Luận văn thạc sĩ Thú y: Tỷ lệ nhiễm và yếu tố nguy cơ liên quan đến bõ có kháng thể kháng Leptospira tại Mộc Hóa, Long An

Kết qua cho thấy, tỷ lệ huyết thanh nhiễm Leptospira theo đàn là 32,67%; và ở cấp độ cá thé là 22,67%.Trong nghiên cứu này, các yếu tố nguy cơ phô biến liên quan đến nhiễm Leptospira gồm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HÒ CHÍ MINH

NGUYEN TAN THÀNH

TY LE NHIEM VA YEU TO NGUY CO LIEN QUAN DEN BO CO KHANG THE KHANG LEPTOSPIRA

TAI MOC HOA, LONG AN

LUAN VAN THAC SI KHOA HOC NONG NGHIEP

Thanh pho H6 Chi Minh - Thang 05/2023

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HÒ CHÍ MINH

NGUYEN TAN THÀNH

TY LE NHIEM VA YEU TO NGUY CO LIEN QUAN DEN BO CO KHANG THE KHANG LEPTOSPIRA

TAI MOC HOA, LONG AN

Chuyén nganh: THU Y

TỶ LỆ NHIEM VA YEU TO NGUY CƠ LIÊN QUAN DEN BO CO KHANG THE KHANG LEPTOSPIRA

TAI MOC HOA, LONG AN

NGUYEN TAN THANH

Hội dong cham luận văn:

1 Chủ tịch: PGS TS NGUYÊN VĂN KHANH

Hội Thú Y Việt Nam

2 Thư ký: TS HOÀNG THANH HẢI

Trường Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh

3 Phản biện 1: TS.NGUYÊN VĂN PHÁT

Hội Chăn Nuôi Thú Y

4 Phản biện2: TS NGUYEN KIÊN CƯỜNG

Trường Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh

5 Ủy viên: TS TRÀN VĂN CHÍNH

Trường DH Công nghệ TP Hồ Chí Minh

1

LÝ LỊCH CÁ NHÂN

Tôi tên là Nguyễn Tan Thành, sinh ngày 08 tháng 03 năm 1981 tại huyện

Tân Thạnh, Tỉnh Long An.

Tốt nghiệp phé thông trung học tại trường Trung học phô thông Tân Thanh,huyện Tân Thạnh, Tỉnh Long An.

Tốt nghiệp Đại học ngành Thú Y, hệ vừa học vừa làm tại Đại học NôngLâm, Thủ Đức, thành phố Hồ Chí Minh

Tháng 2 năm 2020, tôi học Cao học ngành Thú y tại trường Đại học NôngLâm, Thủ Đức, thành phố Hồ Chí Minh

Địa chỉ liên lạc là Khu Phố 2, Thi Tran Bình Phong Thạnh, huyện Mộc Hóa,

Tỉnh Long An.

Điện thoại: 0977880801

Email: nguyenthanhtyy@gmail.com

1H

LỜI CAM ĐOAN

Tôi cam đoan đây là công trình nghiên cứu của tôi.

Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được ai

công bé trong bat kỳ công trình nào

Tác giả

Nguyễn Tan Thành

1V

LỜI CẢM ƠN

Trân trọng cảm ơn Ban Giám Hiệu, Ban chủ nhiệm Khoa Chăn nuôi Thú y,Phòng Dao tạo Sau đại hoc, Trường Đại học Nông Lâm Thành phó Hồ Chí Minh;Chi cục Chăn nuôi và Thú y tỉnh Tiền Giang, quý Thầy, Cô Khoa Chăn Nuôi Thú Y

đã tạo mọi điều kiện để tôi cho được tham gia khóa học và tận tình giảng dạy

truyền đạt cho tôi nhiều kiến thức quí báu trong thời gian học tập tại Trường

Chân thành biết ơn sâu sắc đến TS Đường Chi Mai, đã tận tình giúp đỡ,hướng dẫn tôi trong suốt thời gian thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn

Kính tri ân đến Cha, Mẹ đã luôn động viên tinh thần cũng như vật chất décon cô gắng nâng cao trình độ kiến thức bậc cao học khi tham gia vào lớp Cao họcThú y khóa 2020, Khoa Chăn Nuôi Thú Y, Trường Đại Học Nông Lâm TPHCM.

Ân tình gửi lời yêu thương đến Vợ và Con, cảm ơn Em và Con đã đồng hànhchia sẻ những khó khăn trong cuộc sống, là động lực giúp Anh/Ba trong khoảngthời gian tha phương cầu học và đã hoàn thành xuất sắc nhiệm vụ học tập

Trân trọng cảm tạ chị Nguyễn Thị Đào, phòng xét nghiệm của Chi cục Chănnuôi và Thú y tỉnh Tiền Giang đã nhiệt tình hé trợ và giúp đỡ tôi trong quá trình

thực hiện các xét nghiệm mâu của đê tài.

Nguyễn Tan Thành

Lepfospira được cung cấp bởi Viện Pasteur Thành phố Hồ Chí Minh Mẫu huyết

thanh được xác định là dương tính khi có hiệu giá >1:100 Kết qua cho thấy, tỷ lệ

huyết thanh nhiễm Leptospira theo đàn là 32,67%; và ở cấp độ cá thé là 22,67%.Trong nghiên cứu này, các yếu tố nguy cơ phô biến liên quan đến nhiễm Leptospira

gồm có sự hiện diện của chuột, sử dụng nguồn nước mat cho bo uống, hình thức

chăn nuôi Có tất cả l7 serovar Leptospira được phát hiện trên bò, trong đó 3serovar phổ biến là Icterohaemorhagiae (48,89%), Panama (55,56%), Hustbiride

(46,67%) Đặc biệt có trường hợp phát hiện một con bò nhiễm 6 serovar (0,33%);

trong khi đó, phần lớn bò nhiễm 1 và 2 serovar lần lượt là 11,67% và 4,33% Kếtquả nghiên cứu này cho thấy, bò nhiễm Leptospira spp ở mức độ cao nên có nguy

cơ nhất định về sự lây nhiễm Leptospira từ bò sang người tiếp xúc với bò mắc bệnh

VI

The purpose of this study to evaluate the seroprevalence of Leptospira and some risk factors for Leptospira infection in cattle in Moc Hoa, Long An A cross- sectional study involving 150 cattle households was conducted Serum samples from 300 animals were tested by microscopic agglutination test (MAT) using a panel of 24 Leptospira serovars kit provided by Ho Chi Minh City Pasteur Institute Seropositivity was determined using a cut-off titer of =1:100 Results showed that seroprevalence of Leptospira at herd-level was 32.67%; and at individual-level was

22.67% The most common risk factors associated with Leptospira infection in this

study include the presence of rats, raising patterns and dringking water sources serving each herd There were totally 17 serovars which were detected in cattle, in which, the three most popular serovars were Icterohaemorhagiae (48,89%), Panama (55,56%), Hustbiride (46,67%) Only one animal infected with six Leptospira

serovars (0.33%) was found; meanwhile, the majority of animals infected with one

and two serovars were 11.67% and 4.33%, respectively These results indicated a very high exposure of cattle to Leptospira spp which consequently poses a definite risk for people working with cattle acquiring this zoonotic infection.

