Báo cáo chuẩn hóa phương pháp xác Định hàm lượng capsaicinoid trong thực phẩm bằng kỹ thuật hplc

BÁO CÁO CHUẨN HÓA PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CAPSAICINOID TRONG THỰC PHẨM BẰNG KỸTHUẬT HPLC 1.. Thông tin về nhiệm vụ - Tên nhiệm vụ: Chuẩn hóa quy trình thử nghiệm phân tích hóa tro

BÁO CÁO CHUẨN HÓA PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CAPSAICINOID TRONG THỰC PHẨM BẰNG KỸ

THUẬT HPLC

1 Thông tin về nhiệm vụ

- Tên nhiệm vụ: Chuẩn hóa quy trình thử nghiệm phân tích hóa trong thực phẩm theo ISO/IEC 17025: 2017

- Nội dung thực hiện: Chuẩn hóa phương pháp “ Xác đinh hàm lượng Capsaicinoid trong thực phẩm bằng kỹ thuật HPLC”nhằm kiểm nghiệm mẫu phục vụ quản lý nhà nước về an toàn thực phẩm

 Tên chỉ tiêu: Capsaicinoid

 Nền mẫu thẩm định công nhận ISO/IEC 17025: Thực phẩm

 Thực hiện kiểm nghiệm trên đối tượng mẫu thực: Thực phẩm

 Theo dự toán đăng ký theo NĐ 107 và công nhận theo ISO/IEC 17025:2017: thiết lập và nộp hồ sơ phương pháp “ Xác đinh hàm lượng Capsaicinoid trong thực phẩm”.

 Người chịu trách nhiệm thực hiện: Cao Công Khánh

- Thời gian phê duyệt: tháng 6-12/2022

2 Nội dung thực hiện

2.1 Tổng quan

Cây ớt có tên khoa học Capsium frutescens L; Capsium annuum L, là một loại quả

của cây thuộc chi  Capsicum  của họ Cà (Solanaceae) Ớt là một loại quả gia vị cũng như loại quả làm rau phổ biển trên thế giới Ớt được sử dụng rộng rãi trong nhiều món ăn như mộtloại gia vịđể thêm "vị cay" cho các món ăn Capsaicin và các capsaicinoid tạo cho ớt độ cay khi ăn hoặc bôi ngoài da Ớt có nhiều vị cay và hương vị khác nhau Sự đa dạng này nhờ

sự đa dạng của các ớt, mỗi loại có hương vị và mức độ cay riêng Ớt có nguồn gốc từ châu

Mỹ; ngày nay nó được trồng khắp nơi trên thế giới và được sử dụng làm gia vị, rau,

và thuốc.

Hình thái học:

Cây ớt là cây gia vị, thân thảo, thân dưới hóa gỗ, cao 0,4-1 m, phân nhánh nhiều, có thể sống vài năm, có nhiều cành, nhẵn; lá mọc so le, hình thuôn dài, đầu nhọn; hoa mọc đơn độc ở kẽ lá Quả ớt có nhiều tên gọi khác nhau như Lạt tiêu, Lạt tử, Ngưu giác tiêu, Hải tiêu Quả ớt mọc rủ xuống đất, chỉ riêng ở cây ớt chỉ thiên thì quả lại quay lên trời Các bộ phận của cây ớt như quả, rễ và lá còn được dùng làm thuốc chữa nhiều bệnh.

Cây thuộc loại rễ chùm, ăn sâu và phân nhánh mạnh về bốn phía, có thể ăn sâu tới 70 100cm (gieo cố định) nhưng chủ yếu tập trung ở tầng đất mặt 0 - 30cm Phân bổ theo chiều ngang với đường kính 50 - 70cm Có hai loại rễ: rễ chính (rễ trụ) và rễ phụ (rễ bên) Bộ rễ

-có khả năng tái sinh nếu -có thể thông qua thời kỳ vườn ươm và nhổ đi trồng trần.

