1 Calosterol có trong mủ quả cây Bồng bông công thirc C)sH340 là đồng phân " 0 của Ergosterol !'°! Syriogenin (1) Proceroside (2)
Neen eee eee ee
Trang 13Nghiên cứu thành n hod hoc cao chloroform cua ré cay Bong Bang (Ci i ntea 0 Calatropins (3) Benzoylineolone (4) 19-Nor-cardenolide (5) 18,20-Epoxy cardenolide (6) CHO o KT T ro ơ Cry : KH Le
Galactinic acid (7) Calotoxin (8)
Trang 17Nghiên cứu thành phan hoá hoc cao chloroform cua ré cay Bong Béng (Calotropis ea 158-Hydroxycalactinic acid (27) 16a-Hydroxycalactinic acid methyl ester (28) cym CHạ ole ° CH, ok 0 CH, OCHs Họ ole orcym 0 OCH, CH, o.9 1! ? 3 R? Calotroposide A (29): R' = H; R°=H; R°= OCH;
R? Calotroposide B (30) : R' = OH; R*=H; R*= OCH;
Calotroposide C (31) ; R' = OH; R”=OCH:; RÌ=H Calotroposide D (32): R' = H; R?=OCH;; R’= H
Trang 20
Nghién citu thành phan hod hgc cao chloroform cua ré cây Bong Bong (Calotropis gigantea) OH HOOC OH OH Acid 9,12,13-trihydroxyoctadeca-10(£),15(Z)-dienoic (7) 1.2.5.4 Những chất khac:? 4%"!
Calotropain-FI (1) calotropain-FH (2) calotropins DI (3), calotropins DH (4), calotropbenzofuranone (5), giganticine (6), R-(-)-mevalonolactone (7), a-
calotropenol (8) đ-calotropenol (9) mudarol (10) (bị tách ra thành 2 đồng phân là giganteol (11), isogiganteol (12)) 0 OH A C 0 | 0 ĐỚN " ae pe H " H Oo Oo Giganticine (6) R-(-)- Mevalonolactone (7) 1.2.6 Công dụng dân gian và hoạt tính sinh học:
1.2.6.1 Céng dung dan gian:
> Lá (theo y hoc Án Độ) được sử dụng để chữa chứng liệt từng phần, dầu
trong lá chữa chứng liệt từng phân Lá cũng được dùng đẻ trị đau khớp nhiễm trùng vả sốt liên tục vết thương Trong y học Án Độ cô đại dùng làm thuốc long đờm., chất
tay uẻ, bệnh giun sán diệt nắm, diệt cơn trùng.!“Ì Chữa chất độc do rắn cắn, chữa ung nhọt.!°Ì Ở nước ta, dùng lá cây này làm thuốc chữa hen Cách dùng: hải lá vẻ, lẫy khăn
ướt lau sạch lông, thái nhỏ, sao qua cho héo Ngảy dùng 10 lá sắc với I bát rưỡi nước, cô còn 1 bát Thêm đường vào chia 3-4 lần trong một ngày Nước hơi đẳng và tanh uống nhiều cùng lúc có thể gây nôn Nên uống xa bữa cơm hoặc sau bữa cơm Liỗng
—_——mmmmmmmmmmmmmmmmmœmammmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmm
Trang 21Nghién cứu thành phan hod học cao chloroform của rễ cây Bằng Bong (Calotropis gigantea)
vào cỏ the thay mét moi chan, tay, minh may, di ia long (rất hiểm) Kết quả sau 2-3
ngày, có khi sau 7-8 ngày Có trường hợp cỏ kết quả sau 10 phút.!'Ì
> Hoa (theo y hoc An Độ cô đại) có vị đẳng làm thuốc tiêu hóa chất làm se, thuốc làm dễ tiêu, thuốc trị giun sản, thuốc bổ và làm thuốc giảm đau, thường dùng
chữa sưng viêm, hen suyễn, u bướu, bệnh kapha (một trong ba thể dịch theo quan niệm
y hoc An Độ cổ đại phát sinh từ đất và nước), chán ăn, cỗ trướng, viêm vả sốt Theo y học Án Độ thì hoa là thuốc làm dễ tiêu, tốt cho gan, hoa khô lượng nhỏ uống với
đường trị bệnh phong cùi, giang mai giai đoạn hai và bệnh lậu.!, Hoa còn được dùng đề chữa hen phế quản, °I,
> Mai cay có vị đẳng, nóng, có dâu, là thuốc xô chữa bệnh bạch bì, u bướu, cô trướng, và các bệnh đường ruột (y học Án Độ cô đại) Theo cách chữa bệnh
của An Độ thi mù cây có tính ăn mòn, cay hãng, làm thuốc long đờm, thuốc làm rụng lông, trị giun sán, hữu dụng trong chữa bệnh phong, ghẻ, nằm da đầu, bệnh trĩ, phát
ban trên cơ thể, suyễn, phù lá lách và gan, bệnh phủ thủng, sưng và đau khớp, Ì Chữa các vấn để vẻ răng, chuột cắn, sưng tấy., viêm khớp và các triệu chứng khác do thấp
khớp.!*Ì Dân gian còn dùng nó như một loại thudc pha thai,!'*!