Vil

MỤC LỤC

: TRANG

TYKAING CEA TỶ khen ngggH.nh g1 1101G1103030611014305/30141531,30NG80083164300081008g00018 i

EYTIEN CG naueieeneensonndarrtrddtotoroiptogirigtottraiastiardiisitigstisirtiie iii

PS, ae iv

| 0) OF.) 0), Ô v

"0v ~ ,Ô vi

TIEE FT tuauaresesenbitesotrbitoxogergrtooidvitaroestegridinsteiifovogiioogoidses viii

DANH SÁCH CAC CHỮ VIET TẮTT 5-2 seveseeereerseeseersersee XDANH SÁCH CÁC BẢNG - 5< 5< 5< ©s<+eeEt#EteEteEkerkerkerkerkerkerserserserssrsee xiDANH SÁCH CÁC HÌNH - 2< s2 se+sstvsEvsecvsecrserrserrserrssrvsee xii

NI TA cece acces et pent 1Chương 1 TONG QUAIN -2- 22-2 ©S<©S<£©se©2s£EseEseerseEserrserserrsrrserssrrseree 3OCCT ea 3

1.2 Can ber HOC ễễễ.^ 3

1.3 Dac diGm nui a3 5L.A Stte dé khang once ecceccceccssccssesssecsseessecsseesseesucessecsscesscesscesscssecessceseceseesseceseceneceneesses 61.5 Cau trúc kháng nguy60 cccccccccccsessesssessesssessesssessessessuessessusssessessseesessesseesseesees 61.6 Độc tỐ 2 +21 21 1221221212121121121221211111121121112111111112111211121112111211 2 xe §1.7 Truyền nhiễm học 2: 22©222S2+222EE+2E2EE2EE22E122122112212712211271121122121.2 xe 7

1.8 Triệu.elứng lam sảng trên DÒ:scsscssisesssiioriiicdedooenitii01101105E00156861160564 450001850408 13

OO mẽ TỔ 13

vill

1.8.2 Thể mãn tính 222 SE S323 SS5355 5355155555555 151535515 155151115 15511151151 15151151 ece 13

1.9 Chẩn đoán - 2222222222221 2 Hee 14

1.9.1 Chân đoán phân biệt dịch té học, phân biệt dau hiệu lâm sàng 14

1.9.2 Chân đoán trong phòng thí nghiệm 2 2222222E2E£EE22E22EEzzEzzzzzzez 14LT0 Phòng và điều trị bệnh, Sen 0 H27 00011 220051 0-7 ve 161.11 Một số nghiên cứu ở trong và ngoài nước ecseecseecseeesecsesstecsteeseeseeestesneeens 16

Chương 2 NOI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 202.1 Thời gian và địa điểm -2- 2 22522 2S2E22E221232121232121 2121212121 2 xe 20

22: NỘI dufioiPH1EH GU secsseessnesiene neo tosstSivS9L839088337.09988833/1u998g3SS58/010./00S88000.003:g08 20

2.3 Phương pháp nghiên CỨU + + +2 ++*+*SxE*£ TT HT HT ri 202.3.1 Nội dung 1: Điều tra tình hình chăn nuôi bò tại huyện Mộc Hóa, Long

At eee Cre erent eet ee ee ee 20

2.3.2 Nội dung 2: Khao sát tỷ lệ bò có kháng thé khang Leptospira và xác

định các yếu tố nguy cơ đối với hộ có bò dương tính với Leptospira 21

2.3.2.1 Phương pháp lấy mẫu 22-22 ©2S+E++EEESEEEEEEEEEEEEEEErrrerrrerrrrrrrerre ye)2.3.2.2 Phuong phap xét nghiém ngung két nhanh trén phién kinh (MAT:

microscopic agglutination test) sccccnccorseraseanservsenseoxeastercavenzenannns 8684415 85 22

2323, Chr UNO EOI oeeesenesnatibebriitidinbigiBI3EEEDSEISSS13931330230SHS129-.B.S2DDGULE.012003090/2S8 25

2.4 Phương pháp xử lý số liệu -¿- 2: 22©22+2S22E22EE2EEE2EEE2E2E122E2EE2EEerErrrrrev 25Chương TT QUÁ THÁO LIÊN cendaaaỹaỷaaaaediiddnodriiiuaadinngddiksigaasgae 273.1 Tinh hình chăn nuôi bò tai huyện Mộc Hóa, Long An - - - DT3.2 Tỷ lệ hộ có bò đương tính với Leptospira theo vùng va các yêu tố khảo sat 293.3 Hiệu giá kháng thé của bò đương tính với Ƒ.€?fOspia -+ 2 52 36KET LUẬN VÀ DE NGHỊ, -©22©7222222222222221271211221221211221 21211 1e re 39TÁTEIEU( TH HN FT aaueaeieiaaaniiadonuaaiaosauntitrioiaigtititigtdiStrgtlgiESG0G0E 41

I3iipp ng 52

1X

DANH SÁCH CÁC CHỮ VIET TAT

PTNT: Phát triển nông thôn

PCR: Polymerase Chain Reaction

ELISA: Enzyme-linked Immunosorbent assay

MAT: Microscopic Agglutination Test.

KN: kháng nguyên được thăm đò trong huyết thanh định lượng

DANH SÁCH CAC BANG

Bảng 1.1 Nhóm huyết thanh và một số serovar của L i/đrrogaws - 4

Bảng 1.2 Tính mẫn cảm của các loài ký chủ với các serovar của Leptospira 9

Bảng 1.3 Đặc điểm chan đoán phân biệt bệnh do Leptospira với các bệnh KH 6 bhenarsennrbssrtidrbinitrtglidEgEnS101508Đ0018559913108380/01H55GI1SETSMGSESE.G23003H010S7198905-8H83188-.01DĐ01gE8 14 Bang 2.1 Các serovars trong bộ kháng nguyên của viện Pasteur - TP.HCM 23

Bang 2.2 Phân bố các serovar Leptospira và mẫu huyết thanh - 24

Bang 2.3 Phân bố kháng nguyên và huyết thanh trong kiểm tra định lượng 25

Bang 3.1 Tình hình chăn nuôi bò tai huyện Mộc Hóa, Long An 28

Bảng 3.2 Tỷ lệ hộ có bò dương tính với Leptospira theo vùng và các yếu tố r1 ố.ố ` 30

Bang 3.3 Phân tích đa biến các yếu tố nguy cơ liên quan đến hộ có bò bệnh (0 ECU SIRE ei tet la ca cat 31 Bảng 3.4 Tan số xuất hiện các serovar ở bò khảo SAt c.ccccecceccseseseeseseseeseeeeeeees 33 Bang 3.5 Số lượng serovar Leptospira nhiễm trên 1 cá thé bò -5- 34 Bang 3.6 Tần suất xuất hiện các serovar Leptospira nhiễm ghép trên cùng cá _ / 0 0 00 0 00 00 070 7000 35 Bang 3.7 Kết quả về hiệu giá kháng thể của bò đương tính với Leptospira 36 Bảng 3.8 Mối liên quan giữa số serovar và hiệu giá kháng thé Lepfospira với

dấu hiệu lâm sàng trên bò bị nhiễm 22 22 2222222z2E2z22z+2 38

XI

Moctezuma, 2010) Ở đồng bằng sông Cửu Long, Việt Nam, Hoàng Kim Loan và ctv

(2015) cũng ghi nhận rằng chuột là nguồn tàng trữ Leptospira với tỷ lệ nhiễm cao nhất

ở chuột nâu (Rattus norvegicus) là 33,0%, chuột Bandicota indica (26,5%) và chuộtnhà châu Á (Rattus tanezumi) là 24,6%; đây là nguồn truyền lây bệnh cho chó, con

người và các loài động vật khác (Sykes và ctv, 201 1) Ở thú nhiễm, Lepiospira thườngsong trong ống thận và được bai thải qua nước tiểu vào môi trường trong thời gian

khoảng 40 tuần ké từ sau nhiễm (Adler và Moctezuma, 2010) Mặc dù loài gặm nhamđược coi là nguồn tàng trữ chính, các động vật khác cũng có thé là nguồn tàng trữ, góp

phan vào việc phổ biến mầm bệnh này Trâu bò là vật chủ thường xuyên của serovarHardjo và Sejroe, với những biểu hiện nhiễm trùng cận lâm sang và dai dang ở đường

sinh sản Khác với các bệnh truyền nhiễm nguy hiểm khác, bệnh Leptospirosis không

bùng phát thành những trận dịch lớn, nhưng bệnh này lại gây tốn thất kinh tế đáng ké

cho ngành chăn nuôi và còn ảnh hưởng đến sức khỏe cộng đồng (Epstein, 1995;Trevejo, 1998) Những nghiên cứu trước đây đã ghi nhận rằng, bệnh Leptospirosis gây

thiệt hại về kinh tế do chỉ phí công chăm sóc, thuốc thú y, bò bị vô sinh, sây thai, giảmsản lượng sữa kém và thú bị chết (Lloyd-Smith và ctv, 2007; WHO, 2011)

Ở Việt Nam, Leptospirosis là bệnh thuộc Danh mục bệnh động vật trên cạnphải công bố dịch và Danh mục bệnh truyền lây giữa động vật và người với đặc điểm

của bệnh là sốt, vàng da, vàng niêm mạc, nước tiểu có máu; viêm gan, thận; rỗi loantiêu hóa; động vật mang thai có thé bị say thai Hoàng Mạnh Lâm (2002) đã ghi nhận

ty lệ nhiễm Leprospira trên bò là 34,24% tại tinh Đắk Lắk và Ly Thị Liên Khai (2012)

cũng ghi nhận tỷ lệ nhiễm Lep/ospira trên bò sữa là 22,61% tại các trại chăn nuôiquanh khu vực của công ty cổ phần thủy sản bò sữa Sông Hậu Tuy nhiên, nghiên cứu

tỷ lệ nhiễm Lepfospira trên bò chưa được thực hiện tại tinh Long An nói chung vàhuyện Mộc Hóa nói riêng Do đó, đề tài được thực hiện nhằm mục đích đánh giá tỷ lệnhiễm Leptospira và các yếu tố nguy cơ liên quan đến bò có kháng thé kháng

Leptospira tại Mộc Hóa, Long An.