Lá ớt ngoài nhiệm vụ quang hợp, thì còn một đặc điểm rất quan trọng để phân biệt giữa các giống với nhau Lá có hai dạng chủ yếu: dạng elip (bầu dục), dạng lưỡi mác Phiến

lá nhẵn không có răng cưa, đầu lá nhọn, gân lá dày nỗi rõ, phân bố dày và so le Cuống lá mập, khỏe, dài, chiều dài cuống thường chiếm 1/3 so với tổng chiều dài lá (2,5 - 5cm) tùy giống Lá ớt thường có màu xanh đậm, xanh nhạt, xanh vàng và màu tím Một số giống trên mặt lá non còn phủ lông tơ.

Ớt là cây hàng năm (cây một năm), hoa lưỡng tính (tự thụ phấn), đầu nhụy chia 2 vòi dài, rất thuận tiện cho quá trình tự thụ phấn Thường có hiện tượng rụng hoa, rụng nụ trên cây Hoa thường phân bổ đơn hoặc thành chùm (1 - 3 hoa/chùm) nhưng rất ít Hoa ớt có màu trắng, nở vào buổi sáng vào lúc 9 - 10h sáng.

Quả ớt thuộc loại quả mọng, nhiều nước, có 2 -3 ô cách nhau bởi vách ngăn dọc theo trục quả (lõi quả) Cấu tạo quả chia làm 3 phần (từ ngoài vào trong) Thịt quả, xơ thịt và vỏ quả Nửa quả gần cuống to hơn và chứa nhiều hạt hơn nửa quả phần ngọn Hạt ớt nằm tập trung xung quanh lõi của quả Phần lớn chất cay được tập trung phần giữa đến cuống quả Quả ớt chín có màu đỏ, vàng hoặc tím đen Dạng quả: to hoặc nhỏ, dài hoặc nhọn cuối quả

(chìa vôi), quả dài cong ở cuối quả (sừng bò) Ớt ngọt quả to hơn Ớt cay, ớt ngọt có nhiều hình dáng: tròn dẹt như quả cà chua, tròn dài như quả cà tím, quả đào, bầu như quả lê, hoặc dạng sừng bò, chìa vôi phụ thuộc vào đặc tính của giống và kỹ thuật canh tác Hạt ớt nhẵn, dẹp, có màu vàng, sức nảy mầm của hạt giống khá cao nếu bảo quản tốt có thể giữ được 2 -

3 năm

Đặc điểm bột dược liệu:

Bột màu đỏ cam đến đỏ, mùi đặc trưng của ớt, vị rất cay Các tế bào biểu bì bên ngoài màng có từ 5 – 7 hàng, da nhẵn dạng vân, các giọt dầu ớt màu đỏ trong tế bào nhu

mô ruột Lớp biểu bì bên trong đặc trưng với các tế bào sclerenchymatous phân cách bằng nhu mô hẹp Lớp biểu bì hạt của các tế bào lõm lớn, các lớp ngoài mỏng và các bức tường trong và bên trong dày

Phân bố, sinh học và sinh thái:

Ớt có nguồn gốc từ châu Mỹ, sau lan sang các nước châu Âu, châu Á và châu Phi Cây được trồng ở nhiều ở Trung Quốc, Mexico, Indonesia, Cây ưa sáng và ưa mọc trên đất

ẩm, sinh trưởng mạnh vào mùa xuân hè, mùa đông tàn lụi Nhiệt độ lý tưởng cho cây phát triển từ 21 đến 29 oC.

Hóa học thực vật :

Trong quả ớt có chứa 0,04 – 1,5 % dẫn chất benzylamin, vị cay là các hoạt chất trong nhóm alkaloid (chiếm khoảng 0,05 – 2%) Trong đó thành phần chính là capsaicin (chiếm tới 70% tổng hàm lượng capsaicinoids), phần lớn tập trung ở biểu bì giá noãn và khi nhỏ nước lên rồi soi kính sẽ thấy các tinh thể hình vuông của capsaicin Ngoài ra, còn

có một số chất khác như dihydrocapsaicin (khoảng 20%), nordihydrocapsaicin (7%), homocapsaicin và homodihydrocapsaicin.