> Vỏ rễ dùng lảm thuốc tốt mỏ hơi chữa hen suyễn, phù voi, ho, bệnh giang mai (y học Án Độ cổ đại) Vỏ rễ khô dùng thay thể thuốc gây nôn, nếu dùng lượng nhỏ có thể trị bệnh kiết lị nhưng dùng nhiều thì gây nôn Vỏ rễ là thuốc bỏ,
thuốc trị co thắt, long đờm, trị giun sán, nhuận tràng, chữa bệnh giang mai Trộn bột vỏ rễ với tiêu đen dùng 2 lần ! ngày cũng dùng chữa bệnh vàng da.!Ì Vỏ rễ còn trị các
bệnh nhiễm trùng đa, ho, cô trướng Bột rễ chữa hen suyễn, viêm phế quản, khó tiêu, ting sy tiet dich da day,
1.2.6.2 Hoat tinh sinh học:
Cây bỏng bông được biết đến với khả năng chữa được nhiều bệnh khác nhau, với đặc tính nỏi trội là có tính độc với vi khuẩn và nắm Ngoài ra nó còn nhiều đặc tính
khác:
>» Chong oxi hoa: La cay Calotropis gigamtea có hoạt tinh chống oxi hóa
Nghiên cứu cho thấy dịch trích từ hỗn hợp alcol nước của lá có hoạt tính phân hủy triệt
Trang 22Nghién ciru thanh phan hod học cao chloroform của rễ cây Bằng Bong (Calotropis giga ntea)
dé DPPH, hoat tinh khir va hoạt tỉnh phân hủy gốc tự do NƠ Dịch trích cho thay hoạt tính phân hủy DPPH tôi đa (85.17 %) ở nông độ 400 gưml, côn đối với gốc tự do NƠ' cho thấy sự phân hủy tối đa (54.55 %) ở nồng độ 100 wưml Khả năng khử của
dịch trích này được phát hiện là tăng lên khi tăng nông độ dịch trích ?Ì
> Chống tiêu chảy: dịch trích (50:50) nước và alcol của những bộ phận khác nhau của cây này được nghiên cứu là có hoạt tính chống tiêu chảy ở chuột Dịch
trích cho thấy sự giảm đáng kề việc đi ngoài và dường như là đừng hẳn khi dùng với liều 200-400 mg/kg trọng lượng cơ thẻ,
> Cam mau: Mi cua cây Calotropis gigantea có hoạt tính đông máu Dịch trích từ mủ cây thủy phân protein ở người: casein, fibrinogen va gây đông máu theo
cách thức sẵn có Dịch trích này thủy phân các tiểu don vị của fibrinogen, tiéu đơn vị
Aa thủy phân đâu tiên sau đó là Bb và tiểu đơn vị g Hoạt tính cằm máu này của mủ cay la do cé enzyme thủy phân protein là Calotropin DỊ, DỊI và Calotropain FI,
FII°),
> Ngừa thai: Dịch trích ethanol và chloroform từ rễ của cây này có hoạt
tính ngừa thai ở chuột Dịch trích nảy cho thấy khả năng ngừa thai 100 % khi dùng ở liễu 100 mg/kg nó cũng cho thấy hiệu quả 100 % ở liều 12,5 mg/kg khi dùng trong
những ngày từ ! đến 5 hoặc I đến 7 sau khi giao phói II,
> Chống viêm, giảm đau và hạ sốt:
¥ Dich trich ethanol cia Calotropis gigantea cho thấy hoạt tính chống viêm chống lại chất carrageenan gây ra phù thủng ở chân chuột bạch ,l°Ì