Chương 1

TỎNG QUAN

1.1 Giới thiệu về Leptospira

Bệnh xoắn khuẩn (Leptospirosis) là bệnh truyền lây giữa động vật và người

Đây là bệnh truyền nhiễm ở gia súc do nhiễm xoắn khuẩn gây bệnh thuộc chỉ

Leptospira Theo Mohammed và ctv (2011), con người có thé bị bệnh leptospirosis từcác huyết thanh gây bệnh ở động vật thông qua sự xâm nhập của sinh vật vào dòng

máu qua vết cắt, trầy xước da hoặc màng nhay và các dấu hiệu bệnh ly từ nhiễm trùng

không có triệu chứng đến bệnh động vật có khả năng gây tử vong

Bảng 1.1 Nhóm huyết thanh và một số serovar của L interrogans

STT Nhóm huyết thanh Serovar (S)

1 lcterohaemorrhagiae icterohaemorrhagiae, copnhageni, lai, zimbabwe

2 Hebdomadis hebdomadis, jules, kremastos

3 Autumnalis autumnalis, fortbragg, bim, weerasinghe

1] Sejroe sejroe, saxkoebing, hardjo

12 Panama panama, mangus

Dưới kính hién vi điện tử, Lepfospira có hình ống, xoắn tròn xung quanh một

trục, đọc theo chiều đài thân và uốn cong thành móc (Hình 1.1) Bộ phận di động của

vi khuẩn gồm một trục ở giữa và thân xoắn như lò xo quanh trục Ngoài cùng có một

vỏ mềm co giãn được, chứa nhiều kháng nguyên, tiếp theo là màng bao bọc tế bào chất

bao gồm 3-5 lớp, ở giữa là nhân không có màng ngăn cách với nguyên sinh chất đảm

nhận chức năng di truyền Do có cấu trúc đặc biệt nên Lepfospira vận động rất uyênchuyền và có khả năng co giãn dễ dàng, chúng có thể chui qua da, niêm mạc của giasúc hoặc của người khi ngâm nước hoặc có vết trầy xước Khi cho qua lọc Seitz vớikích thước 16 lọc 0,1-0,45 um, hầu hết các vi khuẩn đều bị giữ lại nhưng chỉ có

Leptospira có thé chui qua được dé dang Các Leptospira chỉ được quan sát bằng kínhhiển vi nền đen Để nhuộm Leptospira phải dùng các phương pháp nhuộm đặc biệtnhư phương pháp nhuộm thấm bac Fontana — Tribondeau (Gunasekara và ctv, 2017)

Dựa trên cơ sở khả năng lây nhiễm của động vật thí nghiệm, Leptospira đượcphân loại thành các loài L interrogans và L biflexa bao gồm các nhóm gây bệnh và

không gây bệnh (Kmety và ctv, 1993) Dựa trên sự trình diện của các epitope bề mặt

của kháng nguyên lipopolysaccharide (LPS), Leptospira spp được chia thành một số

loài và phân loài liên quan đến vật chủ tự nhiên, được gọi là nhóm huyết thanh và

serovars Leptospira gây bệnh có 21 loài, 25 nhóm huyết thanh và hon 300 serovars đã

được tìm thấy (Picardeau, 2013; Thibeaux và ctv, 2018) Trong đó, các nhóm huyết

thanh và serovars L interrogans phố biến được trình bay ở Bảng 1.1

1.3 Đặc điểm nuôi cấy

Điều kiện nuôi cấy tối ưu dé Leptospira sinh trưởng là hiếu khí bắt buộc, nhiệt

độ khoảng 28-30°C, pH 6,8-7,4 (Bharti và ctv, 2003); do vậy khó phát hiện bằngphương pháp nuôi cấy thông thường ở phòng thí nghiệm Leprospira có thể sống được

trong môi trường âm ướt (đất, bùn, đầm lầy, suối và sông), trong các cơ quan và môsông hoặc động vật chết hoặc trong sữa pha loãng (Adler và Moctezuma, 2010).Leptospira có thé phát triển trong môi trường Ellinghausen-McCullough-Johnson-Harris (EMJH), nhưng sự phát triển của Leptospira rat chậm, có đôi khi kéo dài đến 3

tháng Ở nhiệt độ 28-30°C có thé nhan thay được su phat triển của các chủng gây bệnh

sau 4-7 ngày nuôi cấy, còn sự phát triển của các chủng hoại sinh chỉ sau 2-3 ngày ở

nhiệt độ 11-13°C Do đó có thé dựa vào kha năng phát triển ở 13°C dé phan biét cac

loai Leptospira hoai sinh hay loai Leptospira gay bénh (Levett, 2001).

Trong quá trình nuôi cay Leptospira, dé tránh sự vay nhiễm của các vi khuẩn

trong giai đoạn đầu nuôi cấy, đặc biệt các mẫu có nguồn gốc từ động vật bệnh có biéu

hiện triệu chứng lâm sàng hoặc từ môi trường, cần bổ sung thêm khang sinh fluorouracil vào môi trường nuôi cay, làm hạn chế sự phát triển của các vi khuân vay

5-nhiễm khác nhưng không làm giảm sự tăng trưởng của Leptospira (Levett, 2001;

Adler và Moctezuma, 2010) Trong cùng một điều kiện môi trường nuôi cấy, nhữngloài hoại sinh sẽ phát triển nhanh hơn các loài gây bệnh do chúng thường sống trong

môi trường nước đọng hay hòa lẫn trong đất âm cho nên khi nuôi cấy phải thường

xuyên kiểm tra, ít nhất mỗi tuần 1 lần dưới kính hiển vi nền đen để có được kết quả

chính xác (Ganoza và ctv, 2006).

1.4 Sức đề kháng

Sự tồn tại của Leptospira gây bệnh trong môi trường phụ thuộc vào nhiều yếu

tố như nhiệt độ hay pH môi trường Ở điều kiện thích hợp, Leptospira có thé tồn tại ở

ngoài môi trường vài tháng hoặc vai năm Lepfospira có sức đề kháng yếu, nhạy cảmvới nhiệt độ, Leptospira bị tiêu diệt ở nhiệt độ 50°C trong 10 phút, 60°C trong 5 phút.

Các chat sát trùng thông thường có thê diệt được Leptospira nhanh chóng

Trong điều kiện phòng thí nghiệm, Leptospira trong môi trường nước ởpH=7,2-8,0 có thể duy trì được trong nhiều tháng Trong nước thải cống rãnhLeptospira có thê sông được trong vài tuần lễ Ở trong đất có tính acid (pH= 6,2)

Lepfospira serovar Australis có thể sống sau 7 tuần và đất ngập nước mưa sông được ít

nhất 3 tuần Trong đất 4m ướt, Leptospira có thể tồn tại 180 ngày và nhiều tháng trong

nước mặt và khi đất bị ô nhiễm nước tiêu từ chuột nhiễm Leprospira, Leptospira sống

được khoảng 2 tuần (Levett, 2001)

1.5 Cau trúc kháng nguyên

Leptospira có hai loại kháng nguyên bao gồm (1) kháng nguyên P là kháng

nguyên có bản chất là protein không chịu nhiệt, kháng nguyên này giữ vai trò quan

trọng trong phản ứng vi ngưng kết (MAT) Hầu hết các kháng nguyên này nằm ở lớp

vỏ và một số có mang các vị trí quyết định kháng nguyên (epitope), nhờ đó có thé xác

định được serovar và serogroup Leptospira Trong khi đó, kháng nguyên S là kháng

nguyên thân, chịu được nhiệt, cau tạo bởi lipopolysaccharide, có tính đặc trưng choserogroup với các vị trí quyết định kháng nguyên đặc hiệu của serovar Như trên đã đề

cập, Leptospira gây bệnh có 21 loài, 25 nhóm huyết thanh và hơn 300 serovar đã được

tìm thấy (Picardeau, 2013; Thibeaux và ctv, 2018) Mỗi serovar có khuynh hướng kếthợp với vật chủ chuyên biệt, nhưng một số serovar có thê hiện diện ở nhiều vật chủ vàmột vật chủ có thé chứa nhiều serovar, do đó ở những môi trường sinh thái khác nhauthi sự tồn tại của các serovar cũng khác nhau (trích dan Nguyễn Quang Thông, 2004)