Capsaicinoid:

C u trúc c a capsaicinoid: ( ấ ủ  A ) capsaicin, ( B ) dihydrocapsaicin, ( C ) nordihydrocapsaicin, ( D ) norcapsaicin, ( E ) homocapsaicin I, ( F )

homodihydrocapsaicin I, ( G ) homocapsaicin II, ( H ) homodihydrocapsaicin II và ( I ) nonivamide.

Tính chất hóa lý:

Capsaicin (8-methyl-N-vanillyl-6-nonenamide) là một chất được lấy ra từ ớt, công thức hóa học là C18H27NO3 Tinh thể bột màu trắng, tan trong cồn và ete, không tan trong nước Cấu trúc hóa học của nhóm hoạt chất capsaicinoids được xác định là acid isodexenic vanilylam, nhiệt độ nóng chảy của capsaicin là 65oC, khi nhiệt đôi hơi cao và bốc hơi và kích ứng rất mạnh gây hắt hơi rất khó chịu

Sinh học khả dụng của Capsaicinoid

Capsaicinoid kích hoạt thụ thể TRPV1 (Transient Receptor Potential Vanilloid 1) trên

tế bào thần kinh, gây ra cảm giác nóng rát Đây là phản ứng sinh lý giúp cơ thể tăng lưu thông máu và tiết mồ hôi Khi sử dụng kéo dài, capsaicin có thể làm cạn kiệt chất P (một

hoặc viêm khớp Capsaicinoid được hấp thụ chủ yếu qua ruột non khi ăn, và qua da khi bôi ngoài Sau khi hấp thu, capsaicinoid được chuyển hóa tại gan qua hệ enzyme cytochrome P450, tạo ra các chất chuyển hóa ít độc hơn Các chất chuyển hóa này chủ yếu được bài tiết qua nước tiểu

Tác dụng dược lý

Giảm đau thần kinh: Capsaicinoid làm cạn kiệt chất P (một chất dẫn truyền thần kinh liên quan đến cảm giác đau), giúp giảm đau trong các bệnh lý như đau dây thần kinh do tiểu đường, viêm khớp, đau sau zona thần kinh Thường có trong kem bôi hoặc miếng dán giảm đau, capsaicin làm giảm tín hiệu đau khi bôi đều đặn Capsaicinoid tăng cường sinh nhiệt (thermogenesis), giúp cơ thể đốt cháy calo hiệu quả hơn Capsaicinoid kích thích quá trình oxy hóa chất béo, hỗ trợ giảm tích tụ mỡ.

Giảm viêm: Capsaicinoid có đặc tính chống viêm nhờ khả năng ức chế một số cytokine và enzyme gây viêm, ức chế sự phát triển của một số vi khuẩn như Helicobacter pylori, giúp bảo vệ dạ dày.

Tác dụng chống oxy hóa: Capsaicinoid hoạt động như một chất chống oxy hóa, trung hòa các gốc tự do, từ đó bảo vệ tế bào khỏi tổn thương và giảm nguy cơ mắc bệnh mạn tính như ung thư, bệnh tim mạch.

Kích thích tiết dịch tiêu hóa: Capsaicinoid giúp tăng cường tiêu hóa thông qua việc kích thích sản xuất dịch vị và enzyme, tăng cường chất nhầy bảo vệ niêm mạc dạ dày.

Tăng cường lưu thông máu: Capsaicin làm giãn mạch máu cục bộ, cải thiện tuần hoàn máu.Có tác dụng giảm cholesterol xấu (LDL) và ngăn ngừa xơ vữa động mạch.