Dịch trích alcol của hoa cây này có hoạt tính giảm đau khi tien hảnh thí nghiệm lên chuột Liỗng dịch trích ctanol từ hoa giảm cơn đau
đáng kể và giảm sự mở rộng vết thương Dịch trích alcol từ vỏ rễ cũng cho thấy hoạt tính giảm đau khi thí nghiệm trên chuột bạch, cũng làm giảm số
con dau quan va lam chậm sự loét vết thương, °Ï,
Dịch trích nước: cthanol (50:50) từ rễ cây có hoạt tính hạ sết
Hoạt tính này được thí nghiệm bằng việc sử dụng men và vắc-xin thương hản để gây sốt ở chuột bạch Swiss và thỏ,Ì”Ì,
m ẽẽeeằẽ na aD
Trang 23Nhiên cứu thành phân hoá học cao chloroform của rễ cây Bằng Bằng (Calotropis gigantea)
>» Tri ung thư và gây độc tế bào: các chất cardenolide glycoside (dai dién la Calotropin (1), frugoside (2), 4°-O-8-D-glucopyransyfrugoside (3)) trong cay mang
hoạt tính gây độc tế bào đối với vài dòng tế bào ung thư ở người và chuột Theo
nghiên cứu thì chat (1) và (2) trich tir dich ethanol cua re cé tac dụng ức chế hoạt động của đòng tế bào KS562 (gây bệnh bạch cầu mãn tính ở người) và dòng tế bào SGC- 7901 (gây ung thư dạ dày ở người) Dịch trích từ cethyÌ acetate của hoa có khả năng ức
chế ung thư biểu mô cỏ trướng của Ehrlich ở chuột.ÌÌ
1 Chong co giật: dịch trích alcol từ vỏ rễ cây này với liễu dùng nhất định
cho thấy hoạt tính chống co giật, chống lại pentylenetetrazole (PTZ) một chất gây ra
chứng co giật ở chuột Dịch trích này cũng cho thấy hoạt tính làm ngủ ngon do có hoạt tinh an thần l1
> Khang khuẩn:
¥ Dich trich nudéc, methanol, ethanol, petroleum ether cua la cay Calotropis gigantea Linn cé hoat tinh chống lại nắm gây bệnh Candida, cé lập lâm sàng đối với Candida albican, C parapsilosis, C tropicalis va C krusei,Ì°Ì
Dịch trích nước từ lá cây này có hoạt tính chống khuẩn
Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus ceceus, Pseudomonas aeruginosa, Micrococcus luteus, Klebsiella pneumonia Dich trich nudéc từ mu cay nay han ché hoat dong đổi với Staphylococcus aureus, Bacillus ceceus, Escherichia coli va C krurei Ngoai ra dịch trích này còn có hoạt
tinh khang nam gay bénh trén cy nhu Fusarium mangiferae (gay bénh trén
cay xồi),Ì°Ì
Dịch trích methanol, petroleum ether, chloroform, ethyÌ acetate từ vỏ rễ của cây cho thấy hoạt tính chống lại Sarcina lưca, Bacillus megaterium Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Shigella sonnei,
Escherichia col"!