1.6 Độc tố

Leptospira tiết ra hemolysine phá hủy hồng cầu, độc tố này góp phần quyết

định triệu chứng bệnh hoàng dan, xuất huyết, suy thận ở thú bệnh (Trần Thanh Phong,

1996) Ở gia súc non, khả năng ngăn cản tác động hemolysine thấp hơn gia súc trưởngthành nên thường có biểu hiện lâm sàng sốt, khó thở, hoàng dan và có thé chết Ở gia

súc mang thai, hemolysine có thé gây chết thai, gây say thai Ngoài ra, Leptospira còn

tiết ra enzyme hyaluronidase giúp chúng xâm nhập vào các mô của cơ thé ký chủ dễ

dàng (Nguyễn Thi Dao, 2006)

1.7 Truyền nhiễm học

1.7.1 Loài mắc bệnh

Trong tự nhiên Leptospira gây bệnh chủ yếu cho bò, chó, ngựa, cừu, dé, heo,

mèo và các loài hoang đã khác như báo, chồn, khi, Leptospira có thé gây nhiễm chongười do lây nhiễm từ sức vật (Mayer-Scholl và ctv, 2013) (Hình 1.2) Tuy nhiên, mức

độ biểu hiện bệnh có thể khác nhau giữa các loài động vật và chuột là nguồn chứaserovar Icterohaemorrhagiae trong khi đó chó 1a 6 chứa serovar Canicola (Klaasen va

ctv, 2003; Miraglia va ctv, 2012).

Thời gian mang khuân va mức độ bai thai Lepfospira qua nước tiểu thay đồi tùytheo loài mang Leptospira và serovar Leptospira, có thé từ vài tháng đến 1 năm hoặcnhiều hơn như chó khi bị nhiễm bệnh serovar Canicola có thé thải vi khuẩn qua nướctiểu trong nhiều tháng (Paul và ctv, 2009)

—> , —— Leptospira in urine

Human a saRisk factors: infection Rodent

Contact with carriers

(wild and domestic animals)

Hình 1.2 So đồ lây truyền Leptospira

(https://www.researchgate.net/publication/282594539 Chapter 107 Leptospira and _

Leptospirosis/link/607d9b 1 £8ea90924 1 e10382b/download)

Động vật hoang da va loài gam nham thường mắc bệnh ở thé ấn tính hay mangtrùng Đặc biệt, động vật máu lạnh (ếch, nhái, rắn, rùa, cá, ), côn trùng, tiết túc cũng

có thê nhiễm mầm bệnh từ môi trường (Trần Thanh Phong, 1996) Đây là bệnh truyềnlây có tinh chất nguồn dịch thiên nhiên Loài gặm nhấm được coi là nguồn bệnh quantrọng nhất đối với bệnh leptospirosis (Bharti và ctv, 2003; Vinetz va ctv, 1996)

Gia súc và người có thể nhiễm bất kỳ một serovar gây bệnh, chính vì vậy

Leptospira có thé dé dang lây truyền từ gia súc này sang gia súc khác và mức độ bệnh

phụ thuộc vào nhiều yếu tố khác nhau như cường độ nhiễm, ty lệ nhiễm và sức đềkháng của con vật Thêm vào đó, tùy mỗi loài thú sẽ có tính mẫn cảm với các serovar

của Leptospira khác nhau (Bảng 1.2) Mỗi vùng hay mỗi quốc gia khác nhau có một

số serovar Leptospira gây bệnh khác nhau, chang hạn chó thường mang Canicola,

chuột mang Icterohaemorrhagiae và Copenhageni, heo thường mang Pomona,

Tarassovi và có thể truyền lây các serovar lẫn nhau trong đàn (Bharti và ctv, 2003).Bảng 1.2 Tính man cảm của các loài ký chủ với các serovar của Leptospira

chủ yêu ở tiểu quản thận, bề thận, ống dẫn tiểu, bàng quang, nước tiểu, thai bị sây và

màng thai (Phạm Sỹ Lăng, 2006) Đặc biệt, Leptospira có thé có trong tinh dịch của

đực giống bi vay nhiễm từ nước tiểu, thai bi say, thức ăn và nước uống bị vay nhiễm

mam bệnh Heo mang trùng có thé trên 1 năm và bài trùng trong 150 ngày hoặc hon

(Trần Thanh Phong, 1996) Nguồn bệnh chủ yếu là chuột mang trùng: gia súc mắc

bệnh; nguồn nước đọng, đất bị nhiễm nước tiểu của chuột và gia suc mac bénh

1.7.3 Đường truyền lây

Lây lan trực tiếp: Qua đường tiêu hóa, qua da, niêm mạc bị tôn thương; niêmmạc miệng, mắt Bệnh có thé lây lan trực tiếp từ thú mẹ sang con, từ thú bệnh sang thú

khỏe (do nuôi nhốt chung, chăn thả cùng đồng cỏ) và lây qua tinh dịch (do giao phối

trực tiếp hay do thu tinh nhân tạo) Thú có thé nhiễm bệnh do tiếp xúc nước tiêu củachuột bị nhiễm Leptospira (Trần Thanh Phong, 1996)

Lay lan gián tiếp: Qua vật chủ trung gian như côn trùng, ve, mong, rudi, muỗi,dia đốt gia súc mang bệnh và truyền cho gia súc khỏe; do các chất thải của thú nhiễm

bệnh bài tiết ra Nước tiểu là nguồn lây lan rộng rãi, nước tiêu hòa vào dong nước ở

các vùng lầy, khe hở nền chuồng, cây cỏ, bãi chăn thả, lội nước thú tiếp xúc vớinguồn nước nhiễm đều có thé mắc bệnh

1.7.4 Cách sinh bệnh

Leptospira xâm nhập trực tiếp vào cơ thé qua vết cắt hoặc vét trầy xước trên da

hoặc qua da còn nguyên vẹn khi ngâm nhiều giờ trong nước hoặc qua niêm mạc mắt,

mũi, hong hay bộ phận sinh dục (Levett, 2001) Bệnh sẽ khởi phát từ 1 đến 4 tuần saukhi tiếp xúc và có thé kéo dài nhiều tháng Mức độ biểu hiện lâm sang của bệnh phụthuộc vào loại serovar Leptospira nhiễm cũng như tình trạng sức khỏe, miễn dịch và

độ tuổi của vật nhiễm bệnh (Plank và Dean, 2000)

Leptospira xâm nhập vào gia súc khỏe thông qua đường giao phối; nếu con đực(hoặc cái) nhiễm sẽ truyền trực tiếp mầm bệnh qua giao phối Gia súc mẹ bị nhiễmLeptospira sẽ truyền cho con qua nhau thai, qua sữa đầu làm cho con sơ sinh mắc bệnh(Nguyễn Thị Ngân, 2000) Có rất nhiều loài động vật có vú là loài mang Leptospira và

bài thải mầm bệnh liên tục ra môi trường bên ngoài thông qua nước tiểu trong nhiều

tháng hoặc nhiều năm thậm chí cả đời Con người là vật chủ ngẫu nhiên củaLeptospira spp và khu tra ở ống thận của con người, có thé thải Lepfospira ra môitrường qua nước tiểu trong nhiều tuần hay nhiều tháng (Albert và ctv, 2009) Động vậthoặc người bị nhiễm có thể do tiếp xúc trực tiếp với nguồn bệnh như mô động vật,chat bài tiết cơ thé (đặc biệt là nước tiêu) hay tiếp xúc gián tiếp như đất hoặc nước bị 6

10

nhiễm nước tiêu của động vật mang Leptospira (Musso và Scola, 2013) Bên cạnh đó,

chuột là loài gặm nham thường nhiễm các serovar Icterohaemorrhagiae và Ballum; bò

sữa thường nhiễm serovar Hardjo, Pomona và Gryppotyphosa; heo có thé mang mambệnh Pomona, Tarassovi, hoặc Bratislava; cừu có thể chứa Hardjo và Pomona và chó

thường nhiễm Canicola (Bolin, 2000)

Nhiễm trùng Leptospira có thể xảy ra trên người thông qua mức độ tiếp xúcnghề nghiệp, các khu giải trí hay những yếu tố phơi nhiễm, trong đó nghè nghiệp làyếu tô nguy cơ đáng ké cho con người Vi dụ như những nghề tiếp xúc trực tiếp với

động vật nhiễm bệnh: nông dân, bác sĩ thú y, công nhân lò mồ hay tiếp xúc gián tiếp là

những công nhân ống rãnh, thợ mỏ hay người sống ở những khu vực có tình trạng vệ

sinh kém có nguy cơ nhiễm Leptospira hơn (Levett, 2001) Bên cạnh đó, nhưng nguy

cơ nhiễm cũng có thé xảy ra ở các khu giải trí ngoài trời như các môn thé thao dưới

nước: bơi lội, chèo thuyền, câu cá đặc biệt là các vùng nhiệt đới có bệnh

Leptospirosis đang lưu hành (Levett, 2001; Lau và ctv, 2010).