Mặc dù capsaicinoid có nhiều lợi ích cho sức khỏe, nhưng nó cũng có thể gây ra một

số tác dụng phụ, đặc biệt khi sử dụng không đúng cách hoặc ở liều lượng cao Dưới đây là các tác dụng phụ phổ biến của capsaicin:

Nóng rát và đỏ da gây ngứa sưng hoặc phát ban.Gây cảm giác cay nóng mạnh ở miệng

và cổ họng, đặc biệt khi tiêu thụ ớt quá cay, tiếp xúc với mắt hoặc mũi, có thể gây rát, chảy nước mắt hoặc chảy nước mũi.Tiêu thụ quá nhiều capsaicin có thể gây kích thích niêm mạc

dạ dày, dẫn đến đau hoặc cảm giác khó chịu.Capsaicin ít gây độc nghiêm trọng, nhưng tiêu thụ một lượng lớn trong thời gian ngắn có thể gây buồn nôn, ói mửa, và đau bụng dữ dội.

Phương pháp phân tích

Định lượng các dấu hiệu hoạt tính sinh học từ thuốc thảo dược là một nhiệm vụ đầy thách thức vì sự phức tạp của các chất thành phần thực vật có trong nó Định lượng các thành phần thực vật là mong muốn để đảm bảo hoạt động dược lý hiệu quả Phát triển các kỹ thuật phân tích để phân tích các thành phần thực vật trong các công thức thảo dược là cần thiết cho tiêu chuẩn hóa của chúng Điều quan trọng là phải tiếp cận sự an toàn, tinh khiết và chất lượng trong các công thức thảo dược Trên thế giới, phương pháp định lượng capsaicinoid bằng sắc ký lỏng hiệu suất cao (HPLC), sắc ký khí, sắc ký lỏng khối phổ (HPLC-MS), điện di mao quản, HRMAS-NMR và nhiều kỹ thuật gạch nối khác

Nghiên cứu định lượng Capsaicinoid bằng sắc ký lỏng siêu hiệu năng được ứng dụng ngày càng phổ biến Với ưu điểm phân tích nhanh và chính xác, độ đặc hiệu tốt, Magaji G Usman và cộng sự đã nghiên cứu tiến hành để ước tính mức độ capsaicin và dihydrocapsaicin có thể tìm thấy trong một số loại ớt và xác định mức độ cay cũng như tỷ lệ phần trăm hàm lượng capsaicin của từng loại ớt được phân tích Hệ thống sắc ký lỏng siêu hiệu năng (UPLC) nhạy, chính xác và đặc hiệu đã được sử dụng để tách, nhận dạng và định lượng capsaicinoid và dung môi chiết xuất là acetonitrile Các thông số kỹ thuật phương pháp, bao gồm độ tuyến tính, độ tái lập, độ đúng và độ thu hồi, đã mang lại kết quả tốt Giới hạn phát hiện lần lượt là 0,045 µg/kg và 0,151 µg/kg đối với capsaicin và dihydrocapsaicin, trong khi giới hạn định lượng là 0,11 µg/kg và 0,368 µg/kg đối với capsaicin và dihydrocapsaicin Đường chuẩn tuyến tính từ 0,05 đến 0,50 µg/g đối với phân tích UPLC.

Độ chính xác giữa các ngày và trong ngày (độ lệch chuẩn tương đối) là <5,0% đối với capsaicin và <9,9% đối với dihydrocapsaicin trong khi độ thu hồi thu được (89,4%–90,1% đối với capsaicin, 92,4%–95,2% đối với dihydrocapsaicin), cho thấy độ chính xác tốt của phương pháp UPLC

Trong đó sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) được sử dụng phổ biến và lựa chọn hàng đầu khi định lượng capsaicinoid Đây là một kỹ thuật tiên tiến của sắc ký lỏng, được sử dụng

để tách, xác định và định lượng từng thành phần của hỗn hợp Tốc độ cao, độ phân giải cao,