Trang 24Nghién cứu thành phân hoá học cao chloroform cha ré cấy Bông Bong (Calotropis gigantea) > Bảo vệ gan: Vỏ thân cây gồm mủ vả sap Phan sap gom f-amyrin va
dong phân của nó ø vả Ø-calotropeol, hỗn hợp tetracyclic triterpene dạng vết của các
sterol, acid béo, giganteol, hidrocacbon Cạ¡ C;; Phần mủ gồm các cardiac glycoside, calotropin, uscharin, calotoxin uscharidin và gipantine Mủ cây gôm calotropin DI and DII và calotropain FI và FH (có hoạt tính thủy phân protein) Nó là chất đầy hứa hẹn trong việc trị bệnh gan Dịch trích từ thân cay Calotropis gigantea có tác dụng chữa trị nhất định đối với gan bị tôn thương cũng như tế bảo bị suy yếu đo có nhiều nguyên tử oxi trong chúng khi tiền hành thí nghiệm trên chuột Ì, Dịch trích etanol từ hoa của cây cho thây hoạt tính bảo vệ gan khi thí nghiệm lên chuột Paracetamol gây nhiềm
độc gan, cho biết gan bị tổn thương Khi điều trị cho chuột bằng dịch trích ethanol tir
hoa cay Calotropis gigantea sé giam lugng paracetamol lam gan tro lai bình thường Hoạt tính mà dich trích này có được 1a do trong đó có các chất thuộc nhỏm terpenoid và flavonoid,!!,
” Diét cén tring: dich trich methanol petroleum ether va dich trich
chloroform từ vỏ rễ có hiệu quả trong việc xua đuôi côn trùng như ấu trủng và con
trưởng thành của loài Tribolium castaneum,''", Chat Giganticine từ dịch trích methanol của vỏ rễ có hoạt tính tiêu diệt ấu trùng của loài châu chấu sa mạc
§chistocerca gregaria,Ì`°Ì
—>—>ra>—>——————xxẹr ee
Trang 25Nghién cứu thành phan hod học cao chloroform của rỄ cây Bong Bong (Calotropis gigantea)
PHAN 2:NGHIEN CUU
2.1 Giới thiệu chung:
Trong bải khoá luận nảy chúng tôi tiến hành nghiên cứu thành phần hỏa học của rẻ cây bỏng bỏng được thu hái tại Tp Phan Thiết, tỉnh Bình Thuận 06/2011, được
nhận danh bởi Tiến Sĩ Võ Văn Chi (phụ lục })
Sau khi thu hải, rễ cây được rửa sạch, phơi khô và xay nhỏ thành bột Bột rễ cây
bong bỏng được chia làm nhiều phần trích nóng với methanol Toàn bộ dịch trích sau
khi cô quay thu hồi dung môi dưới áp suất kém thu được cao methanol thô Cao thô
methanol được hòa tan với nước sau đó trích lỏng-lỏng với đơn dung môi có độ phân cure ting dan: petroleum ether, chloroform, ethyl acetate, butanol Thu héi dung môi dưới cất áp suất kém thu được cao tương ứng và dịch nước
Sử dụng sắc kí cột silica gel pha thuận, sắc kí điều chế kết hợp với kỹ thuật sắc ký lớp mỏng với nhiều hệ dung môi khác nhau, từ cao chloroform chúng tôi đã cô lập
được 3 hợp chất ký hiệu là: BB2, BB3, BB4
Dựa trên các phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân 'H-NMR, 'ÌC-NMR, HSỌC, HMBC để xác định cấu trúc của 4 hợp chất trên
2.2 Khảo sát cầu trúc hóa học của các hợp chất: 2.2.1 Hợp chất BB2:
Nhận xét chung:
se Hợp chất BB2 thu được có dang bot mau trắng, tan trong methanol, hap thu UV
e Sắc ky ban méng voi hé dung mdi chloroform: methanol (95:5), hieén mau bằng dung dịch H;SO¿ 20% hơ nóng cho vết tròn mảu đỏ có R;= 0.40
% Biên luận cấu trúc:
Pho 'H-NMR (500MHz, methanol _d,) (phu luc 2) của hợp chất BB2 xuất hiện
Trang 26Nghién cứu thành phan hod hoc cao chloroform của rễ cay Bằng Bong ( alotropis gigantea)