Sau khi xâm nhập vào cơ thé, Leptospira vào máu nhân lên mạnh mẽ gây bạihuyết, gây sốt đồng thời kích thích sinh kháng thé, sau đó chúng đến định vị ở những

cơ quan thích hợp cho sự tồn tại như gan, thận, dịch não tủy Chính sự định vị ở các cơquan này giải thích cho những biểu hiện bệnh học khác nhau Trong giai đoạn bạihuyết, Leptospira có thê đến những co quan khác như cơ quan sinh dục (gây xáo trộnsinh sản), hệ thần kinh trung ương (gây viêm mang não) Đặc biệt, L ratislava thườngđịnh vị trong ống dẫn trứng, tử cung của heo nái không mang thai và trong đường sinhdục của heo nọc (Ellis, 2006) Ở gan, nó có thể gây viêm gan, phá hủy chức năng gan

gây thiểu năng gan (lượng đường huyết giảm, bilirubin huyết tăng, hoàng đản) Ở thận,cũng có biểu hiện tương tự viêm thận, thiểu năng thận (urê huyết, albumine niệu), có

thé dẫn đến vô niệu

Ngoài ra, trong quá trình di chuyển trong máu Leptospira còn sinh độc tố

(hemolysin) phá hủy hồng cầu, phá hủy nội mạc mao mạch gây vỡ hoặc tắc nghẽnmao mạch, hậu quả là gây hoại tử, xuất huyết ở niêm mạc Sau khi khỏi bệnh, thú cómiễn dịch nhưng chỉ với loài Leptospira trước đó bị nhiễm

11

1.7.5 Đáp ứng miễn dịch chống Leptospira

Ở thú nhiễm, các kháng thé kháng Leptospira xuất hiện trong máu vào khoảng

5-10 ngày và đạt mức tối đa sau khoảng 3 tuần Hàm lượng kháng thé thay đổi đáng kể(từ 1:800 đến 1:100.000 trong MAT) và chúng có thé được duy trì tới 3 tuần, sau đó

giảm dần Nồng độ thấp có thể được tìm thấy trong nhiều năm ở nhiều loài động vật

Về diễn biến các loại kháng thể ở thú nhiễm, IgM sẽ gia tăng trước vào khoảng hơn 1

tuần ké từ lúc nhiễm bệnh, sau đó giảm dan, kháng thé này không đặc hiệu gây ngưngkết với nhiều loại serovar Sau đó, kháng thể IgG sẽ xuất hiện chậm và tăng từ từ đến

khi ngang bằng với IgM sau khoảng 2 — 3 tháng, kháng thé này có tính đặc hiệu caođối với từng serovar gây bệnh Tuy nhiên, do Leptospira có khuynh hướng thích khu

trú ở hệ thống ống lượn của thận, dịch não tủy, thủy tinh dich của mat và trong lòng

ống cơ quan sinh dục (như tử cung), cho nên sự tác động của kháng thé rất hạn chế ở

những nơi này, điều này giải thích sự ton tại dai dang của mam bệnh ở các động vật bị

nhiễm (Pedersen và ctv, 2017)

Việc chủng ngừa Leptospira bằng vaccine có hiệu qua làm giảm tỷ lệ nhiễm,

nhưng không bảo vệ hoàn toàn chống lại sự nhiễm do có nhiều chủng huyết thanh gây

bệnh khác nhau Thú được tiêm vaccine có thể nhiễm mầm bệnh mà không thê hiện

triệu chứng lâm sàng, chúng có thể bài thải mầm bệnh ở mức độ thấp và thời gian bài

thải ngắn hơn thú không tiêm vaccine Tuy vậy, việc tiêm vaccine cho thú cái trước

khi phối giống sẽ bảo vệ được chúng trong suốt quá trình mang thai, thú non có thé

được bảo hộ sau khi được sinh ra 3-4 tháng Việc phòng bệnh do Leptospira trên chó tuy hiệu quả không hoàn toàn nhưng có tác dụng làm giảm bot bệnh xảy ra trên người (Pedro và Boris, 2001).

1.7.6 Sự cảm nhiễm các serovar Leptospira trên bò

Các serovar như Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae và Pomona gây bệnh cấp

tính nặng trên bò nhiễm lâm sàng (Faine và ctv, 1999) Trên lâm sàng, các dấu hiệucủa bệnh leptospirosis cấp tính bao gồm sốt, thiếu máu tan máu, đái ra máu và vàng

da Bò mang thai nhiễm Leptospira có thê dẫn đến say thai Các kháng thé chống lại L

borgpetersenii serovar Hardjo loài Hardjobovis (Lb Hardjobovis) và L borgpetersenii serovar Hardjo loài Hardjoprajitno (Lb Hardjoprajitno) được phat hiện 25-65% bò ở

12

Hoa Kỳ, Châu Âu, Nam Mỹ và Uc; Lb Hardjobovis phố biến nhất ở bò trên toàn thé

giới (Heath và Johnson, 1994)

Gần đây, kết quả giải trình tự gen cho biết, Lb Hardjobovis và LbHardjoprajitno đã và đang thích nghi, phát triển trên bò (Bulach, 2006) Bò nhiễm LbHardjobovis thường không có triệu chứng hoặc các trường hợp nhẹ, nhưng có liên

quan đến tình trạng nhiễm trùng mãn tính với vô sinh và thất bại trong sinh sản như

say thai, thai chết lưu và bê con yếu Sự say thai xảy ra từ 1-6 tuần (nhiễm trùngserovar Pomona) hoặc 4 -12 tuần (nhiễm trùng serovar Hardjo) sau giai đoạn nhiễm

trùng cấp tính (Ellis, 1994) Trong khi đó, ở những bò mang thai nhiễm serovarPomona, sự say thai thường xảy ra trong 3 tháng cuối của thai kỳ Với nhiễm trùng

serovar Hardjo, bò thường có thé say thai ở tất cả các giai đoạn và thường chết phôi

sớm (Ellis, 1994) Vô sinh thường được quan sát thấy ở các đàn bò bị nhiễm serovar

Hardjo (Guitian, 1999) Ở bò, tỷ lệ say thai do nhiễm tring Lb Hardjobovis là 3-10%,

ty lệ này tăng lên đến 30% khi nhiễm trùng ở Lb Hardjoprajitno (Ellis, 1994) Ở bò

sữa bị nhiễm Lb Hardjoprajitno kết hợp với nhiễm trùng cấp tính, sẽ dẫn đến hội

chứng giảm sữa trên bò sữa (Nobuo và Ichiro, 2012).

1.8 Triệu chứng lâm sàng trên bò

1.8.1 Thể cấp tính

Đối với trâu bò, dé, cừu: bê thường mắc bệnh ở thé cấp tính, triệu chứng banđầu sốt cao (40,5°C - 41°C), bỏ ăn, nước tiểu có máu, khó thở do xung huyết phổi, cóchứng thiếu máu, suy kiệt dần rồi chết Nước tiểu màu vàng Trâu, bò trưởng thành cóbiểu hiện triệu chứng rất khác nhau và khó chân đoán Con cái đang trong thời kỳ tiết

sữa bị giảm sản lượng sữa Sữa thường có màu vàng, có các vệt máu hoặc cục máu.

Bầu vú thường mềm và nhão

1.8.2 Thể mãn tính

Gia súc sốt nhẹ 39°C - 39,5°C, gia súc mang thai có hiện tượng say thai, đẻ non,

không động dục, con non sinh ra yếu; gia súc đực có hiện tượng viêm khớp, sưng dịchhoàn, tinh dịch loãng, ty lệ tinh trùng di hình cao (Groom va ctv, 2006).