độ nhạy, độ chính xác và khả năng tái tạo là một số ưu điểm của HPLC Phương pháp HPLC thường sử dụng cột C18 làm pha tĩnh AOAC khuyến nghị phương pháp sắc ký lỏng để xác định capsaicinoid bằng cách sử dụng phương pháp sau: Pha động: dung dịch acetic 1% và acetonitril, cột: Octadecyl-silica (ODS) 5 μm, 25 cm × 4,6 mm, tốc độ dòng chảy: 1,5 mL/phút, máy đo quang phổ đặt bước sóng 280 nm Dược điển Mỹ cũng khuyến nghị phân tích HPLC bằng phương pháp: pha động: Acetonitril: H3PO4 0,1% (60:40), tốc độ dòng chảy: 1,0 mL/phút, cột C18 ODS ( 3 μm, 25 cm × 4 mm), định lượng bước sóng 280 nm.

Trong nhiều trường hợp, sự kết hợp của methanol, acetonitril và nước đã được sử dụng rộng rãi, trong khi acid acetic, axit formic và axit orthophosphoric cũng được sử dụng làm pha di động Phát hiện Capsaicinoid được thực với hầu hết các phân tích ở 280 nm Tốc

độ dòng chảy được sử dụng trong phân tích nằm trong khoảng 0,7–2 mL / phút; chủ yếu là 1

mL / phút được giữ lại Máy dò UV–Vis được sử dụng phổ biến trong việc phát hiện Hầu hết các nghiên cứu sắc ký đã được thực hiện bằng cách sử dụng methanol làm dung môi chiết xuất và chất pha loãng.

2.2 Kế hoạch thẩm định

KẾ HOẠCH KIỂM TRA XÁC NHẬN, THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP

Xác định hàm lượng Capsaicinoid trong thực phẩm bằng kỹ thuật HPLC

Mã số: NIFC.05.M.273

Thông tin chung

- Mã số phương pháp: NIFC.05.M.273

- Phương pháp tham chiếu:

 AOAC Official Method 995.03: Capsaicinoids in Capsicums and Their Extractives, Liquid Chromatographic Method, First Action 1995

 USP-NF, USP Monographs: Capsaicin

 Hướng dẫn kiểm tra xác nhận và thẩm định phương pháp phân tích hóa học NIFC.L.G.07

- Người thực hiện:

 Nguyễn Văn Khoa

 Lê Thị Kim Anh

- Thời gian thực hiện: Tháng 09/2024

Nền mẫu:

- Thực phẩm:

 Mẫu dạng nhiều protein

 Mẫu dạng nhiều sơ

 Mẫu dạng nhiều carbonhydrat

 Mẫu dạng dầu

 Mẫu dạng lỏng

Các thông số thẩm định

a) Độ đặc hiệu

Tiến hành xác định độ đặc hiệu, chọn lọc của phương pháp như sau:

Phân tích lần lượt các mẫu:

- Mẫu chuẩn: Sử dụng dung dịch chuẩn Capsaicinoid nồng độ 20 μg/mL

- Mẫu trắng: Cân 2,0 g mẫu thực phẩm không có chứa Capsaicinoid và tiến hành phân tích theoSOP

- Mẫu trắng thêm chuẩn: Cân 2,0 g mẫu trắng Thêm dung dịch chuẩn Capsaicinoid để đượcdịch phân tích có nồng độ 20 μg/mL Tiến hành phân tích theo SOP

b) Đường chuẩn

Chuẩn bị các dung dịch chuẩn Capsaicinoid có nồng độ trong khoảng 0,50 – 100 µg/mL, dãychuẩn gồm 7 điểm chuẩn có nồng độ lần lượt là: 0,50 µg/mL; 1,00 µg/mL; 2,00 µg/mL; 10,0µg/mL; 25,0 µg/mL; 50,0 µg/mL, 100,0 µg/mL Tiến hành phân tích theo SOP

c) Độ lặp lại, độ tái lập nội bộ

Tiến hành thêm chuẩn Capsaicinoid vào mẫu trắng (dạng nhiều protein, dạng nhiều sơ - ớt tươi,dạng nhiều carbonhydrat-tương cà, dạng dầu, dạng lỏng) để được mẫu có hàm lượng 25, 250, 500μg/g (tương đương 2,5*LOQ, 25*LOQ, 50*LOQ) và tiến hành phân tích theo SOP Mỗi mức nồng