Negoai ra con cé tin hiéu céng huéng cilia | proton anome [5,; 4.70 (1H d, J=7.9), H-1"] cing voi tín hiệu của hai nhóm methy! [5, 0.82(3H, s,) H-18]; [Sy 1.20 (3H d, 1=6.2Hz) H-6'|
Pho C-NMR (phu luc 3) két hop véi phd HSQC (phu luc 4) cho thay hop chat BB3 có 29 tín hiệu carbon gôm các tín hiệu của một phân tử đường và tín hiệu
của aglycon có khung cardenolide
e Các tín hiệu cộng hưởng của aglycon bao gồm: 1 carbon oximethylene của vòng lactone C-2l (ðc 75.3), § carbon methylene có tín hiệu cộng hưởng từ (2%5-45 ppm) một carbon olefin C-22 (äc 117.9), 2 carbon carboxyl C-23 (ôc 177.2) và C-19 (5,209.4), 1 carbon olefin hoan tồn trí hoản (ơc 178.2) của vòng lactone, 3 tín hiệu carbon tử cấp, 6 tín hiệu carbon methine Các tin hiệu trẻn lả đặc trưng của khung cardenolide
PhO HMBC (phy luc 5) cho thay proton H-1 cho tuong quan véi 2 carbon oximethine C-2 (8¢ 70.4), C-3 (&¢ 73.1) va carbon carboxy! C-19 (d¢ 209.4)
Các dữ liệu trên cho thấy phần aglycon của hợp chất BB2 có cầu trúc như sau:
Nee a
Trang 27Nghién cứu thành phần hod học cao chloroform của rỄ cây Bằng Bằng (Calotropis gigantea) e Các tín hiệu cộng hướng của phân tử đường bao gồm: | carbon anome C-1" (8c 95.5) một carbon tứ cắp mang oxigene 2 carbon oximethine C-5' (õc 91.8) và C-3' (öc 71.9), 1 carbon methylene C-4' (õc 38.2), I carbon methyl C-6" (ðc 21.2)
Phố HMBC (phụ lục 5) cho thay:
Proton anome H-1* [4.70 (1H, s)] cho twong quan voi carbon oximethine C-3 va carbon tir cap C-5’
Proton oximethine H-3' [3.61 (1H dd, 1=7.8 Hz: 4.0 Hz)| cho tương quan carbon C-2° va C-5’
Proton oximethine H-5S° [1.65 (2H, m)| cho tương quan carbon methylene C-4', carbon C-1', carbon C-4’, carbon C-6'
Proton methy! H-6° [1.2 (3H, m)] cho trong quan véi carbon oximethine C-6' va carbon oximethine C-5’
Các đữ liệu trên cho thấy phần đường của hợp chất BB2 có cấu trúc như sau:
Proton oximethine H-3 [ô;; 3.93 (1H, m)] cho tương quan với carbon anome C-I' (ðc 95.5); ngược lại, proton anome H-]' cũng cho tương quan với carbon C-3
(ô¿ 73.1) Đồng thời proton oximethine H-2 [ô„ 3.84 (1H, m)] cho tương quan với
carbon tử cấp C-2' (õc 91.8) như vậy phần đường sẽ gắn vào phần aglycon tại carbon C-3 va C-2
Neen ee
Trang 28Nghiên cứu thành phan hod hoc cao chloroform cua ré cay Bong Bang (Calotropis gigantea
Hình 1-10: Tương quan HMBC chính của hợp chất BB2
Từ các dữ liệu phơ 'H-NMR, 'ÌC-NMR HMBC của hợp chất BB2 kết hợp so sánh với tài liệu tham khảo,!"”Í, câu trúc của BB2 được đẻ nghị là calotropin
Hình 1-11: Calotropin
Trang 29Nghién cứu thành phan hoa học cao chloroform của rỄ cay Bong Bong (Calotropis gigantea) Bang 1: Số liệu phỏ 'H- NMR '°C-NMR va tuong quan HMBC của BB2
Vị | LoạiC Hop chat BB2 (methanol d
Trang 30Nehién ciru thinh phan hod hgc cao chloroform ciia rễ cấy Bong Bong (Calotropis gigantea)
Trang 31Nghién cứu thành phân hoá học cao chloroform của rễ Cây Bong Bong (Calotropis gigantea)
2.2.2 Hợp chất BB3:
+ Nhân xét chung:
e Hợp chất BB3 thu được dạng bột, màu trắng, tan trong aceton, hap thu UV
s Sắc ký bản mỏng với hệ dung môi chloroform: acetone (95:5), hién mau bằng
dung dịch H;SO, 20% hơ nóng cho vết tròn mảu đỏ, cỏ R¿= 0,45