Ở gia súc mắc bệnh, phổi thủy thũng, trong phế quản và phế nang có tích nhiều

nước màu vàng; mỡ vành tim có mau vàng; bàng quang căng, niêm mạc xuât huyệt

13

nặng, chứa đầy nước tiểu màu vàng, đỏ hoặc đỏ sam, có khi bàng quang xep, không

chứa nước tiểu; gan sưng, nâu vàng, bở nát, hoại tử, thâm nhiễm tế bao lympho va đơn

nhân lớn, tế bào ống dẫn mật tăng sinh, hoại tử ống dẫn mật, túi mật teo hoặc căng,dịch mật sánh lại như kẹo mạch nha; hạch lâm ba ruột sưng, thủy thũng; trường hợp

bệnh nặng, màng treo ruột thoái hóa biến thành tổ chức nhay có mau vàng; thận nhạtmàu hoặc có mau vàng, sưng to có điểm hoại tử trắng hoặc điểm xuất huyết nhỏ trên

bề mặt Đối với bào thai bị sảy có các điểm hoại tử như đầu đỉnh ghim trên gan, dịch

trong cơ thé có màu vàng

1.9 Chan đoán

1.9.1 Chan đoán phân biệt dịch tễ học, phân biệt dau hiệu lâm sàng

(1) Chan đoán dịch tễ hoc: dựa vào biểu hiện lâm sàng kết hợp với đặc điểm

của bệnh có tính nguồn dịch thiên nhiên Bệnh có quanh năm nhưng thường xuất hiện

nhiều vào mùa mưa, nhất là sau mùa lũ (Nguyễn Vĩnh Phước, 1978)

(2) Chân đoán phân biệt dấu hiệu lâm sàng: Chủ yếu là dấu hiệu hoàng đản vàsây thai:

Bảng 1.3 Đặc điểm chân đoán phân biệt bệnh do Leptospira với các bệnh khácBiểu hiện lâm sàng Các bệnh cần phân biệt

- Ký sinh trùng đường máu

- Bệnh đo một số vi trùng khác như E coli gây dung

Hoàng đản huyết

- Một số trường hợp nhiễm độc tố aflatoxin

- Một số trường hợp ngộ độc hóa chất (arsenic, Cu )Sây thai - Bệnh do vi khuẩn Brucella suis

Tuy nhiên, các triệu chứng bệnh chi cho phép nghi ngờ có bệnh Muốn chân

đoán một cách chính xác nên tiễn hành các xét nghiệm tại phòng xét nghiệm

1.9.2 Chan đoán trong phòng thí nghiệm

Mẫu bệnh phẩm là huyết thanh của động vật hoặc máu, nước tiểu, gan, thận của

động vật mắc bệnh, chết, có dấu hiệu mắc bệnh Bệnh phẩm phải được lấy, bao gói vàbảo quản theo Quy chuẩn Việt Nam QCVN 01-83: 2011/BNNPTNT được ban hànhtheo Thông tư số 71/2011/TT-BNNPTNT ngày 25/10/2011 của Bộ Nông nghiệp và

14

PTNT; đựng trong lọ vô trùng đóng kín nắp, dán nhãn, ghi rõ bệnh phâm đã lấy, bảo

quản trong điều kiện lạnh khoảng 2°C đến 8°C và được chuyền đến phòng thử nghiệmnông nghiệp được cơ quan có thâm quyền công nhận càng nhanh càng tốt

Phương pháp xét nghiệm: Thực hiện theo quy trình chân đoán bệnh Leptospira

quy định tại Tiêu chuân Việt Nam TCVN 8400-15:2011 dựa vào chan đoán huyếtthanh học sử dụng phản ứng ngưng kết trên phiến kính (MAT - Microscopic

Agglutination Test) Trong phương pháp này, huyết thanh thú nghi bệnh được dùng déthực hiện phản ứng ngưng kết trên phiến kính (MAT - Microscopic Agglutination

Test) với bộ kháng nguyên sống gồm 23 chủng Le/ospira lưu hành ở Việt Nam Kếtquả được đánh giá theo mức độ ngưng kết giữa kháng nguyên và kháng thể mà đánh

giá phản ứng là +, ++, +++ hay ++++ Phan ứng được đánh giá là đương tính nếu như

tại hiệu giá pha loãng từ 1/100 trở lên, mẫu huyết thanh đó có chứa một lượng kháng

thé gây ngưng kết ít nhất 50% Lepfospira (phản ứng ở mức ++) Trong khi đó, kết qua

âm tính, khi không tìm thấy sự ngưng kết

Chân đoán vi khuẩn học

Kiểm tra hình thái học: Thường sử dụng mẫu máu, mẫu nước tiêu, mẫu là phủtạng (gan, lách, thận) Mẫu được quan sát dưới kính hiển vi nền đen thay Leptospiravận động Tuy nhiên, phương pháp này có độ nhạy và độ đặc hiệu thấp (Levett, 2001)

Phân lập vi khuẩn

Việc phát hiện Leptospira bằng cách nuôi cấy được coi là phương pháp chanđoán chính xác bệnh Leptospirosis (Adler và Moctezuma, 2010) Trong tuần đầu tiêncủa bệnh, Leptospira có thé được phát hiện từ máu, dich não tủy Sang tuần thứ hai,

Leptospira có thé được phát hiện trong nước tiểu và tỷ lệ thành công cao nhất từ 14

đến 28 ngày sau khi nhiễm bệnh (Bharti và ctv, 2003)

Chân đoán bằng kỹ thuật PCR (Polymerase Chain Reaction)

PCR có nhiều lợi thế hơn các xét nghiệm huyết thanh học (MAT, ELISA), biết

được tình trạng nhiễm trùng của con vật, có giá trị ứng dụng trong lâm sàng và trong

nghiên cứu (Rojas va ctv, 2010) Theo Picardeau (2013), có nhiều phương pháp chanđoán Leptospira khác nhau như xét nghiệm nhanh (Rapid test), dipstick test, xétnghiệm ngưng kết trên phiến kính, ELISA thăm do IgM kháng Leprospira, MAT (xét

15

nghiệm vi ngưng kết), xét nghiệm ngưng kết hồng cầu gián tiếp Trong khi đó, kỹ

thuật PCR là một bước tiến lớn trong chân đoán bệnh Leptospirosis do có thé phát

hiện vi khuẩn trong tuần đầu tiên của bệnh Nhìn chung, có rất nhiều xét nghiệm déchân đoán sự hiện diện của Leptospira spp.trên người va động vật nhưng không có

phương pháp nào thỏa mãn được cho tất cả các mục đích Vì vậy khi xét nghiệm cần

lựa chọn phương pháp phù hợp với mục đích thí nghiệm và loại mẫu vật sẵn có

1.10 Phòng và điều trị bệnh

Theo Mughini-Gras (2013), ngoài áp dụng chăn nuôi an toàn sinh học, nhiều

quốc gia đã sử dụng vaccine phòng bệnh Thị trường thuốc thú y Việt Nam có vaccinecủa công ty cé phần thuốc thú y Trung ương Vetvaco có 6 chủng leptospira (L

pomona; L canicola; L mitis; L icterohaemorrhagiae; L bataviae; L grippotyphosa.

Bénh do Leptospira can duoc phát hiện sớm, điều trị toàn điện và triệt dé Kháng sinh

được ưu tiên chon lựa là - Doxycycline (Truccolo và ctv, 2002; Liegeon va ctv, 2018).

Bên cạnh đó, Enrofloxacin Hydrochloride-Dihydrate cũng được nghiên cứu và điều trị

thành công Leptospira trên chó (Mendoza va ctv, 2019).

1.11 Một số nghiên cứu ở trong và ngoài nước

Nguyễn Ngọc Hải và ctv (2010) đã nghiên cứu tình hình nhiễm Leptospira trên

chuột ở Thành phố Hồ Chí Minh với với kỹ thuật vi ngưng kết (MAT) đối với 22 mẫuhuyết thanh Kết quả cho thấy khoảng 40,9% (9/22) mẫu huyết thanh dương tính với

các serovar cua Leptospira thường gây bệnh trên người và thú có vú Chuột là loài

gam nham mang trùng Lepfospira nguy hiểm, là nguồn lưu trữ và lây nhiễm tự nhiênLeptospira đôi với các loài vật nuôi và con người, gây nguy hai cho sức khỏe cộng

đồng

Ở khu vực đồng bằng sông Cửu Long, Lý Thị Liên Khai (2012), điều tra về tình

hình nhiễm khuẩn Leptospira trên đàn bò sữa, trên chó và trên chuột tại Công ty cổphần thủy sản sông Hậu Can Thơ, kết quả cho thấy tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chuộtcao nhất, kế đến là chó và đàn bò sữa là thấp nhất Tỷ lệ nhiễm này không phụ thuộcvào lứa tuổi và giới tính, với 6 serogroup pho biến L ba/aviae, L ballum, L

pyrogenes, L icterohaemorrhagiae, L sejroe và L tarassovi Chuột có thê là nguôn

16

làm lây nhiễm Leptospira cho bò và chó trong trại bò sữa với hệ số tương quan rat chặt

chẽ.