độ được tiến hành lặp lại 6 lần Độ tái lặp lập nội bộ được thực hiện tương tự trong ngày khác bởimột kiểm nghiệm viên khác

d) Độ thu hồi

Tiến hành thêm chuẩn Capsaicinoid vào mẫu trắng (dạng nhiều protein, dạng nhiều sơ - ớt tươi,dạng nhiều carbonhydrat-tương cà, dạng dầu, dạng lỏng) để được mẫu có hàm lượng 25, 250, 500μg/g (tương đương 2,5*LOQ, 25*LOQ, 50*LOQ) và tiến hành phân tích theo SOP Mỗi mức nồng

độ được tiến hành lặp lại 12 lần

e) Giới hạn phát hiện (LOD), giới hạn định lượng (LOQ)

Tiến hành thêm chuẩn trên mẫu trắng ở mức hàm lượng 25 μg/g Tiến hành phân tích theo SOP

f) Độ không đảm bảo đo

Tính toán độ không đảm bảo đo của phương pháp dựa trên kết quả thẩm định độ lặp lại và độthu hồi theo phương pháp TOPDOWN

Chuẩn mực đánh giá và tiêu chí đặt ra:

- Chuẩn mực đánh giá: NIFC.L.G.07

- Mức giới hạn cho phép hay mức tồn dư tối đa (nếu có)

- Yêu cầu về độ chụm: NIFC.L.G.07

Yêu cầu khác (nếu có)

+ Nguyên liệu thực phẩm, phụ gia và chất hỗ trợ chế biến thực phẩm

+ Thức ăn chăn nuôi

+ Tinh dầu, chất chiết thơm và sản phẩm chứa tinh dầu

+ Chất tẩy rửa, dung dịch sát khuẩn, khử trùng, sản phẩm chăm sóc cá nhân

+ Mỹ phẩm

3 Tài liệu viện dẫn

- USP-NF, USP Monographs: Capsaicin

- AOAC Official Method 995.03: Capsaicinoids in Capsicums and Their Extractives, Liquid Chromatographic Method, First Action 1995

4 Định nghĩa

- Các chất Capsaicinoid gồm Capsaicin, Dihydrocapsaicin, Nordihydrocapsaicin.

- Độ cay được tính từ tổng hàm lượng Capsaicinoid, theo đơn vị SHU

Chất chuẩn, hóa chất, thuốc thử sử dụng đều đạt yêu cầu tinh khiết dùng cho sắc ký

6.1 Chất chuẩn Capsaicin, Dihydrocapsaicin, Nordihydrocapsaicin (≥ 95%)

Cân chính xác khoảng 20 mg chuẩn trên cân phân tích vào bình định mức 20 mL Thêmkhoảng 15 mL methanol, lắc đều cho tan hết, định mức đến vạch bằng methanol, lắc đều.

7.1.2 Dung dịch trung gian 100 µg/mL

Hút chính xác 1,0 mL dung dịch chuẩn gốc (7.1.1) vào bình định mức 10 mL Định mức đếnvạch bằng methanol

7.1.3 Dung dịch chuẩn làm việc

Pha loãng thích hợp dung dịch chuẩn trung gian (7.1.2) để có các dung dịch chuẩn làm việc

có nồng độ 1 – 100 µg/mL

7.1.4 Xây dựng đường chuẩn

Lần lượt phân tích các dung dịch chuẩn làm việc (7.1.3) bằng HPLC Dựng đường biểu diễnmối tương quan tuyến tính giữa nồng độ chuẩn và diện tích pic tương ứng Hệ số R2 ≥ 0,995, độchệch của mỗi điểm (bias) ≤ 15% (hoặc 20% ở mức LOQ) Nếu không đạt phải dựng lại đườngchuẩn

7.2 Chuẩn bị mẫu

7.2.1 Chuẩn bị mẫu sơ bộ:

Các mẫu rắn cần được nghiền nhỏ thành bột mịn, trộn đồng nhất

Các mẫu lỏng cần được lắc kỹ cho đồng nhất trước khi đem phân tích

7.2.2 Mẫu thử:

Cân khoảng 0,1 – 5,0 g mẫu trên cân phân tích vào ống ly tâm 50 mL Thêm khoảng 30 mLmethanol (6.3), đậy kín nắp, lắc đều bằng máy lắc vortex, ly tâm 6000 vòng/phút trong 5 phút, gạndịch vào bình định mức 50 mL Chiết lặp lại lần hai với khoảng 15 mL methanol (6.3) Gộp dịch,định mức đến vạch bằng methanol Lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm vào lọ đựng mẫu và phântích bằng HPLC Mẫu có hàm lượng cao được pha loãng thích hợp bằng methanol (6.3) trước khiphân tích bằng HPLC

Chú ý: Với một số mẫu dạng dầu với tỷ lệ dầu cao, dung môi chiết mẫu trong quy trình được thaythế bằng aceton (6.4)

7.2.3 Mẫu trắng:

Tiến hành làm tương tự như mẫu thử nhưng là với mẫu không chứa chất phân tích

7.2.4 Mẫu kiểm tra (thu hồi, QC)

Tiến hành làm tương tự như với mẫu thử nhưng sử dụng mẫu trắng có cho thêm một lượngchuẩn xác định

7.3 Điều kiện sắc ký

Cột phân tích C18 (250 mm x 4,6 mm; 5 µm) và tiền cột tương ứng

m: khối lượng mẫu cân (g);

1000: hệ số quy đổi từ µg/g sang mg/g

Hàm lượng Capsaicinoid được tính là tổng Capsaicin, Dihydrocapsaicin, Nordihydrocapsaicin

Độ cay (SHU) được tính theo công thức:

Khi tín hiệu nằm ngoài đường chuẩn không quá 20 % đểm cao nhất và thấp nhất Hàm lượngCPT trong mẫu thử X (mg/g) được tính theo công thức sau:

Trong đó:

C’: là nồng độ chất phân tích, tính từ đường chuẩn (µg/mL),V: thể tích dịch chiết định mức (mL),

k: hệ số pha loãng,m: khối lượng mẫu cân (g),

1000: hệ số quy đổi µg sang mg.

Công thức tính C’:

Sm: diện tích hoặc chiều cao pic của mẫu thử,

Cc: nồng độ điểm cao nhất hoặc thấp nhất đường chuẩn,

Sc: diện tích hoặc chiều cao pic của điểm chuẩn

9 Kiểm soát chất lượng

Có thể lựa chọn một hoặc đồng thời các hình thức đảm bảo chất lượng kết quả sau:

- Phân tích lặp lại lấy giá trị trung bình, kết quả giữa hai lần đo không được chênh lệch nhau quá2,8*RSD (%) so với trị giá trung bình (giá trị RSD thu được sau khi thẩm định phương pháp đạt yêucầu AOAC)

- Thực hiện phân tích mẫu thêm chuẩn, độ thu hồi phải đạt theo yêu cầu AOAC

10 Phụ lục

Biểu mẫu trả kết quả: NIFC.05.M.273.F.01

3.2 Thông số thẩm định

BÁO CÁO KIỂM TRA XÁC NHẬN, THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP

XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CAPSAICINOID TRONG THỰC PHẨM BẰNG KỸ

THUẬT HPLC (Mã số: NIFC.05.M.273)

1 Thông tin chung

- Người thực hiện: Nguyễn Văn Khoa- Lê Thị Kim Anh

 Mẫu dạng nhiều sơ

 Mẫu dạng nhiều carbonhydrat