+ Biên luân cầu trúc:
Phé 'H-NMR (SO00MHz, acetone đ;) (phự iục 6) và phổ 'ÌC-NMR (125 MHz, acetone ds) (phụ lục 7) của hợp chất BB3 cho các tin hiệu tương tự như phơ ÌH và
C-NMR cia hop chat BB2
Pho 'H-NMR (phụ luc 6) cho các mũi cộng hưởng ứng với sự hiện diện của 2 proton methylene [5, 4.84 (1H, dd, J=18.2Hz; 1.3Hz) H-2la|: 4.98 (1H dd, J=18.2Hz; 1.3Hz) H-21b], mot proton olefin [5 5.85 (1H, s) H-22], mét proton methine [5,, 2.82 (1H, dd, J=10.5 Hz; 5.7Hz) H-17]} Ngoài ra còn có tín hiệu cộng hưởng của l proton anome [ð 4.67 (1H, d, J=7.9Hz), H-1'| cùng với tín hiệu của một nhóm methyl [õ„ 1.17 (3H, d, J=6.3Hz) H-6']
Phé “C-NMR (phu luc 7) két hop voi pho HSQC (phụ lục 8) cho thấy hợp chất BB3 có 30 tín hiệu carbon gồm các tín hiệu của một phân tử đường và tín hiệu
của aglycon có khung cardenolide
e Các tín hiệu cộng hưởng của aglycon bao gém: | carbon oximethylene cia
vong lactone C-21 (8¢ 73.3), 8 carbon methylene cé tin hiệu cộng hưởng từ (25-45 ppm), 2 carbon oximethine C-2 (6¢ 72.3) va C-3 (8¢ 78.1), m6t carbon olefin C-22 (5¢ 117.8), 2 carbon carboxy! C-23 (S¢ 176.3), C-19 (8 174.5), va 1 carbon olefin hồn tồn trí hốn C-20 (öc 175.6) cua vong lactone, 3 tin hiéu carbon tir cap, 4 tín hiéu carbon methine Cac tín hiệu trên là đặc trưng của khung cardenolide
Phé HMBC (phu luc 9) cho thay proton H-1 cho trong quan yéi 2 carbon oximethine C-2 (8¢ 30.7), C-3 (8¢ 78.1) va carbon carboxy! C-19 (S¢ 174.5),
eee rere ee
Trang 32Nghiên cửu thành phân hoá hoc cao chloroform cia ré cay Bong Béng (Calotropis gigantea
Các dữ liệu trên cho thấy phần aglycon của hợp chất BB3 có cầu trúc như sau:
e Các tín hiệu cộng hưởng của phân tử đường bao gồm: 1 carbon anome C-I" (äc 109.2) 1 carbon oximethine C-4' (öc 74.0), | carbon tir cp mang oxigene C-2'
(Sc 85.4), 1 carbon methylene C-3’ (8¢ 41.1), 1 carbon carboxyl C-6" (8c 171.6), 1 carbon methy! C-5° va | carbon cua nhém methoxy! (8¢ 52.2)
Phd HMBC (phy luc 9 ) cho thấy:
Proton anome H-1I" [4.94 (1H, d, J=7.9Hz)] cho tương quan véi carbon oximethine C-3° va carbon methylene C-2’
Trang 33Nghién cứu thành phan hoá học cao chloroform của rễ cây Bằng Bằng (Calotropis gigantea)
Các dữ liệu trên cho thấy phần đường của hợp chất BB3 có cấu trúc như sau: HạC
GO 6 | of
Proton oximethine H-3 [8, 3.30 (1H, m)] cho trong quan vm carbon anome C-1’ (S¢ 109.2); ngược lai, proton anome H-1* cing cho twong quan voi carbon C-3 (4¢ 86,1) như vậy phần đường sẽ gắn vào phần aglycon tai carbon C-3
Hình 1-10: Tương quan HMBC chính của hợp chất BB3
Trang 34Nghiên cứu thành phân hoá hoc cao chloroform cia ré cay Bong Béng (Cal is gigantea
Tir cdc dit ligu phé 'H-NMR, "C-NMR , HMBC cua hgp chat BB3 két hợp so sánh với tài liệu tham khao, '""!, cầu tric cia BB3 duge dé nghi 1a:
eee eee ee
Trang 35Aehiên cứu thành phân hoá hgc cao chloroform ciia ré cây Bong Bong (Calotropis gigantea)
Trang 36Nghién cứu thành phan hod học cao chloroform của rỄ cây Bông Bong (Calotropis gigantea)