Hoàng Kim Loan và ctv (2013) đã nghiên cứu tình hình nhiễm Leptospira trên

người (từ năm 2004- 2013) và động vat gam nham (2005 - 2013) ở miền Nam ViệtNam Sử dụng phương pháp xét nghiệm huyết thanh học MAT với hiệu giá >1:400được xác định là dương tính trên người và hiệu giá > 1:20 được xác định là dương tinhtrên động vat gam nhấm Kết quả cho thấy có 48 mẫu huyết thanh được xác định là

dương tính trên 1089 bệnh nhân nghi nhiễm Leptospira từ chỉ định xét nghiệm của bác

sĩ lâm sàng Các serovar nổi trội là bataviae, hurstbridge (25,93%), canicola (9,26%),

cynopterie và gryppotyphosa (7,41%) Trên quan thé động vat gam nham bao gồm các

loài S.murinus, R.norvegicus, R.exulans R.rattus, R.flavipetus, B.indica cho thay ti lệnhiễm là 7,14% (72/1009) ở các serovar: bataviae (37,5%), hurstbridge (20,8%), patoc

(12,5%), javanica (11,11%).

Nguyễn Thị Bé Mười va ctv (2016) đã nghiên cứu tỷ lệ nhiễm Leptospira trên

chuột tại thành phố Rạch Giá và huyện Hòn Đất của tỉnh Kiên Giang bằng thử nghiệm

vi ngưng kết (MAT) với 18 serogroup Leptospira Kết quả khảo sát cho thấy, tỷ lệnhiễm Leptospira trên chuột tại tỉnh Kiên Giang là 22,73% (20/88), trong đó chuột

công (Rattus novergicus) nhiềm với tỷ lệ là 19,18% (14/73) và chuột nhà (Rattusrattus) nhiễm 46,15% (6/15) Các serogroup phổ biến trên chuột là: L semaranga(14,29%), L grippotyphosa (9,52%) và L ballum (9,52%) Cường độ nhiễm serogrouptrên 1 cá thé chuột cao nhất là 4 serogroup (2/20, 10%), 3 serogroup (5/20, 25%) và 2

serogroup (6/20, 30%).

Duong và ctv (2020) đã khảo sát huyết thanh học bệnh Leptospirosis trên bò tại

Củ Chi, TP.HCM Nghiên cứu đã sử dụng kỹ thuật vị ngưng kết dé phân tích 446 mauhuyết thanh trên bò với 24 serovars Leptospira Kết quả cho thấy, tỷ lệ nhiễmLeptospira huyết thanh trong đàn là 61,54%; và ở cấp độ cá nhân là 31,17% Trong đó,

tỷ lệ bò thịt (29,77%) nhiễm L@p/ospira thấp hơn bò sữa (31,75%) Bò từ 2 - 3 tuổi có

tỷ lệ nhiễm Leptospira cao nhất là 37,72% Điều này cho thay bò ở Củ Chi có mức độ

phơi nhiễm rat cao với Leptospira spp Do đó gây ra rủi ro nhất định cho những ngườilàm việc với gia súc mắc bệnh lây nhiễm từ động vật sang người

17

Bahaman và ctv (1987) đã ghi nhận được tỷ lệ nhiễm Leptospira trên trâu bò vàheo ở Tây Malaysia lần lượt là 31% và 16%; chủ yếu là các serovars Sejroe, Tarassovi

và Pomona.

Nghiên cứu của Emmanuel và ctv (2012) cho biết, ty lệ nhiễm bệnhleptospirosis trong huyết thanh của 142 con bò được giết mô tại lò Zango ở Zaria,Bang Kaduna, Nigeria từ tháng 6 đến tháng 7/2011 đã được xét nghiệm ELISA có3,5% bò bị nhiễm Leprospira serovar Hardjo

Điều tra về Leptospira trong 5 năm (2010-2015) ở Thái Lan, bằng phương pháp

MAT, Sudarat và ctv (2017) cho biết tỷ lệ nhiễm Leprospira ở người là 23,7%, ở trâu

là 24,8%, ở bò là 28,1% và ở lợn là 11,3% Các serovars chiếm ưu thế nhất là

Shermani, tiếp theo là Bratislava Trong đó, Panama và Sejroe phô biến ở người;

Shermani, Ranarum và Tarassovi ở trâu và Shermani và Ranarum ở bò Kết quả cũng

cho thay, gia súc dé bị nhiễm bởi serovar Shermani hon so với con người

Nghiên cứu Lyle (1981) cho biết, bệnh leptospirosis ở bò là một bệnh của gia

súc, có it nhất 23 serovars Ở thé cấp tinh, bò thường sốt, có chứng vàng da, huyết sắc

tố niệu Trên bò mang thai thường bị nhiễm Leptospira trong ba tháng cuối của thời ky

thường bị sây thai, đẻ con chết hoặc bê yếu Ở thể mãn tính, bò bệnh leptospirosis có

liên quan đến vô sinh

Nghiên cứu bệnh leptospirosis ở Uruguay trong 3 năm của Zarantonelli và ctv(2018) cho biết, chủng Leptospira gây bệnh từ bò bị nhiễm bệnh tự nhiên có nguy cơliên quan đối với bệnh leptospirosis ở người với 40 chủng Leptospira spp Trong đó,

L interrogans nhóm huyết thanh Pomona serovar Kennewicki (20 chủng), 7.interrogans nhóm huyết thanh Canicola serovar Canicola (1 chủng), L borgpeterseniinhóm huyết thanh Sejroe serovar Hardjo (10 chủng) và L noguchii (9 chủng)

Nghiên cứu bệnh leptospirosis trên bò sữa của Elisabeth va ctv (2017) cho biết,

tỷ lệ nhiễm Leptospira ở bò sữa là 13%, tỷ lệ bò nhiễm Leptospira có sự tương quan

thuận với tuổi của bò và tập quán chăn thả

Nghiên cứu cua Martins va ctv (2015) cho biét, khi thu thập mau nước tiểu trựctiếp bằng cách chọc thủng bàng quang từ những bò được chọn ngẫu nhiên từ một lò

mồ 6 Rio de Janeiro, Brazil, để nuôi cấy vi khuẩn Kết quả có 10/167 mẫu nước tiêu

18

dương tính (6%) đã thu được với nhóm huyết thanh Panama (hiệu giá 1600) và nhómhuyết thanh Autumnalis (hiệu giá 12800).

Nghiên cứu của Kathryn va ctv (2018) cho biết, tỷ lệ nhiễm Leptospira gây

bệnh được phát hiện ở 7,08% bò (n = 452 [5,1-9,8%]), 1,20% dê (n = 167 [0,3-4.3%])

và 1,12% cừu (n = 89 [0,1-60,0%]); trong đó, 2 nhóm huyết thanh riêng biệt của L.borgpetersenii đã được xác định ở bò Những kết qua chỉ ra rằng gia súc nhai lại là vậtchủ quan trọng của Leptospira ở miền bắc Tanzania Gia súc bị nhiễm bệnh có thể là

nguồn lây nhiễm Leptospira cho người

Nghiên cứu 200 trang trại bò sữa ngẫu nhiên ở New Zealand của Yupiana vàctv (2020) cho biết, khi lấy mẫu nước tiêu 20 bò sữa/trại từ tháng 1 đến tháng 4/2016

và xét nghiệm bằng phương pháp PCR, kết quả có 26,5% trong số 200 trang trại có ítnhất một con bò dương tính với Leptospira và 2,4% trong số 4.000 bò thai Leptospira

qua nước tiểu Bằng cách đánh giá hồi quy logistic đa biến, các yếu tố liên quan đến

bệnh Leptospira, bao gồm tuổi gia súc (OR = 0,82, 95% CI 0,71-0,95), có sự hiệndiện của các loài khác như cừu (OR = 5,57, 95% CI 1,46-21,25); chó (OR = 1,45,

95% CI 1,07-1,97) Hiện nay, ở tỉnh Long An chưa có nghiên cứu khoa học nào vềbệnh Leptospirosis trên bò Đây cũng là nội dung chính của đề tài này

19

Chương 2

NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Thời gian và địa điểm

Thời gian thực hiện: Từ tháng 6/2021 đến tháng 3/2022

Địa điểm:

Điều tra và lấy mẫu huyết thanh tại các hộ chăn nuôi bò thịt trên địa bàn Mộc

Hóa, Long An.

Mẫu được xét nghiệm tại Chi cục Chăn nuôi và Thú y Tiền Giang

2.2 Nội dung nghiên cứu

Nội dung 1: Điều tra tình hình chăn nuôi bò tai huyện Mộc Hóa, Long An

Nội dung 2: Khao sát tỷ lệ bò có kháng thé kháng Leptospira và xác định cácyếu tô nguy cơ đối với hộ có bò dương tính với Leptospira

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Nội dung 1: Điều tra tình hình chăn nuôi bò tại huyện Mộc Hóa, Long An

Chọn hộ khảo sát

Huyện Mộc Hóa có 1 thị tran, 6 xã (thi tran Binh Phong Thanh, Binh Hoa

Dong, Binh Hoa Trung, Binh Hoa Tay, Binh Thanh, Tan Thanh, Tan Lap) Dua vao

điều kiện kinh tế xã hội, huyện Mộc Hóa được phân ra 3 vùng (1) Vùng 1 gồm thị tranBình Phong Thạnh, Bình Hòa Đông, Bình Hòa Trung: (2) Vùng 2 gồm Bình Hòa Tây,Bình Thạnh; và (3) Vùng 3 gồm Tân Thành, Tân Lập

20

2.3.2 Nội dung 2: Khảo sát tỷ lệ bò có kháng thé kháng Leptospira và xác định

các yếu tố nguy cơ đối với hộ có bò dương tính với Leptospira

Mẫu huyết thanh: khoảng 300 mẫu huyết thanh được thu thập từ 150 hộ chănnuôi Tại mỗi hộ chăn nuôi, thu thập mẫu máu ngẫu nhiên từ 1- 3 bò theo quy mô đàn,

ưu tiên mẫu trên bò có dau hiệu lâm sàng; 1 mẫu ở đàn <3 con; 2 mẫu ở đàn 3 -5 con;

3 mẫu ở đàn >5 con Cụ thé:

Đàn có quy mô < 3 con: 49 hộ với 49 mẫu

Đàn có quy mô 3-5 con: 52 hộ với 104 mẫu

Đàn có quy mô >5 con: 49 hộ với 147 mẫu

Tổng cộng: 150 hộ với 300 mẫu huyết thanh của bò

Pal

2.3.2.1 Phương pháp lấy mẫu

Lấy 3 ml máu ở tĩnh mạch tai hoặc tĩnh mạch cô của bò bằng ống tiêm loại 5 ml

vô trùng có gắn kim 18G Sau đó đóng nắp kim, kéo pit tông ra để có không khí trongống tiêm, để yên ống tiêm trong khoảng 30 phút dé máu đông lại, rồi dé ống tiêm vào

thùng bảo quản lạnh ở 2°C - 8°C và chuyên về phòng thí nghiệm trong vòng 24 giờ.Lưu ý mỗi ống tiêm sau khi lấy máu đều phải ghi ký hiệu riêng dé theo dõi Mẫu sau

khi đưa về phòng thí nghiệm phải được ly trích huyết thanh Nếu mẫu được xét

nghiệm trong vòng 5 ngày thì bảo quản huyết thanh ở nhiệt độ từ 2°C - 8°C còn nếu délâu hơn thì bảo quản ở nhiệt độ -20°C đến -70°C và tránh rã đông nhiều lần Mẫu khi

xét nghiệm phải rã đông ở nhiệt độ phòng và trộn đều mẫu bằng máy lắc trước khi xét

nghiệm.

2.3.2.2 Phương pháp xét nghiệm ngưng kết nhanh trên phiến kính (MAT:

microscopic agglutination test).

Phương pháp thực hiện phản ứng MAT theo quy định của OIE (1996) Ở Việt

Nam, thực hiện theo TCVN 8400-15: 2019, 2019.

Sử dung kháng nguyên sống Các serovar Leptospira do Viện Pasteur Thànhphó Hồ Chi Minh cung cấp (Bảng 2.1)

Nguyên tắc: Nguyên tắc của phản ứng MAT là phản ứng ngưng kết xảy ra giữa

vi khuẩn Leptospira còn sông và kháng thé đặc hiệu trong huyết thanh Mức độ ngưngkết của phức hợp kháng nguyên-kháng thé được đánh giá dưới kính hiển vi nền đen

Bộ kháng nguyên chuẩn được chứa trong 24 ống có nắp đậy, dán nhãn có cácserovar Leptospira tương ứng Trước khi thực hiện phan ứng MAT, chất lượng củaLeptospira spp kit cần được xác nhận bằng cách nhỏ một giọt kháng nguyên chuẩnlên phiến kính và thêm một giọt dung dịch đệm PBS (phosphate buffered saline) vào

trộn đều; dé phản ứng 5 - 10 phút ở nhiệt độ phòng Sau đó, phan ứng được quan sátdưới kính hiển vi nền đen ở vật kính 10x, vi khuẩn Leptospira chuyén động mạnh,

phân bố day trên vi trường và không tự ngưng kết được đánh giá đạt yêu cầu

22

Kiểm tra định tính

Chuẩn bị kháng nguyên chuẩn và huyết thanh: các mẫu huyết thanh được pha

loãng với dung dịch đệm PBS ở nồng độ bằng 1:25 Trong khi đó, kháng nguyênchuẩn được pha loãng theo tỷ lệ 1: 2 trong dung dịch PBS

Trước hết, 25ul của mỗi kháng nguyên pha loãng với tỷ lệ 1: 2 được thêm vào

các giếng từ 1 đến 24, tương ứng với 24 huyết thanh trong kit thử nghiệm Sau đó,

25ul huyết thanh đã pha loãng được thêm vào mỗi giếng và trộn đều dé có được huyết

thanh pha loãng theo tỷ lệ 1:50 (Bang 2.2) Phan ứng được ủ ở 20 — 25°C trong 2 giờhoặc 37°C trong 1 giờ Sau đó, hút Sul phản ứng lên lam kính và được đậy bằng

lamelle Dưới kính hiển vi nền đen (10x), kết quả ngưng kết của phản ứng khángnguyên-kháng thể sẽ được quan sát

Bảng 2.1 Cac serovars trong bộ kháng nguyên của viện Pasteur - FP.HCM

TT Loài Kiểu huyét thanh Serovar Chủng

| L interrogans Australis Australis Ballico

2 L interrogans Autumnalis Autumnalis Akiyami a

3 L interrogans Bataviae Bataviae Van Tienem

4 L interrogans Canicola Canicola Hond Utrecht

5 L borgpeterenii Ballum Castellonis Castellon 3

6 L interrogans Icterohaemorrhagiae Copenhageni Fiocruz L1-130

ý L interrogans Pyogenes Pyogenes Salinem

8 L borgpeterenii Icterohaemorrhagiae Tonkini LT 96-68

9 L interrogans Icterohaemorrhagiae Icterohaemorrhagiae Verdun

10 L kirschineri Cynopterie Cynopterie 3522 C

11 L kirschineri Gryppotyphosa Gryppotyphosa Moskava v

12 L borgpeterenii SeJoe Hardjo Hardjo bovis

13 L interrogans Hebdomadis Hebdomadis Hebdomadis

14 L borgpeterenii ]avanica Javanica Veldrat bataviae 46

15 L noguchii Panama Panama CZ 214k

16 L biflexa Semaranga Patoc Patoc I

17 L interrogans Pomona Pomona Pomona

18 L borgpeterenii TarassoVI Tarassovi Mistis Johnson

19 L weilii Tarassovi Vughia LT 89-68

20 L interrogans Sejoe HardJo Hardjoprajitno

21 L interrogans Sejoe Saxkoebing Mus 24

22 L interrogans Canicola Canicola Chiffon

23 L noguchii Louisiana Louisiana LSU 1945

24 L fainei Hustbridge Hustbridge

(Nguôn: Viện Pasteur thành pho Hồ Chi

23

Minh, 2014).