Trang 37Nghién cửu thành phan hoa hoc cao chloroform cua ré cây Bong Bằng (Calotropis gigantea) > >CH- 1.43 (2H, m) 41.1 40.2 | 4° >CH- 4.44 (1H, m) 74.0 75.8 3 TCH x 1.32 (3H, d J=6.3Hz) 226 21.7 6 | -COO- 171.6 171.1 O-CH; 3.67 (3H, s) 52.2 51.6 2.2.3 Hợp chất BB4: “+ Nhân xét chung: e Hợp chất BB4 thu được dạng bột mảu trắng, tan trong DMSO, hap thu UV
e Sac ky ban mong voi hé dung mdi chloroform: methanol (97:3), hién mau bằng dung dịch H;SO, 20% hơ nóng cho vết tròn mảu đỏ đậm, có R;= 0.50
Biên luận cầu trúc:
Phổ 'H-NMR (500MHz DMSO _đ,) (phụ lục 10) và phố 'ÌC-NMR (125 MHz, DMSO ds) (phu luc 11) cha hgp chat BB4 cho cac tin hiệu tương tự như phỏ 'H vả "C-NMR cia hop chat BB2 va BB3
Phé 'H-NMR (S00MHz, DMSO ds) (phu luc 10) cha hop chat BB4 xuat hién
các tín hiệu cộng hưởng nhu sau: 2 proton methylene [6, 4.87 (1H, dd, J=18.3Hz; 1.3Hz) H-21a;4.98 (1H, dd, J=18.3Hz; 1.3Hz) H-21b], mét proton olefin [5 5.9 (1H, s) H-22], m6t proton methine [5,, 2.72 (1H, dd, J=10.5 Hz; 5.3Hz) H-17], một mũi đơn methyl [õạ 0.7 (3H, s)] Ngoài ra còn có tín hiệu cộng hưởng của | proton anome [5 4.73 (1H, d, J=7.9Hz), H-1'] cùng với tin hiệu của một nhóm methyl [ỗ„ 1.13 (3H d, J=6.3Hz) H-6']
Phé C-NMR (phụ lục /1) kết hợp với phô HSỌQC (phự iụe 12) cho thay hop chất BB4 có 31 tín hiệu carbon gồm các tín hiệu của một phân tử đường và tín hiệu
của aglycon có khung cardenolide
e Các tin hiệu cộng hưởng của aglycon bao gom: | carbon oximethylene của
vòng lactone C-21 (5¢ 73.2) Icarbon olefin C-22 (äc I I6.3) vả | carbon olefin hoản tồn trí hốn C-20 (ð, 176.0) của vòng lactone, 2 carbon oximethine C-2 (ỗc 70.5) và
mmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmemmmmmmmmmmmmmmmmmm
Trang 38Nghiên cứu thành phân hod hoc cao chloroform của rê cây Bằng Bằng (Cai
C-3 (ỗc 69.3), 8 carbon methylene co tin hiệu cộng hưởng từ (25-50 ppm), 2 carbon carboxyl C-23 (õc 173.8), C-19 (õc 208.7), 3 tin hiệu carbon tứ cắp, 4 tin hiệu carbon methine Các tín hiệu trên là đặc trưng của khung cardenolide
Phé HMBC (phu luc /3 ) cho thay proton H-1 cho tuong quan véi 2 carbon
oximethine C-2 (d¢ 69.3), C-3 (&¢ 70.5) va carbon carboxy! C-19 (8c 174.5)
Các dữ liệu trén cho thay phan aglycon cua hop chất BB4 có cấu trúc như sau:
e Các tin hiệu cộng hưởng của phân tử đường bao gồm: I carbon carboxyl C-
§' (ðc 173.8), ! carbon anome C-l' (ôc 93.5), 2 carbon tứ cấp mang oxigene C-2' (ôc 91.3) và C-3' (õc 71.3), l carbon oximethine C-Š" (ôc 66.0), 2 carbon methylene C-4'" (8c 41.6) va C-7° (Sc 31.0), | carbon methyl C-6'(d¢ 20.7)
Ph6 HMBC (phu luc 13 ) cho thay:
Proton anome H-1* [4.73 (1H, d J=7.9Hz)] cho tuong quan véi carbon tit cap
mang oxigene C-Š" va carbon oximethine C-3
Proton methylene H-4’ [1.82 (2H m)| cho tương quan carbon C-5’ va C-6’, Proton oximethine H-5* [3.92 (1H, m)] cho trong quan carbon C-1", C-3’, C-4" vả C-6"
—_——.mmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmm
Trang 39Nghién cứu thành phân hoá học cao chloroform của ré cây Bằng Bong (Calotropis gigantea) Proton nhóm methyl H-6' [1.13 (3H d, 1= 6.3)] cho tương quan với carbon C- 4°va C-S’ Proton methylene H-7° [3.36 (3H, d, J= 15.2)] cho tuong quan voi carbon C- 5'va C-8" Các dữ liệu trên cho thấy phân đường cúa hợp chất BB4 có câu trúc như sau: